检索结果-内蒙古大学图书馆

深圳大学学报（理工版） 2006年第4期23卷 362-367页

作者：叶展辉郑易之刘昀深圳大学生命科学学院深圳市微生物基因工程重点实验室深圳518060

大豆PM2蛋白属LEA3(late embryogenes is abundant group3)蛋白.以含大豆PM2基因的重组载体为模板,PCR法扩增出可编码6拷贝11-氨基酸重复序列的基因片段PM2D.构建pET28a/PM2D重组载体,并转化大肠杆菌得到重组菌BL21/***-PAGE电泳结果表... 详细信息

大豆PM2蛋白属LEA3(late embryogenes is abundant group3)蛋白.以含大豆PM2基因的重组载体为模板,PCR法扩增出可编码6拷贝11-氨基酸重复序列的基因片段PM2D.构建pET28a/PM2D重组载体,并转化大肠杆菌得到重组菌BL21/***-PAGE电泳结果表明,BL21/PM2D重组菌可被诱导表达相对分子质量约为15000的蛋白条带,与目的蛋白的理论相对分子质量(13600)接近.利用DNASIS软件分析,PM2D缺失短肽的亲水指数为1.12.将重组菌BL21/PM2和BL21/PM2D分别涂布在含500mmol/LNaCl和1200mmol/L山梨糖的固体培养基上,计算重组菌的存活率.结果显示,两种重组菌在含500mmol/LNaCl培养基上的存活率分别为30.8%和26.0%,均高于对照菌(BL21/pET28a)的存活率;在含1200mmol/L山梨糖培养基上的存活率分别为59.7%和59.3%,与对照BL21/pET28a菌株的存活率相比无明显差异.PM2D短肽长度为PM2蛋白全长的1/4,但BL21/PM2D重组菌的耐盐能力为BL21/PM2重组菌的80%左右.表明11-氨基酸重复序列区是PM2蛋白序列的一个耐盐结构域.

关键词： LEA3蛋白 PM2蛋白 11-氨基酸重复序列区结构域盐胁迫大肠杆菌大豆

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植物BURP-蛋白家族

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自然科学进展 2009年第3期19卷 241-247页

作者：唐玉林王亚静蔡雪梅郑易之深圳大学生命科学学院深圳市微生物基因工程重点实验室深圳518060

BURP-蛋白是植物中所特有的一类蛋白.目前,在NCBI数据库登录的BURP-蛋白序列已超过260个,其中有20余种在文献中有报道.BURP-蛋白家族成员在初级结构上具有相似的特征:N-端多含有疏水的信号肽序列,而C-端均含有保守的BURP-结构域.它们具... 详细信息

BURP-蛋白是植物中所特有的一类蛋白.目前,在NCBI数据库登录的BURP-蛋白序列已超过260个,其中有20余种在文献中有报道.BURP-蛋白家族成员在初级结构上具有相似的特征:N-端多含有疏水的信号肽序列,而C-端均含有保守的BURP-结构域.它们具有一定的组织特异性和不同的表达模式,在功能上或与特定组织、细胞的发育有关,或参与植物的逆境胁迫响应.文中主要从BURP-蛋白家族成员的结构、系统进化、表达及功能等方面对这类蛋白的特点及它们在植物生长发育中的重要性进行了讨论.

关键词： BURP-结构域信号肽表达模式胁迫应答发育

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大豆LEA蛋白Em的表达可提高大肠杆菌和烟草耐盐性

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深圳大学学报（理工版） 2006年第3期23卷 230-236页

作者：蔡丹郑易之兰英深圳大学生命科学学院深圳市微生物基因工程重点实验室深圳518060

将大豆Em(LEA1)基因构建到原核表达载体pET28-Em中.转化大肠杆菌,经SDS-PAGE电泳及电喷雾质谱鉴定.结果显示,经IPTG诱导的重组菌可表达约18kDa的特异蛋白.这种蛋白具有良好的可溶性和热稳定性.在含800 m mol/L NaC l培养基中,含空载体... 详细信息

将大豆Em(LEA1)基因构建到原核表达载体pET28-Em中.转化大肠杆菌,经SDS-PAGE电泳及电喷雾质谱鉴定.结果显示,经IPTG诱导的重组菌可表达约18kDa的特异蛋白.这种蛋白具有良好的可溶性和热稳定性.在含800 m mol/L NaC l培养基中,含空载体的对照菌生长迟滞期约为50 h,含Em基因的重组菌生长迟滞期为32 h,表明大豆Em蛋白的表达可提高大肠杆菌对盐胁迫的适应能力及耐盐性.在此基础上,构建了含Em基因的真核表达载体pB I-Em.再利用根癌农杆菌介导法将该基因转入烟草.PCR及RT-PCR结果显示,大豆Em基因已整合到转基因烟草的基因组DNA中,并能正常转录.转化率为53%.转Em基因烟草植株在含有质量分数1.5%NaC l的培养基中生长状况好于对照植株,叶片的叶绿素含量高于对照植株的叶片.结果表明,大豆Em基因的表达可提高大肠杆菌和转基因烟草的耐盐性.

关键词：大豆 LEA1基因 Em蛋白大肠杆菌根癌农杆菌转化转基因烟草盐胁迫

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多头绒泡菌G_2期cDNA表达文库的构建

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深圳大学学报（理工版） 2005年第1期22卷 50-56页

作者：张建华刘士德邢苗深圳大学生命科学学院深圳市微生物基因工程重点实验室深圳518060

cDNA表达文库是分离、筛选基因的重要平台.为分离多头绒泡菌SC35类似蛋白PSCL32 5及其激酶的基因,首先检测多头绒泡菌PSCL32 5及其激酶在细胞周期不同时相的含量,发现PSCL32 5在G2期含量最高;再从多头绒泡菌G2期RNA出发,构建多头绒泡菌G... 详细信息

cDNA表达文库是分离、筛选基因的重要平台.为分离多头绒泡菌SC35类似蛋白PSCL32 5及其激酶的基因,首先检测多头绒泡菌PSCL32 5及其激酶在细胞周期不同时相的含量,发现PSCL32 5在G2期含量最高;再从多头绒泡菌G2期RNA出发,构建多头绒泡菌G2期cDNA表达文库.得到cDNA文库的初始滴度为1 22×106pfu/mL(pfu为噬菌体数目),cDNA扩增文库的滴度为1 12×1011pfu/mL,插入片段的重组率接近100%,插入片段的大小在0 5～2 5kb范围,说明所构建的cDNA文库质量较好.

关键词：多头绒泡菌 cDNA表达文库 SC35类似蛋白

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大豆PM2蛋白及其结构域可提高烟草耐盐性

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深圳大学学报（理工版） 2007年第1期24卷 95-101页

作者：刘昀李冉辉郑易之蔡文斌深圳大学生命科学学院深圳市微生物基因工程重点实验室深圳518060

深圳市微生物基因工程重点实验室已利用大肠杆菌异源表达体系证明了大豆PM2蛋白(LEA3)的耐盐功能,并首次证实PM2蛋白序列中的22-氨基酸结构域(PM2B)为一主要耐盐结构域．为在高等植物中进一步验证PM2蛋白及22-氨基酸结构域的耐盐功能,... 详细信息

深圳市微生物基因工程重点实验室已利用大肠杆菌异源表达体系证明了大豆PM2蛋白(LEA3)的耐盐功能,并首次证实PM2蛋白序列中的22-氨基酸结构域(PM2B)为一主要耐盐结构域．为在高等植物中进一步验证PM2蛋白及22-氨基酸结构域的耐盐功能,将大豆PM2及PM2B基因克隆至植物表达载体pBI121,并利用农杆菌侵染法转化烟草叶盘,通过PCR扩增法鉴定转基因植株．结果表明PM2及PM2B基因已整合至转基因烟草的基因组DNA中,转化率分别为44．4％和62．5％．与含1．5％(质量分数)NaCl的培养基比较,转基因烟草植株的生长状况和叶片的叶绿素含量,结果表明转PM2和PM2B基因的烟草耐盐性明显高于对照(转化pBI121载体)植株．这说明转PM2和PM2B基因可提高烟草的耐盐能力．可见,PM2蛋白及22-氨基酸结构域在原核和真核细胞中的耐盐保护作用可能是相似的．

关键词： 22-氨基酸结构域 PM2蛋白 LEA3蛋白耐盐结构域耐盐基因大豆转基因烟草盐胁迫

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同源过表达BglR对嗜热毁丝霉β-葡萄糖苷酶活性的影响

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中国生物工程杂志 2017年第7期37卷 64-71页

作者：来亚鹏邓婷婷刘刚王娟深圳大学生命与海洋科学学院深圳市微生物基因工程重点实验室深圳518060 深圳市海洋生物资源与生态环境重点实验室深圳518060

目的:克隆嗜热毁丝霉(Myceliophthora thermophila ATCC42464)bglr基因,构建Mtbglr过表达载体,研究同源过表达bglr对嗜热毁丝霉β-葡萄糖苷酶活性及总纤维素酶活性的影响。方法:利用SLIC技术构建Mtbglr过表达载体;使用MtPpdc启动子及MtT... 详细信息

目的:克隆嗜热毁丝霉(Myceliophthora thermophila ATCC42464)bglr基因,构建Mtbglr过表达载体,研究同源过表达bglr对嗜热毁丝霉β-葡萄糖苷酶活性及总纤维素酶活性的影响。方法:利用SLIC技术构建Mtbglr过表达载体;使用MtPpdc启动子及MtTpdc终止子将该基因进行同源过表达;利用原生质体转化、实时荧光定量PCR和酶活测定等技术实现bglr基因在嗜热毁丝霉中表达及酶活水平的鉴定。结果:成功构建Mtbglr过表达载体,并转化嗜热毁丝霉,结果表明,诱导培养条件下,转化子Mt8菌株的β-葡萄糖苷酶活性和胞外蛋白质浓度分别是WT菌株的1.7倍和1.9倍。结论:bglr基因对嗜热毁丝霉β-葡萄糖苷酶活性具有增强作用,为嗜热真菌β-葡萄糖苷酶基因调控奠定了理论基础。

关键词：嗜热真菌嗜热毁丝霉同源过表达 β-葡萄糖苷酶BglR

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以增加催化结构域的基因重构方法提高里氏木霉外切型葡聚糖酶Ⅱ的活性

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农业生物技术学报 2007年第6期15卷 1019-1023页

作者：邓丽瑜余少文邢苗张煜刘刚深圳大学生命科学学院深圳市微生物基因工程重点实验室深圳518060 深圳大学生命科学学院深圳市微生物基因工程重点实验室

通过两种增加催化结构域基因的方式对里氏木霉(Trichoderma reesei)QM9414外切型葡聚糖酶Ⅱ(CBHⅡ)编码基因(cbh2)进行重构。第一种重构方式是在cbh2基因的上游增加内切葡聚糖酶Ⅳ(EGⅣ)的催化结构域基因(cdE),第二种重构方式是在纤维素... 详细信息

通过两种增加催化结构域基因的方式对里氏木霉(Trichoderma reesei)QM9414外切型葡聚糖酶Ⅱ(CBHⅡ)编码基因(cbh2)进行重构。第一种重构方式是在cbh2基因的上游增加内切葡聚糖酶Ⅳ(EGⅣ)的催化结构域基因(cdE),第二种重构方式是在纤维素酶CBHⅡ编码基因的下游增加其自身的cdC基因。通过PCR和基因重构手段获得重组质粒pPICZαA-cdE-cbh2和pPICZαA-cbh2-cdC,并在毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中表达,获得重组菌株***11和PCC16,在经改良的摇瓶培养条件下能表达具有较高CMCNa(sodium carboxymethyl cellulose)酶活性的融合蛋白,培养液的CMCNa活性分别达到3.87和7.66U/mL,其中*** PCC16表达的重构酶活性是毕赤酵母表达的单一CBHⅡ酶活性的2倍。表明采用增加结构域的方式可以有效地提高纤维素酶的活性。

关键词：里氏木霉催化结构域外切型葡聚糖酶Ⅱ 基因重构毕赤酵母

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阿尔茨海默病转基因小鼠肝内核受体和细胞色素氧化酶基因转录谱变化

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中国药理学与毒理学杂志 2015年第1期29卷 33-39页

作者：韩双雪郑海洋刘洋麦紫君黄秀娴何晓阳深圳大学生命科学学院深圳市微生物基因工程重点实验室广东深圳518060 深圳大学生命科学学院深圳市海洋生物资源与生态环境重点实验室广东深圳518060

目的探讨阿尔茨海默病(AD)病变与肝Ⅰ相药酶基因表达的相关性,为早期和长期药物干预AD病程提供实验参考。方法制备B6.129-PS1M146V/APPSwe/Tau P301L三重转基因AD模型小鼠(3×Tg AD小鼠)及同系非转基因正常小鼠(NTg小鼠)肝组织总RN... 详细信息

目的探讨阿尔茨海默病(AD)病变与肝Ⅰ相药酶基因表达的相关性,为早期和长期药物干预AD病程提供实验参考。方法制备B6.129-PS1M146V/APPSwe/Tau P301L三重转基因AD模型小鼠(3×Tg AD小鼠)及同系非转基因正常小鼠(NTg小鼠)肝组织总RNA和总蛋白质样品,逆转录PCR/实时荧光定量PCR技术检测肝核因子4(HNF4)等7种核受体和细胞色素氧化酶P4501a2(Cyp1a2)等7种CYP基因mRNA相对表达量,比较基因转录谱差异;Western蛋白印迹法检测技术检测差异显著的目的基因蛋白质水平。结果与NTg小鼠相比,3×Tg AD小鼠HNF4、雌激素受体(ERα)及组成型雄甾烷受体均下调近66%(P<0.01),孕烷X受体和芳香烃受体分别上调1.84和1.64倍(P<0.05),糖皮质激素受体及受氧化应激激活的核因子E2相关因子未见显著变化;主要药物代谢酶Cyp2b10及Cyp2a5 mRNA分别降低至正常小鼠水平的3%(即下降97%,P<0.01)和30%(P<0.05),Cyp2e1、Cyp2j9、Cyp3a11基因的转录水平则分别上调了2.26倍、2.42倍和3.66倍(P<0.05);Cyp1a2和Cyp2d22基因转录在两种小鼠中无明显差异。Western蛋白印迹分析证实,3×Tg AD小鼠ERα和CYP2a5明显下降(P<0.05)而Cyp3a11表达则明显上升(P<0.05),蛋白质表达变化的趋势与其相应mRNA水平改变一致。结论 3×Tg AD小鼠肝内核受体基因及CYP酶基因转录谱发生显著改变,提示AD病变可能干扰机体肝代谢功能,对机体内源性及外源性化合物生物转运产生影响。

关键词：阿尔茨海默病 3×Tg AD模型小鼠核受体细胞色素氧化酶基因转录

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粉尘螨Ⅱ类变应原的克隆表达、纯化及其免疫学特性

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免疫学杂志 2006年第2期22卷 213-216页

作者：朱健琦刘志刚高波吉坤美邢苗深圳大学生命科学学院广东深圳518060 深圳市微生物基因工程重点实验室广东深圳518060

目的获得大量具有良好的IgE结合活性的Der fⅡ重组变应原,以促进粉尘螨变态反应性疾病的特异性诊断及治疗的研究。方法挑取经纯培养的粉尘螨,提取总RNA,采用RT-PCR的方法扩增Der fⅡ片段,产物连接进入T载体(pMD18)。经扩增后,用NdeⅠ和... 详细信息

目的获得大量具有良好的IgE结合活性的Der fⅡ重组变应原,以促进粉尘螨变态反应性疾病的特异性诊断及治疗的研究。方法挑取经纯培养的粉尘螨,提取总RNA,采用RT-PCR的方法扩增Der fⅡ片段,产物连接进入T载体(pMD18)。经扩增后,用NdeⅠ和XhoⅠ双酶切后将目的片段连接到pET-24a表达载体上,得到重组质粒pET-Der f2,工程菌经IPTG诱导培养,明显表达出Der fⅡ蛋白,表达产物经固定化金属配体亲和层析纯化,用Western blot检测免疫学活性。结果成功提取粉尘螨的总RNA,扩增出编码129个氨基酸的长度为387个碱基对的核苷酸片段。序列分析结果和Genebank上的基因序列(D10448)同源性98%,其中有6个碱基不同。使用高效表达的原核载体pET,所得产物的5′端含有抗原性极小的6个组氨酸标签。表达质粒在***21 star中得到高效表达,表达产物主要以包涵体形式存在,目的蛋白具有良好的变应原性。结论成功构建了粉尘螨Ⅱ类变应原的原核表达载体,并纯化了具有免疫特性的重组蛋白,为进一步开展Der fⅡ蛋白和重组疫苗研究奠定了基础。

关键词：粉尘螨变应原表达纯化

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雌激素样化合物对人细胞色素氧化酶2A6基因的转录调控

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中国药理学与毒理学杂志 2014年第1期28卷 88-96页

作者：黄春玲邓寒柯雪娥韩霜雪何晓阳深圳大学生命科学学院深圳市海洋生物资源与生态环境重点实验室广东深圳518060 深圳大学生命科学学院深圳市微生物基因工程重点实验室广东深圳518060

目的建立尼古丁代谢酶CYP2A6报告基因高容量筛选系统,分析环境和天然雌激素样化合物对CYP2A6基因转录的影响。方法构建3种CYP2A6基因转录上游-2460^+1全长、增强子-启动子串联和3倍增强子-启动子串联的荧光素酶报告基因重组体pGL3-2A6 3... 详细信息

目的建立尼古丁代谢酶CYP2A6报告基因高容量筛选系统,分析环境和天然雌激素样化合物对CYP2A6基因转录的影响。方法构建3种CYP2A6基因转录上游-2460^+1全长、增强子-启动子串联和3倍增强子-启动子串联的荧光素酶报告基因重组体pGL3-2A6 3UP,GL3-2A6 EP和pGL3-2A63EP,分别与雌激素受体α(ERα)及海肾荧光蛋白表达载体三重共转染人肝HepG2细胞。用双荧光素酶报告基因分析技术,选择确认对雌二醇诱导应答最强的CYP2A6报告基因系统;分别用氰戊菊酯、2,2',4,4'-四溴联苯醚、4-二羟基二苯基丙烷、全氟辛酸铵、淫羊藿苷、大豆苷元和槲皮素等7种拟雌激素化合物处理转染报告基因的HepG2细胞,同时设置雌二醇10 nmo·lL-1阳性和0.1%DMSO阴性对照,48 h后测定各组细胞相对荧光强度,分析评估拟雌激素物质对CYP2A6基因转录的诱导作用。结果 3种CYP2A6报告基因重组体中pGL3-2A6 3EP对雌二醇诱导应答最强,且呈显著量效依赖关系。7种拟雌激素化合物对CYP2A6报告基因均具显著诱导作用,其中,2,2',4,4'-四溴联苯醚1.0~100.0 nmol·L-1诱导倍变值为1.45±0.13~3.30±0.13(P<0.01),诱导效应最强。表现出相似的量效诱导关系,淫羊藿苷、大豆苷元和槲皮素10μmo·lL-1时的诱导倍变值为2.41~2.83(P<0.01)。结论建立灵敏可靠、重复性强的CYP2A6报告基因高容量筛选系统,证实多种拟雌激素物质通过激活ERα诱导CYP2A6报告基因转录。提示环境拟雌激素污染物和药材食材雌激素样活性物质可诱导个体尼古丁代谢酶基因表达,从而干扰个体尼古丁代谢清除活性及其对环境化合物致癌代谢活化水平。

关键词：细胞色素P450 CYP2A6 转录水平调控拟雌激素化合物

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