检索结果-内蒙古大学图书馆

生物化学与生物物理进展 2003年第3期30卷 471-473页

作者：王刚刚杨海涛饶子和清华大学生物科学与技术系教育部蛋白质科学重点实验室北京100084

在凝胶介质中结晶了极端嗜酸热菌Sulfolobus shibataeDNA结合蛋白Ssh10b ,与没有凝胶介质的条件下相比 ,晶体的出晶速度减缓 ,晶体的外形变得更规则 ,晶胞的C轴变短 ,晶体衍射分辨率从 0 65nm提高到了0 3 5nm .

关键词：凝胶介质古菌 DNA结合蛋白分辨率蛋白晶体晶体衍射

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水稻谷胱甘肽磷脂氢过氧化物酶的表达、纯化及晶体生长条件初筛

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高等学校化学学报 2007年第9期28卷 1701-1706页

作者：王丰刘进元清华大学生物科学与技术系分子生物学实验室教育部蛋白质科学重点实验室北京100084

将水稻PHGPx(OsPHGPx)的编码序列克隆到表达载体pGEX-6P-1上,并转化为大肠杆菌进行表达.通过GST亲和层析、离子交换层析和凝胶过滤层析,制备了可用于晶体学研究的OsPHGPx,其纯度超过95%,具备明显的PHGPx活性.质谱显示OsPHGPx的精确分子... 详细信息

将水稻PHGPx(OsPHGPx)的编码序列克隆到表达载体pGEX-6P-1上,并转化为大肠杆菌进行表达.通过GST亲和层析、离子交换层析和凝胶过滤层析,制备了可用于晶体学研究的OsPHGPx,其纯度超过95%,具备明显的PHGPx活性.质谱显示OsPHGPx的精确分子量为19642.5553,与理论分子量基本一致.OsPHGPx在多个晶体生长条件下出现微晶.三维结构同源建模显示OsPHGPx的结构为硫氧还蛋白折叠形式.

关键词：水稻谷胱甘肽磷脂氢过氧化物酶表达纯化晶体生长三维结构建模

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斑马鱼胚胎中受Nodal信号调控基因的鉴定

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生物化学与生物物理进展 2007年第6期34卷 595-603页

作者：孙智慧孟安明清华大学生物科学与技术系发育生物学实验室蛋白质科学教育部重点实验室北京100084

Nodal信号在脊椎动物胚胎发育的中内胚层诱导、左右不对称性的建立、神经外胚层沿前后轴线的分化等方面起着重要的作用.为鉴定受Nodal信号调控的基因,特别是那些转录因子基因,通过将来自squint过量表达、缺失Nodal信号的MZoep突变体或... 详细信息

Nodal信号在脊椎动物胚胎发育的中内胚层诱导、左右不对称性的建立、神经外胚层沿前后轴线的分化等方面起着重要的作用.为鉴定受Nodal信号调控的基因,特别是那些转录因子基因,通过将来自squint过量表达、缺失Nodal信号的MZoep突变体或野生型30%外包期胚胎的RNA与Affymetrix斑马鱼寡核苷酸芯片杂交.发现与野生型样本相比,在squint过量表达的样本中,265个转录本的表达显著增强(log2ratio>1),111个转录本的表达显著减弱(log2ratio<-1);在MZoep样本中,表达显著增强的(log2ratio>1)转录本有1495个,表达显著减弱(log2ratio<-1)的有550个.squint过量表达使26个转录因子基因的表达增强,11个转录因子基因的表达减弱;另一方面,MZoep突变体中表达增强的转录因子基因为69个,表达减弱的转录因子基因为30个.这些结果为进一步研究Nodal信号的转导机理和生物学功能提供了有益的数据.

关键词：斑马鱼胚胎 Nodal 基因芯片转录因子

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大鼠N型钙通道ⅢP区原核表达、纯化及活性研究(英文)

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生物化学与生物物理进展 2009年第12期36卷 1569-1577页

作者：周玉娟谢莉萍张荣庆清华大学生物科学与技术系北京100084 清华大学教育部蛋白质科学实验室北京100084

高保真PCR克隆出编码大鼠海马组织N型钙通道α1B亚基ⅢP区的DNA序列,分别与表达载体pET28b和pGEX-4T-1连接,转化入能补充稀有密码子tRNAs的大肠杆菌Rosetta菌株中,通过优化表达条件,实现了高效诱导表达.再通过低温诱导,将包涵体用尿素... 详细信息

高保真PCR克隆出编码大鼠海马组织N型钙通道α1B亚基ⅢP区的DNA序列,分别与表达载体pET28b和pGEX-4T-1连接,转化入能补充稀有密码子tRNAs的大肠杆菌Rosetta菌株中,通过优化表达条件,实现了高效诱导表达.再通过低温诱导,将包涵体用尿素溶解再稀释后透析法复性、酶切、亲和柱层析等方法得到较纯的可溶性目的蛋白HIS-Cav22P、GST-Cav22P和Cav22P,紫外吸收光谱检测实验证明了重组蛋白HIS-Cav22P能和钙离子可逆地结合.最后通过GST沉降实验证明了芋螺毒素SO3与Cav22P存在体外相互结合作用.上述结果为揭示芋螺毒素SO3特异性阻断大鼠海马组织N型钙流的分子机制提供了直接的依据,也为建立筛选新的非吗啡型天然镇痛药物的技术平台提供了基础.

关键词：纯化表达 N型钙通道

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合浦珠母贝外套膜细胞engrailed、BMP2和Smad3的mRNA表达水平的相关性(英文)

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生物化学与生物物理进展 2010年第7期37卷 737-746页

作者：周玉娟何作鑫李长忠向亮朱方捷张贵友谢莉萍张荣庆清华大学生物科学与技术系北京100084 清华大学教育部蛋白质科学实验室北京100084

软体动物engrailed蛋白和骨形成相关蛋白对胚胎贝壳区域边界形成可能具有重要作用,engrailed还被推测为调节基质蛋白在外套膜组织区域化表达的重要调控因子.因此,弄清调控engrailed在软体动物中特征表达的分子机制有着重要的研究意义.但... 详细信息

软体动物engrailed蛋白和骨形成相关蛋白对胚胎贝壳区域边界形成可能具有重要作用,engrailed还被推测为调节基质蛋白在外套膜组织区域化表达的重要调控因子.因此,弄清调控engrailed在软体动物中特征表达的分子机制有着重要的研究意义.但是,由于贝类基因组测序尚不完整,目前也没有建立获得贝类细胞系,以致于许多预测可能参与调控的基因需要通过克隆来鉴定,而且经典的研究细胞信号通路的方法也很难得到应用.目前,在中国南海广泛养殖的合浦珠母贝中,已获知其BMP2和Smad3的cDNA全长,以该贝的基因组为模板,PCR扩增获得了一段engrailed编码区片段.经软件分析,该片段含有EH4结构域,且与其他物种engrailed蛋白具有很高的同源性.研究的贝中,特别是外套膜组织中,engrailed、BMP2和Smad3三者表达之间的相关性,将有助于我们理解贝壳形成的分子机制.贝壳缺刻后半定量PCR试验结果表明,三者均参与贝壳修复,且在贝壳缺刻后的修复过程中,engrailed和Smad3的mRNA表达变化规律非常相似,提示它们之间可能存在相互影响的联系.用地塞米松(DXM)和过氧化氢(H2O2)分别处理原代培养的贝外套膜组织迁出细胞,实时相对定量PCR检测engrailed、BMP2和Smad3的mRNA表达水平,统计分析结果表明,三者具有显著的相关性.上述所有结果为进一步研究贝类生物矿化的发育和信号转导机制提供了新的思路和基础.

关键词： engrailed 合浦珠母贝 Smad3 BMP2 贝壳蚀刻实验实时PCR

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棉花脱水应答元件(DRE)结合蛋白GhDBP1的原核表达、纯化及其DNA结合活性(英文)

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生物化学与生物物理进展 2006年第3期33卷 247-253页

作者：黄波刘进元清华大学生物科学与技术系分子生物学实验室及教育部蛋白质科学重点实验室北京100084

棉花是一种重要的经济作物,其生产和产量要受到干旱、低温和高盐等环境胁迫的影响,因此提高棉花对这些胁迫的抗性非常重要.脱水应答元件(DRE-dehydrationresponsiveelement)结合蛋白(DBP)在调节植物对环境胁迫的抗性中起到非常重要的作... 详细信息

棉花是一种重要的经济作物,其生产和产量要受到干旱、低温和高盐等环境胁迫的影响,因此提高棉花对这些胁迫的抗性非常重要.脱水应答元件(DRE-dehydrationresponsiveelement)结合蛋白(DBP)在调节植物对环境胁迫的抗性中起到非常重要的作用.而且过量表达DBP类基因的转基因植株能够很好抵抗这些环境胁迫,所以研究棉花中此类DRE元件结合蛋白对棉花生产有非常重要的意义.在以前的工作中,从棉花中分离一个DBP基因,命名为GhDBP1并在转录水平上分析它在棉花植株中的表达特征.在研究中,报道了GhDBP1的原核表达、纯化和它的DNA结合特性.GhDBP1基因的编码区用PCR技术扩增出来插入到原核表达载体pET28a中,并转化到大肠杆菌菌株BL21(DE3)中.经过IPTG诱导,GhDBP1融合蛋白在BL21(DE3)菌株中成功进行表达.利用Ni-NTA亲和层析技术得到了纯化的融合蛋白.在非同位素的凝胶滞留实验中,纯化的GhDBP1融合蛋白能够结合到含有DRE元件的DNA片段上.另外,用SWISS-MODEL软件对GhDBP1蛋白的DNA结合区的三维结构进行了计算机模拟.模拟的结果显示,GhDBP1蛋白的DNA结合区的主链结构和折叠模式与已知的拟南芥GCC盒结合蛋白AtERF1的DNA结合区结构很相似.这些结果显示了GhDBP1是一个脱水应答元件(DRE)结合的转录因子,并可能运用与AtERF1的DNA结合区相似的结构和它的目标序列脱水应答元件(DRE)相结合.

关键词：棉花 DRE结合蛋白原核表达纯化凝胶滞留(EMSA) 同源建模

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水稻磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶在蛋白质水平上的组织和诱导表达特征(英文)

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生物化学与生物物理进展 2009年第1期36卷 77-82页

作者：李甜杨晓东刘进元清华大学生物科学与技术系分子生物学实验室及教育部蛋白质科学重点实验室北京100084

蛋白质是生命活动的主要承担分子,了解蛋白质在有机体中的时空分布对于正确解析蛋白质的功能十分重要.磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(PHGPx)是目前发现的唯一能够直接还原膜上脂类过氧化物的抗氧化酶,在保护生物膜免受过氧化损伤方面有着重... 详细信息

蛋白质是生命活动的主要承担分子,了解蛋白质在有机体中的时空分布对于正确解析蛋白质的功能十分重要.磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(PHGPx)是目前发现的唯一能够直接还原膜上脂类过氧化物的抗氧化酶,在保护生物膜免受过氧化损伤方面有着重要作用.采用Westernblot技术,分析了水稻PHGPx(OsPHGPx)在水稻不同组织以及多种胁迫条件下的蛋白质表达特征.结果表明,OsPHGPx在成熟水稻植株内主要分布于叶组织中,以旗叶中含量最高,而在水稻幼苗中则在茎及叶组织中均检测到较强的杂交信号.OsPHGPx在幼苗中的表达受到H2O2和NaCl的强烈诱导,但植物激素对其表达的影响较弱.H2O2和NaCl的诱导效果呈现出时间及剂量的相关性,当用0.5mmol/LH2O2处理12h或用500mmol/LNaCl处理24h,此时OsPHGPx表达量达到最大值.对H2O2清除剂二甲基硫脲处理的水稻幼苗,外源H2O2的再处理并不能诱导OsPHGPx的表达,而NaCl的诱导效果并不受影响,说明H2O2可能并不介导NaCl诱导OsPHGPx的表达.这些结果为进一步研究OsPHGPx在水稻中生物学功能奠定了基础.

关键词：水稻磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶蛋白质表达谱氧化胁迫盐胁迫

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用免疫亲和层析法纯化萝卜PHGPx天然蛋白(英文)

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生物化学与生物物理进展 2005年第8期32卷 794-799页

作者：杨晓东刘进元清华大学生物科学与技术系分子生物学实验室及教育部蛋白质科学重点实验室北京100084

萝卜磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(RsPHGPx)是一个定位于线粒体的蛋白质.为了阐明该蛋白质线粒体定位信号的准确切割位点,采用了免疫亲和层析方法纯化天然的RsPHGPx.用重组RsPHGPx 蛋白免疫兔子获得了抗RsPHGPx 的多克隆抗血清,以重组RsPH ... 详细信息

萝卜磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(RsPHGPx)是一个定位于线粒体的蛋白质.为了阐明该蛋白质线粒体定位信号的准确切割位点,采用了免疫亲和层析方法纯化天然的RsPHGPx.用重组RsPHGPx 蛋白免疫兔子获得了抗RsPHGPx 的多克隆抗血清,以重组RsPH G Px 蛋白为配体,采用亲和层析技术对抗血清进行了纯化,得到了单特异性的抗RsPHGPx 的抗体.将纯化好的抗体偶联到一个N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)预先激活的琼脂糖柱子上,装配成一个以单特异性的抗RsPHGPx 抗体为配体的免疫亲和层析柱.经过对纯化条件的摸索和优化,形成了一个简单、特异的一步法纯化方案.按照该方案,从萝卜幼苗线粒体总蛋白质提取物中纯化到一个分子质量与预期值相一致的特异蛋白质.免疫印迹分析表明,该蛋白质被抗RsPH G Px 的抗血清特异识别.酶活性分析表明,该蛋白质具有显著的PH G Px 活性.这些结果表明,纯化到的特异蛋白质是萝卜的RsPH G Px天然蛋白.这是首个关于定位于植物细胞器的PH G Px 蛋白纯化的报道.这一结果为准确测定RsPH G Px 信号肽的切割位点奠定了基础,并将有助于对植物PH G Px 的亚细胞定位机制及其生理功能的深入研究.

关键词：免疫亲和层析天然蛋白质多克隆抗体磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶萝卜

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两个水稻GDP-甘露糖-3′, 5′-异构酶基因特征及表达模式的研究

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生物化学与生物物理进展 2006年第4期33卷 368-376页

作者：杜盈姚远刘进元清华大学生物科学与技术系分子生物学实验室及教育部蛋白质科学重点实验室北京100084

GDP-甘露糖-3',5'-异构酶(GME)可以催化GDP-甘露糖转化为左旋GDP-半乳糖,该反应对于高等植物体内抗坏血酸的合成是非常重要的.但目前在分子水平上还没有对GME基因进行研究的报道.通过逆转录PCR(RT-RCR)技术从水稻成熟叶片中克... 详细信息

GDP-甘露糖-3',5'-异构酶(GME)可以催化GDP-甘露糖转化为左旋GDP-半乳糖,该反应对于高等植物体内抗坏血酸的合成是非常重要的.但目前在分子水平上还没有对GME基因进行研究的报道.通过逆转录PCR(RT-RCR)技术从水稻成熟叶片中克隆到两个GME基因的cDNA序列,并与其他植物物种中的GMEs进行比对,结果显示,GME基因在所有植物物种中高度保守,尽管进化树分析表明单子叶植物GMEs和双子叶植物GMEs在进化上相互独立.同时,分析这两个水稻GME基因的剪切模式揭示了二者也存在高度相似性.采用半定量RT-PCR技术对两个GME基因在不同组织和不同胁迫条件下的表达模式进行研究表明,OsGME1基因在冷胁迫条件下表达水平上调,这和先前水稻冷胁迫蛋白质组学研究的结果是一致的.而OsGME2和OsGME1基因在用赤霉素处理条件下表达水平均下调,暗示赤霉素可能通过调节GME基因的表达来调控植物体内的抗坏血酸合成.

关键词：植物抗坏血酸合成基因表达半定量RT-PCR技术

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萝卜磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶基因结构及其调控序列分析(英文)

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生物化学与生物物理进展 2005年第7期32卷 649-656页

作者：杨晓东刘进元清华大学生物科学与技术系分子生物学实验室及教育部蛋白质科学重点实验室北京100084

磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(PHGPx)是谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)家族的重要一员,是目前已知能直接保护生物膜免受过氧化损伤的唯一酶类.此前的研究表明,萝卜磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶基因(RsPHGPx)编码一个有生理功能的过氧化物酶,并且RsPH... 详细信息

磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(PHGPx)是谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)家族的重要一员,是目前已知能直接保护生物膜免受过氧化损伤的唯一酶类.此前的研究表明,萝卜磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶基因(RsPHGPx)编码一个有生理功能的过氧化物酶,并且RsPHGPx基因的表达可能受发育和环境胁迫信号的复杂调控.要深入了解该基因的表达调控机制首先必须阐明RsPHGPx基因的结构及其上游调控序列.DNA印迹表明萝卜RsPHGPx基因以单拷贝的形式存在于基因组中.以基因组DNA为模板,通过常规PCR与染色体步行相结合的方法克隆到了一段3.3kb长的RsPHGPx基因组序列.分析发现,该基因由7个外显子和6个内含子组成,所有内含子的剪切位点均符合真核生物GT-AG规则.另外还发现该基因的上游基因是生物素合成酶基因;位于RsPHGPx基因上游的调控序列只有不足300bp.这些结构特征与拟南芥AtGPX3基因极其相似.顺式作用元件的数据库搜索发现RsPHGPx基因的上游调控序列含有多个响应激素(如E-Box和W-Box)、胁迫(如转录因子MYB和MYC的结合位点)和光(如BoxⅡ和Ⅰ-Box)信号的元件.RNA印迹分析表明RsPHGPx基因的表达受到脱落酸(ABA)和连续光照(在黄化苗中)处理的负调控,受到冷胁迫(4℃)的正调控,这暗示了预测的顺式作用元件的调控作用.然而,除草剂paraquat对该基因表达的正调控作用,暗示了某些与氧化胁迫相关的未知元件的存在.这些结果进一步印证了RsPHGPx基因的表达受发育和环境胁迫信号复杂调控的推测.这是迄今为止首个关于植物PHGPx基因结构和上游调控序列的系统报道,为今后全面认识植物PHGPx基因的表达调控机制奠定了必要基础.

关键词：萝卜磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶基因结构上游调控序列顺式作用元件

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