检索结果-内蒙古大学图书馆

中华风湿病学杂志 2014年第3期18卷 199-202页

作者：陈静熊江彪叶文静朱小春章慧娣张丽芳薛向阳温州医科大学附属第一医院风湿免疫科 325000 温州医科大学附属第一医院肾内科 325000 温州医科大学分子病毒与免疫学研究所基础医学院微生物和免疫学教研室

目的检测SLE患者外周血人巨细胞病毒（HCMV）的感染状况，探讨HCMV感染在SLE发病中的作用。方法采集并抽提60例已确诊的SLE患者和111名健康人外周血白细胞DNA，利用巢式PCR技术检测HCMV糖蛋白gB（UL55）基因以确定HCMV感染情况。应用2... 详细信息

目的检测SLE患者外周血人巨细胞病毒（HCMV）的感染状况，探讨HCMV感染在SLE发病中的作用。方法采集并抽提60例已确诊的SLE患者和111名健康人外周血白细胞DNA，利用巢式PCR技术检测HCMV糖蛋白gB（UL55）基因以确定HCMV感染情况。应用2个独立样本t检验、非参数检验、χ2检验及Fisher确切概率法统计分析。结果琼脂糖凝胶电泳及测序显示建立的巢式PCR能特异地检测***55基因，SLE患者外周血中HCMV检出率明显高于对照组[分别为41．7％（25／60）和1．8％（2／111），χ2=46．551，P〈0．01]。与外周血HCMV阴性组SLE患者相比，HCMV阳性组SLE患者抗核糖体P蛋白抗体（Rib．P）阳性率[分别为26％（9／35），56％（14／25），χ2=5．659，P=0．017]、直接Coomb’s试验阳性率[分别为37％（13／35），72％（18／25），χ2=7．096，P=-0．008]及抗β2糖蛋白1（GP1）抗体水平[分别为21．3（9．9，51．8）U/ml，13．6（5．9，23．1）U／ml；U=2．017，P=0．044]明显升高，血液系统相关指标中的红细胞[分别为（3．65±0．10）×10^12／L，（3．17±0．17）×10^12／L；t=2．574，P=0．013]、淋巴细胞[分别为（1．37±0．14）×10^12／L，（0．90±0．13）×10^12；t=2．456，P=0．017]、血红蛋白[分别为（110±19）g／L，（98±5）g／L；t=2．034，P=0．048]明显减少；肾损害相关指标中的血尿阳性率[分别为40％（14／35），72％（18／25）；χ2=6．000，P=0．014]、尿蛋白定量（24h）水平[分别为0．80（0．53，2．37）g，0．48（0．13，1．21）g；U=2．140，P=0．032]明显上升。结论外周血细胞HCMV感染可能参与SLE发生、发展过程。

关键词：红斑狼疮,系统性巨细胞病毒聚合酶链反应

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宫颈癌组织HPV16早期基因E6相关转录本检测方法的建立及意义

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温州医学院学报 2014年第5期44卷 324-328页

作者：卢徐涟邹阮敏陈向敏陈俊张丽芳薛向阳温州医科大学微生物学与免疫学教研室分子病毒与免疫研究所浙江温州325035 温州医科大学附属第一医院妇产科浙江温州325000 温州医科大学检验医学院生命科学学院浙江温州325035

目的:建立宫颈癌组织HPV16早期基因E6相关转录本检测方法,分析宫颈癌发生各时期的HPV16早期基因E6相关转录的情况。方法:留取HPV16阳性的宫颈肿瘤组织63例,包括8例低度鳞状上皮内瘤变(LSIL)、38例高度鳞状上皮内瘤变(HSIL)和17例宫颈癌... 详细信息

目的:建立宫颈癌组织HPV16早期基因E6相关转录本检测方法,分析宫颈癌发生各时期的HPV16早期基因E6相关转录的情况。方法:留取HPV16阳性的宫颈肿瘤组织63例,包括8例低度鳞状上皮内瘤变(LSIL)、38例高度鳞状上皮内瘤变(HSIL)和17例宫颈癌,提取RNA,利用含保守序列的RT引物将标本中的mRNA反转录成5’端含保守序列的cDNA,并利用HPV16 E6特异性引物(P1)和保守序列(P0)进行PCR扩增,建立特异性扩增HPV16 E6相关转录本的方法,检测标本中HPV16 E6相关的转录本,通过E6特异性探针进行Southern杂交加以验证。结果:成功建立了HPV16 E6相关转录模式分析的方法。经分析HPV16阳性的LSIL、HSIL及宫颈癌组织中E6转录模式结果发现,不同级别HPV16阳性的宫颈肿瘤组织的转录模式差异显著。随着LSIL向宫颈癌发展,肿瘤组织中HPV16 E6转录本种类增多,且优势转录模式逐渐清晰。结论:成功建立HPV16 E6相关转录模式分析的方法,并发现HPV16早期基因E6相关的转录模式与宫颈肿瘤癌变程度密切相关,其可能参与宫颈癌的发生和发展。

关键词：人乳头瘤病毒16 转录宫颈肿瘤 human papillomavirus 16

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Dicer干预对HPV18 E6/E7基因表达的影响

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温州医学院学报 2013年第2期43卷 101-105页

作者：林茂卢徐涟胡飞红胡芝吕艳冯娟张丽芳薛向阳温州医学院微生物学与免疫学教研室分子病毒与免疫研究所浙江温州325035 温州医学院附属第一医院妇产科浙江温州325000 温州市中心医院妇瘤科浙江温州325000

目的:探讨Dicer干预对高危型HPV18 E6、E7基因表达的影响。方法:设计并合成三条Dicer基因的siRNA,采用定量PCR分析siRNA在不同浓度(40 nmol/L、60 nmol/L及80 nmol/L)、不同时间(24 h、48 h及72 h)干预效果的基础上,通过定量PCR分析Dice... 详细信息

目的:探讨Dicer干预对高危型HPV18 E6、E7基因表达的影响。方法:设计并合成三条Dicer基因的siRNA,采用定量PCR分析siRNA在不同浓度(40 nmol/L、60 nmol/L及80 nmol/L)、不同时间(24 h、48 h及72 h)干预效果的基础上,通过定量PCR分析Dicer被干预后对HPV18 E6、E7及miR-16基因表达的影响。结果:本研究建立的定量PCR能特异地检测Dicer、HPV18 E6、E7及miR-16基因的表达。设计的三种siRNA均明显下调Dicer基因表达,40 nmol/L的siRNA干预24 h即可获得明显效果。在此基础上分析对miR-16及高危型HPV18 E6、E7表达的影响,结果显示,40 nmol/L的Dicer siRNA干预可明显下调HPV18 E6、E7及miR-16基因表达(P<0.05)。生物信息学分析提示,HPV18 E6、E7基因编码区存在miR-16的结合位点。结论:Dicer siRNA干预能明显下调高危型HPV18E6、E7基因表达,miR-16可能参与HPV18E6、E7基因表达调控。

关键词：宫颈肿瘤人乳头瘤病毒早期基因微RNA

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乙型肝炎病毒C基因多态性及其蛋白特性分析

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温州医学院学报 2012年第5期42卷 409-412,418页

作者：冯娟吕艳陈昊涂建欣朱珊丽薛向阳张丽芳温州医学院分子病毒与免疫研究所/微生物学与免疫学教研室浙江温州325035

目的:调查温州医学院大学生人群乙型肝炎病毒(HBV)C基因多态性及其HBc蛋白特性变化,为了解乙肝病毒核心抗原(HBcAg)变异提供理论依据。方法:采用HBV-C基因特异性引物对21份温州医学院大学生HBV携带者(血清学检测为大三阳患者)血清标本进... 详细信息

目的:调查温州医学院大学生人群乙型肝炎病毒(HBV)C基因多态性及其HBc蛋白特性变化,为了解乙肝病毒核心抗原(HBcAg)变异提供理论依据。方法:采用HBV-C基因特异性引物对21份温州医学院大学生HBV携带者(血清学检测为大三阳患者)血清标本进行PCR扩增鉴定,并取19份PCR检测阳性产物直接测序;进一步用Vector NTI 8.0和DNA Star软件分析HBV-C基因多态性及HBc蛋白特性的变化。结果:21份标本中,HBV-C DNA阳性率达90.48%(19/21),与标准基因序列(Gen Bank X01587)比较,HBV-C基因同源性为93.3%～95.1%。HBV-C基因分别形成51种突变模式,其中一处由于核苷酸的改变,翻译的氨基酸也发生了相应的改变,此处氨基酸序列的第130处脯氨酸(Pro)突变为苏氨酸(Thr),其余标本均为同义突变;但突变处编码蛋白在亲水性、表面可及性及抗原性与标准株相比较无明显变化。结论:温州医学院大学生HBV携带者的HBV C基因具有多态性,但是由C基因决定的核心蛋白序列相对保守。

关键词：乙型肝炎病毒 C基因突变多态性

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沙眼衣原体主要外膜蛋白多表位免疫血清中和活性分析

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温州医学院学报 2012年第1期42卷 6-9页

作者：陈昊巩文词陈江冯娟吕艳朱珊丽陈向敏薛向阳张丽芳温州医学院微生物学与免疫学教研室分子病毒与免疫研究所浙江温州325035

目的:制备高效价E型沙眼衣原体(Ct)主要外膜蛋白(MOMP)168多表位特异性免疫血清并研究其免疫学特性。方法:纯化的Trx-his/Ct MOMP168融合蛋白经弗氏佐剂乳化后,小鼠背部皮下多点免疫注射,间隔2周后加强免疫,共3次,并分别于免疫前和每次... 详细信息

目的:制备高效价E型沙眼衣原体(Ct)主要外膜蛋白(MOMP)168多表位特异性免疫血清并研究其免疫学特性。方法:纯化的Trx-his/Ct MOMP168融合蛋白经弗氏佐剂乳化后,小鼠背部皮下多点免疫注射,间隔2周后加强免疫,共3次,并分别于免疫前和每次免疫后2周取血,采用ELISA法检测血清融合蛋白和E型Ct全菌体特异性抗体水平及变化趋势,通过体外中和反应检测多表位特异性血清的免疫学特性。结果:小鼠用Ct MOMP168多表位融合蛋白全程免疫后产生了抗融合蛋白和E型Ct全菌体特异性抗体,ELISA法检测最高滴度达1:500。ELISA和体外中和实验检测结果显示,该抗体能特异性识别MOMP多表位蛋白和E型Ct全菌体,并能有效抑制E型Ct感染Hela229细胞。结论:沙眼衣原体MOMP多表位融合蛋白免疫血清可特异性结合并中和E型Ct。

关键词：沙眼衣原体主要外膜蛋白表位中和作用

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癌胚抗原T、B细胞表位短肽诱导特异性体液免疫反应研究

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医学研究杂志 2012年第4期41卷 65-68页

作者：陈江肖德双吴乐蒋佩佩邵欢义应江辉朱珊丽薛向阳张丽芳朱冠保温州医学院附属第一医院胃肠外科 325000 温州医学院分子病毒与免疫研究所/微生物学与免疫学教研室

目的筛选癌胚抗原含T、B细胞表位的短肽并分析其诱导机体产生体液免疫的特性。方法利用免疫信息学方法预测CEA CTL表位,结合我们早期对CEA B表位预测的结果,选择含多个CTL表位肽和B表位肽的CEA氨基酸序列580～598处短肽作为目的基因。... 详细信息

目的筛选癌胚抗原含T、B细胞表位的短肽并分析其诱导机体产生体液免疫的特性。方法利用免疫信息学方法预测CEA CTL表位,结合我们早期对CEA B表位预测的结果,选择含多个CTL表位肽和B表位肽的CEA氨基酸序列580～598处短肽作为目的基因。目的基因密码子优化后采用pET32a(+)原核表达系统表达融合蛋白,经SDS-PAGE和Western blot-ting鉴定融合蛋白的抗原性;经镍螯合亲和层析柱(Ni-NTA Agarose)纯化CEA580～598全长融合蛋白,纯化蛋白用佐剂乳化后经日本大耳白家兔背部皮下多点免疫注射,采用Western blotting检测血清抗体的特异性,采用ELISA法检测血清抗体水平及变化趋势。结果含多个T、B细胞表位的短CEA580～598在大肠杆菌中获得了高效表达,表达量占总蛋白的25.6%;表达产物的相对分子质量(Mr)约21kDa,与预期Mr相符;Western blotting分析结果显示,在21kDa处出现特异性条带。日本大耳白兔经CEA580～598融合蛋白免疫后产生高水平的特异性抗体,与空载体和PBS对照组比较具有显著性差异(P<0.05),制备的免疫血清不但能特异识别CEA580～598短肽,而且能特异识别天然CEA抗原。结论 CEA580～598短肽融合蛋白具有较强的免疫原性,诱导的兔免疫血清能特异性结合CEA抗原,为基于CEA表位疫苗的研究奠定理论和实验基础。

关键词：癌胚抗原预测 ELISA 融合蛋白 CTL

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癌胚抗原T、B细胞表位短肽诱导特异性体液免疫反应研究

癌胚抗原T、B细胞表位短肽诱导特异性体液免疫反应研究

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2012年浙江省外科学学术年会

作者：陈江肖德双吴乐蒋佩佩邵欢义应江辉朱冠保朱珊丽薛向阳张丽芳温州医学院附属第一医院胃肠外科温州医学院分子病毒与免疫研究所/微生物学与免疫学教研室

目的筛选癌胚抗原含T、B细胞表位的短肽并分析其诱导机体产生体液免疫的特性。方法利用免疫信息学方法预测CEA CTL表位,结合我们早期对CEA B表位预测的结果,选择含多个CTL表位肽和B表位肽的CEA氨基酸序列580-598处短肽作为目的基因。目... 详细信息

目的筛选癌胚抗原含T、B细胞表位的短肽并分析其诱导机体产生体液免疫的特性。方法利用免疫信息学方法预测CEA CTL表位,结合我们早期对CEA B表位预测的结果,选择含多个CTL表位肽和B表位肽的CEA氨基酸序列580-598处短肽作为目的基因。目的基因密码子优化后采用pET32a(+)原核表达系统表达融合蛋白,经SDS-PAGE和Western Blot鉴定融合蛋白的抗原性;经镍螯合亲和层析柱(Ni-NTAAgarose)纯化CEA580-598全长融合蛋白,纯化蛋白用佐剂乳化后经日本大耳白家兔背部皮下多点免疫注射,采用Western blot检测血清抗体的特异性,采用EL ISA法检测血清抗体水平及变化趋势。结果含多个T、B细胞表位的短CEA580-598在大肠杆菌中获得了高效表达,表达量占总蛋白的25.6%;表达产物的相对分子质量(Mr)约21×103Da,与预期Mr相符;Western Blot分析结果显示,在21×103Da处出现特异性条带。日本大耳白兔经CEA580-598融合蛋白免疫后产生高水平的特异性抗体,与空载体和PBS对照组比较具有显著性差异(p<0.05),制备的免疫血清不但能特异识别CEA580-598短肽,而且能特异识别天然CEA抗原。结论 CEA580-598短肽融合蛋白具有较强的免疫原性,诱导的兔免疫血清能特异性结合CEA抗原,为基于CEA表位疫苗的研究奠定理论和实验基础。

关键词：癌胚抗原预测 ELISA 融合蛋白 CTL

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癌胚抗原CEA168～183多表位肽的免疫原性研究

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中华实验外科杂志 2012年第4期29卷 635-635页

作者：沈贤应江辉吴乐王鹏飞朱珊丽薛向阳张丽芳浙江省温州医学院附属第一医院普外科 325000 温州医学院分子病毒与免疫研究所微生物学与免疫学教研室

本研究旨在通过免疫信息学手段预测癌胚抗原（CEA）表位，选择富含T、B细胞免疫优势表位的短肽并对其免疫原性进行分析。

关键词：免疫原性癌胚抗原表位肽免疫信息学 B细胞免疫

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沙眼衣原体主要外膜蛋白多表位重组DNA诱导小鼠体液免疫有效剂量的探讨

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温州医学院学报 2012年第2期42卷 103-106页

作者：饶品欢石朝晖李文姝吕艳陈向敏朱珊丽张丽芳温州医学院微生物学与免疫学教研室分子病毒与免疫研究所浙江温州325035 平顶山市疾病预防控制中心检验科河南平顶山467000

目的:探讨沙眼衣原体主要外膜蛋白多表位(Ct MOMP168)重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)/Ct MOMP168免疫小鼠的有效免疫剂量,为体内免疫学效应的研究提供实验依据。方法:在重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)/Ct MOMP168构建成功的基础上,抽提纯化... 详细信息

目的:探讨沙眼衣原体主要外膜蛋白多表位(Ct MOMP168)重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)/Ct MOMP168免疫小鼠的有效免疫剂量,为体内免疫学效应的研究提供实验依据。方法:在重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)/Ct MOMP168构建成功的基础上,抽提纯化质粒,分3个免疫剂量组,即50、100和150μg剂量组,同时设PBS对照组。肌肉注射免疫BALB/c小鼠3次,间隔2周,于免疫的0、2、4、6、8周分别尾静脉取血,分离血清,间接ELISA法检测小鼠血清中Ct MOMP多表位特异性抗体IgG的生成量,并于0、1、3、5、7周取小鼠阴道冲洗物,检测Ct MOMP多表位特异性SIgA的生成量,分别进行统计学分析。结果:3个不同免疫剂量组,血清特异性抗体IgG生成量于免疫第4周后均开始随免疫时间延长而逐步增加,150μg剂量组抗体IgG的生成水平高于其他剂量组(P<0.05)。免疫小鼠阴道分泌物中特异性抗体SIgA生成较快,免疫开始后1周,150μg剂量组SIgA的产生水平高于其他组,7周后SIgA开始下降,但150μg剂量组抗体水平仍高于其他剂量组(P<0.05)。结论:重组质粒DNA免疫小鼠的特异性抗体生成显示了剂量依赖关系,高剂量(150μg)免疫组小鼠血清特异性抗体IgG和阴道分泌性特异性抗体SIgA生成水平优势显著。

关键词：沙眼衣原体主要外膜蛋白 DNA免疫免疫剂量小鼠

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HPV6b L1/Ct MOMP多表位嵌合DNA诱导BALB/c小鼠产生特异性细胞免疫的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2010年第10期30卷 942-948页

作者：石朝辉朱珊丽许文陆丽君李玲玲张丽芳温州医学院分子病毒与免疫研究所/微生物与免疫学教研室 325035

目的探讨人乳头瘤病毒（HPV）6b结构蛋白L1和沙眼衣原体（Ct）主要外膜蛋白（MOMP）多表位嵌合DNA（HPV6b L1/Ct MOMP）诱导BALB/c小鼠产生特异性细胞免疫效应,及HPV6b L1对Ct MOMP多表位基因诱导细胞免疫的增强作用.方法将Ct MOMP多... 详细信息

目的探讨人乳头瘤病毒（HPV）6b结构蛋白L1和沙眼衣原体（Ct）主要外膜蛋白（MOMP）多表位嵌合DNA（HPV6b L1/Ct MOMP）诱导BALB/c小鼠产生特异性细胞免疫效应,及HPV6b L1对Ct MOMP多表位基因诱导细胞免疫的增强作用.方法将Ct MOMP多表位基因连接在经真核密码子优化的HPV6b L1羧基端,构建嵌合重组质粒pcDNA3.1（＋）/HPV6b L1/Ct MOMP多表位,经酶切和测序证实后,转染COS-7细胞,间接免疫荧光鉴定其在真核细胞中的表达;将纯化后的嵌合重组质粒肌肉注射免疫BALB/c小鼠,并设置pcDNA3.1（＋）/Ct MOMP多表位质粒、pcD-NA3.1（＋）和PBS三组对照.采用0、2、4周免疫程序,DNA剂量为每只150μg/次.于末次免疫后2周,分别用乳酸脱氢酶（LDH）释放法和细胞内细胞因子染色-流式细胞术（ICS-FAGS）检测小鼠脾细胞对Ct MOMP多表位蛋白和HPV6b L1蛋白的特异性CTL活性,胞内细胞因子IFN-γ、IL-4和IL-10产生水平等细胞免疫应答指标.结果免疫后,在效靶比（E∶T）分别为40∶1、20∶1时,pcDNA3.1（＋）/HPV6b L1/Ct MOMP多表位嵌合重组质粒免疫组小鼠产生了针对Ct MOMP多表位蛋白特异性CTL杀伤活性（44.56%±4.02%,35.35%±2.89%）和HPV6b L1蛋白特异性CTL杀伤活性（27.08%±2.04%,21.68%±4.06%）,与各对照组比较差异有统计学意义（F=72.87,F=114.55,P＜0.05;F=30.04,F=10.47,P＜0.05）,且显著高于pcDNA3.1（＋）/Ct MOMP多表位质粒组（35.50%±2.68%,30.24%±1.75%;12.27%±3.36%,9.32%±3.07%;P＜0.05）;而pcDNA3.1（＋）/Ct MOMP多表位质粒组小鼠仅显示了Ct MOMP多表位特异性的CTL杀伤活性,与对照组比较差异也有统计学意义（F=58.85,F=120.21;P＜0.05）.胞内细胞因子IFN-γ的产生水平,pcDNA3.1（＋）/HPV6b L1/Ct MOMP多表位嵌合质粒组（4.34%±0.06%）高于pcDNA3.1（＋）/Ct MOMP多表位质粒组（3.14%±0.18%）,与对照组比较差异有统计学意义（F=473.83,P＜0.05）,而重组质粒组较空载体组和PBS对照组差异也有统计学意义（F=211.72,P＜0.05）;但IL-4和IL-10水平则各组间差异无统计学意义（F=0.97,P＞0.05;F=2.25,P＞0.05）.结论 pcDNA3.1（＋）/HPV6b L1/Ct MOMP多表位嵌合DNA质粒可诱导BALB/c小鼠同时产生针对HPV6b L1蛋白和Ct MOMP多表位蛋白特异性的细胞免疫效应;真核密码子优化的HPV6b L1能显著增强Ct MOMP 多表位基因诱导的小鼠特异性细胞免疫效应.

关键词：人乳头瘤病毒沙眼衣原体主要外膜蛋白细胞毒T细胞表位

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