检索结果-内蒙古大学图书馆

温州医学院学报 2013年第2期43卷 101-105页

作者：林茂卢徐涟胡飞红胡芝吕艳冯娟张丽芳薛向阳温州医学院微生物学与免疫学教研室分子病毒与免疫研究所浙江温州325035 温州医学院附属第一医院妇产科浙江温州325000 温州市中心医院妇瘤科浙江温州325000

目的:探讨Dicer干预对高危型HPV18 E6、E7基因表达的影响。方法:设计并合成三条Dicer基因的siRNA,采用定量PCR分析siRNA在不同浓度(40 nmol/L、60 nmol/L及80 nmol/L)、不同时间(24 h、48 h及72 h)干预效果的基础上,通过定量PCR分析Dice... 详细信息

目的:探讨Dicer干预对高危型HPV18 E6、E7基因表达的影响。方法:设计并合成三条Dicer基因的siRNA,采用定量PCR分析siRNA在不同浓度(40 nmol/L、60 nmol/L及80 nmol/L)、不同时间(24 h、48 h及72 h)干预效果的基础上,通过定量PCR分析Dicer被干预后对HPV18 E6、E7及miR-16基因表达的影响。结果:本研究建立的定量PCR能特异地检测Dicer、HPV18 E6、E7及miR-16基因的表达。设计的三种siRNA均明显下调Dicer基因表达,40 nmol/L的siRNA干预24 h即可获得明显效果。在此基础上分析对miR-16及高危型HPV18 E6、E7表达的影响,结果显示,40 nmol/L的Dicer siRNA干预可明显下调HPV18 E6、E7及miR-16基因表达(P<0.05)。生物信息学分析提示,HPV18 E6、E7基因编码区存在miR-16的结合位点。结论:Dicer siRNA干预能明显下调高危型HPV18E6、E7基因表达,miR-16可能参与HPV18E6、E7基因表达调控。

关键词：宫颈肿瘤人乳头瘤病毒早期基因微RNA

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沙眼衣原体主要外膜蛋白多表位免疫血清中和活性分析

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温州医学院学报 2012年第1期42卷 6-9页

作者：陈昊巩文词陈江冯娟吕艳朱珊丽陈向敏薛向阳张丽芳温州医学院微生物学与免疫学教研室分子病毒与免疫研究所浙江温州325035

目的:制备高效价E型沙眼衣原体(Ct)主要外膜蛋白(MOMP)168多表位特异性免疫血清并研究其免疫学特性。方法:纯化的Trx-his/Ct MOMP168融合蛋白经弗氏佐剂乳化后,小鼠背部皮下多点免疫注射,间隔2周后加强免疫,共3次,并分别于免疫前和每次... 详细信息

目的:制备高效价E型沙眼衣原体(Ct)主要外膜蛋白(MOMP)168多表位特异性免疫血清并研究其免疫学特性。方法:纯化的Trx-his/Ct MOMP168融合蛋白经弗氏佐剂乳化后,小鼠背部皮下多点免疫注射,间隔2周后加强免疫,共3次,并分别于免疫前和每次免疫后2周取血,采用ELISA法检测血清融合蛋白和E型Ct全菌体特异性抗体水平及变化趋势,通过体外中和反应检测多表位特异性血清的免疫学特性。结果:小鼠用Ct MOMP168多表位融合蛋白全程免疫后产生了抗融合蛋白和E型Ct全菌体特异性抗体,ELISA法检测最高滴度达1:500。ELISA和体外中和实验检测结果显示,该抗体能特异性识别MOMP多表位蛋白和E型Ct全菌体,并能有效抑制E型Ct感染Hela229细胞。结论:沙眼衣原体MOMP多表位融合蛋白免疫血清可特异性结合并中和E型Ct。

关键词：沙眼衣原体主要外膜蛋白表位中和作用

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乙型肝炎病毒C基因多态性及其蛋白特性分析

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温州医学院学报 2012年第5期42卷 409-412,418页

作者：冯娟吕艳陈昊涂建欣朱珊丽薛向阳张丽芳温州医学院分子病毒与免疫研究所/微生物学与免疫学教研室浙江温州325035

目的:调查温州医学院大学生人群乙型肝炎病毒(HBV)C基因多态性及其HBc蛋白特性变化,为了解乙肝病毒核心抗原(HBcAg)变异提供理论依据。方法:采用HBV-C基因特异性引物对21份温州医学院大学生HBV携带者(血清学检测为大三阳患者)血清标本进... 详细信息

目的:调查温州医学院大学生人群乙型肝炎病毒(HBV)C基因多态性及其HBc蛋白特性变化,为了解乙肝病毒核心抗原(HBcAg)变异提供理论依据。方法:采用HBV-C基因特异性引物对21份温州医学院大学生HBV携带者(血清学检测为大三阳患者)血清标本进行PCR扩增鉴定,并取19份PCR检测阳性产物直接测序;进一步用Vector NTI 8.0和DNA Star软件分析HBV-C基因多态性及HBc蛋白特性的变化。结果:21份标本中,HBV-C DNA阳性率达90.48%(19/21),与标准基因序列(Gen Bank X01587)比较,HBV-C基因同源性为93.3%～95.1%。HBV-C基因分别形成51种突变模式,其中一处由于核苷酸的改变,翻译的氨基酸也发生了相应的改变,此处氨基酸序列的第130处脯氨酸(Pro)突变为苏氨酸(Thr),其余标本均为同义突变;但突变处编码蛋白在亲水性、表面可及性及抗原性与标准株相比较无明显变化。结论:温州医学院大学生HBV携带者的HBV C基因具有多态性,但是由C基因决定的核心蛋白序列相对保守。

关键词：乙型肝炎病毒 C基因突变多态性

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癌胚抗原T、B细胞表位短肽诱导特异性体液免疫反应研究

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医学研究杂志 2012年第4期41卷 65-68页

作者：陈江肖德双吴乐蒋佩佩邵欢义应江辉朱珊丽薛向阳张丽芳朱冠保温州医学院附属第一医院胃肠外科 325000 温州医学院分子病毒与免疫研究所/微生物学与免疫学教研室

目的筛选癌胚抗原含T、B细胞表位的短肽并分析其诱导机体产生体液免疫的特性。方法利用免疫信息学方法预测CEA CTL表位,结合我们早期对CEA B表位预测的结果,选择含多个CTL表位肽和B表位肽的CEA氨基酸序列580～598处短肽作为目的基因。... 详细信息

目的筛选癌胚抗原含T、B细胞表位的短肽并分析其诱导机体产生体液免疫的特性。方法利用免疫信息学方法预测CEA CTL表位,结合我们早期对CEA B表位预测的结果,选择含多个CTL表位肽和B表位肽的CEA氨基酸序列580～598处短肽作为目的基因。目的基因密码子优化后采用pET32a(+)原核表达系统表达融合蛋白,经SDS-PAGE和Western blot-ting鉴定融合蛋白的抗原性;经镍螯合亲和层析柱(Ni-NTA Agarose)纯化CEA580～598全长融合蛋白,纯化蛋白用佐剂乳化后经日本大耳白家兔背部皮下多点免疫注射,采用Western blotting检测血清抗体的特异性,采用ELISA法检测血清抗体水平及变化趋势。结果含多个T、B细胞表位的短CEA580～598在大肠杆菌中获得了高效表达,表达量占总蛋白的25.6%;表达产物的相对分子质量(Mr)约21kDa,与预期Mr相符;Western blotting分析结果显示,在21kDa处出现特异性条带。日本大耳白兔经CEA580～598融合蛋白免疫后产生高水平的特异性抗体,与空载体和PBS对照组比较具有显著性差异(P<0.05),制备的免疫血清不但能特异识别CEA580～598短肽,而且能特异识别天然CEA抗原。结论 CEA580～598短肽融合蛋白具有较强的免疫原性,诱导的兔免疫血清能特异性结合CEA抗原,为基于CEA表位疫苗的研究奠定理论和实验基础。

关键词：癌胚抗原预测 ELISA 融合蛋白 CTL

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癌胚抗原T、B细胞表位短肽诱导特异性体液免疫反应研究

癌胚抗原T、B细胞表位短肽诱导特异性体液免疫反应研究

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2012年浙江省外科学学术年会

作者：陈江肖德双吴乐蒋佩佩邵欢义应江辉朱冠保朱珊丽薛向阳张丽芳温州医学院附属第一医院胃肠外科温州医学院分子病毒与免疫研究所/微生物学与免疫学教研室

目的筛选癌胚抗原含T、B细胞表位的短肽并分析其诱导机体产生体液免疫的特性。方法利用免疫信息学方法预测CEA CTL表位,结合我们早期对CEA B表位预测的结果,选择含多个CTL表位肽和B表位肽的CEA氨基酸序列580-598处短肽作为目的基因。目... 详细信息

目的筛选癌胚抗原含T、B细胞表位的短肽并分析其诱导机体产生体液免疫的特性。方法利用免疫信息学方法预测CEA CTL表位,结合我们早期对CEA B表位预测的结果,选择含多个CTL表位肽和B表位肽的CEA氨基酸序列580-598处短肽作为目的基因。目的基因密码子优化后采用pET32a(+)原核表达系统表达融合蛋白,经SDS-PAGE和Western Blot鉴定融合蛋白的抗原性;经镍螯合亲和层析柱(Ni-NTAAgarose)纯化CEA580-598全长融合蛋白,纯化蛋白用佐剂乳化后经日本大耳白家兔背部皮下多点免疫注射,采用Western blot检测血清抗体的特异性,采用EL ISA法检测血清抗体水平及变化趋势。结果含多个T、B细胞表位的短CEA580-598在大肠杆菌中获得了高效表达,表达量占总蛋白的25.6%;表达产物的相对分子质量(Mr)约21×103Da,与预期Mr相符;Western Blot分析结果显示,在21×103Da处出现特异性条带。日本大耳白兔经CEA580-598融合蛋白免疫后产生高水平的特异性抗体,与空载体和PBS对照组比较具有显著性差异(p<0.05),制备的免疫血清不但能特异识别CEA580-598短肽,而且能特异识别天然CEA抗原。结论 CEA580-598短肽融合蛋白具有较强的免疫原性,诱导的兔免疫血清能特异性结合CEA抗原,为基于CEA表位疫苗的研究奠定理论和实验基础。

关键词：癌胚抗原预测 ELISA 融合蛋白 CTL

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癌胚抗原CEA168～183多表位肽的免疫原性研究

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中华实验外科杂志 2012年第4期29卷 635-635页

作者：沈贤应江辉吴乐王鹏飞朱珊丽薛向阳张丽芳浙江省温州医学院附属第一医院普外科 325000 温州医学院分子病毒与免疫研究所微生物学与免疫学教研室

本研究旨在通过免疫信息学手段预测癌胚抗原（CEA）表位，选择富含T、B细胞免疫优势表位的短肽并对其免疫原性进行分析。

关键词：免疫原性癌胚抗原表位肽免疫信息学 B细胞免疫

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沙眼衣原体主要外膜蛋白多表位重组DNA诱导小鼠体液免疫有效剂量的探讨

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温州医学院学报 2012年第2期42卷 103-106页

作者：饶品欢石朝晖李文姝吕艳陈向敏朱珊丽张丽芳温州医学院微生物学与免疫学教研室分子病毒与免疫研究所浙江温州325035 平顶山市疾病预防控制中心检验科河南平顶山467000

目的:探讨沙眼衣原体主要外膜蛋白多表位(Ct MOMP168)重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)/Ct MOMP168免疫小鼠的有效免疫剂量,为体内免疫学效应的研究提供实验依据。方法:在重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)/Ct MOMP168构建成功的基础上,抽提纯化... 详细信息

目的:探讨沙眼衣原体主要外膜蛋白多表位(Ct MOMP168)重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)/Ct MOMP168免疫小鼠的有效免疫剂量,为体内免疫学效应的研究提供实验依据。方法:在重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)/Ct MOMP168构建成功的基础上,抽提纯化质粒,分3个免疫剂量组,即50、100和150μg剂量组,同时设PBS对照组。肌肉注射免疫BALB/c小鼠3次,间隔2周,于免疫的0、2、4、6、8周分别尾静脉取血,分离血清,间接ELISA法检测小鼠血清中Ct MOMP多表位特异性抗体IgG的生成量,并于0、1、3、5、7周取小鼠阴道冲洗物,检测Ct MOMP多表位特异性SIgA的生成量,分别进行统计学分析。结果:3个不同免疫剂量组,血清特异性抗体IgG生成量于免疫第4周后均开始随免疫时间延长而逐步增加,150μg剂量组抗体IgG的生成水平高于其他剂量组(P<0.05)。免疫小鼠阴道分泌物中特异性抗体SIgA生成较快,免疫开始后1周,150μg剂量组SIgA的产生水平高于其他组,7周后SIgA开始下降,但150μg剂量组抗体水平仍高于其他剂量组(P<0.05)。结论:重组质粒DNA免疫小鼠的特异性抗体生成显示了剂量依赖关系,高剂量(150μg)免疫组小鼠血清特异性抗体IgG和阴道分泌性特异性抗体SIgA生成水平优势显著。

关键词：沙眼衣原体主要外膜蛋白 DNA免疫免疫剂量小鼠

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人乳头瘤病毒L2氨基端蛋白的同源性及其交叉反应特性研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2010年第9期30卷 848-852页

作者：李玲玲赵朋云王佳周珠哈朱珊丽薛向阳张丽芳温州医学院微生物学与免疫学教研室/分子病毒与免疫研究所 325000

目的研究人乳头瘤病毒（HPV）次要衣壳蛋白（L2）在临床常见HPV感染型别中的同源性及其交叉反应特性.方法采用生物信息学方法对临床常见HPV感染型别中的L2氨基酸序列进行比对,发现其氨基端1～200序列具有高度同源性.采用PCR法从宫颈... 详细信息

目的研究人乳头瘤病毒（HPV）次要衣壳蛋白（L2）在临床常见HPV感染型别中的同源性及其交叉反应特性.方法采用生物信息学方法对临床常见HPV感染型别中的L2氨基酸序列进行比对,发现其氨基端1～200序列具有高度同源性.采用PCR法从宫颈癌患者组织DNA中扩增HPV16 L2（1～200）肽段的碱基序列,将其克隆至原核表达载体PGEX-4T-1得到重组质粒PGEX-4T-1-HPV16 L2（1～200）.将测序鉴定正确的重组质粒转入*** BL21（DF3）中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定;进一步通过Western blot检测HPV16L2（1～200）融合蛋白与HPV6、11、16和18型DNA检测阳性临床患者血清的特异性结合能力;以镍螯合亲和层析柱（Ni-NTA Agarose）纯化的HPV16 L2（1～200）融合蛋白作为包被抗原,采用间接ELISA法对98例尖锐湿疣患者、135例宫颈癌患者及96例健康对照者血清进行特异性血清IgG抗体检测.结果在HPV6、11、18、35等14个临床常见型别中,与HPV16 L2的1～200间的氨基酸序列比较,同源性达到52.7%～74.3%;成功构建了含有HPV16 L2（1～200）的重组质粒PGEX-4T-1-HPV16 L2（1～200）,含有HPV16 L2（1～200）的融合蛋白在原核表达体系中呈高效表达,表达量占总蛋白的22.6%;表达产物的相对分子质量（Mr）约49×103,与预期Mr相符;以HPV6、11、16和18 DNA阳性患者血清为一抗进行Western blot分析,结果显示,在Mr约49×103处出现特异性条带.ELISA结果显示,尖锐湿疣组、宫颈癌组患者血清及健康对照者血清抗体均值分别为0.753±0.262、0.756±0.274和0.178±0.157,阳性率分别为89.8%、88.9%和9.4%.三组间血清抗体均值及阳性率比较差异均具有统计学意义（P均＜0.001）,而尖锐湿疣组和宫颈癌组间的血清抗体均值比较差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 HPV L2 N端1～200氨基酸序列具有高度同源性,并在HPV6、11、16和18型别间具有交叉反应.

关键词：人乳头瘤病毒次要衣壳蛋白同源性交叉反应

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HPV6b L1/Ct MOMP多表位嵌合DNA诱导BALB/c小鼠产生特异性细胞免疫的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2010年第10期30卷 942-948页

作者：石朝辉朱珊丽许文陆丽君李玲玲张丽芳温州医学院分子病毒与免疫研究所/微生物与免疫学教研室 325035

目的探讨人乳头瘤病毒（HPV）6b结构蛋白L1和沙眼衣原体（Ct）主要外膜蛋白（MOMP）多表位嵌合DNA（HPV6b L1/Ct MOMP）诱导BALB/c小鼠产生特异性细胞免疫效应,及HPV6b L1对Ct MOMP多表位基因诱导细胞免疫的增强作用.方法将Ct MOMP多... 详细信息

目的探讨人乳头瘤病毒（HPV）6b结构蛋白L1和沙眼衣原体（Ct）主要外膜蛋白（MOMP）多表位嵌合DNA（HPV6b L1/Ct MOMP）诱导BALB/c小鼠产生特异性细胞免疫效应,及HPV6b L1对Ct MOMP多表位基因诱导细胞免疫的增强作用.方法将Ct MOMP多表位基因连接在经真核密码子优化的HPV6b L1羧基端,构建嵌合重组质粒pcDNA3.1（＋）/HPV6b L1/Ct MOMP多表位,经酶切和测序证实后,转染COS-7细胞,间接免疫荧光鉴定其在真核细胞中的表达;将纯化后的嵌合重组质粒肌肉注射免疫BALB/c小鼠,并设置pcDNA3.1（＋）/Ct MOMP多表位质粒、pcD-NA3.1（＋）和PBS三组对照.采用0、2、4周免疫程序,DNA剂量为每只150μg/次.于末次免疫后2周,分别用乳酸脱氢酶（LDH）释放法和细胞内细胞因子染色-流式细胞术（ICS-FAGS）检测小鼠脾细胞对Ct MOMP多表位蛋白和HPV6b L1蛋白的特异性CTL活性,胞内细胞因子IFN-γ、IL-4和IL-10产生水平等细胞免疫应答指标.结果免疫后,在效靶比（E∶T）分别为40∶1、20∶1时,pcDNA3.1（＋）/HPV6b L1/Ct MOMP多表位嵌合重组质粒免疫组小鼠产生了针对Ct MOMP多表位蛋白特异性CTL杀伤活性（44.56%±4.02%,35.35%±2.89%）和HPV6b L1蛋白特异性CTL杀伤活性（27.08%±2.04%,21.68%±4.06%）,与各对照组比较差异有统计学意义（F=72.87,F=114.55,P＜0.05;F=30.04,F=10.47,P＜0.05）,且显著高于pcDNA3.1（＋）/Ct MOMP多表位质粒组（35.50%±2.68%,30.24%±1.75%;12.27%±3.36%,9.32%±3.07%;P＜0.05）;而pcDNA3.1（＋）/Ct MOMP多表位质粒组小鼠仅显示了Ct MOMP多表位特异性的CTL杀伤活性,与对照组比较差异也有统计学意义（F=58.85,F=120.21;P＜0.05）.胞内细胞因子IFN-γ的产生水平,pcDNA3.1（＋）/HPV6b L1/Ct MOMP多表位嵌合质粒组（4.34%±0.06%）高于pcDNA3.1（＋）/Ct MOMP多表位质粒组（3.14%±0.18%）,与对照组比较差异有统计学意义（F=473.83,P＜0.05）,而重组质粒组较空载体组和PBS对照组差异也有统计学意义（F=211.72,P＜0.05）;但IL-4和IL-10水平则各组间差异无统计学意义（F=0.97,P＞0.05;F=2.25,P＞0.05）.结论 pcDNA3.1（＋）/HPV6b L1/Ct MOMP多表位嵌合DNA质粒可诱导BALB/c小鼠同时产生针对HPV6b L1蛋白和Ct MOMP多表位蛋白特异性的细胞免疫效应;真核密码子优化的HPV6b L1能显著增强Ct MOMP 多表位基因诱导的小鼠特异性细胞免疫效应.

关键词：人乳头瘤病毒沙眼衣原体主要外膜蛋白细胞毒T细胞表位

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EB病毒潜伏膜蛋白2多表位的原核表达及其抗原特性分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2010年第7期30卷 615-620页

作者：陆丽君李玲玲刘建晓王佳朱珊丽陈筱菲张丽芳温州医学院附属第一医院 325000 温州医学院微生物学与免疫学教研室/分子病毒与免疫学研究所 325035

目的对EB病毒（EBV）潜伏膜蛋白2（LMP2）中富含T、B细胞多表位肽段基因进行原核表达,并分析该多表位蛋白的抗原特性.方法利用计算机在线软件预测EBV LMP2蛋白的CTL表位、Th表位.选取富含CTL表位和Th表位的肽段,兼顾其上下游已预测的... 详细信息

目的对EB病毒（EBV）潜伏膜蛋白2（LMP2）中富含T、B细胞多表位肽段基因进行原核表达,并分析该多表位蛋白的抗原特性.方法利用计算机在线软件预测EBV LMP2蛋白的CTL表位、Th表位.选取富含CTL表位和Th表位的肽段,兼顾其上下游已预测的B细胞表位,组成含多个T、B细胞表位的EBV LMP2多表位,该多表位基因序列经原核密码子优化后全序列合成,并克隆入原核表达载体pET32a（＋）得到pET32a（＋）/EBV-LMP2多表位重组质粒,经IPTG诱导在*** BL21（DE3）表达并纯化,经SDS-PAGE和Western blot分析鉴定;采用EBV膜蛋白家兔免疫血清和鼻咽癌患者血清进行Western blot分析其抗原特性;并利用EBV-LMP2多表位蛋白免疫BALB/c小鼠,分别采用LDH和ELISA方法检测小鼠脾细胞特异性CTL杀伤效应及血清特异性抗体IgG水平,以分析该表位蛋白的免疫原性.结果 LMP2（aa195-232）和LMP2（aa419-436）肽段富含CTL、Th和B细胞表位,将其串联后作为EBV LMP2多表位,该多表位基因在大肠杆菌中获得了表达.表达产物的相对分子质量（Mr）约27×103,与预期Mr相符;经Western blot证实EBV-LMP2多表位具有抗原特异性,可被EBV膜蛋白家兔免疫血清和鼻咽癌患者血清特异性抗体识别;小鼠免疫结果显示EBVLMP2多表位可诱导机体产生特异性的CTL杀伤效应,随着效靶比（1：5,1：10,1：25）增加,CTL杀伤活性逐渐增强（12.52%±2.59%,21.80%±1.08%,23.68%±3.74%）,同时产生了特异性血清IgG抗体反应（A490=0.258±0.040）,与对照组比较差异均具有统计学意义（P＜0.05）.结论本研究设计的EBV-LMP2多表位具有良好的抗原性和一定的免疫原性.

关键词： EB病毒潜伏膜蛋白表位表达

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