检索结果-内蒙古大学图书馆

郑州大学学报（医学版） 2014年第1期49卷 4-8页

作者：唐悦轩小燕柳璐璐李敏郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州450001

目的:观察沉默谷胱甘肽S转移酶-π(GST-π)基因的表达对食管鳞状细胞癌顺铂耐药细胞系EC9706/cDDP细胞耐药性的影响。方法:构建靶向GST-π基因的siRNA重组慢病毒GSTsi1、GSTsi2和无义对照GSTsiC,转染EC9706/cDDP细胞。通过RT-PCR及Weste... 详细信息

目的:观察沉默谷胱甘肽S转移酶-π(GST-π)基因的表达对食管鳞状细胞癌顺铂耐药细胞系EC9706/cDDP细胞耐药性的影响。方法:构建靶向GST-π基因的siRNA重组慢病毒GSTsi1、GSTsi2和无义对照GSTsiC,转染EC9706/cDDP细胞。通过RT-PCR及Western blot法检测GSTsi1、GSTsi2和GSTsiC感染前后EC9706/cDDP细胞中GST-πmRNA和蛋白的表达;MTT法检测感染GSTsi2、GSTsiC与未感染的EC9706/cDDP细胞对顺铂敏感性的变化。结果:感染GSTsi1、GSTsi2后EC9706/cDDP细胞GST-πmRNA的表达下调(F=3.490,P<0.001),其蛋白表达也减弱。感染GSTsi2的EC9706/cDDP细胞对顺铂的耐药指数较感染GSTsiC和未感染的EC9706/cDDP细胞降低(F=50.510,P<0.001)。结论:沉默GST-π基因的表达可降低EC9706/cDDP细胞的顺铂耐药性。

关键词： EC9706 cDDP细胞耐药谷胱甘肽S转移酶-π RNA干扰

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miR-143在胃癌中的表达及其临床病理意义

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中国病理生理杂志 2010年第9期26卷 1674-1678页

作者：林巧爱李玲玲巩文辞武文一沈贤张丽芳薛向阳温州医学院微生物学和免疫学教研室浙江温州325000 温州医学院附属第一医院胃肠外科浙江温州325000

目的:分析miR-143在胃癌中的表达及其与临床病理特征的关系。方法:分别取胃癌手术标本32例及其癌旁组织,提取总RNA,采用茎环逆转录实时定量PCR方法检测miR-143在胃癌及其癌旁正常组织中的表达量,并分析其与临床病理特征关系。结果:与癌... 详细信息

目的:分析miR-143在胃癌中的表达及其与临床病理特征的关系。方法:分别取胃癌手术标本32例及其癌旁组织,提取总RNA,采用茎环逆转录实时定量PCR方法检测miR-143在胃癌及其癌旁正常组织中的表达量,并分析其与临床病理特征关系。结果:与癌旁组织比较,miR-143在胃癌组织中表达显著下调(P<0.05);miR-143的表达与细胞分化程度(P<0.05)及淋巴结转移(P<0.05)相关,与性别、年龄、血型、肿块位置、肿块大小、肿块侵润深度及肿瘤淋巴结转移分期无关。低分化胃癌组织的miR-143表达明显低于中高分化的标本(P<0.05);有淋巴结转移胃癌组织的miR-143表达明显低于无淋巴结转移的胃癌组织(P<0.05)。ROC曲线分析显示,miR-143评价胃癌细胞分化程度的特异性和敏感性可达75.0%和79.2%。结论:miR-143表达下调可能与胃癌的发生发展有关,miR-143可作为评价低分化胃癌的辅助指标。

关键词： microRNA 胃肿瘤细胞分化

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巢氏PCR-RFLP和多重PCR检测HBV基因型、基因亚型方法的比较

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军医进修学院学报 2008年第4期29卷 280-282页

作者：张烜榕李威申元英任来峰李强沈茹赵海平大理学院基础医学院微生物学与免疫学教研室云南大理671000 山西大学汾阳医学院微生物学与免疫学教研室山西汾阳032200

目的:建立HBV基因型和亚型的分型方法,并分析相关的两种方法特异性和敏感性。方法:采用型特异性引物的巢氏PCR-RFLP和六种主要的HBV型特异性引物和亚型特异性引物的多重PCR方法,分别检测了100例患者标本。结果:两法不一致率为50%(27/54... 详细信息

目的:建立HBV基因型和亚型的分型方法,并分析相关的两种方法特异性和敏感性。方法:采用型特异性引物的巢氏PCR-RFLP和六种主要的HBV型特异性引物和亚型特异性引物的多重PCR方法,分别检测了100例患者标本。结果:两法不一致率为50%(27/54)。型特异性引物巢氏PCR-RFLP法检测出B基因型41例(41%),C基因型25例(25%),B+C基因型34例(34%),B j亚型3例(7.3%),Ba亚型为38例(92.7%),Cs亚型为21例(84%),Ce亚型为3例(12%),1例C型未分出亚型(4%)。多重PCR法检出B型18例(33.3%),C型7例(13%),B+C混和型5例(9.3%),B2亚型2例(11%),C1亚型2例(28.5%)。巢氏PCR-RFLP法型检出率100%亚型检出率98.5%,多重PCR法型检出率55.6%,亚型检出率仅为16%,前者高于后者(P<0.05)。结论:巢氏PCR-RFLP鉴定HBV基因型、基因亚型较多重PCR敏感性高,重复性好,但耗时长,费用高。

关键词：聚合酶链反应多态性限制性片段长度肝炎病毒乙型基因型

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豫医无毛小鼠无毛基因部分DNA序列分析

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郑州大学学报（医学版） 2005年第6期40卷 1021-1024页

作者：李敏卢新亚赵国强杜献堂郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州450052

目的:探讨豫医无毛小鼠的无毛基因突变情况。方法:采用PCR方法扩增豫医无毛小鼠无毛基因的部分DNA序列,并进行克隆测序,将测序结果与国外公布的小鼠、大鼠及人无毛基因的cDNA序列做同源性比较和分析,确定该鼠无毛基因的特异性。结果:克... 详细信息

目的:探讨豫医无毛小鼠的无毛基因突变情况。方法:采用PCR方法扩增豫医无毛小鼠无毛基因的部分DNA序列,并进行克隆测序,将测序结果与国外公布的小鼠、大鼠及人无毛基因的cDNA序列做同源性比较和分析,确定该鼠无毛基因的特异性。结果:克隆测序结果为一923bp的片段,相当于Genbank上公布的小鼠无毛基因cDNA序列的3150～3565bp位置,包含4个外显子(外显子13～16)及3个内含子(内含子13～15);与本室以前所测昆明小鼠无毛基因部分DNA序列100%同源,其外显子部分共416bp,可编码138个氨基酸,与国外公布的小鼠、大鼠、人的无毛基因核苷酸同源性分别为100%、95%、84%,氨基酸同源性分别为100%、97.8%、84%。结论:①克隆定序了豫医无毛小鼠无毛基因的部分DNA序列;②排除了豫医无毛小鼠无毛基因的突变发生于本段序列的可能;③无毛基因在哺乳动物体内同源性很高,应属保守基因,其蛋白质产物可能在一些基本的调节途径中起重要作用,推测豫医无毛小鼠的无毛基因可能也位于14号染色体。

关键词：豫医无毛小鼠昆明小鼠无毛基因序列分析

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抗人CD25分子单链抗体基因的构建、表达及初步鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第3期23卷 264-266页

作者：沈弢张爱华闭兰史良如温州医学院基础医学院微生物学与免疫学教研室浙江温州325035 武汉生物制品研究所卫生部单克隆抗体中试实验室湖北武汉430060

目的:构建和表达抗人CD25分子单链抗体(scFv)蛋白,并测定其生物学活性。方法:用RT-PCR方法从能分泌特异性抗CD25单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞中分离纯化抗体VH和VL基因。用重叠延伸PCR方法将VH和VL拼接在一起,构建抗CD25分子scFv的基因... 详细信息

目的:构建和表达抗人CD25分子单链抗体(scFv)蛋白,并测定其生物学活性。方法:用RT-PCR方法从能分泌特异性抗CD25单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞中分离纯化抗体VH和VL基因。用重叠延伸PCR方法将VH和VL拼接在一起,构建抗CD25分子scFv的基因。将scFv基因克隆至pMD18T,用限制性内切酶切以及测序鉴定。将scFv基因连接到pBAD/gⅢA表达载体,转化Top10表达菌。阳性克隆用左旋阿拉伯糖诱导4 h,SDS-PAGE电泳检测蛋白纯度,竞争抑制ELISA实验检测其活性。结果:scFv基因长度约为700 bp。通过DNA序列测定和分析,构建出VL-(GGGGS)3-VH(但其中349位G突变为A,使Linker其中一位Gly→Ser)。其VH隶属于小鼠Ig重链可变区Ⅲ(C)亚类,全长351 bp,可编码117个氨基酸;其VL隶属于小鼠Igκ轻链可变区Ⅳ亚类,全长318 bp,可编码106个氨基酸。TOP10中表达的scFv抗体加上同时融合表达的两个标签6×His和C-mycMr约为31 000,结果符合scFv的Mr。竞争抑制细胞ELISA实验显示表达的scFv具有活性。结论:此scFv基因的表达产物具有一定的特异结合活性。为抗CD25 scFv的临床应用打下了基础。

关键词： CD25 scFv 蛋白表达 ELISA

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人类免疫缺陷病毒与乙型肝炎病毒双重感染的研究进展

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新医学 2008年第6期39卷 420-420,F0003页

作者：沈茹申元英云南大理学院基础医学院微生物学与免疫学教研室 671000

HIV与HBV双重感染会增加患者的病死率,这主要与2种病毒双重感染加重了患者的肝损害有关。其相互作用的致病机制未明,该文阐述了2种病毒双重感染后导致机体损伤的可能机制和治疗原则,为该类患者的临床治疗提供参考。

关键词：人类免疫缺陷病毒获得性免疫缺陷综合征乙型肝炎病毒感染

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幽门螺杆菌napA-ctxB融合蛋白的基因克隆与表达

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免疫学杂志 2007年第2期23卷 172-175页

作者：邓颖杨致邦王勇黄进张绍兰叶翠莲重庆医科大学基础医学院微生物学与免疫学教研室重庆400016

目的克隆、表达幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白napA与霍乱毒素B亚单位ctxB融合基因napA-ctxB(nctB),为制备预防***感染的疫苗奠定基础。方法用PCR方法扩增ctxB目的基因片段,克隆至pQE30-napA质粒的napA基因上游,构建含双基因的表达质粒pQ... 详细信息

目的克隆、表达幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白napA与霍乱毒素B亚单位ctxB融合基因napA-ctxB(nctB),为制备预防***感染的疫苗奠定基础。方法用PCR方法扩增ctxB目的基因片段,克隆至pQE30-napA质粒的napA基因上游,构建含双基因的表达质粒pQE30-napA-ctxB(pQE30-nctB),经测序分析确认后转化***5α,经IPTG诱导表达融合蛋白NCTB,融合蛋白NCTB经镍离子柱纯化。结果PCR扩增出807bp的目的基因片段nctB。工程菌pQE30-nctB-DH5α经IPTG诱导后,SDS-PAGE显示有新生的蛋白表达条带,Mr为30000,与预期的一致,约占菌体总蛋白的27%,重组蛋白用Ni2+-NTA树脂提纯,纯化后的蛋白质经SDS-PAGE分析可见单一条带,图象软件分析表明纯度可达94%以上。Westernblot显示重组蛋白质有良好的抗原性。结论构建含双基因的表达质粒pQE30-nctB成功,并在大肠杆菌DH5α中高效的表达。

关键词：幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白霍乱毒素B亚单位融合基因

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结核分枝杆菌分泌蛋白早期分泌性抗原6(ESAT-6)的免疫学性质及其在新型疫苗中作用的研究进展

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细胞与分子免疫学杂志 2024年第1期40卷 89-94页

作者：李玉洁余海燕杨雨婷杨国平大理大学基础医学院医学微生物学及免疫学教研室云南大理671000

早期分泌性抗原6(ESAT-6)是结核分枝杆菌(MTB)关键的毒力因子,可通过抑制巨噬细胞的吞噬杀菌功能与自噬反应抵抗机体对MTB的清除,从而减弱机体对MTB感染的免疫防御功能。此外,ESAT-6诱导的巨噬细胞的凋亡与固有免疫细胞的大量坏死可促进... 详细信息

早期分泌性抗原6(ESAT-6)是结核分枝杆菌(MTB)关键的毒力因子,可通过抑制巨噬细胞的吞噬杀菌功能与自噬反应抵抗机体对MTB的清除,从而减弱机体对MTB感染的免疫防御功能。此外,ESAT-6诱导的巨噬细胞的凋亡与固有免疫细胞的大量坏死可促进MTB的扩散、定植,引发MTB的全身感染。ESAT-6还可抑制Th1细胞的保护性免疫反应从而抑制相关促炎细胞因子的分泌,引发机体免疫功能的紊乱,加速MTB感染进程。在这一感染过程中,ESAT-6所具备的高度免疫原性使其可作为优势抗原用于新型结核病(TB)疫苗的研制,具有广阔的发展前景。

关键词：结核分枝杆菌(MTB) 早期分泌性抗原6(ESAT-6) 自噬凋亡优势抗原综述

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AIDS疫苗的研究策略及其进展

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中国现代医学杂志 2007年第3期17卷 312-316页

作者：杜丽华王玲昆明医学院基础医学院微生物学暨免疫学教研室云南昆明650031

随着艾滋病发病率增长,严重威胁着人类生命。因而,研制和发展HIV疫苗是人类抑制和消灭HIV感染的必要手段,该文综述了HIV疫苗迄今所实施的各种研究策略。

关键词： HIV AIDS 疫苗免疫应答

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H5N8流感病毒密码子偏爱性及聚类分析

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中国病原生物学杂志 2018年第5期13卷 494-498,503页

作者：田明明魏雪玲杨兴宋秀锋李光华刘奇大理大学基础医学院医学微生物学及免疫学教研室云南大理671000

目的探索H5N8流感病毒相关蛋白的密码子偏爱性及其变化趋势。方法运用CUSP、CodonW等生物信息软件对2000年以来的H5N8流行株相关蛋白的编码序列进行密码子偏爱性分析,并以重要的人类流感病毒作为参照进行聚类分析。结果 H5N8流感病毒相... 详细信息

目的探索H5N8流感病毒相关蛋白的密码子偏爱性及其变化趋势。方法运用CUSP、CodonW等生物信息软件对2000年以来的H5N8流行株相关蛋白的编码序列进行密码子偏爱性分析,并以重要的人类流感病毒作为参照进行聚类分析。结果 H5N8流感病毒相关蛋白的有效密码子数目(ENC)值均较高,密码子偏性总体较低;相关蛋白的偏爱密码子有差异性。ENC-Plot及中性分析显示,H5N8在进化过程中主要受自然选择因素的影响。聚类分析显示,除NA蛋白的密码子偏爱性相对稳定外,其他蛋白在2010、2014、2016年流行株发生了明显改变。结论近年来H5N8在环境压力下发生快速突变,其跨物种感染人的风险进一步加强,而NA密码子偏爱性变化可能是监测的重点。

关键词：禽流感病毒偏爱性分析 ENC-Polt分析聚类分析

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