检索结果-内蒙古大学图书馆

生物医学工程学杂志 2012年第3期29卷 530-533页

作者：唐佳许晓玲聂小霞茅奇峰高基民温州医学院浙江省模式生物技术与应用重点实验室温州325035

以本实验室构建的pET24a-hrIL-11表达载体为模板,PCR扩增重组人白细胞介素11(hrIL-11)的基因,克隆入pET21a表达载体,转化BL-21(DE3),经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导产生hrIL-11/His融合蛋白,并经Western blot实验确认。原核表达... 详细信息

以本实验室构建的pET24a-hrIL-11表达载体为模板,PCR扩增重组人白细胞介素11(hrIL-11)的基因,克隆入pET21a表达载体,转化BL-21(DE3),经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导产生hrIL-11/His融合蛋白,并经Western blot实验确认。原核表达的hrIL-11/His融合蛋白经变性后,利用亲和层析纯化,目的蛋白纯度达95%以上。纯化后蛋白经尿素梯度复性后,比活达到1×106 IU/mg。研究结果为进一步研究该蛋白在促进血小板增殖等方面的作用奠定了基础。

关键词：重组人白细胞介素11 原核表达纯化生物学活性

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制备可溶性肿瘤坏死因子受体Ⅱ-脂联素球部融合蛋白的两种细胞培养工艺比较

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生物工程学报 2013年第1期29卷 115-118页

作者：黄世高尹玉婷熊春晖王彩虹吕建新高基民温州医学院浙江省模式生物技术与应用重点实验室浙江温州325035

利用7．5L生物反应器篮式贴壁培养和全悬浮批式培养CHO工程细胞株表达可溶性肿瘤坏死因子受体Ⅱ-脂联素球部（sTNFRII-gAD）融合蛋白，比较这两种培养方法的产率，以便优化高效表达sTNFRII—gAD融合蛋白的制备工艺。篮式贴壁培养首先小... 详细信息

利用7．5L生物反应器篮式贴壁培养和全悬浮批式培养CHO工程细胞株表达可溶性肿瘤坏死因子受体Ⅱ-脂联素球部（sTNFRII-gAD）融合蛋白，比较这两种培养方法的产率，以便优化高效表达sTNFRII—gAD融合蛋白的制备工艺。篮式贴壁培养首先小规模培养CHO工程细胞株，待细胞增殖到一定密度后以3×105-4×10^5cells／mL密度接种生物反应器贴壁培养3d，调换成不含血清的LK021培养基继续培养4d。而全悬浮无血清批式培养则以3×10^5-4×10^5cells／mL密度的CHO工程细胞株接种于生物反应器，连续培养7d。培养过程实时监测培养条件，维持pH和DO的稳定。分别收集细胞上清，离心去细胞后用Pellicon切相流超滤系统对蛋白进行浓缩，并通过DEAE离子交换柱进行纯化。结果显示，篮式贴壁培养和全悬浮批式培养均成功表达了sTNFRII-gAD融合蛋白，产量分别为8．0mg／L和7．5mg／L、纯度分别为95％和98％，从而为sTNFRII-gAD融合蛋白的中试工艺研究提供了一定的基础。

关键词：可溶性肿瘤坏死因子受体Ⅱ-脂联素球部融合蛋白生物反应器 CHO细胞真核表达

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杆状病毒表面展示丙型肝炎病毒结构蛋白及其对丙型肝炎病毒的检测

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中国病理生理杂志 2012年第10期28卷 1910-1916页

作者：李祥金爱慧邹立林高基民吕建新温州医学院浙江省医学遗传学重点实验室浙江省模式生物技术与应用重点实验室浙江温州325035

目的:利用杆状病毒表面展示系统对丙型肝炎病毒(HCV)进行早期检测。方法:利用杆状病毒表面展示(baculovirus surface display)技术,构建展示HCV结构蛋白的重组杆状病毒vAc-Flag-HCV C-GP64、vAc-Flag-HCV E-GP64和vAc-Flag-CE-GP64。结果:(1)Western blotting分析结果表明重组杆状病毒表达了C(HCV核心蛋白)、E(HCV包膜蛋白)和CE蛋白。(2)激光共聚焦显微镜检测结果表明,重组杆状病毒感染昆虫细胞Sf9后在昆虫细胞膜上表达了C、E和CE蛋白。(3)免疫金电子显微镜观察表明重组蛋白展示在杆状病毒囊膜上。(4)重组病毒进行浓缩纯化后,利用时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术对HCV样本进行检测,vAc-Flag-CE-GP64的检测阳性率可达80.2%。结论:vAc-Flag-CE-GP64可用于对HCV进行早期检测。

关键词：肝炎病毒,丙型杆状病毒表面展示时间分辨荧光免疫分析

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丙型肝炎病毒Core蛋白类病毒颗粒的表达及纯化

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中国老年学杂志 2012年第21期32卷 4700-4703页

作者：李祥邹立林吕建新高基民温州医学院浙江省医学遗传学重点实验室浙江省模式生物技术与应用重点实验室浙江温州325035

目的通过PCR将丙肝病毒(HCV)Core与蜂毒素信号肽(Mel)进行融合,构建到pIZ/V5载体上获得pIZ/V5-Core-Mel表达载体。方法将pIZ/V5-Mel-core稳定转染Sf9细胞,经Zeocin抗性筛选,获得单克隆抗性细胞株。RT-PCR检测结果表明获得稳定表达Mel-c... 详细信息

目的通过PCR将丙肝病毒(HCV)Core与蜂毒素信号肽(Mel)进行融合,构建到pIZ/V5载体上获得pIZ/V5-Core-Mel表达载体。方法将pIZ/V5-Mel-core稳定转染Sf9细胞,经Zeocin抗性筛选,获得单克隆抗性细胞株。RT-PCR检测结果表明获得稳定表达Mel-core的细胞系Sf9-Core。对稳定细胞系Sf9-Core的上清进行离心纯化并Western印迹检测。结果在上清离心纯化的样品中有HCV Core形成的类病毒颗粒(VLPs)。透射电镜显示Core蛋白能自组装成直径约30 nm的球形颗粒。结论该研究成功构建了HCV Core与蜂毒素信号肽的融合蛋白并在Sf9细胞稳定表达,在细胞培养的上清中获得了VLPs。

关键词：丙型肝炎病毒 Core蛋白类病毒颗粒

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环境致癌物诱导慢性炎症致肺癌发生发展的研究进展

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生物化学与生物物理进展 2014年第1期41卷 41-51页

作者：吕建祎张敏金红蕾竹俊兰危金龙代佳黄海山高基民温州医科大学检验医学院/生命科学学院浙江省模式生物技术与应用重点实验室温州325035

近年来,由于工业发展负面影响造成的环境污染及吸烟等不良嗜好导致吸入人体肺部的致癌物急剧增加,致使肺癌的发病率及死亡率逐年升高,已跃居各癌症之首.研究表明,环境致癌物诱导肺部慢性炎症与肺癌的发生发展之间存在着紧密联系,环境致... 详细信息

近年来,由于工业发展负面影响造成的环境污染及吸烟等不良嗜好导致吸入人体肺部的致癌物急剧增加,致使肺癌的发病率及死亡率逐年升高,已跃居各癌症之首.研究表明,环境致癌物诱导肺部慢性炎症与肺癌的发生发展之间存在着紧密联系,环境致癌物如砷、镍及苯并芘等暴露可激活NFAT、NF-κB、AP-1等转录因子,调控炎症因子如TNFα及COX-2等的表达,且这些炎性因子的释放又可正反馈激活转录因子,促进更多的炎性因子产生,进而形成炎性因子产生回路,维持肺部炎性微环境,从而促进肺癌的发生发展.本文就环境致癌物诱导肺部炎症导致肺癌发生发展的分子机制及其相关信号通路进行了综述.

关键词：环境致癌物炎症恶性转化肺癌

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用于时间分辨荧光免疫分析的结核分枝杆菌培养滤液蛋白10参照品的制备

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南方医科大学学报 2011年第6期31卷 955-959页

作者：郭芳芳邹立林吴英松胡志明李金龙吕建新高基民南方医科大学生物技术学院生物治疗研究所广东广州510515 温州医学院浙江省医学遗传学重点实验室/浙江省模式生物技术与应用重点实验室浙江温州325035

目的通过基因工程技术制备结核分枝杆菌培养滤液蛋白10(CFP10)、链亲和素(SA)/CFP10融合蛋白(包括SA-CFP10、CFP10-SA),筛选灵敏度最高、稳定性最好者作为时间分辨荧光免疫分析法检测(TRFIA)的参考标准品。方法以结核分枝杆菌H37Rv标准... 详细信息

目的通过基因工程技术制备结核分枝杆菌培养滤液蛋白10(CFP10)、链亲和素(SA)/CFP10融合蛋白(包括SA-CFP10、CFP10-SA),筛选灵敏度最高、稳定性最好者作为时间分辨荧光免疫分析法检测(TRFIA)的参考标准品。方法以结核分枝杆菌H37Rv标准株基因组为模板,扩增CFP10基因,将其克隆到pET24b、pET24b-SA、pET21a-SA三种载体中,转化到大肠杆菌Rosetta中进行表达,表达产物经镍离子亲和层析(Ni-NTA)柱纯化,透析法复性。三种重组蛋白用双抗体夹心法TRFIA从灵敏度、稳定性两方面进行评价。结果成功构建了pET24b-CFP10、pET24b-SA-CFP10和pET21a-CFP10-SA三种表达载体,重组蛋白CFP10主要为可溶形式表达,融合蛋白CFP10-SA、SA-CFP10均以包涵体形式存在,Ni-NTA柱纯化后透析复性,纯度均可达90%以上。三种重组蛋白经双抗体夹心TRFIA,CFP10-SA灵敏度最高(0.02μg/L),稳定性最好。结论得到了灵敏度高、稳定性好的TRFIA检测CFP10的参照品CFP10-SA融合蛋白,为研制该结核分支杆菌时间分辨荧光诊断试剂盒,并应用于临床打下了基础。

关键词：结核分枝杆菌培养滤液蛋白10 时间分辨荧光分析法

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PFOA对斑马鱼胚胎发育、行为和DNA损伤的毒性研究(英文)

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生态毒理学报 2012年第3期7卷 241-250页

作者：崔燕白承连徐涛王晓彤陈元红靳大庆温州医学院水域科学与环境生态研究所浙江省模式生物技术与应用重点实验室温州325035

全氟辛酸(PFOA)是一种分布广泛的环境持久性有机污染物,在野生动物与人体内普遍被检出。目前PFOA发育毒性的特点和机制尚未阐明,已有的研究显示,PFOA毒性与受试物种及性别密切相关。因此,利用不同物种进行PFOA毒性研究对阐明其毒性机制... 详细信息

全氟辛酸(PFOA)是一种分布广泛的环境持久性有机污染物,在野生动物与人体内普遍被检出。目前PFOA发育毒性的特点和机制尚未阐明,已有的研究显示,PFOA毒性与受试物种及性别密切相关。因此,利用不同物种进行PFOA毒性研究对阐明其毒性机制十分重要。本研究选用了斑马鱼这种理想的脊椎动物模型,考察了PFOA暴露对其胚胎发育的自主运动、心跳、行为、细胞凋亡和DNA损伤的影响。研究发现,始于6hpf的PFOA暴露会导致斑马鱼胚胎自主运动异常,心率降低,且具有一定的剂量依赖性;6～24hpf的高浓度的PFOA暴露(>414.0mg·L-1)会导致胚胎发生显著的细胞凋亡,凋亡主要出现在眼部、头部、心脏和尾部。较高浓度的PFOA暴露(165.6mg·L-1)会使仔鱼的光刺激应激行为模式发生变化。此外,PFOA暴露会致使斑马鱼发生DNA损伤,且损伤程度随PFOA浓度的升高而加重,表明PFOA具有一定的基因毒性。上述结果表明,PFOA对斑马鱼胚胎具有发育毒性,具体表现为自主运动异常,心率降低和行为反应能力变弱,同时伴随畸形、细胞凋亡和DNA损伤。

关键词：全氟辛酸(PFOA) 斑马鱼胚胎发育毒性行为反应 DNA损伤

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构建一种基于双启动子模型的特异性检测镉离子的大肠杆菌传感器

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生物工程学报 2015年第11期31卷 1601-1611页

作者：吕攀攀肖芳兰严锡娟卢彬彬林炜炜许清清张珍珍王伍吕建新温州医科大学检验医学院生命科学学院浙江省模式生物技术与应用重点实验室浙江温州325000

为构建一种能够特异性检测镉离子的大肠杆菌荧光报告菌株,本研究通过对检测元件模式和荧光蛋白的筛选后,以蓝色荧光蛋白mTagBFP2基因作为报告基因,使用双启动子模式,构建融合报告载体Pmer::merR-m-Pmer::mTagBFP2-pMD19-T。然后将报告... 详细信息

为构建一种能够特异性检测镉离子的大肠杆菌荧光报告菌株,本研究通过对检测元件模式和荧光蛋白的筛选后,以蓝色荧光蛋白mTagBFP2基因作为报告基因,使用双启动子模式,构建融合报告载体Pmer::merR-m-Pmer::mTagBFP2-pMD19-T。然后将报告载体转化至*** MC4100菌中,构建特异性检测镉离子的微生物传感器,并对此微生物传感器进行了最佳培养基、起始诱导浓度和时间、最适检测范围等相关参数的确定,以及对特异性进行了测定。研究表明,此微生物传感器检测镉离子背景信号低,选定起始菌液浓度为OD600=0.1,于IHMM培养基中诱导2 h为最佳检测条件,检测镉离子线性浓度范围为0.1-75μmol/L,并且只对Cd2+响应,特异性较高。因此,本研究成功构建了能够特异性检测镉离子的生物传感器,为重金属微生物传感器的优化研究工作提供了有用方案。

关键词：微生物传感器镉离子检测双启动子蓝色荧光蛋白

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构建一种检测水中As^(3+)的敏感型大肠杆菌

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生物工程学报 2016年第8期32卷 1081-1092页

作者：王伍纪松军黄招竹卢彬彬吕建新温州医科大学检验医学院生命科学学院浙江省模式生物技术与应用重点实验室浙江温州325000

为构建一种敏感性强、特异性好的检测砷离子的大肠杆菌荧光报告菌株,本研究利用基因敲除技术,敲除了大肠杆菌中负责向胞外转运砷离子的ars B基因,构建对As^(3+)敏感的菌株;利用egfp基因作为报告基因,构建融合检测载体p ET28b-Pars-ars R... 详细信息

为构建一种敏感性强、特异性好的检测砷离子的大肠杆菌荧光报告菌株,本研究利用基因敲除技术,敲除了大肠杆菌中负责向胞外转运砷离子的ars B基因,构建对As^(3+)敏感的菌株;利用egfp基因作为报告基因,构建融合检测载体p ET28b-Pars-ars R-egfp。然后将检测载体p ET28b-Pars-ars R-egfp转化至ars B基因敲除菌中完成敏感型As^(3+)检测菌株的构建。接着对此微生物传感器进行了检测条件的优化,以及线性检测范围、最低检出限、特异性等性能的确定。研究结果表明,与利用野生大肠杆菌作为检测宿主相比,此敏感型砷检测菌株对检测As^(3+)的灵敏度有显著提高,最适检测As^(3+)浓度范围为0.013-42.71μmol/L,最低检出下限为5.13 nmol/L。因此,本研究利用基因敲除技术对大肠杆菌进行改造,成功地提高了砷检测微生物传感器的灵敏度,为重金属微生物传感器的优化研究工作提供了有用方案。

关键词： As3+检测大肠杆菌 arsB基因基因敲除敏感性

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链亲和素标记的人粒细胞巨噬细胞-集落刺激因子融合蛋白的制备(英文)

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南方医科大学学报 2012年第10期32卷 1389-1393页

作者：白莉胡志明王菲许晓玲夏昶金丽琴李金龙高基民南方医科大学生物技术学院生物治疗研究所广东广州510515 温州医学院生命科学学院浙江省模式生物技术与应用重点实验室浙江温州325035

目的制备链亲和素(SA)标记的人粒细胞巨噬细胞-集落刺激因子(hGM-CSF)融合蛋白SA-hGM-CSF和hGM-CSF-SA,并鉴定其生物学活性。方法构建原核表达质粒PET24a-6His-SA-L-hGM-CSF和PET24a-hGM-CSF-L-SA-6His,转化大肠杆菌Rosetta(DE3),用镍金属螯合(Ni-NTA)层析柱进行纯化,并对其进行复性。复性后蛋白用DEAE-Sepharose FF阴离子交换层析进一步纯化。MTT法检测融合蛋白对人红白血病细胞(TF-1)的增殖活性。流式细胞仪分析融合蛋白对生物素化的MB49细胞锚定修饰效率。结果 SA-hGM-CSF和hGM-CSF-SA两种融合蛋白在大肠杆菌中实现了高效表达,目标蛋白占菌体蛋白的20%以上,纯化后纯度达到96%以上。两种融合蛋白均具有双功能活性,即同时具有hGM-CSF的促进人红白血病细胞增殖的活性和SA介导的高效结合至表面生物素化的MB49细胞的功能(锚定修饰率大于99%)。结论研制的SA/hGM-CSF融合蛋白具有双重活性,可为研制hGM-CSF表面修饰的新型肿瘤细胞疫苗提供基础。

关键词：人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子链亲和素肿瘤细胞疫苗融合蛋白

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