检索结果-内蒙古大学图书馆

2015年浙江省医学遗传学学术年会暨高通量基因测序产前筛查与诊断技术研讨会

作者：张增君付汝宁张娟娟赵福新管敏鑫温州医科大学Attardi线粒体生物医学研究院和浙江省医学遗传学重点实验室温州医学院眼视光学院浙江大学生命科学学院浙江大学遗传研究所

目的:通过对仅有女性母系成员发病的七个携带线粒体ND4G11778A突变的Leber遗传性视神经病变(Leber's Hereditary Optic Neuropathy,LHON)家系进行临床、遗传和分子特征分析评估,探讨线粒体ND4G11778A突变突变在LHON发生发展中的作用... 详细信息

目的:通过对仅有女性母系成员发病的七个携带线粒体ND4G11778A突变的Leber遗传性视神经病变(Leber's Hereditary Optic Neuropathy,LHON)家系进行临床、遗传和分子特征分析评估,探讨线粒体ND4G11778A突变突变在LHON发生发展中的作用;方法:对1362个家系进行ND4基因的筛查,线粒体全基因组测序;结果:发现有7个携带线粒体ND4G11778A突变的LHON家系仅有女性母系成员发病。本研究的7个家系先证者视力损伤程度从轻度到重度不等,发病年龄从9岁到26岁不等,平均发病年龄为17岁,属于LHON的高发年龄阶段。这7个家系外显率较低,分别为33.3%、15.0%、6.7%、10.0%、8.3%、6.7%、33.3%,平均外显率为16.2%。这些家系的线粒体单体型分别属于B5a、Z、N9、B4clb、G2h、B5a、M7b。结论:这7个携带相同突变的不同家系之间,及有相同线粒体遗传背景的同一家系的不同母系成员之间LHON外显率、表现度和发病年龄有着显著的差异,这表明G11778A突变是视神经病变发病的分子基础,但突变本身不足以造成LHON的表型表达,提示其他修饰因子(线粒体单体型、核修饰基因及环境因素)在疾病的发生中起着一定的作用。

关键词： Leber遗传性视神经病变 G11778A突变女性母系成员线粒体单体型修饰因子

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二次蔗糖密度梯度离心纯化线粒体

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中国细胞生物学学报 2013年第4期35卷 510-515页

作者：周望展黄君况凌云周晓静郭能能吕建新刘丹慧温州医学院细胞与分子医学研究所浙江省医学遗传学重点实验室温州325035

该研究以小鼠肝组织和脑组织为原材料,对常规的差速离心法结合密度梯度离心纯化线粒体的方法进行改进,发现在常规操作步骤上增加一次非线性蔗糖密度梯度离心可以有效地提高线粒体纯度。透射电镜及免疫印迹鉴定结果显示,增加一次密度梯... 详细信息

该研究以小鼠肝组织和脑组织为原材料,对常规的差速离心法结合密度梯度离心纯化线粒体的方法进行改进,发现在常规操作步骤上增加一次非线性蔗糖密度梯度离心可以有效地提高线粒体纯度。透射电镜及免疫印迹鉴定结果显示,增加一次密度梯度离心后,线粒体纯度大大提高,而对线粒体得率影响有限。虽然这样延长了实验时间,但线粒体膜电位及琥珀酸脱氢酶比活实验证实,在线粒体纯度获得提高的同时,其活力并没有受到明显影响。因此,建议在进行线粒体蛋白质组检测等对线粒体纯度有较高要求的实验时,可以增加一次或者二次非线性蔗糖密度梯度离心,在维持线粒体活力的同时,提高其纯度,有利于后续实验的开展。

关键词：线粒体纯化两次非线性蔗糖密度梯度离心透射电子显微镜

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ATP依赖的人Lon蛋白酶的表达、纯化及其活性鉴定

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中国细胞生物学学报 2012年第9期34卷 899-905页

作者：姚蔚夏雷刘永章黎真王璐吕斌温州医学院生物物理研究所温州325035 温州医学院检验医学与生命科学学院生物系温州325035 温州医学院Attardi线粒体生物医学研究院温州325035 浙江省医学遗传学重点实验室温州325035

ATP依赖的人Lon蛋白酶是一种同质寡聚、环状的蛋白酶,主要位于细胞线粒体基质中。许多研究表明,Lon蛋白酶对于维护细胞的内环境稳定起着重要作用,并参与线粒体蛋白质量控制和代谢调控。将pPROEX1 His6-Lon重组质粒在Escherichia coli Ro... 详细信息

ATP依赖的人Lon蛋白酶是一种同质寡聚、环状的蛋白酶,主要位于细胞线粒体基质中。许多研究表明,Lon蛋白酶对于维护细胞的内环境稳定起着重要作用,并参与线粒体蛋白质量控制和代谢调控。将pPROEX1 His6-Lon重组质粒在Escherichia coli Rosetta 2菌株中诱导表达用Ni2+柱亲和层析法纯化,获得纯度较高的目的蛋白。经纯化后,Lon蛋白酶的比酶活达到0.17 U/mg。通过多肽底物Rhodamine 110、bis-(CBZ-L-alanyl-L-alanine amide)[(Z-AA)2 Rh110]的降解检测显示,Lon蛋白酶具有肽酶活性,并被ATP所刺激。Casein和线粒体转录因子A降解实验表明,纯化的Lon蛋白酶具有蛋白水解活性,而且蛋白水解活性依赖于ATP。

关键词：线粒体 Lon蛋白酶蛋白纯化蛋白酶活性

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与耳聋相关的线粒体12S rRNA突变

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中国生物化学与分子生物学报 2012年第4期28卷 316-325页

作者：张婷曾爱平郑静管敏鑫温州医学院Attardi线粒体生物医学研究院和浙江省医学遗传学重点实验室浙江温州325035 温岭市第一人民医院检验科暨温州医学院附属温岭医院检验科浙江温岭317500 浙江大学生命科学学院遗传学研究所浙江杭州310058

线粒体DNA突变是引起听力损伤的重要原因之一.其中,线粒体12S rRNA基因突变与综合征型耳聋和非综合征型耳聋相关.导致综合征型耳聋的线粒体DNA突变多为异质性,然而对于非综合征型耳聋突变则多以同质性或高度异质性存在,说明这种分子致... 详细信息

线粒体DNA突变是引起听力损伤的重要原因之一.其中,线粒体12S rRNA基因突变与综合征型耳聋和非综合征型耳聋相关.导致综合征型耳聋的线粒体DNA突变多为异质性,然而对于非综合征型耳聋突变则多以同质性或高度异质性存在,说明这种分子致病性需要较高的阈值.位于12S rRNA解码区的A1555G和C1494T突变是造成氨基糖甙类抗生素耳毒性和非综合征型耳聋常见的分子机制.这些突变可能造成12S rRNA二级结构的改变,影响线粒体蛋白质的合成,降低细胞内ATP的产生,由此引起的线粒体功能障碍导致耳聋.但是多数基因突变的致病机制还仅处于推测阶段.其它修饰因子如氨基糖甙类抗生素、线粒体单体型、核修饰基因参与了线粒体12SrRNA基因A1555G和C1494T突变相关的耳聋表型表达.

关键词：线粒体12S rRNA 突变耳聋修饰因子

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mIL21-SA双功能融合蛋白锚定治疗膀胱癌实验研究

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生物技术 2012年第4期22卷 83-87页

作者：王菲胡志明法萍萍白莉石小军罗满生李金龙高基民南方医科大学生物技术学院生物治疗研究所广东广州510515 温州医学院浙江省医学遗传学重点实验室/浙江省模式生物技术与应用重点实验室浙江温州325035

目的:制备链亲合素标记的鼠白细胞介素21融合蛋白(mIL21-SA),治疗小鼠表浅膀胱癌。方法:构建mIL21-SA-pET21质粒,BL21表达,Ni-NTA纯化,透析复性,Western blot鉴定,MTT法检测其对小鼠胸腺细胞的增殖作用,流式检测其对生物素化的MB49锚定... 详细信息

目的:制备链亲合素标记的鼠白细胞介素21融合蛋白(mIL21-SA),治疗小鼠表浅膀胱癌。方法:构建mIL21-SA-pET21质粒,BL21表达,Ni-NTA纯化,透析复性,Western blot鉴定,MTT法检测其对小鼠胸腺细胞的增殖作用,流式检测其对生物素化的MB49锚定修饰率。建立小鼠MB49表浅膀胱癌模型,将mIL21-SA锚定在小鼠膀胱表面进行治疗并观察小鼠存活时间。60d后对mIL21-SA治疗后存活小鼠进行二次攻击。结果:mIL21-SA可以促进T细胞增殖,且具有SA介导的高效结合已生物素化的MB49表面的功能(修饰率98.74%)。膀胱灌注60d后,mIL21-SA组有10只(10/25)存活,二次攻击后,仍有6只(6/10)存活。与对照组比较均有统计学意义(P<0.05)。结论:该实验研制了具有双重活性的mIL21-SA,mIL21-SA锚定修饰治疗表浅膀胱癌是一种有效的免疫治疗方法。

关键词：链亲合素白细胞介素21 锚定表浅膀胱癌

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乳杆菌细胞壁成分激活人阴道上皮细胞β-防御素-2表达机制研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2011年第4期31卷 289-293页

作者：刘佳明屠燕烨郭雅君丁卉楼永良温州医学院微生态学研究所浙江省医学遗传学重点实验室325035

目的探讨乳杆菌细胞壁成分（Lactobacillus cell wall extract，LCWE）对人阴道上皮细胞β-防御素之的诱导作用及细胞内信号转导机制。方法采用实时定量PCR和Western blot方法检测LCWE处理对人阴道卜皮细胞（WZV-1）β-防御素-2表达的... 详细信息

目的探讨乳杆菌细胞壁成分（Lactobacillus cell wall extract，LCWE）对人阴道上皮细胞β-防御素之的诱导作用及细胞内信号转导机制。方法采用实时定量PCR和Western blot方法检测LCWE处理对人阴道卜皮细胞（WZV-1）β-防御素-2表达的影响；Western blot方法检测LCWE处理后WZV-1细胞内NF-κB和p38MAPK信号通路活化情况；实时定量PCR和Westernblot方法检测NF-κB抑制剂和p38MAPK抑制剂预处理WZV-1细胞对LCWE诱导β-防御素-2表达的影响。结果LCWE可诱导WZV-1细胞β-防御素-2表达且存在着明显的时间效应和剂量依赖关系，50μg／mlLCWE处理细胞8h对β-防御素-2的i：调幅度最大，刺激0．5h后可引起细胞内p38MAPK蛋白的磷酸化显著增加，1h达到顶峰；刺激0．5h后可引起细胞核内NF-κB含量显著增加（P〈0．05），2h达到顶峰。NF-κB抑制剂PDTC、p38MAPK抑制剂SB20380预处理WZV-1细胞，可明显抑制LCWE诱导WZV-1细胞β-防御素-2的表达。结论LCWE具有激活NF-κB和p38MAPK信号通路诱导阴道上皮细胞β-防御素-2的作用。

关键词：乳杆菌细胞壁成分人阴道上皮细胞人β-防御素-2 p38MAPK NF-κB

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几个能量代谢相关蛋白在HeLa细胞自噬过程中表达下调

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中国细胞生物学学报 2011年第6期33卷 651-657页

作者：刘丹慧韩姗姗李潞云曲业敏林虹文杰吕建新温州医学院细胞与分子医学研究所浙江省医学遗传学重点实验室蛋白质组学研究所温州325035

自噬是真核细胞中的一种保守的代谢信号通路。人们已经知道自噬与肿瘤发生等疾病密切相关,但对于自噬的分子机制仍然不是很清楚。鉴定更多的自噬相关蛋白对于进一步阐明自噬的分子机制具有重要意义。该研究使用饥饿法处理HeLa细胞,通过... 详细信息

自噬是真核细胞中的一种保守的代谢信号通路。人们已经知道自噬与肿瘤发生等疾病密切相关,但对于自噬的分子机制仍然不是很清楚。鉴定更多的自噬相关蛋白对于进一步阐明自噬的分子机制具有重要意义。该研究使用饥饿法处理HeLa细胞,通过电镜观察以及检测自噬标记蛋白LC3-I的转换,证实HeLa细胞发生了明显的自噬。之后,使用双向电泳结合串联质谱分析鉴定细胞自噬时发生变化的蛋白质。结果发现果糖二磷酸醛缩酶A、GAPDH和ATP合成酶O亚基的量在HeLa细胞发生自噬后明显降低。实时定量PCR结果证明饥饿诱导后,这三种蛋白的mRNA水平都发生了明显的下降。使用自噬抑制剂3-Methyladenine预处理HeLa细胞后再行饥饿,三种蛋白mRNA的表达水平与正常细胞相当而明显高于饥饿诱导的细胞。结果表明这三种蛋白在饥饿诱导的自噬中表达下调,其分子机制还有待进一步研究。

关键词：自噬饥饿双向电泳质谱差异蛋白

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大肠杆菌拓扑异构酶I是一种锌和铁结合蛋白

大肠杆菌拓扑异构酶I是一种锌和铁结合蛋白

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“细胞活动生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会

作者：吕建新王伍谭国强易鹏思凡任亚光丁焕根温州医学院细胞与分子医学院研究所温州医学院浙江省医学遗传学重点实验室温州医学院浙江省模式生物技术与应用重点实验室

大肠杆菌拓扑异构酶I(TopA)可以催化双链DNA中单链的断裂和再连接反应而使负超螺旋拓扑状态得到松弛。TopA从结构上分析,包括了N端的催化片段和C端的锌结合域,后者对于负超螺旋结构的松弛是必需的。我们发现从LB培养基中表达纯化出来的... 详细信息

大肠杆菌拓扑异构酶I(TopA)可以催化双链DNA中单链的断裂和再连接反应而使负超螺旋拓扑状态得到松弛。TopA从结构上分析,包括了N端的催化片段和C端的锌结合域,后者对于负超螺旋结构的松弛是必需的。我们发现从LB培养基中表达纯化出来的大肠杆菌TopA同时结合了锌和铁。但是,从M9基础培养基中表达纯化的TopA结合了极微量的锌和铁,且没有拓扑异构酶活性。

关键词：铁结合蛋白拓扑异构酶大肠杆菌

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大肠杆菌铁硫簇组装蛋白IscA的铁结合活性研究

大肠杆菌铁硫簇组装蛋白IscA的铁结合活性研究

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“细胞活动生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会

作者：王伍谭国强司凡刘敏吕建新丁焕根温州医学院细胞与分子医学院研究所温州医学院浙江省医学遗传学重点实验室温州医学院浙江省模式生物技术与应用重点实验室

铁硫蛋白是真核生物线粒体中一类重要的功能蛋白,在细胞能量代谢、电子呼吸链传递过程中发挥了关键作用。IscA是铁硫簇组装蛋白系统中十分重要的一种,但是它的生理功能至今仍未完全阐明。我们以大肠杆菌IscA蛋白为研究对象,阐述了大肠杆... 详细信息

铁硫蛋白是真核生物线粒体中一类重要的功能蛋白,在细胞能量代谢、电子呼吸链传递过程中发挥了关键作用。IscA是铁硫簇组装蛋白系统中十分重要的一种,但是它的生理功能至今仍未完全阐明。我们以大肠杆菌IscA蛋白为研究对象,阐述了大肠杆菌IscA的体内铁结合活性。有氧条件下在M9基础培养基中添加1μM的外源铁就可以使大肠杆菌中表达的IscA蛋白结合的铁达到最大程度。相反,在相同实验条件下,大肠杆菌铁硫簇组装支架蛋白IscU和人Frataxin的大肠杆菌同源蛋白Cyay在体内都不能结合铁。值得注意的是,IscA这种很强的体内铁结合活性在土氧条件下显著减弱,进一步研究发现氧气可以促发IscA的铁结合能力,而且铁的这种结合作用反过来可以保护铁在有氧条件下免受氧气的氧化作用生成不可利用的氢氧化铁。与之相一致的是,我们发现大肠杆菌IscA和它的同系蛋白SufA对大肠杆菌的有氧生长是必需的。上述体内实验证据说明了IscA可能作为一种铁的分子伴侣参与了有氧条件下线粒体铁硫簇的生物合成,并防止自由铁超载而导致线粒体氧化应激损伤的产生。

关键词： iscA 铁结合活性自由铁铁硫簇

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大肠杆菌拓扑异构酶Ⅰ是一种锌和铁结合蛋白

大肠杆菌拓扑异构酶Ⅰ是一种锌和铁结合蛋白

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中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会

作者：吕建新王伍谭国强易鹏思凡任亚光丁焕根温州医学院细胞与分子医学院研究所浙江温州325035 温州医学院浙江省医学遗传学重点实验室浙江温州325035 温州医学院浙江省模式生物技术与应用重点实验室浙江温州325035

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