检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物工程杂志 2009年第7期29卷 12-16页

作者：张琳胡志明法萍萍梁中锟高基民温州医学院浙江省医学遗传学重点实验室温州325035 南方医科大学生物技术学院生物治疗研究所广州510515

目的:制备链亲和素标记的人白细胞介素-2(SA-hIL2)融合蛋白,并研究其生物学功能。方法:构建SA-L-IL2-pET24重组表达质粒,在大肠杆菌中表达SA-hIL2融合蛋白,对表达的SA-hIL2融合蛋白采用镍金属螯合(Ni-NTA)层析柱进行纯化,透析复性。CCK-... 详细信息

目的:制备链亲和素标记的人白细胞介素-2(SA-hIL2)融合蛋白,并研究其生物学功能。方法:构建SA-L-IL2-pET24重组表达质粒,在大肠杆菌中表达SA-hIL2融合蛋白,对表达的SA-hIL2融合蛋白采用镍金属螯合(Ni-NTA)层析柱进行纯化,透析复性。CCK-8法检测SA-hIL2融合蛋白对PHA刺激的人外周血淋巴细胞的增值活性,流式细胞仪分析SA-hIL2融合蛋白对生物素化的B16.F10肿瘤细胞表面锚定修饰效率。结果:SA-hIL2在大肠杆菌中实现了高效表达,约占菌体总蛋白的20%,制备的SA-hIL2融合蛋白纯度达到95%,并具有双重活性,即hIL-2促进PHA刺激的人外周血淋巴细胞的增值活性和SA介导的高效结合至已生物素化的B16.F10肿瘤细胞表面的功能(表面锚定修饰效率约95%)。结论:研制的SA-hIL2融合蛋白具有双重活性,可为研制表面修饰的新型肿瘤细胞疫苗提供基础。

关键词：白细胞介素2 链亲和素融合蛋白锚定

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新方法简便高效建立小鼠原位膀胱癌模型

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南方医科大学学报 2009年第4期29卷 627-630,634页

作者：梁中锟张琳胡志明陈忠黄鑫石向华谭万龙高基民南方医科大学南方医院泌尿外科广东广州510515 温州医学院浙江省医学遗传学重点实验室浙江温州325035 南方医科大学生命技术学院生物治疗研究所广东广州510515 南方医科大学珠江医院肾移植科广东广州510282

目的用物理化学的方法建立小鼠原位表浅膀胱癌模型,并对影响成瘤率的因素进行探讨,筛选出高效简便建立小鼠原位表浅膀胱癌模型的方法。方法用改造过的静脉留置针经小鼠尿道插入膀胱腔内,实验组用酸碱腐蚀的方法对小鼠膀胱粘膜进行预处理... 详细信息

目的用物理化学的方法建立小鼠原位表浅膀胱癌模型,并对影响成瘤率的因素进行探讨,筛选出高效简便建立小鼠原位表浅膀胱癌模型的方法。方法用改造过的静脉留置针经小鼠尿道插入膀胱腔内,实验组用酸碱腐蚀的方法对小鼠膀胱粘膜进行预处理,按观察目的的不同分为4组;对照组不作预处理。PBS冲洗后将MB49灌注入膀胱,构建小鼠原位表浅膀胱癌模型。所有小鼠观察一般情况和肿瘤生长情况。按计划处死小鼠并解剖观察膀胱肿瘤生长情况及有无转移,取标本做病理切片。结果病理显示膀胱粘膜已预处理的小鼠接种肿瘤细胞后可在膀胱部位成瘤(成瘤率100%);丝裂霉素能显著减缓膀胱肿瘤的生长(P=0.000,P<0.05);对照组接种肿瘤细胞后未见成瘤。结论膀胱粘膜处理的时间以酸20s,碱5s较合适;简便的物理化学方法成功建立了可靠性、稳定性和重复性均好的小鼠原位表浅膀胱癌模型,为表浅膀胱癌术后复发的防治研究尤其是抗癌药物的筛选和免疫治疗研究提供了理想的动物实验模型。

关键词：膀胱肿瘤原位模型 C57BL/6小鼠 MB49 丝裂霉素

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钙结合蛋白S100A7在肺癌中的选择性表达

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中国肺癌杂志 2009年第1期12卷 54-58页

作者：张颢刘丹慧孙锁柱刘吉福武珊珊毛颖李明颖冯盛肖焱光何大澄肖雪媛北京师范大学细胞增殖与调控教育部重点实验室高等学校蛋白质组学研究院北京100875 温州医学院细胞与分子研究所浙江省医学遗传学重点实验室温州325035 中国人民解放军第二炮兵总医院病理科北京100088 北京军区总院心胸外科北京100700

背景与目的S100A7是S100蛋白家族成员,它的过表达与一些癌的发生和转移密切相关,本文旨在探讨S100A7在肺癌中的差异表达。方法采用RT-PCR、Western blot和免疫组化等技术探讨了S100A7蛋白在肺癌及其癌旁组织中的表达差异。结果S100A7只... 详细信息

背景与目的S100A7是S100蛋白家族成员,它的过表达与一些癌的发生和转移密切相关,本文旨在探讨S100A7在肺癌中的差异表达。方法采用RT-PCR、Western blot和免疫组化等技术探讨了S100A7蛋白在肺癌及其癌旁组织中的表达差异。结果S100A7只在肺鳞癌和大细胞肺癌组织中有表达,而在肺腺癌、小细胞肺癌及其他亚型的肺癌组织、癌旁组织和正常肺组织中不表达;并发现S100A7蛋白的表达在高分化的癌细胞中较强。结论S100A7蛋白可选择性地在不同亚型的肺癌中表达,很可能成为肺癌亚型诊断的标志蛋白之一。

关键词：肺肿瘤人S100A7蛋白肿瘤生物标记物病理学

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线粒体自噬的研究进展

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细胞生物学杂志 2008年第4期30卷 467-471页

作者：刘丹慧吕建新温州医学院细胞与分子医学研究所浙江省医学遗传学重点实验室温州325035

由于线粒体在生物氧化和能量转换过程中会产生活性氧,线粒体DNA又比核DNA更容易发生突变,因此线粒体是一种比较容易受到损伤的细胞器。及时清除细胞内受损的线粒体对细胞维持正常的状态具有重要的作用。细胞主要通过自噬来清除损伤线粒... 详细信息

由于线粒体在生物氧化和能量转换过程中会产生活性氧,线粒体DNA又比核DNA更容易发生突变,因此线粒体是一种比较容易受到损伤的细胞器。及时清除细胞内受损的线粒体对细胞维持正常的状态具有重要的作用。细胞主要通过自噬来清除损伤线粒体,维持细胞稳态。越来越多的研究表明,线粒体自噬是一种特异性的过程,线粒体通透性孔道通透性的改变在这个过程中起着重要的作用。线粒体自噬在维持细胞内线粒体的正常功能和基因组稳定性上起着重要作用,但是线粒体发生自噬的信号通路及其调控机制还有待进一步深入研究。

关键词：线粒体损伤线粒体自噬活性氧

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高活性β-内酰胺酶的分离、表达和性质

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细胞生物学杂志 2008年第5期30卷 667-672页

作者：赖飞田宇鑫赵峰王震吕建新温州医学院检验医学院细胞与分子医学研究所浙江省医学遗传学重点实验室温州325035

应用DNA家族改组方法制备TEM型β-内酰胺酶基因突变文库，利用平皿初筛和琼脂稀释法复筛获得一株酶活力增高的突变体blaTEM^m。带有该突变基因的大肠杆菌，其最低抑菌浓度（MIC）比带有野生型blaTEM的大肠杆菌高24倍（氨苄青霉素）、4-... 详细信息

应用DNA家族改组方法制备TEM型β-内酰胺酶基因突变文库，利用平皿初筛和琼脂稀释法复筛获得一株酶活力增高的突变体blaTEM^m。带有该突变基因的大肠杆菌，其最低抑菌浓度（MIC）比带有野生型blaTEM的大肠杆菌高24倍（氨苄青霉素）、4-8倍（头孢唑啉）、4-8倍（头孢呋辛）、16-32倍（头孢他啶）、8倍以上（头孢曲松）和4～8倍（头孢噻肟）。在*** BL21（DE3）高效表达blaTEM和blaTEM^m，利用离子交换柱层析和凝胶过滤层析对包涵体进行柱上复性和纯化，获得纯度达90％的重组蛋白质。酶动力学分析显示，与野生型蛋白相比，突变蛋白酶促反应的kcat／Km值分别增加1．5倍（青霉素G）、4．4倍（氨苄青霉素）、3．1倍（头孢唑啉）、2．8倍（头孢他啶），但是对头孢噻肟的kcat／Km下降了2．5倍。DNA序列分析显示blaTEM^m发生7处碱基置换，造成4个氨基酸改变，即S59G、R164S、A237T和E240K。应用Swiss-Pdb Viewer3．7软件预测蛋白质的三维结构，显示这些突变不影响酶的活性中心，但是变异造成的蛋白质空间结构的细微变异增加了酶和底物的亲和性。

关键词： β-内酰胺酶 DNA家族改组最低抑菌浓度耐药

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创伤弧菌溶细胞素融合蛋白细胞毒活性相关分子机制研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2008年第5期28卷 390-394页

作者：桂静胡蝶郑丽楼永良肖美英严杰朱晔晶肖翔温州医学院微生态学研究所浙江省医学遗传学重点实验室325035 浙江大学医学院病原生物学教研室

目的研究创伤弧菌溶细胞素融合蛋白（rVVC）诱导人ECV304细胞（人脐静脉内皮细胞）凋亡过程中caspase．3，-8，-9活性变化。方法应用MTT法、Hoehest33342／PI荧光双染、流式细胞术及DNA琼脂糖凝胶电泳分析rVVC对人ECV304细胞诱导凋亡的... 详细信息

目的研究创伤弧菌溶细胞素融合蛋白（rVVC）诱导人ECV304细胞（人脐静脉内皮细胞）凋亡过程中caspase．3，-8，-9活性变化。方法应用MTT法、Hoehest33342／PI荧光双染、流式细胞术及DNA琼脂糖凝胶电泳分析rVVC对人ECV304细胞诱导凋亡的影响；比色法测定rVVC诱导人ECV304凋亡过程中caspase-3，-8，-9活性变化。结果MTT结果显示rVVC具有降低人ECV304细胞的存活率活性；浓度为2．0溶血单位（HU）／ml的rVVC作用人ECV30412h后，其诱导凋亡的活性高于对照组和浓度为0．5HU／ml的rVVC处理组，具有剂量依赖性；浓度为2．0HU／ml rVVC处理组加40μmol／L Caspase全酶抑制剂（Z—VAD—FMK）后凋亡率较2．0HU／ml rVVC处理组有一定程度降低。浓度为2．0HU／ml rVVC处理人ECV304细胞0．5h后caspase-3活性开始增高，于3h达高峰，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01），caspase-8，-9活性无明显变化。结论rVVC对人ECV304具有凋亡诱导的生物学活性，caspase-3可能与活性rVVC诱导的人ECV304凋亡有关。

关键词：创伤弧菌溶细胞素 rVVC 人ECV304 细胞凋亡

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闽浙地区香鱼线粒体Cytb基因和D-loop区序列多态性分析

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遗传 2008年第7期30卷 919-925页

作者：李娜陈少波谢起浪吕建新管敏鑫温州医学院浙江省医学遗传学重点实验室温州325035 浙江省海洋水产养殖研究所温州325005 Division of Human Genetics and Center for Hearing and Deafness Research Cincinnati Children＇s Hospital Medical Center Cin-cinnati Ohio 45229 USA

对浙江瑞安、福建宁德、福建东张水库3个地理群体共31例香鱼(Plecoglossus altivelis)的线粒体细胞色素b(Cyt b)基因和线粒体D-loop区序列进行了PCR扩增、序列测定、核苷酸组成和多态性分析。Cytb基因中,A、T、C和G4种核苷酸的比例分别... 详细信息

对浙江瑞安、福建宁德、福建东张水库3个地理群体共31例香鱼(Plecoglossus altivelis)的线粒体细胞色素b(Cyt b)基因和线粒体D-loop区序列进行了PCR扩增、序列测定、核苷酸组成和多态性分析。Cytb基因中,A、T、C和G4种核苷酸的比例分别为19.72%、29.71%、32.25%和18.32%,A+T含量为49.43%,G+C含量为50.57%。D-loop区序列中,A、T、C和G4种核苷酸的比例分别为29.99%、29.29%、23.80%和16.92%,A+T含量为59.28%,G+C含量为40.72%。在长度为1141bp的Cytb基因序列中,仅存在1个变异位点,核苷酸多样性指数(π值)为0.00028,31个样本中仅出现两种单倍型;857 bp 长的D-loop区序列中,仅存在5个变异位点,核苷酸多样性指数(π值)为0.00199,仅出现5种单倍型。这表明闽浙地区香鱼的遗传多样性水平很低,应当加大对香鱼的保护力度。

关键词：香鱼细胞色素b基因 D—loop区多态性单倍型

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创伤弧菌溶细胞素融合蛋白重组、表达与细胞毒活性鉴定

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细胞生物学杂志 2008年第1期30卷 89-94页

作者：桂静肖美英楼永良胡蝶严杰朱晔晶温州医学院微生态学研究所浙江省医学遗传学重点实验室温州325035 浙江大学医学院病原生物学教研室杭州310031

研究重组创伤弧菌溶细胞素融合蛋白(rVvhA)诱导人脐静脉内皮细胞(human umbili-cal vein endothelial cells,human ECV304)凋亡的作用。诱导含pET-28a(+)vvhA重组质粒的BL21大肠杆菌表达创伤弧菌溶细胞素融合蛋白,应用Ni2+亲和层析方法... 详细信息

研究重组创伤弧菌溶细胞素融合蛋白(rVvhA)诱导人脐静脉内皮细胞(human umbili-cal vein endothelial cells,human ECV304)凋亡的作用。诱导含pET-28a(+)vvhA重组质粒的BL21大肠杆菌表达创伤弧菌溶细胞素融合蛋白,应用Ni2+亲和层析方法对rVvhA进行纯化;利用分步稀释加透析相结合的方法进行蛋白质复性;绵羊红细胞裂解试验对复性后的rVvhA进行溶血活性初步测定;MTT法检测rVvhA对人ECV304细胞的体外毒性作用;应用Hochest33342/PI活细胞荧光双染及流式细胞术分析rVvhA对人ECV304细胞诱导凋亡的影响。结果显示,用Ni2+-NTAHisBand亲和层析柱纯化rVvhA纯度达88.6%左右;复性后的rVvhA有一定的溶血活性,其溶血活性具有时间-剂量依赖性;MTT结果显示rVvhA具有降低人ECV304细胞的存活率活性;浓度为2.0HU/mlrVvhA作用人ECV30412h后,其诱导凋亡的活性高于对照组和浓度为0.5HU/mlrVvhA处理组,具有剂量依赖性;浓度为2.0HU/mlrVvhA处理组加用40μmol/Lcaspase全酶抑制剂(Z-VAD-FMK)后凋亡率较2.0HU/mlrVvhA处理组有一定程度降低。rVvhA对人ECV304细胞具有诱导凋亡的生物学活性,推测诱导调亡途径可能与caspase家族有关。

关键词：创伤弧菌溶细胞素 rVvhA 人ECV304细胞细胞凋亡 caspase

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人结直肠癌组织中线粒体基因D环区突变的研究

人结直肠癌组织中线粒体基因D环区突变的研究

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中国遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会

作者：方合志沈丽君魏佳丁志囡白益东吕建新温州医学院细胞与分子研究所浙江省医学遗传学重点实验室温州医学院细胞与分子医学研究所浙江省医学遗传学重点实验室

大量研究表明癌症的发生发展与线粒体 DNA(mtDNA)突变及其功能的改变相关。而 mtDNA D—loop 区是控制 mtDNA 复制和转录的重要区域,该区域的突变或微卫星不稳定性(MSI)都可能会影响到 mtDNA 复制和转录的能力,进而影响线粒体的功能并... 详细信息

大量研究表明癌症的发生发展与线粒体 DNA(mtDNA)突变及其功能的改变相关。而 mtDNA D—loop 区是控制 mtDNA 复制和转录的重要区域,该区域的突变或微卫星不稳定性(MSI)都可能会影响到 mtDNA 复制和转录的能力,进而影响线粒体的功能并最终影响癌的发生发展。本研究分析了结直肠癌线粒体基因 D 环区序列的体细胞性突变及微卫星不稳定性,以期能为将来进行结直肠癌的基因诊断提供参考。本文收集了36例来自温州医学院附属第一医院病理科的石蜡组织标本,所有石蜡块均为未放化疗病人的术后组织。行连续石蜡切片获取3到5张10um 厚切片,参照一张4um 切片 HE 染色结果,在显微镜下(×40)对若干张10um 切片用1ml 注射器针头分离剥取癌和癌周正常组织,并以经典的酚—氯仿法提取包含 mtDNA 的总 DNA。巢式 PCR 扩增和检测结直肠癌组织和癌周正常组织的线粒体基因 D 环区序列,并结合线粒体基因数据库进行相关多态性分析。以剑桥序列为参考,结合 mitomap,mtDB,及 GeneBank 等数据库, 未在36例组织标本中发现新的多态性位点。以癌周正常组织为对照,在8例病人的癌组织(32 %)中各发现一个体细胞突变,其中50%位于 D310区,其余4个突变均分别为 C16092T, T16184C,A178G/A 和 G/A16274G 且均为碱基转换。进一步的研究发现,在11例检测高变区Ⅱ突变频率的组织标本中发现2例组织标本(18%)存在突变,且均为 D310区微卫星不稳定性, 突变位点分别为309delC 和309insC。结直肠癌的 mtDNA D 环区是一个具有高频突变率的不稳定区域,除 MSI 外的4个点突变均为 T—C或 A—G,表明突变的发生是由线粒体内氧自由基致 mtDNA 突变所致。而癌症的发生往往伴随着线粒体内的氧自由基的累积,提示癌症的发生发展同 mtDNA 突变存在相关性。在共计36个组织标本的 D310区中共发现6个均为309位点插入或缺失的 MSI(16.6%),癌组织中309位点的突变频率远高于其他碱基位点的突变率,其机制可能是由于癌细胞不断的分裂导致含有 polyC 结构的 D310区比正常细胞更易产生复制滑移。这也表明 D310区域的微卫星不稳定性与结直肠癌存在密切的联系。

关键词：结直肠癌微卫星不稳定性 mtDNA 突变

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脊椎动物成纤维细胞生长因子及其受体

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解剖科学进展 2008年第3期14卷 337-340页

作者：李祥吕建新彭颖陈新文温州医学院浙江省医学遗传学重点实验室浙江温州325035 中国科学院武汉病毒研究所病毒学国家重点实验室湖北武汉430071

成纤维细胞生长因子(FGFs)具有广泛的生物学功能,已知FGF家族至少包括23个因子(FGFs1-23);成纤维细胞生长因子受体(FGFRs)家族有3类:酪氨酸激酶受体类、富胱氨酸FGF受体和低亲和力受体肝素硫酸糖蛋白。FGFs和FGFRs一起组成了一个大而复... 详细信息

成纤维细胞生长因子(FGFs)具有广泛的生物学功能,已知FGF家族至少包括23个因子(FGFs1-23);成纤维细胞生长因子受体(FGFRs)家族有3类:酪氨酸激酶受体类、富胱氨酸FGF受体和低亲和力受体肝素硫酸糖蛋白。FGFs和FGFRs一起组成了一个大而复杂的信号分子家族,具有促细胞分裂、促细胞运动和促形态形成的作用,在胚胎、组织发育和成熟中发挥着重要作用。

关键词：脊椎动物成纤维细胞生长因子成纤维细胞生长因子受体

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