检索结果-内蒙古大学图书馆

中华心血管病杂志 2013年第1期41卷 54-59页

作者：戴晓春周希黄晓燕王良国林素杨德业温州医学院附属第一医院心内科温州医学院心血管生物和基因研究所温州325000

目的采用RNA干扰技术选择性下调大鼠心肌细胞中转录因子Pax-8的表达，引起线粒体功能的变化，借此探讨线粒体对心肌细胞凋亡的影响。方法将H9C2（2-1）大鼠胚胎心肌细胞分为3组：实验组[针对Pax-8基因的小干扰RNA（Pax-8siRNA）组]，阴... 详细信息

目的采用RNA干扰技术选择性下调大鼠心肌细胞中转录因子Pax-8的表达，引起线粒体功能的变化，借此探讨线粒体对心肌细胞凋亡的影响。方法将H9C2（2-1）大鼠胚胎心肌细胞分为3组：实验组[针对Pax-8基因的小干扰RNA（Pax-8siRNA）组]，阴性对照组[非特异性siRNA（NCsiRNA）组]和空白对照组（BCsiRNA组）。荧光分光光度法检测半胱天冬酶（caspase-3）活性以反映细胞凋亡，RT—PCR测定B细胞淋巴瘤／白血病-2（Bcelllymphoma／lewkmia-2，Bcl2）和其同源类似物Bax的mRNA表达，Westernblot测定Bcl2、Bax和胞浆细胞色素C（Cyto）的蛋白表达，流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位（△咿m，用JC-1单体／聚合物比值来衡量线粒体去极化的比例，比值越大，△ψm越低）。结果Pax-8siRNA组心肌细胞caspase-3活性（0．167±0．012）明显高于NCsiRNA组（0．075±0．021）和BCsiRNA组（0．072±0．019），P均〈0．05。Pax-8siRNA组Bcl，mRNA和蛋白的表达水平（分别为0．61±0．06和0．94±0．11）明显低于NCsiRNA组（分别为0．90±0．070和1．39±0．15）和BCsiRNA组（分别为0．94±0．09和1．49±0．20），P均〈0．05。Pax-8siRNA组BaxmRNA和蛋白表达水平（分别为1．05±0．10和1．25±0．12）明显高于NCsiRNA组（分别为0．72±0．03和0．99±0．12）和BCsiRNA组（分别为0．64±0．03和0．92±0．06），P均〈0．05。Pax-8siRNA组心肌细胞线粒体释放Cyto至胞浆的量（0．75±0．14）明显高于NCsiRNA组（0．51±0．06）和BCsiRNA组（0．48±0．07），P均〈0．05。Pax-8siRNA组JC-1单体／聚合物比值（0．163±0．011）明显高于NCsiRNA组（0．092±0．015）和BCsiRNA组（0．072±0．025），P均〈0．05，提示Aqtm明显低于NCsiRNA组和BCsiRNA组（P均〈0．05）。NCsiRNA组与BCsiRNA组上述指标比较，差异均无统计学意义。结论Pax-8基因干扰心肌细胞，促进了心肌细胞的凋亡，线粒体参与了心肌细胞凋亡，推测心肌细胞的凋亡可能是通过线粒体途径实现的。

关键词：肌细胞心脏细胞凋亡线粒体转录因子

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心脏发育相关的微小RNA差异表达分析

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中华医学杂志 2009年第20期89卷 1416-1420页

作者：施翔翔来丹丹章佳颖褚茂平王赛斌倪秋明黄晓燕张怀勤杨德业温州医学院附属第一医院心血管内科温州医学院心血管生物和基因研究所 325000

目的探讨微小RNA（miRNA）在心脏发育中的作用。方法建立先天性心脏病-室间隔缺损相关基因Pax-8敲除小鼠模型Pax·8KO-／-（纯合子）及Pax-8KO＋／-（杂合子），提取纯合子和杂合子小鼠心脏总RNA，采用含有567种miRNA的芯片进行检... 详细信息

目的探讨微小RNA（miRNA）在心脏发育中的作用。方法建立先天性心脏病-室间隔缺损相关基因Pax-8敲除小鼠模型Pax·8KO-／-（纯合子）及Pax-8KO＋／-（杂合子），提取纯合子和杂合子小鼠心脏总RNA，采用含有567种miRNA的芯片进行检测并分析miRNA表达谱的差异，并通过荧光实时定量PCR技术对结果进行验证。结果纯合子小鼠比杂合子小鼠左心室腔扩大，左心室壁肥厚，室间隔增厚，左室乳头肌肥大，心脏呈球形。超声结果显示杂合子小鼠左室收缩末期内径[（LVIDs）（1．23±0．25）mm比（1．93±0．50）mm]和左室舒张末期内径[（LVIDd）（2．13±0．18）mm比（2．89±0．29）]均明显小于纯合子小鼠，差异均有统计学意义（均P〈0．01）心肌左心室壁以及室间隔组织可见大量的凋亡心肌细胞。在纯合子小鼠发现miRNA表达谱中差异表达的miRNA共10个，其中2个miRNA表达下调，8个miRNA表达上调。荧光实时定量RT-PCR结果与芯片结果基本符合。结论miRNA参与心脏发育过程，在先天性心脏病室间隔缺损的发病机制中可能发挥重要作用。

关键词：室间隔缺损小鼠,基因敲除微RNAs

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川芎嗪对内皮祖细胞氧化应激损伤的保护作用研究

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中国药学杂志 2009年第3期44卷 187-191页

作者：林杰黄伟剑徐力辛杨德业林捷张怀勤温州医学院附属第一医院心血管内科温州医学院心血管生物和基因研究所浙江温州325000

目的观察川芎嗪(TMP)对过氧化氢(H2O2)诱导的内皮祖细胞(EPCs)氧化应激损伤的保护作用及机制。方法通过密度梯度离心分离脐静脉血单个核细胞,利用血管内皮生长因子(VEGF)诱导纯化方法培养EPCs。CCK-8细胞计数试剂盒、流式细胞仪、激光... 详细信息

目的观察川芎嗪(TMP)对过氧化氢(H2O2)诱导的内皮祖细胞(EPCs)氧化应激损伤的保护作用及机制。方法通过密度梯度离心分离脐静脉血单个核细胞,利用血管内皮生长因子(VEGF)诱导纯化方法培养EPCs。CCK-8细胞计数试剂盒、流式细胞仪、激光共聚焦显微镜检测TMP对细胞氧化应激损伤的保护作用及机制探讨。结果200mg·L–1TMP抑制内皮祖细胞增殖功能;但是25mg·L-1TMP显著减少H2O2致细胞凋亡和细胞生长停滞在G0/G1期,而L-单甲基精氨酸(L-NMMA)抵消TMP的保护作用。结论TMP对氧化应激损伤诱导细胞凋亡和生长停滞具有明显的保护作用,eNOS受体拮抗剂L-NMMA能抵消TMP这种保护作用,说明TMP对EPCs抗氧化应激损伤的保护作用可能是通过eNOS途径。

关键词：川芎嗪内皮祖细胞细胞周期凋亡氧化应激

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微小RNA-144表达对大鼠心肌细胞凋亡的影响

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中华心血管病杂志 2011年第4期39卷 353-357页

作者：黄芳黄晓燕闫东升周希杨德业温州医学院附属第一医院心血管内科温州医学院心血管生物和基因研究所 325000 温州医学院附属眼视光医院

目的探讨微小RNA-144（miR-144）对心肌细胞凋亡的影响.方法运用转染的方法,使大鼠H9C2胚胎心肌细胞中高表达miR-144（miR-144组）,实时定量PCR确定miR-144表达上调后,通过细胞计数试剂盒-8（CCK-8）、半胱天冬酶（Caspase）-3、流式... 详细信息

目的探讨微小RNA-144（miR-144）对心肌细胞凋亡的影响.方法运用转染的方法,使大鼠H9C2胚胎心肌细胞中高表达miR-144（miR-144组）,实时定量PCR确定miR-144表达上调后,通过细胞计数试剂盒-8（CCK-8）、半胱天冬酶（Caspase）-3、流式细胞术等方法测定细胞凋亡水平,观察miR-144对细胞凋亡的影响.空白脂质体及随机微小RNA片段作为空白对照及阴性对照.结果实时定量PCR结果显示,miR-144组miR-144的表达（2178.84±838.52）明显高于空白对照组（1.00±0.00）和阴性对照组（2.06±0.73）（P均＜0.01）.与阴性对照组和空白对照组比较,miR144组细胞增殖明显低、Caspase-3活性明显高、细胞凋亡率明显高,而阴性对照组与空白对照组以上数值比较差异均无统计学意义.结论合成的miR-144片段（miR-144 mimics）能选择性上调miR144的表达,并促进心肌细胞凋亡、抑制细胞增殖.

关键词：肌细胞,心脏胚胎微RNAs 细胞凋亡

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ADMA对内皮生长晕细胞凋亡及其相关p38丝裂素活化蛋白激酶表达的影响

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中国病理生理杂志 2010年第6期26卷 1052-1058页

作者：夏雪张怀勤贾红梅林以诺黄伟剑叶盛邵小琳温州医学院附属第一医院心内科心血管生物和基因研究所浙江温州325000

目的:探讨非对称性二甲基精氨酸(ADMA)对内皮生长晕细胞(EOCs)凋亡和黏附能力的影响以及凋亡相关p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)表达水平的变化。方法:分离脐血中单个核细胞并原代培养扩增内皮生长晕细胞,免疫细胞化学染色和荧光染色... 详细信息

目的:探讨非对称性二甲基精氨酸(ADMA)对内皮生长晕细胞(EOCs)凋亡和黏附能力的影响以及凋亡相关p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)表达水平的变化。方法:分离脐血中单个核细胞并原代培养扩增内皮生长晕细胞,免疫细胞化学染色和荧光染色法鉴定其内皮细胞特性。将浓度为0、1、5、10、30μmol/L ADMA与内皮生长晕细胞作用48 h,流式细胞仪检测细胞凋亡率,DAPI染色及AnnexinV/PI双染观察凋亡细胞核形态变化。在倒置显微镜下观察计数重黏附细胞数来测定细胞黏附能力。用特异性的phospho-p38MAPK抗体的W esternb lotting检测p38MAPK的活性。结果:采用贴壁法培养的细胞具有多种内皮细胞特性。ADMA(1-30μmol/L)诱导内皮生长晕细胞的凋亡(P<0.01),同时ADMA(5-30μmol/L)使phospho-p38MAPK蛋白表达增加,两者作用均呈浓度依赖性。ADMA作用组和对照组相比,激光共聚焦显微镜下可见更显著的细胞凋亡形态学改变。除1μmol/L ADMA外,5、10、30μmol/L ADMA均可抑制内皮生长晕细胞的黏附能力。结论:ADMA能诱导内皮生长晕细胞发生凋亡并抑制其黏附能力,ADMA诱导内皮生长晕细胞发生凋亡可能与p38 MAPK磷酸化水平上升有关。

关键词：精氨酸内皮生长晕细胞细胞凋亡 p38MAPK

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中国病理生理杂志 2011年第2期27卷 254-259页

作者：叶盛张怀勤林以诺黄伟剑张艳丽邵小琳温州医学院附属第一医院心内科心血管生物和基因研究所浙江温州325000

目的:探讨雷帕霉素对内皮细胞凋亡和增殖、迁移能力的影响,以及肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)表达水平的变化。方法:用浓度为0、1、10、100μg/L的雷帕霉素孵育内皮细胞24 h,应用CCK8法检测血管内皮细胞的增殖能力,Transwell小... 详细信息

目的:探讨雷帕霉素对内皮细胞凋亡和增殖、迁移能力的影响,以及肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)表达水平的变化。方法:用浓度为0、1、10、100μg/L的雷帕霉素孵育内皮细胞24 h,应用CCK8法检测血管内皮细胞的增殖能力,Transwell小室和划痕试验检测细胞迁移能力,DAPI染色观察凋亡细胞核形态改变,Western blotting法检测caspase-3活性以显示血管内皮细胞的凋亡,并用Western blotting检测TRAIL在凋亡的内皮细胞中的表达。结果:雷帕霉素(1-100μg/L)能诱导血管内皮细胞凋亡并抑制其迁移能力(P<0.01)。除雷帕霉素1μg/L外,10μg/L和100μg/L雷帕霉素均能抑制内皮细胞增殖能力(P<0.01),同时雷帕霉素(10-100μg/L)使TRAIL蛋白表达增加,两者作用均呈浓度依赖性(P<0.01)。结论:雷帕霉素能诱导内皮细胞发生凋亡并抑制其增殖和迁移能力。TRAIL表达上调与雷帕霉素诱导血管内皮细胞损伤有一定的相关性。

关键词：雷帕霉素内皮细胞细胞凋亡细胞增殖细胞迁移肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体

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糖尿病并发冠心病与内脂素的关系

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临床心血管病杂志 2009年第10期25卷 752-753页

作者：马逸张怀勤陈达开温州医学院附属第一医院心内科心血管生物和基因研究所浙江温州325000

目的:探讨血清内脂素水平与糖尿病并发冠心病的关系。方法:将69例2型糖尿病患者根据冠状动脉造影管腔直径是否狭窄(50%)及狭窄是否超过70%分为冠状动脉阴性组(27例),非显著狭窄组(19例)和显著狭窄组(23例),并入选正常对照者(25例)分别... 详细信息

目的:探讨血清内脂素水平与糖尿病并发冠心病的关系。方法:将69例2型糖尿病患者根据冠状动脉造影管腔直径是否狭窄(50%)及狭窄是否超过70%分为冠状动脉阴性组(27例),非显著狭窄组(19例)和显著狭窄组(23例),并入选正常对照者(25例)分别测定内脂素浓度并进行比较。结果:冠状动脉显著狭窄组血清内脂素浓度显著高于对照组和冠状动脉阴性组(P<0.01)。但冠状动脉非显著狭窄组和显著狭窄组之间内脂素浓度差异无统计学意义(P>0.05)。结论:糖尿病患者血清内脂素水平与冠心病发生及病变严重程度显著相关。

关键词：内脂素 2型糖尿病冠脉病变

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罗格列酮对ADMA氧化应激损伤内皮生长晕细胞的影响

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中国病理生理杂志 2008年第11期24卷 2126-2131页

作者：林以诺张怀勤虞慧君杨德业黄晓燕温州医学院附属第一医院心内科心血管生物和基因研究所浙江温州325000 温州医学院附属第二医院产科浙江温州325000

目的:观察过氧化物体增殖剂激活的受体γ(PPARγ)激动剂罗格列酮对非对称性二甲基精氨酸氧化应激损伤内皮生长晕细胞的影响。方法:分离脐血中单个核细胞,采用贴壁培养法培养扩增内皮生长晕细胞(EOCs)。以10μmol/L非对称性二甲基精氨酸(... 详细信息

目的:观察过氧化物体增殖剂激活的受体γ(PPARγ)激动剂罗格列酮对非对称性二甲基精氨酸氧化应激损伤内皮生长晕细胞的影响。方法:分离脐血中单个核细胞,采用贴壁培养法培养扩增内皮生长晕细胞(EOCs)。以10μmol/L非对称性二甲基精氨酸(ADMA)和不同浓度的罗格列酮(0、1、5、10μmol/L)与第2代细胞孵育72h,检测细胞的凋亡率、增殖能力、成血管能力,RT-PCR法检测内皮一氧化氮合酶(eNOS)mRNA的表达。结果:采用贴壁法培养的细胞具有多种内皮细胞特性。ADMA能抑制细胞功能并增加细胞的凋亡率,1、5μmol/L罗格列酮能够对抗这种损伤(P<0.01)并能够促进细胞的增殖(P<0.01)。但10μmol/L罗格列酮的保护作用减弱或丧失,甚至可以抑制细胞的成血管能力(P<0.01)。5μmol/L罗格列酮浓度组eNOS基因表达增强(P<0.01),10μmol/L组eNOS基因表达减弱(P<0.01)。结论:低浓度的罗格列酮(<10μmol/L)能够减轻和保护由ADMA所致的内皮生长晕细胞的氧化应激损伤,并能够促进内皮生长晕细胞增殖,这种作用部分是通过活化eNOS基因实现的。

关键词：内皮生长晕细胞罗格列酮非对称性二甲基精氨酸

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Pax-8基因敲除小鼠心脏中Bcl2l14基因表达上调

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中国病理生理杂志 2010年第4期26卷 640-644页

作者：高瞻来丹丹黄晓燕褚茂平施翔翔张怀勤杨德业温州医学院附属第一医院心血管内科温州医学院心血管生物和基因研究所浙江温州325000

目的:寻找先天性心脏病相关基因-转录因子Pax-8的下游基因。方法:分别提取Pax-8基因敲除小鼠纯合子(Pax-8 KO-/-)和杂合子(Pax-8 KO+/-)的心脏总RNA,利用含31802个小鼠基因的基因芯片检测两组小鼠基因表达水平,找出差异表达的基因,并经... 详细信息

目的:寻找先天性心脏病相关基因-转录因子Pax-8的下游基因。方法:分别提取Pax-8基因敲除小鼠纯合子(Pax-8 KO-/-)和杂合子(Pax-8 KO+/-)的心脏总RNA,利用含31802个小鼠基因的基因芯片检测两组小鼠基因表达水平,找出差异表达的基因,并经半定量RT-PCR和荧光实时定量PCR技术初步筛选出转录因子Pax-8的下游基因。结果:基因芯片检测发现,Pax-8 KO-/-组与Pax-8 KO+/-相比有25个基因表达下调,另有17个基因表达上调,差异基因涉及细胞周期及信号转导的调节因子,直接参与代谢的酶,以及核转录因子等。用半定量RT-PCR验证发现:Bcl2-like 14(Bcl2l14)基因在Pax-8 KO-/-组上调。定量RT-PCR亦证实在Pax-8KO-/-组Bcl2l14基因的表达水平较Pax-8 KO+/-组及Pax-8 KO+/+(野生型)组分别上调2.07倍和2.23倍(P<0.01)。结论:Bcl2l14基因为转录因子Pax-8的下游基因,可能在先天性心脏病室间隔缺损的发病机制中发挥重要作用。

关键词： Paired box gene 8 Bcl2-like 14 室间隔缺损细胞凋亡

来源：评论

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Pax-8基因在大鼠心肌细胞凋亡中的作用

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解放军医学杂志 2009年第9期34卷 1082-1084页

作者：高瞻来丹丹张敏周希黄芳黄晓燕张怀勤杨德业浙江温州温州医学院附属第一医院心血管内科、温州医学院心血管生物和基因研究所 325000

目的用RNA干扰技术选择性下调大鼠心肌细胞中转录因子Pax-8的表达,观察其对心肌细胞凋亡和增殖的影响。方法将H9C2(2-1)大鼠胚胎心肌细胞分为3组:针对Pax-8基因的小干扰RNA(Pax-8 siRNA)组,非特异性siRNA(NCsiRNA)组和空白对照组。前两... 详细信息

目的用RNA干扰技术选择性下调大鼠心肌细胞中转录因子Pax-8的表达,观察其对心肌细胞凋亡和增殖的影响。方法将H9C2(2-1)大鼠胚胎心肌细胞分为3组:针对Pax-8基因的小干扰RNA(Pax-8 siRNA)组,非特异性siRNA(NCsiRNA)组和空白对照组。前两组分别给予相应siRNA(5μl)和Lipofectamine 2000(5μl)配制成的siRNA-脂质体复合物溶液,空白对照组给予等量的细胞培养基。采用RT-PCR和Western blotting测定Pax-8的mRNA和蛋白质表达,荧光光度法检测半胱天冬酶(Caspase)-3活性以反映细胞凋亡,CCK-8法检验细胞的增殖抑制率。结果与NCsiRNA组和空白对照组比较,Pax-8 siRNA组的Pax-8 mRNA表达分别下调60.30%(P<0.05)和63.09%(P<0.05),蛋白表达分别下调50.38%(P<0.05)和54.17%(P<0.05),而NCsiRNA组与空白对照组间无显著差异(P>0.05)。Pax-8 siRNA组的Caspase-3活性较NCsiRNA组和空白对照组明显升高(P<0.01),而后两者间无显著差异(P>0.05)。Pax-8 siRNA组的细胞增殖抑制率明显高于NCsiRNA组(P<0.01)。结论Pax-8 siRNA能选择性下调心肌细胞中Pax-8的表达,并促进细胞凋亡、抑制细胞增殖。

关键词： PAX8蛋白大鼠肌细胞心脏细胞凋亡 RNA干扰室间隔缺损

来源：评论

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