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细胞与分子免疫学杂志 2023年第8期39卷 742-747页

作者：叶晓鲜董海艳王昱陈争珍李军伟韦玉兵张丽芳温州医科大学仁济学院基础医学部解剖教研室浙江温州325035 温州医科大学仁济学院分子病毒与免疫研究所浙江温州325035

目的制备兔抗重组细胞周期蛋白依赖激酶6(CDK6)抗体并进行鉴定。方法合成并构建pET21a(+)-CDK6重组质粒,将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3),经异丙基硫代-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组蛋白,经SDS-PAGE及Western blot法... 详细信息

目的制备兔抗重组细胞周期蛋白依赖激酶6(CDK6)抗体并进行鉴定。方法合成并构建pET21a(+)-CDK6重组质粒,将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3),经异丙基硫代-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组蛋白,经SDS-PAGE及Western blot法检测蛋白表达;用镍氮川三乙酸(Ni-NTA)亲和层析柱纯化,SDS-PAGE分析;纯化后的CDK6蛋白多部位、多次(隔周)免疫日本大耳白兔,分别于免疫的0、 2、 4、 6周取血,分离血清。采用间接ELISA检测效价,Western blot法、免疫荧光细胞化学染色和免疫组织化学染色法检测其特异性。结果表达并获得高纯度的CDK6蛋白,制备了兔抗CDK6重组蛋白抗体,其效价达1∶30 000,能特异性识别宫颈癌细胞及宫颈癌组织中表达的CDK6蛋白。结论成功制备了高效价、特异性强的兔抗CDK6抗体。

关键词：细胞周期蛋白依赖激酶6(CDK6) 重组蛋白基因表达血清抗体

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新型冠状病毒M蛋白结构和B细胞表位预测

引用

中国生物制品学杂志 2021年第4期34卷 400-405页

作者：叶晓鲜李明洋朱珊丽崔怀瑞王昱张丽芳温州医科大学仁济学院基础医学部解剖教研室分子病毒与免疫研究所浙江温州325035

目的预测新型冠状病毒(SARS-CoV-2)M蛋白的结构及可能的B细胞优势表位。方法从NCBI GenBank数据库中检索SARS-CoV-2 M蛋白的氨基酸序列,应用计算机辅助生物信息学软件进行分析,利用ExPASy服务器上的ProtParam、SOPMA、GOR、Swiss Model... 详细信息

目的预测新型冠状病毒(SARS-CoV-2)M蛋白的结构及可能的B细胞优势表位。方法从NCBI GenBank数据库中检索SARS-CoV-2 M蛋白的氨基酸序列,应用计算机辅助生物信息学软件进行分析,利用ExPASy服务器上的ProtParam、SOPMA、GOR、Swiss Model分别预测M蛋白的理化性质、二级结构、三级结构;利用TMHMM、Phobius线上软件预测M蛋白的跨膜区域,并结合DNASTAR软件进行亲水性、柔韧性、表面可能性、抗原性及极性等综合分析;利用Vector NTI软件分析冠状病毒属M蛋白的同源性。结果 SARS-COV-2 M蛋白由222个氨基酸组成,为稳定的跨膜蛋白,以α螺旋为主。多种参数进行综合分析推测,其可能的B细胞优势表位为第5-14位氨基酸(NGTITVEELK)。SARS-CoV-2 M蛋白与SARS-CoV M蛋白、Bat SARS-like CoV的M蛋白同源性匹配最高,达90%。结论 5-14肽段为SARS-CoV-2 M蛋白可能的B细胞优势表位。本研究为实验确定SARS-CoV-2 M蛋白的B细胞表位、免疫识别提供了参考,为进一步研发疫苗奠定了基础。

关键词：新型冠状病毒 M蛋白生物信息学 B细胞表位预测同源性分析

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