检索结果-内蒙古大学图书馆

细胞与分子免疫学杂志 2014年第2期30卷 167-170,175页

作者：王冰冰涂建欣吕艳侯柏龙刘巧琼林晓云陈韶薛向阳朱珊丽张丽芳温州医科大学分子病毒与免疫研究所/微生物学与免疫学教研室浙江温州325000

目的制备人乳头瘤病毒(HPV)16型E7原核表达蛋白及其多克隆抗体。方法用PCR方法从宫颈癌组织中扩增HPV16 E7基因,克隆至pET21a(+)载体并构建pET21a(+)/HPV16 E7重组质粒,测序鉴定;将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3),经异丙基硫代-β-D-... 详细信息

目的制备人乳头瘤病毒(HPV)16型E7原核表达蛋白及其多克隆抗体。方法用PCR方法从宫颈癌组织中扩增HPV16 E7基因,克隆至pET21a(+)载体并构建pET21a(+)/HPV16 E7重组质粒,测序鉴定;将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3),经异丙基硫代-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导后表达重组蛋白,用Ni-NTA亲和层析法纯化并经SDS-PAGE及Western blot分析鉴定;纯化的HPV16 E7重组蛋白免疫日本大耳白兔制备多克隆抗体,用ELISA检测多克隆抗体的效价,并用Western blot法及免疫荧光技术分析多克隆抗体的特异性。结果 HPV16 E7重组蛋白可通过原核表达系统进行表达和纯化;通过兔免疫后可制备特异性的多克隆IgG抗体,效价达1∶30 000;经Western blot法和免疫荧光染色结果证实兔多克隆抗体可特异性识别HPV16 E7蛋白。结论成功进行了HPV16 E7原核表达并制备了HPV16 E7兔多克隆抗体。

关键词：人乳头瘤病毒 E7蛋白多克隆抗体

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宫颈肿瘤组织高危型HPV新分型检测方法的建立及应用

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肿瘤学杂志 2015年第11期21卷 889-894页

作者：谢旺凯王慧静肖兰兰计苏惠王俭陈向敏邹阮敏陈俊薛向阳温州医科大学第二临床学院浙江温州325035 温州医科大学检验医学院生命科学学院浙江温州325035 温州医科大学附属第一医院浙江温州325000 温州医科大学微生物学与免疫学教研室分子病毒与免疫研究所热带医学研究所浙江温州325035

[目的]建立一种新型宫颈肿瘤组织高危型人乳头瘤病毒(HPV)检测及分型方法,并评价其临床应用。[方法]基于我国人群流行的5种高危型HPV(HPV 16、18、31、33、51)的E6/E7早期基因序列,设计特异性引物,以明确HPV型别的宫颈癌细胞株及宫颈肿... 详细信息

[目的]建立一种新型宫颈肿瘤组织高危型人乳头瘤病毒(HPV)检测及分型方法,并评价其临床应用。[方法]基于我国人群流行的5种高危型HPV(HPV 16、18、31、33、51)的E6/E7早期基因序列,设计特异性引物,以明确HPV型别的宫颈癌细胞株及宫颈肿瘤组织为模板,进行PCR检测,结合基因测序验证引物的特异性。进一步优化条件,建立高危型HPV多重PCR检测方法,检测65例宫颈肿瘤组织标本,与临床上使用的流式荧光杂交HPV检测法比较,评价其敏感性和特异性。[结果]成功建立可同时检测5种高危型HPV的多重PCR检测方法,对65例宫颈肿瘤组织进行高危型HPV检测,检出率为72.3%,明显高于临床流式荧光杂交检测法的检出率(32.31%)(χ2=3.86,P<0.05)。[结论 ]基于HPV E6/E7早期基因的高危型HPV多重PCR检测方法是特异、灵敏的高危型HPV检测方法。

关键词：人乳头瘤病毒多聚酶链反应基因分型宫颈肿瘤

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miR-29a在系统性红斑狼疮患者血浆中的表达及意义

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浙江医学 2015年第19期37卷 1565-1569页

作者：徐玲娟叶璐璐陈阿琼黄茜茜章慧娣陈朝生薛向阳浙江中医药大学附属金华市中医医院检验科 321017 温州医科大学微生物学和免疫学教研室分子病毒与疫苗研究所热带医学研究所宁波李惠利医院风湿免疫科温州医科大学附属第一医院肾内科

目的分析microRNA-29a（miR-29a）在系统性红斑狼疮（SLE）患者血浆中的表达水平及与SLE临床特征的相关性.方法建立检测miR-29a的实时荧光定量PCR（RT-qPCR）方法,分析48例SLE患者和20例健康体检者血浆中miR-29a的表达水平,ROC曲线评... 详细信息

目的分析microRNA-29a（miR-29a）在系统性红斑狼疮（SLE）患者血浆中的表达水平及与SLE临床特征的相关性.方法建立检测miR-29a的实时荧光定量PCR（RT-qPCR）方法,分析48例SLE患者和20例健康体检者血浆中miR-29a的表达水平,ROC曲线评估其作为SLE诊断标记物的意义,统计分析其表达与SLE患者临床特征的相关性.结果与健康体检者比较,SLE患者血浆miR-29a表达水平明显上调（Z=3.476,P=0.0009）;血清miR-29a诊断SLE的ROC AUC为0.794 （95％Cl：0.689～0.898）,具较好诊断SLE的效能;抗β 2GP1抗体＞20RU/ml患者的血浆miR-29a水平明显升高（P=0.033）,Pearson相关分析显示,SLE患者血浆miR-29a表达水平与抗β2GP1抗体水平呈正相关（r=0.584,P=0.001）,而与不同SLEDAI评分及其他SLE活动相关指标等差异均无统计学意义（均P ＞0.05）. 结论 miR-29a在SLE患者血浆中的表达水平明显上调,且血浆miR-29a上调与SLE患者自身抗体水平相关,其调节机制尚待进一步的研究.

关键词：系统性红斑狼疮临床诊断

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EB病毒潜伏膜蛋白2多表位DNA联合多肽的免疫效应研究

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中国病原生物学杂志 2014年第2期9卷 117-121页

作者：李文姝田晓娟林晓云刘建晓朱珊丽薛向阳张丽芳温州医科大学分子病毒与免疫研究所/微生物学与免疫学教研室浙江温州325035

目的研究HPV L1携带EB病毒(EBV)潜伏膜蛋白2(LMP2)多表位DNA联合多肽的免疫效应。方法BALB/c雌性小鼠随机分为4组。pcHPVL1-EBV LMP2DNA免疫组,肌肉注射pcDNA3.1(+)/HPVL1-EBV LMP2多表位DNA,每鼠每次100μg;DNA联合多肽免疫组:先用DNA免疫,每鼠每次50μg,同时皮下注射EBV LMP2多表位肽,每鼠每次5μg;DNA免疫对照组:肌肉免疫空载体pcDNA3.1(+),每鼠每次100μg;多肽免疫对照组:每鼠每次10μg皮下注射不相关多肽。共免疫4次,间隔2周。免疫后第7周收集小鼠血清,采用ELISA法检测小鼠EBV LMP2特异性抗体IgG、IgA以及HPVL1特异性抗体IgG;免疫后第9周测定EBV特异性抗体IgG1与IgG2a亚类,同时采用乳酸脱氢酶(LDH)释放法测定小鼠脾细胞CTL的杀伤活性。结果多肽联合DNA免疫组小鼠血清EBV LMP2特异性抗体IgG、IgA A值分别为1.573±0.025和0.436±0.033,单独DNA免疫组分别为1.282±0.051和0.317±0.022,差异有统计学意义(F=80.393,27.722,P<0.05);两免疫组小鼠血清HPV L1特异性IgG A值别为0.648±0.063和0.702±0.023,差异无统计学意义(F=1.952,P>0.05)。DNA免疫组IgG1和IgG2aA值别为0.723±0.023和0.594±0.084,差异无统计学意义(F=6.643,P>0.05),是混合Th1/Th2免疫反应类型;多肽联合DNA免疫组IgG1和IgG2aA值别为0.897±0.042和0.629±0.035,差异有统计学意义(F=72.306,P<0.05),是偏向Th2免疫反应类型。多肽联合DNA免疫组在效靶比为10︰1时,小鼠脾细胞CTL杀伤效应(杀伤率)为27.70%,DNA免疫组为21.50%,差异有统计学意义(F=51.559,P<0.05)。结论多肽联合DNA免疫可产生有效的CTL杀伤效应,更能发挥有效的体液免疫作用,其免疫策略可为EBV相关肿瘤的免疫治疗提供参考。

关键词： EB病毒潜伏膜蛋白2 多表位联合免疫

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表达乙型肝炎表面抗原及前 S2蛋白120～146片段重组酵母菌的构建及全菌体免疫效应评价

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中华传染病杂志 2014年第11期32卷 660-665页

作者：陈向敏张跃进田晓娟夏平潘唯文夏天俞陈慧张丽芳薛向阳温州医科大学生物学实验教学中心 325035 温州医科大学诊断学实验室 325035 温州医科大学分子病毒与疫苗研究所微生物与免疫学教研室 325035 仁济学院

目的：构建表达 HBsAg 及前 S2蛋白120～146片段（PreS2120-146）-HBsAg 的重组酵母菌，并评价其全菌体免疫效应。方法根据酵母密码子偏爱性优化 PreS2120-146区及 HBsAg 基因序列，串联后克隆到毕赤酵母 pPIC3．5K 表达载体，构建 pPIC... 详细信息

目的：构建表达 HBsAg 及前 S2蛋白120～146片段（PreS2120-146）-HBsAg 的重组酵母菌，并评价其全菌体免疫效应。方法根据酵母密码子偏爱性优化 PreS2120-146区及 HBsAg 基因序列，串联后克隆到毕赤酵母 pPIC3．5K 表达载体，构建 pPIC3．5K／PreS2120-146-HBsAg 质粒，重组质粒经 BgkⅡ酶切线性化后，电转化至 GS115菌株中，筛选 PreS2120-146-HBsAg 重组毕赤酵母，通过 SDS-PAGE、Western 印迹、ELISA 分析目的蛋白的表达；以表达目的蛋白的灭活酵母全菌体免疫 BALB／c 小鼠，采用 ELISA 检测其产生的 HBsAg 特异性抗体；以 HBsAg CTL 表位肽刺激免疫小鼠脾细胞，通过实时PCR 检测γ干扰素表达，分析其诱导的 CTL 反应。采用独立样本 t 检验。结果PCR、酶切和测序分析表明成功构建了 pPIC3．5K／PreS2120-146-HBsAg 重组质粒。重组毕赤酵母甲醇诱导后，SDS-PAGE、Werstern 印迹和 ELISA 证实 PreS2120-146-HBsAg 目的蛋白表达。与 HBsAg 纯抗原免疫比较，灭活重组酵母菌免疫小鼠产生抗 HBsAg 特异性 IgG 抗体水平相当（t＝0．946，P ＝0．381）。CTL 反应检测显示， HBsAg CTL 表位肽刺激灭活重组酵母菌免疫组小鼠的脾细胞产生更高水平的γ干扰素（t＝2．305，P ＝0．044）。结论利用整合型重组毕赤酵母表达系统成功表达了 PreS2120-146-HBsAg 目的蛋白，全菌体免疫小鼠后能诱导产生特异的体液免疫和细胞免疫反应。

关键词：肝炎表面抗原,乙型 PreS2 毕赤酵母免疫反应

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HPV16 L1在整合型重组毕赤酵母中的表达及病毒样颗粒的纯化

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中国人兽共患病学报 2014年第5期30卷 479-483页

作者：田晓娟冯娟张丽芳李文姝薛向阳温州医科大学分子病毒与免疫研究所/微生物学与免疫学教研室温州325035 湖北省黄石市爱康医院黄石435001

目的构建可稳定表达HPV16L1的整合型重组毕赤酵母,并纯化自主组装成的HPV16L1病毒样颗粒(VLPs)。方法根据酵母密码子偏爱性优化HPV16L1基因并克隆到pPIC3.5K表达载体,构建pPIC3.5K/HPV16L1重组质粒;重组质粒经Bgl II酶切线性化后,电转化... 详细信息

目的构建可稳定表达HPV16L1的整合型重组毕赤酵母,并纯化自主组装成的HPV16L1病毒样颗粒(VLPs)。方法根据酵母密码子偏爱性优化HPV16L1基因并克隆到pPIC3.5K表达载体,构建pPIC3.5K/HPV16L1重组质粒;重组质粒经Bgl II酶切线性化后,电转化至GS115菌株中,筛选HPV16L1重组毕赤酵母。阳性整合菌株甲醇诱导后,以HPV16L1单克隆抗体检测目的蛋白表达;采用肝素亲和层析法纯化HPV16L1VLPs并进行透射电镜观察。结果PCR、酶切和测序分析表明成功构建了pPIC3.5K/HPV16L1重组质粒。成功构建的HPV16L1重组毕赤酵母甲醇诱导后,Western blot证实重组酵母菌裂解产物存在HPV16L1目的蛋白。肝素亲和纯化后,透射电镜观察到了直径大约55nm的VLPs,其形态与HPV16天然病毒颗粒相似。结论利用整合型重组毕赤酵母表达系统成功表达了HPV16L1蛋白,并用肝素亲和纯化可快速获得结构完整的HPV16L1VLPs,为HPV16预防性疫苗的研制奠定基础。

关键词：人乳头瘤病毒主要衣壳蛋白L1 毕赤酵母表达系统病毒样颗粒

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系统性红斑狼疮患者外周血人巨细胞病毒感染状态分析及意义

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中华风湿病学杂志 2014年第3期18卷 199-202页

作者：陈静熊江彪叶文静朱小春章慧娣张丽芳薛向阳温州医科大学附属第一医院风湿免疫科 325000 温州医科大学附属第一医院肾内科 325000 温州医科大学分子病毒与免疫学研究所基础医学院微生物和免疫学教研室

目的检测SLE患者外周血人巨细胞病毒（HCMV）的感染状况，探讨HCMV感染在SLE发病中的作用。方法采集并抽提60例已确诊的SLE患者和111名健康人外周血白细胞DNA，利用巢式PCR技术检测HCMV糖蛋白gB（UL55）基因以确定HCMV感染情况。应用2... 详细信息

目的检测SLE患者外周血人巨细胞病毒（HCMV）的感染状况，探讨HCMV感染在SLE发病中的作用。方法采集并抽提60例已确诊的SLE患者和111名健康人外周血白细胞DNA，利用巢式PCR技术检测HCMV糖蛋白gB（UL55）基因以确定HCMV感染情况。应用2个独立样本t检验、非参数检验、χ2检验及Fisher确切概率法统计分析。结果琼脂糖凝胶电泳及测序显示建立的巢式PCR能特异地检测***55基因，SLE患者外周血中HCMV检出率明显高于对照组[分别为41．7％（25／60）和1．8％（2／111），χ2=46．551，P〈0．01]。与外周血HCMV阴性组SLE患者相比，HCMV阳性组SLE患者抗核糖体P蛋白抗体（Rib．P）阳性率[分别为26％（9／35），56％（14／25），χ2=5．659，P=0．017]、直接Coomb’s试验阳性率[分别为37％（13／35），72％（18／25），χ2=7．096，P=-0．008]及抗β2糖蛋白1（GP1）抗体水平[分别为21．3（9．9，51．8）U/ml，13．6（5．9，23．1）U／ml；U=2．017，P=0．044]明显升高，血液系统相关指标中的红细胞[分别为（3．65±0．10）×10^12／L，（3．17±0．17）×10^12／L；t=2．574，P=0．013]、淋巴细胞[分别为（1．37±0．14）×10^12／L，（0．90±0．13）×10^12；t=2．456，P=0．017]、血红蛋白[分别为（110±19）g／L，（98±5）g／L；t=2．034，P=0．048]明显减少；肾损害相关指标中的血尿阳性率[分别为40％（14／35），72％（18／25）；χ2=6．000，P=0．014]、尿蛋白定量（24h）水平[分别为0．80（0．53，2．37）g，0．48（0．13，1．21）g；U=2．140，P=0．032]明显上升。结论外周血细胞HCMV感染可能参与SLE发生、发展过程。

关键词：红斑狼疮,系统性巨细胞病毒聚合酶链反应

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趋化因子CXCL14在结直肠癌组织中的表达及其临床相关性研究

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中国病理生理杂志 2014年第2期30卷 355-358,373页

作者：林刻智林峰郑双沈洁沈贤薛向阳温州医科大学基础医学实验中心浙江温州325035 台州市第一人民医院普外科浙江台州318020 温州医科大学附属第一医院胃肠外科浙江温州325000 温州医科大学微生物与免疫学教研室分子病毒与免疫研究所浙江温州325035

目的:分析趋化因子CXCL14在结直肠癌组织中的表达,并探讨其表达的临床意义。方法:采用实时荧光定量PCR和免疫组化对40例结直肠癌及癌旁正常组织CXCL14的表达进行检测。Kaplan-Meier生存曲线和Cox回归模型评估CXCL14在结直肠癌组织中表... 详细信息

目的:分析趋化因子CXCL14在结直肠癌组织中的表达,并探讨其表达的临床意义。方法:采用实时荧光定量PCR和免疫组化对40例结直肠癌及癌旁正常组织CXCL14的表达进行检测。Kaplan-Meier生存曲线和Cox回归模型评估CXCL14在结直肠癌组织中表达的临床意义。结果:CXCL14 mRNA和蛋白水平在结直肠癌组织中的表达较正常组织明显降低(P<0.05)。临床相关性分析表明,CXCL14表达的下调与肿瘤淋巴结转移、发生部位以及临床病理分期有关(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示,不同CXCL14蛋白表达水平的患者,生存时间具有显著差异(P<0.01)。结论:CXCL14可能参与结直肠癌的发生、发展过程。

关键词：趋化因子CXCL14 生存分析结直肠肿瘤

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M13噬菌体多克隆抗体的制备与鉴定

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温州医学院学报 2014年第4期44卷 245-247,251页

作者：谭慧王冰冰卢徐涟侯柏龙林晓云刘巧琼张丽芳陈筱菲温州医科大学附属第一医院检验科浙江温州325015 温州医科大学分子病毒与免疫研究所/微生物学与免疫学教研室浙江温州325035

目的 :制备M13K07辅助噬菌体多克隆抗体。方法:将M13K07辅助噬菌体进行大量扩增,以此作为免疫原于1、3、5周进行兔免疫,收集0周和免疫后2、4、6、8周免疫血清,用间接ELISA法对兔免疫血清的效价进行检测,进一步用免疫斑点实验检测兔多克... 详细信息

目的 :制备M13K07辅助噬菌体多克隆抗体。方法:将M13K07辅助噬菌体进行大量扩增,以此作为免疫原于1、3、5周进行兔免疫,收集0周和免疫后2、4、6、8周免疫血清,用间接ELISA法对兔免疫血清的效价进行检测,进一步用免疫斑点实验检测兔多克隆抗体与M13K07辅助噬菌体的特异性结合能力。结果:M13K07辅助噬菌体免疫兔可产生高效价的多克隆抗体,效价达1:3 200,并能特异性识别M13K07辅助噬菌体。结论:成功制备了高效价的M13K07辅助噬菌体多克隆抗体,为噬菌体展示技术研究提供了检测抗体。

关键词： M13K07辅助噬菌体多克隆抗体免疫斑点实验酶联免疫吸附试验兔

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启动子高甲基化抑制趋化因子CXC趋化因子配体14在胃癌组织中的表达

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中华实验外科杂志 2014年第3期31卷 473-473页

作者：胡畅远沈贤薛向阳庞文洋陈文静张丽芳朱冠保温州医科大学附属第一医院胃肠外科 325035 温州医科大学分子病毒与免疫研究所微生物学与免疫学教研室

CXC趋化因子配体14（CXCL14）作为趋化凶子CXC子家族的一员，普遍存在于人体正常组织，有提供维持机体稳态的作用，但在各类实体肿瘤中表达高低不。本研究旨在观察CXCL14在胃癌中的表达，并探讨其机制。

关键词：趋化因子配体胃癌组织 CXC 高甲基化启动子人体正常组织机体稳态实体肿瘤

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