检索结果-内蒙古大学图书馆

中华微生物学和免疫学杂志 2023年第2期43卷 93-101页

作者：贾如斯辰力李明洋杨佳吴芯蕾朱珊丽温州医科大学第一临床医学院(信息与工程学院) 温州325035 武汉大学医学部基础医学院武汉430062 温州医科大学基础医学院微生物学和免疫学教研室温州325035 温州医科大学第二临床医学院温州325035

目的分析人正常宫颈上皮细胞(HcerEpic)感染沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)前后基因表达谱差异。方法HcerEpic细胞经DEAE-D预处理后加入E型Ct标准株,培养44 h后收集HcerEpic细胞(感染组),并以未感染Ct的HcerEpic细胞作为对照组,... 详细信息

目的分析人正常宫颈上皮细胞(HcerEpic)感染沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)前后基因表达谱差异。方法HcerEpic细胞经DEAE-D预处理后加入E型Ct标准株,培养44 h后收集HcerEpic细胞(感染组),并以未感染Ct的HcerEpic细胞作为对照组,提取两组总RNA后反转录并构建cDNA文库。通过高通量测序分析两组基因表达谱差异,并选择代表性基因通过实时荧光定量PCR(qPCR)验证。结果共检测23997个基因,差异基因125个,其中上调基因119个,下调基因6个;GO分析显示差异基因富集于对病毒防御反应、Ⅰ型干扰素(interferon,IFN)信号通路、对Ⅰ型IFN的细胞反应等条目;KEGG富集通路为甲型流感、单纯疱疹病毒感染、EB病毒感染、HPV感染、NOD样受体通路等相关通路。结论人正常宫颈上皮细胞感染Ct前后转录组存在差异,差异基因主要富集于IFN通路,与细胞抗病毒过程密切相关。qPCR验证了ISG15、IFIT2、OASL、UBE2L6等差异显著且与IFN通路密切相关的基因。

关键词：沙眼衣原体宫颈上皮细胞转录组差异表达基因

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沙眼衣原体Pgp3多克隆抗体的制备及鉴定

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温州医科大学学报 2024年第3期54卷 184-189页

作者：周璐琪杨佳李洋朱珊丽温州医科大学基础医学院微生物学与免疫学教研室分子病毒与免疫研究所浙江温州325035

目的:制备沙眼衣原体(Ct)Pgp3蛋白的兔多克隆抗体,并检测其生物学功能。方法:采用原核表达系统制备Pgp3蛋白,通过镍柱亲和纯化Pgp3蛋白并进行复性。将复性的Pgp3蛋白经皮下多点注射免疫家兔制备兔多克隆抗体,利用ELISA和Western blot法... 详细信息

目的:制备沙眼衣原体(Ct)Pgp3蛋白的兔多克隆抗体,并检测其生物学功能。方法:采用原核表达系统制备Pgp3蛋白,通过镍柱亲和纯化Pgp3蛋白并进行复性。将复性的Pgp3蛋白经皮下多点注射免疫家兔制备兔多克隆抗体,利用ELISA和Western blot法检测抗体的效价和特异性。随后建立Ct感染HeLa细胞模型,通过间接免疫荧光法和非变性Western blot法检测兔多克隆抗体对天然Pgp3蛋白的特异性识别能力。结果:Pgp3重组蛋白成功诱导表达,且主要以包涵体形式存在。ELISA显示制备的兔多克隆抗体效价可达1:512000,Western blot法和间接免疫荧光法显示Pgp3兔多克隆抗体可以特异性识别重组及天然Pgp3蛋白。结论:制备的Pgp3多克隆抗体效价高,能特异性识别重组Pgp3蛋白及天然Pgp3蛋白,为Pgp3蛋白功能的研究及Ct免疫制剂的研发等奠定基础。

关键词：沙眼衣原体多克隆抗体 Pgp3

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沙眼衣原体质粒蛋白3致病机制的研究进展

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国际生物制品学杂志 2024年第4期47卷 245-251页

作者：吴芯蕾朱润泽朱珊丽温州医科大学第二临床医学院温州325035 眼视光学院(生物医学工程学院) 温州325035 温州医科大学基础医学院微生物学和免疫学教研室温州325035

沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,CT)的生殖道感染可导致女性盆腔炎症、输卵管炎症、异位妊娠和不孕等严重并发症,然而其致病机制尚不明确。CT质粒蛋白3(plasmid gene protein 3,Pgp3)的缺失可使CT上行感染致病力减弱、无法诱导上生... 详细信息

沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,CT)的生殖道感染可导致女性盆腔炎症、输卵管炎症、异位妊娠和不孕等严重并发症,然而其致病机制尚不明确。CT质粒蛋白3(plasmid gene protein 3,Pgp3)的缺失可使CT上行感染致病力减弱、无法诱导上生殖道输卵管的病变,表明Pgp3在CT致病中起重要作用。Pgp3通过抑制宿主细胞凋亡、改善宿主细胞生存状态以及抑制人类抗菌肽等多种机制,维持CT生存并促进其感染上行。Pgp3还可通过促进CT转移并定植于胃肠道,建立CT的持续感染。此外,Pgp3通过诱导产生炎症因子等方式促进炎症的发生发展。因此,Pgp3是CT致病的重要毒力因子。此文就Pgp3对CT致病机制的研究进展作一综述。

关键词：沙眼衣原体质粒质粒蛋白3

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基于HBc载体的SARS-CoV-2 S蛋白嵌合病毒样颗粒疫苗诱导的粘膜免疫反应评估

基于HBc载体的SARS-CoV-2 S蛋白嵌合病毒样颗粒疫苗诱导的粘膜免...

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浙江省免疫学会第十三次学术大会

作者：陈卓李青峰陈俊朱珊丽张丽芳温州医科大学基础医学院微生物学与免疫学教研室

背景:SARS-CoV-2引起COVID-19大流行,威胁全球公共卫生安全。迄今为止,不同监管机构批准使用的COVID-19疫苗均是通过肌肉免疫接种,该免疫途径诱导粘膜免疫应答能力较弱,迫切需要应对COVID-19大流行的新型疫苗和免疫策略。SARS-CoV-2S蛋... 详细信息

背景:SARS-CoV-2引起COVID-19大流行,威胁全球公共卫生安全。迄今为止,不同监管机构批准使用的COVID-19疫苗均是通过肌肉免疫接种,该免疫途径诱导粘膜免疫应答能力较弱,迫切需要应对COVID-19大流行的新型疫苗和免疫策略。SARS-CoV-2S蛋白通过与宿主细胞ACE2受体结合进而入侵细胞,故S蛋白已成为疫苗研究的重要靶标。其中S蛋白中RBM、FP、HR1、HR2等四个结构域在病毒入侵宿主细胞过程中至关重要。乙肝病毒核心抗原(HBc)可自组装成病毒样颗粒(VLPs),作为载体携带异源蛋白质并能增强其免疫原性。研究目的:以HBc为载体携带新冠病毒S蛋白结构域,制备嵌合VLPs疫苗,并评估不同免疫途径刺激机体产生的免疫应答效应。材料和方法:本研究将新冠病毒S蛋白的四个主要结构域通过柔性肽连接,形成长度为230个氨基酸的多肽分子命名为S230,并以HBc为载体携带S230,构建HBc-S230 VLPs,分别通过肌肉注射、滴鼻免疫、肌肉联合滴鼻的方式免疫小鼠,检测血清抗体IgG、粘膜分泌物抗体sIgA及脾细胞IFN-γ、IL-4等细胞因子的产生情况,同时在细胞水平检测分析了免疫后小鼠血清抗体对野生型、Delta突变株和Omicron突变株新冠假病毒的中和活性,以评估嵌合VLPs疫苗的免疫效应、开发更有效的疫苗及免疫策略。结果:采用肌肉、鼻内及肌肉联合鼻内等三种方式免疫小鼠,通过ELISA检测血清中IgG抗体水平和粘膜分泌物中sIgA抗体水平,结果显示,血清中IgG抗体A450值分别为1.70±0.02、2.10±0.07、1.89±0.08;肺泡灌洗液中sIgA抗体A450值分别为0.81±0.03、1.05±0.05、1.63±0.09,鼻灌洗液中sIgA抗体A450值分别为0.57±0.03、1.21±0.02、2.15±0.04。说明三种途径免疫HBc-S230 VLPs均可刺激机体产生高水平的血清特异性抗体和粘膜分泌物sIgA,以肌肉联合鼻内免疫效果最佳。同时采用ELISA检测脾细胞分泌的细胞因子IFN-γ、IL-4的产生情况,结果显示,三种途径免疫小鼠均能刺激机体产生高水平的IFN-γ,且以肌肉联合鼻内免疫效果最佳。荧光素酶报告实验检测三种免疫途径血清中IgG对新冠假病毒的中和能力,结果显示,肌肉注射、肌肉联合鼻内免疫途径产生的血清IgG均能中和野生型、Delta突变株和Omicron突变株SARS-CoV-2假病毒,且以肌肉联合鼻内免疫组中和效果最佳(对野生型、Delta突变株、Omicron突变株病毒中和活性IC50肌肉注射组分别为1:257、1:26、1:76,肌肉联合鼻内组分别为1:811、1:161、1:3435),而鼻内免疫组无中和活性。结论:HBc-S230 VLPs通过肌肉注射、滴鼻免疫、肌肉联合滴鼻免疫均能刺激机体产生高水平的体液免疫(血清IgG抗体和粘膜分泌物sIgA抗体)和细胞免疫效应,血清IgG抗体均能中和野生型、Delta突变株和Omicron突变株SARS-CoV-2假病毒,且以肌肉联合滴鼻免疫效果最佳。

关键词： SARS-CoV-2 S蛋白粘膜免疫 HBcAg 中和作用

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抗人B7-H4嵌合抗体的制备及鉴定

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中国免疫学杂志 2022年第22期38卷 2763-2769页

作者：范振军张文婷张丽张俊爱赵祖国徐军发(指导) 广东医科大学医学技术学院检验医学研究所东莞523808 广东医科大学基础医学院微生物学和免疫学教研室东莞523808

目的:制备抗人B7-H4嵌合单克隆抗体(mAb),并对其生物学功能进行初步鉴定。方法:从杂交瘤细胞株扩增抗人B7-H4可变区基因序列;构建表达人鼠嵌合抗体的表达载体,并转染CHO-K1细胞构建稳定表达抗B7-H4嵌合抗体的CHO-K1细胞株;SDS-PAGE检测... 详细信息

目的:制备抗人B7-H4嵌合单克隆抗体(mAb),并对其生物学功能进行初步鉴定。方法:从杂交瘤细胞株扩增抗人B7-H4可变区基因序列;构建表达人鼠嵌合抗体的表达载体,并转染CHO-K1细胞构建稳定表达抗B7-H4嵌合抗体的CHO-K1细胞株;SDS-PAGE检测mAb纯度;ELISA测定mAb效价;SPR测定mAb的亲和力;BCA法检测mAb浓度;CCK-8法检测T细胞增殖情况;ELISA和Western blot确定mAb结合表位范围;使用Discovery Studio软件对单抗表位进行分析。结果:从杂交瘤细胞成功扩增出抗体可变区基因,筛选出稳定表达嵌合抗体的CHO-K1细胞株;细胞培养上清中mAB浓度为1.82 mg/ml,ELISA有效效价为1.97×10^(5)左右,亲和力为3.72×10^(-9)kD;CCK-8结果表明嵌合单抗可以阻断B7-H4-Fc分子对T细胞增殖的抑制作用;表位分析结果表明嵌合mAb主要以氢键和疏水作用与B7-H4 IgC域结合。结论:本研究成功制备了抗B7-H4的人鼠嵌合单抗,可在体外有效地阻断B7-H4-Fc对T细胞增殖抑制作用并为B7-H4抗体药物研发提供了前期基础。

关键词： B7-H4 嵌合抗体抗体表位 T细胞增殖

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一种新型抗体替代品——亲和体的研究进展

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国际生物制品学杂志 2022年第5期45卷 272-276页

作者：杨佳周璐琪(综述) 张丽芳朱珊丽(审校) 温州医科大学基础医学院微生物学与免疫学教研室温州325000

作为抗体的一种新型替代品,亲和体不仅以高亲和力与靶蛋白特异性结合,同时又具备相对分子质量小(~6500)、穿透性强、免疫原性弱和制备过程简单等诸多特性。因此,亲和体在肿瘤靶向治疗、体内成像诊断和生物技术应用等方面具有更突出的优... 详细信息

作为抗体的一种新型替代品,亲和体不仅以高亲和力与靶蛋白特异性结合,同时又具备相对分子质量小(~6500)、穿透性强、免疫原性弱和制备过程简单等诸多特性。因此,亲和体在肿瘤靶向治疗、体内成像诊断和生物技术应用等方面具有更突出的优势和可行性。此文对其特性和应用研究进展做一综述。

关键词：亲和体靶向治疗成像诊断生物技术

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新型冠状病毒PLpro蛋白酶结构与功能的生物信息学分析

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病毒学报 2021年第1期37卷 43-51页

作者：杜倩倩张智慧廉政张庆媛薛向阳张丽芳蒋朋飞温州医科大学基础医学院微生物学与免疫学教研室分子病毒与免疫研究所温州325035 温州医科大学病毒研究院温州325035

2019年12月,由新型冠状病毒(SARS-CoV-2)引起的新型冠状病毒肺炎(COVID-19)在中国武汉暴发。SARS-CoV-2的基因组编码2种病毒蛋白酶,即木瓜样蛋白酶(Papain-like protease,PLpro)和3C样蛋白酶(3C-like protease)。其中PLpro是SARS-CoV-2复制酶复合体(RC)形成的重要调节蛋白分子,对于病毒基因组转录和复制至关重要。因此,将SARS-CoV-2 PLpro作为药物的靶点对COVID-19的治疗具有积极意义。本研究应用生物信息学工具分析新型冠状病毒的木瓜样蛋白酶的结构和功能,首先利用BLAST和BioEdit获取SARS-CoV-2 PLpro蛋白酶(SC2-PLpro)及其同源蛋白的氨基酸序列,并利用BLAST和MEGA 6.0进行同源性分析。之后,利用ProParam和Proscale分别对SC2-PLpro蛋白酶的理化性质、亲水性和疏水性进行分析。然后,通过SOMPA、ScanProsite和InterPro分别预测SC2-PLpro蛋白酶的二级结构和功能区域,进一步利用SignalP 4.0和TMHMM对SC2-PLpro蛋白酶的信号肽和跨膜区进行分析。最后,通过SWISS-MODEL对SARS-CoV-2 PLpro蛋白酶进行三级结构同源建模。结果显示,对SARS-CoV-2 PLpro蛋白酶与已报道的PLpro蛋白酶进行多序列比对后,发现SARS-CoV-2 nsp3的746~1063段氨基酸与多种冠状病毒PLpro蛋白酶氨基酸序列高度相似。同时,同源性分析发现SARS-CoV-2与蝙蝠冠状病毒的PLpro蛋白酶具有同源性,其中与QHR63299、AVP78030相似性最高。对SC2-PLpro进行理化性质预测结果显示,其由318个氨基酸所组成,为稳定亲水性蛋白。二级结构预测结果显示SC2-PLpro主要含有α-螺旋、延伸链、β-转角、无规卷曲,四种结构贯穿整条氨基酸链。进一步进行功能分析,发现其具有完整的催化三联体、锌结合域、泛素样N末端结构域,故推测该蛋白具有去泛素化的功能。然后,信号肽假说和跨膜结构域分析结果表明,SC2-PLpro既不是分泌蛋白,也不属于跨膜蛋白。本研究提示,生物信息学分析SC2-PLpro为稳定性亲水蛋白,属于非跨膜蛋白,比较保守,具有去泛素化的功能,利用此功能可以进一步规避宿主的固有免疫反应。通过制备PLpro蛋白酶小分子抑制剂,可能有助于治疗新型冠状病毒肺炎。

关键词：新型冠状病毒(SARS-CoV-2) 木瓜样蛋白酶(PLpro蛋白酶) 结构功能生物信息学新型冠状病毒肺炎(COVID-19)

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基于NK相关基因的急性髓细胞白血病预后风险评估模型的建立

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温州医科大学学报 2024年第7期54卷 563-573页

作者：梅殿凤项丹毛晨晨周海霞薛向阳朱珊丽温州医科大学基础医学院微生物学与免疫学教研室分子病毒与免疫研究所浙江温州325035 温州医科大学附属第二医院育英儿童医院儿科研究室温州市儿童血液肿瘤疾病研究重点实验室浙江温州325027

目的:通过分析NK细胞相关基因(NRGs)在急性髓细胞白血病(AML)中的表达模式及其与预后的关系,构建新型风险评分模型以评估AML患者的预后。方法:基于生物信息学的方法下载TCGA数据库中AML转录组数据。根据NRGs的表达不同,通过无监督聚类将... 详细信息

目的:通过分析NK细胞相关基因(NRGs)在急性髓细胞白血病(AML)中的表达模式及其与预后的关系,构建新型风险评分模型以评估AML患者的预后。方法:基于生物信息学的方法下载TCGA数据库中AML转录组数据。根据NRGs的表达不同,通过无监督聚类将AML患者分组,并分别分析不同亚组AML患者的生存差异、基因功能富集情况和免疫相关分析。根据亚组的差异表达基因,通过Cox生存分析以及LASSO回归分析构建基于NRGs的预后评估模型。最后收集AML患者的骨髓样本进行转录组测序,进一步验证预后评估模型中各基因与AML的相关性。结果:单因素Cox筛选与预后相关的NRGs,并根据其表达情况将AML患者分成3个亚组。生存分析以及富集分析、免疫浸润分析、免疫检查点分析均发现亚组2具有更好的临床预后,并且免疫微环境明显重塑。进一步根据三个亚组的差异表达基因,通过Cox联合LASSO回归分析构建风险评分模型,此风险评分模型与AML的临床预后显著相关。临床病例的转录组测序结果表明,风险模型的6个AML危险基因中,ADGRG1、LSP1、PDE7B在复发患者中的表达量较缓解患者上调,保护基因TBX1的表达量则下调。结论:本研究构建的AML患者风险评分模型可作为一种新的预后评估手段,具有较好的预测价值。

关键词：急性髓细胞白血病 NK细胞相关基因风险评估模型肿瘤免疫微环境

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主动学习模式建立对医学高等教育作用研究及启示

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基础医学教育 2020年第3期22卷 232-235页

作者：陈薪安董海艳丁茂超温州医科大学基础医学院微生物学与免疫学教研室温州325035 温州医科大学基础医学院解剖学教研室

文章对UCLA的教育教学方法进行分析,发现西方教育教学的根本理念是培养学生主动学习(active learning)能力,教学过程以学生为主。PBL教学、TBL教学、翻转课堂等教学方法都是为实现这个教学理念而使用的手段。国内高等教育教学改革过程中... 详细信息

文章对UCLA的教育教学方法进行分析,发现西方教育教学的根本理念是培养学生主动学习(active learning)能力,教学过程以学生为主。PBL教学、TBL教学、翻转课堂等教学方法都是为实现这个教学理念而使用的手段。国内高等教育教学改革过程中,无论采用哪一种教学方法,都要结合中国学生特点和学校情况进行实施,都要围绕培养学生主动学习能力这个教育理念,而建立小组讨论、允许学生在犯错中学习、激发学生主动学习兴趣和引导学生建立批判性思维是实现这个教育理念最好的帮手。

关键词：高等教育主动学习批判性思维

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人巨细胞病毒感染对单核细胞功能的影响

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病毒学报 2019年第6期35卷 907-918页

作者：施昕妤郭刚强林康明李宝青薛向阳章慧娣温州医科大学基础医学院微生物学和免疫学教研室温州325035 温州医科大学附属第二医院检验科温州325000 温州医科大学附属第一医院肾内科温州325000

人巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)是一种β疱疹病毒。单核细胞是HCMV的主要体内靶标。当前大多数的研究集中于单个时间点来分析HCMV感染对单核细胞功能的影响,并未整体且动态地阐述HCMV感染对单核细胞功能的影响。本研究从GEO(... 详细信息

人巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)是一种β疱疹病毒。单核细胞是HCMV的主要体内靶标。当前大多数的研究集中于单个时间点来分析HCMV感染对单核细胞功能的影响,并未整体且动态地阐述HCMV感染对单核细胞功能的影响。本研究从GEO(Gene Expression Omnibus)数据库筛选HCMV感染单核细胞4h、24h、48h后的基因芯片,通过生物信息学方法对HCMV感染单核细胞4h、24h、48h后的功能影响进行详细的阐述及比较分析,并用定量反转录聚合酶连锁反应(quantificational reverse transcription polymerase chain reaction,qRTPCR)验证HCMV感染人单核细胞白血病细胞(THP-1细胞)4h、24h和48h后白细胞介素(Interleukin,IL)-1β、IL-8、肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor,TNF)-a、IL-10的表达。结果表明HCMV感染单核细胞4h后参与信号转导、炎症反应、免疫反应、防御病毒反应和趋化反应等17个通路,且可能与病理学过程/疾病、病毒疾病、RNA病毒感染和免疫系统疾病等相关。HCMV感染单核细胞24h后主要参与炎症反应、细胞趋化等信号通路,预测主要与系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus,SLE)、结缔组织疾病和自身免疫性疾病等10种疾病相关。HCMV感染单核细胞48h后主要参与炎症反应、细胞趋化等信号通路,预测主要与结缔组织疾病、病理学过程和SLE等10个疾病相关。qRT-PCR结果显示HCMV感染THP-1细胞4h、24h和48h后IL-1β、IL-8、TNF-α、IL-10的表达增加。本研究表明HCMV感染主要引起炎症反应及趋化反应,并可能与自身免疫性疾病或SLE高度相关。

关键词：人巨细胞病毒(HCMV) 单核细胞炎症反应趋化反应

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