检索结果-内蒙古大学图书馆

温州医科大学学报 2020年第2期50卷 87-91页

作者：刘欣谢旺凯孙祥威陈治元沈贤薛向阳温州医科大学附属第二医院育英儿童医院胃肠外科浙江温州325027 温州医科大学基础医学院微生物学与免疫学教研室浙江温州325035

目的:探究人巨细胞病毒(HCMV)UL111A基因在增殖性感染不同时间点的转录本特征及变化。方法:在HCMV AD169株感染人包皮成纤维细胞(HFF)12 h,24 h,48 h,3 d,5 d,7 d,9 d等不同时间点,抽提RNA,反转录成cDNA,PCR检测UL111A转录本特征。扩增... 详细信息

目的:探究人巨细胞病毒(HCMV)UL111A基因在增殖性感染不同时间点的转录本特征及变化。方法:在HCMV AD169株感染人包皮成纤维细胞(HFF)12 h,24 h,48 h,3 d,5 d,7 d,9 d等不同时间点,抽提RNA,反转录成cDNA,PCR检测UL111A转录本特征。扩增产物通过克隆、测序验证不同时间点UL111A转录本的特征变化。利用真核表达载体pcDNA3.1构建UL111A 3种转录本编码区序列载体pcDNA3.1-cmvIL-10,pcDNA3.1-LAcmvIL-10以及pcDNA3.1-unspliced,Western blot验证构建的载体在293T细胞中的有效表达。结果:感染HCMV AD169株的HFF可以检测到cmvIL-10,LAcmvIL-10以及未剪切3种形式转录本。未剪切形式转录本占比最多,cmvIL-10转录本占比最少。在感染的24 h和9 d 3种转录本都有检测到,而在其他时间点未能检测到cmvIL-10转录本。此外,3种转录本的编码区序列在293T细胞中均可有效表达。结论:HCMV UL111A基因在增殖性感染不同时间点存在3种形式的转录本。

关键词：人巨细胞病毒 UL111A基因转录本

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巨细胞病毒UL133-UL138基因表达与系统性红斑狼疮的相关性研究

巨细胞病毒UL133-UL138基因表达与系统性红斑狼疮的相关性研究

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二零一四年浙江省风湿病学学术年会

作者：陈静朱小春张丽芳薛向阳温州医科大学附属第一医院风湿科温州医科大学基础医学院微生物和免疫学教研室

目的:巨细胞病毒(HCMV)属于疱疹病毒β亚科,是一种广泛细胞亲嗜性的DNA病毒,一旦感染,将能长期潜伏存在于人体内。本研究中,我们检测系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中HCMV感染的情况并探索其在SLE发病中的作用。方法:... 详细信息

目的:巨细胞病毒(HCMV)属于疱疹病毒β亚科,是一种广泛细胞亲嗜性的DNA病毒,一旦感染,将能长期潜伏存在于人体内。本研究中,我们检测系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中HCMV感染的情况并探索其在SLE发病中的作用。方法:采集并分离92例SLE住院病人和81例门诊健康体检者的PBMCs及血清标本,利用高度敏感和特异的PCR方法检测SLE患者及对照组PBMCs中UL133-UL138基因的表达情况,同时采用罗氏公司电化学发光试剂盒检测SLE患者及对照组血清HCMV特异性IgG和IgM抗体,统计分析外周血单个核细胞内HCMV感染与SLE常见临床指标的关系。结果:SLE患者和健康对照组血清HCMV特异性IgG和IgM抗体检测的阳性率之间差异无统计学意义(P值分别为1.000,0.216),但是与对照组相比,SLE患者的IgG和IgM抗体滴度明显升高(P值分别为0.038,0.032),提示HCMV感染可能是SLE发病过程中的一个重要因素。琼脂糖凝胶电泳和测序结果显示,我们建立的PCR方法可以特异地检测HCMV UL133-UL138基因。利用高度敏感和特异的PCR方法,我们发现SLE患者UL133-UL138基因检测的阳性率明显高于对照组(P值分别为<0.001,<0.001,<0.001,0.025),而且UL135和UL136基因仅在SLE患者的PBMCs中检测到。将HCMV UL133-UL138基因在PBMCs中的表达情况与SLE患者的相关临床指标进行统计学分析后发现,UL133、UL135、UL136与SLE患者的多项临床指标存在相关性。尤其是UL135和/或UL136基因检测阳性的SLE患者在疾病活动期会出现全血细胞减少的症状,包括淋巴细胞减少、单核细胞减少以及红细胞减少。结论:我们的数据证实HCMV潜伏感染可能在SLE发生、发展中其至关重要的作用,有关潜伏感染的具体机制需要进一步研究。

关键词：系统性红斑狼疮(SLE) 巨细胞病毒(HCMV) PCR UL133-UL138

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系统性红斑狼疮患者B细胞中microRNA-155的表达及干预后效应

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浙江医学 2018年第10期40卷 1033-1036,1053页

作者：陈阿琼黄茜茜叶璐璐薛向阳林巧爱朱小春李声东宁波市医疗中心李惠利医院风湿免疫科 315040 温州医科大学第二临床医学院温州医科大学微生物学和免疫学教研室温州医科大学附属第一医院风湿免疫科

目的分析micro RNA-155(miR-155)在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血B细胞中的表达及干预后B细胞表达IgG水平。方法收集66例SLE患者及10例健康人群外周血,分离出B细胞,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-155在B细胞中的表达水平,利用... 详细信息

目的分析micro RNA-155(miR-155)在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血B细胞中的表达及干预后B细胞表达IgG水平。方法收集66例SLE患者及10例健康人群外周血,分离出B细胞,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-155在B细胞中的表达水平,利用电转染技术使miRNA抑制剂干预SLE患者外周血B细胞miR-155的表达,然后以ELISA检测B细胞干预后培养液上清液IgG的水平。结果 qRT-PCR结果显示,与健康人比较,SLE患者外周血B细胞中miR-155表达上调(P<0.05),通过miRNA抑制剂下调SLE患者B细胞中的miR-155的表达后,B细胞分泌的IgG水平明显降低。结论 SLE患者的B细胞中表达上调的miR-155可能参与了SLE患者B细胞功能调控。

关键词：系统性红斑狼疮微小RNA 微小RNA-155 B细胞 IgG

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结直肠癌组织浸润免疫细胞组成及特征

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温州医科大学学报 2020年第6期50卷 454-460页

作者：吴林峰孙永吉叶乐乐沈贤薛向阳沈淑蓉温州市中西医结合医院肿瘤科浙江温州325000 温州医科大学第一临床医学院浙江温州325035 温州医科大学基础医学院微生物学与免疫学教研室浙江温州325035 温州医科大学附属第二医院胃肠外科浙江温州325027

目的:研究结直肠癌(CRC)患者和健康人大肠组织中免疫细胞的浸润情况,为后续开展肿瘤微环境的研究提供前期的分析结果和数据。方法:通过GEO数据库对51例正常人结直肠组织和333例CRC患者肿瘤组织的基因表达谱数据进行计算分析,通过CIBERS... 详细信息

目的:研究结直肠癌(CRC)患者和健康人大肠组织中免疫细胞的浸润情况,为后续开展肿瘤微环境的研究提供前期的分析结果和数据。方法:通过GEO数据库对51例正常人结直肠组织和333例CRC患者肿瘤组织的基因表达谱数据进行计算分析,通过CIBERSORT方法将基因表达谱数据转化为组织中22种免疫细胞的浸润比例,对比这些免疫细胞在两者中的分布情况。结果:肠道浸润的免疫细胞组成在CRC患者与健康人之间有较大差异。T细胞和B细胞在肿瘤组织中的浸润数量少于健康人,而巨噬细胞、中性粒细胞、肥大细胞和树突状细胞在肿瘤组织中的浸润数量大于健康人。结论:CRC患者和健康人的结直肠组织中免疫细胞浸润存在较大的差异,这些具有差异的免疫细胞在癌症进展中可能发挥重要作用。

关键词：结直肠癌 CIBERSORT 肿瘤微环境免疫细胞

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人巨细胞病毒US31蛋白的特异性抗体的制备及鉴定

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中国卫生检验杂志 2020年第17期30卷 2102-2105,2108页

作者：李宝青项超丽谢尚丹施昕妤郭刚强薛向阳温州医科大学附属第二医院浙江温州325000 温州医科大学第二临床医学院浙江温州325000 温州医科大学微生物学和免疫学教研室分子病毒与疫苗研究所热带医学研究所浙江温州325000

目的制备人巨细胞病毒(HCMV)US31原核表达蛋白及其多克隆抗体。方法HCMV US31基因经原核密码子优化后进行全基因合成,克隆至p ET21a(+)原核表达载体,构建p ET21a(+)/HCMV US31重组质粒,测序鉴定;将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG... 详细信息

目的制备人巨细胞病毒(HCMV)US31原核表达蛋白及其多克隆抗体。方法HCMV US31基因经原核密码子优化后进行全基因合成,克隆至p ET21a(+)原核表达载体,构建p ET21a(+)/HCMV US31重组质粒,测序鉴定;将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导目的蛋白表达,Ni-NTA亲和层析法纯化US31蛋白,免疫新西兰兔制备多克隆抗体,ELISA、Western blot及免疫荧光方法检测抗体效价和特异性。结果在大肠杆菌中诱导出高表达的HCMV US31融合蛋白,经镍柱亲和纯化后获得高纯度的目的蛋白;免疫新西兰兔诱导产生特异性的Ig G抗体,效价为1∶49600;经ELISA、Western blot以及免疫荧光均证实制备的特异性抗体可识别细胞中表达的US31蛋白。结论成功制备了HCMV US31蛋白及特异性抗体,为进一步研究US31蛋白的生物学功能奠定了基础。

关键词：人巨细胞病毒 US31蛋白多克隆抗体

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长链非编码RNA AL049452在结直肠癌组织中的表达及临床意义

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温州医科大学学报 2017年第8期47卷 566-570页

作者：孙祥威胡盈盈徐剑峰张良毛晨晨郭刚强黄关立沈贤薛向阳温州医科大学附属第一医院胃肠外科浙江温州325015 温州医科大学附属第二医院妇产科浙江温州325027 温州医科大学基础医学院微生物学与免疫学教研室浙江温州325035 温州医科大学附属第一医院肿瘤科浙江温州325015 温州医科大学附属第二医院胃肠外科浙江温州325027

目的:探索长链非编码RNA(lncRNA)AL049452在结直肠癌组织中的表达及临床意义。方法:收集84例手术切除的结直肠癌及相应的癌旁正常组织,q RT-PCR检测lncRNA-AL049452的表达水平,用Mann-Whitney U检验分析lncRNA-AL049452表达水平和结直... 详细信息

目的:探索长链非编码RNA(lncRNA)AL049452在结直肠癌组织中的表达及临床意义。方法:收集84例手术切除的结直肠癌及相应的癌旁正常组织,q RT-PCR检测lncRNA-AL049452的表达水平,用Mann-Whitney U检验分析lncRNA-AL049452表达水平和结直肠癌患者临床病理特征的关系,同时分析其对结直肠癌患者的总生存时间及无病生存时间的影响。绘制ROC曲线评价lncRNA-AL049452诊断结直肠癌的效能。结果:结直肠癌患者肿瘤组织lncRNA-AL049452的表达水平明显高于癌旁正常组织(P=0.0035),肿瘤更大的结直肠癌患者其lncRNA-AL049452的表达量更高(P=0.024)。生存曲线分析显示,高表达lncRNA-AL049452的结直肠癌患者的无病生存时间较低表达组更短(log-rank=4.208,P=0.034)。ROC曲线分析显示,lncRNA-AL049452诊断结直肠癌的曲线下面积为0.723(95%CI=0.613~0.832,P<0.001),敏感性和特异性分别为86.0%和51.2%。结论:肿瘤组织中高表达的lncRNA-AL049452可能参与了结直肠癌发生发展进程,是结直肠癌诊断和预后判断的新生物标记物。

关键词：长链非编码RNA AL049452 结直肠肿瘤生物学标记

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基于NK相关基因的急性髓细胞白血病预后风险评估模型的建立

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温州医科大学学报 2024年第7期54卷 563-573页

作者：梅殿凤项丹毛晨晨周海霞薛向阳朱珊丽温州医科大学基础医学院微生物学与免疫学教研室分子病毒与免疫研究所浙江温州325035 温州医科大学附属第二医院育英儿童医院儿科研究室温州市儿童血液肿瘤疾病研究重点实验室浙江温州325027

目的:通过分析NK细胞相关基因(NRGs)在急性髓细胞白血病(AML)中的表达模式及其与预后的关系,构建新型风险评分模型以评估AML患者的预后。方法:基于生物信息学的方法下载TCGA数据库中AML转录组数据。根据NRGs的表达不同,通过无监督聚类将... 详细信息

目的:通过分析NK细胞相关基因(NRGs)在急性髓细胞白血病(AML)中的表达模式及其与预后的关系,构建新型风险评分模型以评估AML患者的预后。方法:基于生物信息学的方法下载TCGA数据库中AML转录组数据。根据NRGs的表达不同,通过无监督聚类将AML患者分组,并分别分析不同亚组AML患者的生存差异、基因功能富集情况和免疫相关分析。根据亚组的差异表达基因,通过Cox生存分析以及LASSO回归分析构建基于NRGs的预后评估模型。最后收集AML患者的骨髓样本进行转录组测序,进一步验证预后评估模型中各基因与AML的相关性。结果:单因素Cox筛选与预后相关的NRGs,并根据其表达情况将AML患者分成3个亚组。生存分析以及富集分析、免疫浸润分析、免疫检查点分析均发现亚组2具有更好的临床预后,并且免疫微环境明显重塑。进一步根据三个亚组的差异表达基因,通过Cox联合LASSO回归分析构建风险评分模型,此风险评分模型与AML的临床预后显著相关。临床病例的转录组测序结果表明,风险模型的6个AML危险基因中,ADGRG1、LSP1、PDE7B在复发患者中的表达量较缓解患者上调,保护基因TBX1的表达量则下调。结论:本研究构建的AML患者风险评分模型可作为一种新的预后评估手段,具有较好的预测价值。

关键词：急性髓细胞白血病 NK细胞相关基因风险评估模型肿瘤免疫微环境

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结直肠癌组织肿瘤浸润的免疫细胞特征及与预后关联

结直肠癌组织肿瘤浸润的免疫细胞特征及与预后关联

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浙江省免疫学会第六次会员代表大会暨第十一次学术大会

作者：叶乐乐施昕妤林康明常文军薛向阳温州医科大学基础医学院微生物学与免疫学教研室海军军医大学(原第二军医大学)热带医学与公共卫生学系卫生毒理学教研室

肿瘤微环境中浸润的免疫细胞是肿瘤发生发展的重要因素。本研究旨在构建一种有效预测结直肠癌患者预后的免疫细胞模型,为结直肠癌(colorectal cancer,CRC)的防治和预后评估提供新的方向。本研究纳入GEO数据库1497例样本和TCGA数据库的62... 详细信息

肿瘤微环境中浸润的免疫细胞是肿瘤发生发展的重要因素。本研究旨在构建一种有效预测结直肠癌患者预后的免疫细胞模型,为结直肠癌(colorectal cancer,CRC)的防治和预后评估提供新的方向。本研究纳入GEO数据库1497例样本和TCGA数据库的621例CRC样本,以及来自中国温州和上海两个中心的1008例结直肠腺癌标本。利用CIBERSORT法评估CRC标本22种浸润免疫细胞特征,COX单因素分析进一步探讨了浸润免疫细胞与CRC预后(无病生存期DFS、总生存时间OS)的关联性。通过筛选并选择TAN、TAM及Tregs 3种免疫细胞在对1008例CRC组织标本行免疫组化分析。以来自温州的CRC样本作为训练队列,统计分析这3种免疫细胞与CRC临床特征及预后的相关性,并构建模型,进一步通过上海样本进行测试及验证。结果显示,22种免疫细胞不同程度与CRC预后(DFS、OS)相关。测试队列检测结果显示,TAN、TAM及Tregs三种免疫细胞与肿瘤分化、淋巴结转移等临床特征相关,是CRC预后的独立因素。本研究利用TAN、TAM及Tregs三种细胞构建了一个针对CRC患者的预后评估模型,并在测试队列及验证队列中确认了这一模型的预测价值,结果显示高风险组的CRC患者相对于低风险组患者有更短的DFS及OS。此外,TAN、TAM及Tregs可影响CRC患者对放化疗的反应性,在经放化疗的患者中,高风险组的预后差距更大。总之,肿瘤组织浸润免疫细胞参与了CRC的发生发展过程,与预后相关,并影响放化疗的效果。

关键词：结直肠癌肿瘤微环境免疫细胞

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