检索结果-内蒙古大学图书馆

Acta Pharmacologica Sinica 2001年第8期22卷 53-56页

作者：王胜军姚堃谢芳艺季晓辉中国 212001 南京 210029 南京医科大学微生物学和免疫学教研室南京医科大学微生物学和免疫学教研室镇江镇江医学院微生物学和免疫学教研室

目的:体外研究雷公藤多甙与白介素-10(IL-10)对人外周血树突细胞表面HLA-DR、CD80抗原表达及IL-12 p40蛋白表达和mRNA转录的影响。方法:采用GM-CSF、IL-4和TNFα体外培养体系获得人外周血树突细胞(DC),HLA-DR和CD80抗原的表达经免疫荧... 详细信息

目的:体外研究雷公藤多甙与白介素-10(IL-10)对人外周血树突细胞表面HLA-DR、CD80抗原表达及IL-12 p40蛋白表达和mRNA转录的影响。方法:采用GM-CSF、IL-4和TNFα体外培养体系获得人外周血树突细胞(DC),HLA-DR和CD80抗原的表达经免疫荧光染色后采用流式细胞仪进行分析,用酶联免疫吸附测定和逆转录聚合酶链反应分别检测IL-12p40蛋白水平和mRNA的转录。结果:雷公藤多甙5-20mg/L显著下调HLA-DR和CD80抗原的表达,IL-10 50-200μg/L能抑制HLA-DR和CD80抗原的表达,并都具有剂量依赖关系;雷公藤多甙5-20mg/L和IL-10 50-200μg/L均能抑制DC分泌IL-12p40蛋白,同时经雷公藤多甙20mg/L和IL-10 200μg/L处理的DC中IL-12 p40 mRNA的表达受到显著抑制。结论:雷公藤多甙和IL-10能通过抑制DC表面分子的表达和IL-12的合成而发挥免疫抑制作用。

关键词：雷公藤树突细胞细胞培养 HLA-DR抗原 CD80抗原白介素-10 白介素-12 流式细胞术逆转录聚合酶链反应酶联免疫吸附测定

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HPV16 E5蛋白免疫优势肽段分析及其多克隆抗体的制备

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中国生物制品学杂志 2021年第6期34卷 725-729,739页

作者：唐婉林王路得顾美萍 Kamara SAIDU 汪琪李明洋陈韶张丽芳温州医科大学微生物学与免疫学教研室浙江温州325035

目的预测人乳头瘤病毒16型(human papillomavirus 16,HPV16)E5蛋白的免疫优势肽段,并制备其多克隆抗体。方法以人HPV16 E5蛋白全长氨基酸序列为基础,采用Hopp&Woods的亲水性方案、Zimmerman极性参数、Jameson-Wolf抗原指数方案和Em... 详细信息

目的预测人乳头瘤病毒16型(human papillomavirus 16,HPV16)E5蛋白的免疫优势肽段,并制备其多克隆抗体。方法以人HPV16 E5蛋白全长氨基酸序列为基础,采用Hopp&Woods的亲水性方案、Zimmerman极性参数、Jameson-Wolf抗原指数方案和Emini表面可及性方案及抗原性指数(antigenic index,AI)等生物信息学方法,综合分析E5蛋白免疫优势肽段。通过免疫日本大耳白兔进行E5蛋白免疫优势肽段的免疫原性验证并制备多克隆抗体;进一步采用ELISA法和间接免疫荧光试验分别检测多克隆抗体的效价及特异性。结果HPV16 E5蛋白N-端1~17氨基酸序列(MTNLDTASTTLLACFLL)为免疫优势肽段,可诱导兔产生高水平的E5蛋白特异性IgG抗体,抗体滴度随免疫次数增加而升高;间接细胞免疫荧光试验结果显示,制备的多克隆抗体可特异性识别TC-1-E5细胞胞浆内表达的E5蛋白。结论HPV16 E5蛋白氨基酸肽段(MTNLDTASTTLLACFLL)具有良好的免疫原性;成功制备了HPV16 E5蛋白多克隆抗体,为进一步研究HPV16 E5蛋白的生物学特性奠定了基础。

关键词：人乳头瘤病毒 E5蛋白免疫优势肽段多克隆抗体

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弓形虫棒状体蛋白2和膜表面蛋白1复合抗原优势表位免疫原性研究

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中华传染病杂志 2016年第1期34卷 32-38页

作者：吕金辉汪文寰熊一融杜王琪叶璐璐张丽芳李文姝温州医科大学微生物学与免疫学教研室 325032

目的分析弓形虫棒状体蛋白2（ROP2）和膜表面蛋白1（SAGl）复合抗原免疫优势表位的免疫原性。方法利用生物信息学技术预测和筛选出弓形虫复合抗原ROP2-SAG1免疫优势T、B淋巴细胞表位组合，将优势表位相应基因片段克隆至pET32a（＋）载... 详细信息

目的分析弓形虫棒状体蛋白2（ROP2）和膜表面蛋白1（SAGl）复合抗原免疫优势表位的免疫原性。方法利用生物信息学技术预测和筛选出弓形虫复合抗原ROP2-SAG1免疫优势T、B淋巴细胞表位组合，将优势表位相应基因片段克隆至pET32a（＋）载体并转化至表达感受态（大肠埃希菌Rosetta菌株）中诱导表达，通过离子螯合亲和层析柱（Ni—NTA）纯化表达产物，经SDS—PAGE鉴定表达产物纯化效果。以纯化的优势表位蛋白作为免疫原，皮下多点注射日本大耳兔，设pET32a（＋）载体蛋白和PBS为对照，以纯化的优势表位蛋白作包被抗原，ELISA法检测第0、2和4周免疫兔血清中表位特异性抗体IgG的产生时间及效价，免疫斑点实验验证免疫兔血清多克隆抗体的特异性。以纯化的优势表位免疫BALB／c小鼠，酶联免疫斑点分析技术检测免疫鼠脾细胞7干扰素产生能力。结果在原核表达体系中获得了相对分子质量为30000的优势表位融合表达产物。纯化的表位蛋白免疫大耳白兔血清中可检测到相应的表位特异性抗体IgG，其抗体水平随着免疫次数的增加而呈现逐渐升高的趋势，优势表位免疫组第2、4周兔血清抗体显著高于载体pET32a（＋）蛋白对照组（1．454±0．098比0．616±0．084，F=0．000，P〈0．05；2．299±0．224比1．580±0．192，F=0．112，P〈O．05），第4周的免疫血清多克隆抗体效价可达1：40960。免疫斑点实验证实多克隆抗体针对优势表位具有良好的特异性。原核体系制备的优势表位蛋白免疫鼠脾细胞受3种不同的CTL表位肽刺激产生的7干扰素水平，分别为表位肽1[（19．333±1．528）／10万细胞]、表位肽2[（40．333±1．528）／10万细胞]、表位肽3E（70．667±1．890）／10万细胞]，与PBS免疫对照组[表位肽1（1．033±0．150）／10万细胞、表位肽2（1．045±0．110）／10万细胞、表位肽3（1．041±0．120）／10万细胞]比较差异均有统计学意义（F值分别为0．284、0．000、0．284，均P〈0．05）。免疫鼠脾细胞受到优势表位中特异性CTL表位肽刺激后，γ干扰素产生水平显著升高，而且CTL表位联合Th表位的组合肽刺激（表位肽3），7干扰素产生水平分别显著高于单独的CTL表位肽刺激组（表位肽1和2，F值分别为5．796、0．000，均P〈0．05）。结论筛选的弓形虫复合抗原ROP2一SAGl免疫优势表位通过原核表达体系制备的重组表位蛋白，具有显著的免疫原性。

关键词：弓形虫 ROP2-SAG1 表位免疫原性

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人乳头瘤病毒16/18型E7双特异亲和体融合颗粒酶B的免疫亲和毒素制备和鉴定

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病毒学报 2023年第5期39卷 1326-1335页

作者：余丽君李妍姮黄智羡杨佳妮谢自新张丽芳李文姝温州医科大学微生物学与免疫学教研室温州325000

制备人乳头瘤病毒(Human papilloma virus,HPV)16/18型双特异性亲和体(Affibody,Z_(HPV16-18E7))融合颗粒酶B(GrB)的免疫亲和毒素,并鉴定其诱导靶细胞凋亡效应。于实验室前期已构建的Z_(HPV16-18E7)的N-端、中间、及C-端,偶联GrB构建不... 详细信息

制备人乳头瘤病毒(Human papilloma virus,HPV)16/18型双特异性亲和体(Affibody,Z_(HPV16-18E7))融合颗粒酶B(GrB)的免疫亲和毒素,并鉴定其诱导靶细胞凋亡效应。于实验室前期已构建的Z_(HPV16-18E7)的N-端、中间、及C-端,偶联GrB构建不同融合形式的免疫亲和毒素,并在原核表达体系中制备与纯化;在线网站分析免疫亲和毒素基本理化性质和空间结构预测;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测免疫亲和毒素分别对靶蛋白HPV16E7、HPV18E7的特异性结合力;流式细胞分析术检测免疫亲和毒素分别诱导人宫颈癌细胞SiHa(HPV16阳性)、HeLa(HPV18阳性)的细胞凋亡效应。成功构建三种不同组合形式的免疫亲和毒素,各免疫亲和毒素空间结构符合理论预测,且理化特性趋于一致;融合于Z_(HPV16-18E7)中间和C-端的两种免疫亲和毒素组合形式可在原核表达体系中表达出预期目的蛋白;制备的免疫亲和毒素可特异性结合相应的靶蛋白,结合效价均可达到1∶5625与1∶78125之间,且可分别诱导靶细胞产生显著的细胞凋亡效应。本研究成功构建与制备了基于亲和体的免疫亲和毒素,为HPV感染宫颈癌靶向治疗研究提供了新思路。

关键词：人乳头瘤病毒 HPV16/18型 Affibody 颗粒酶B 双靶向细胞凋亡

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BPI_(23)-Fcγ1重组蛋白原核表达载体的构建、表达和生物学活性的测定

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中国医学科学院学报 2000年第6期22卷 511-516页

作者：安云庆柯岩杨贵贞首都医科大学微生物学和免疫学教研室北京100054

目的构建 pBV- BPI600- Fcγ 1700重组表达载体，转化大肠杆菌 DH5α，诱导表达 BPI23- Fcγ 1抗菌重组蛋白。方法采用 RT- PCR技术，从 HL- 60细胞和正常人白细胞 mRNA中扩增编码 BPI23和 IgG1Fc（ Fcγ 1）的基因；通过连接反应构建... 详细信息

目的构建 pBV- BPI600- Fcγ 1700重组表达载体，转化大肠杆菌 DH5α，诱导表达 BPI23- Fcγ 1抗菌重组蛋白。方法采用 RT- PCR技术，从 HL- 60细胞和正常人白细胞 mRNA中扩增编码 BPI23和 IgG1Fc（ Fcγ 1）的基因；通过连接反应构建重组克隆载体和重组表达载体；转化感受态大肠杆菌 DH5α，通过温控诱导表达 BPI23- Fcγ 1重组蛋白；测定 BPI23- Fcγ 1重组蛋白的抗菌及免疫学活性。结果 (1)RT- PCR获得预期的扩增产物— BPI600bp和 Fcγ 1 700bp基因片段； (2)成功构建 pUC18- BPI180、 pUC18- BPI420和 pUC18- Fcγ 1700重组克隆载体， DNA测序结果与文献报道一致； (3)成功构建 pBV- BPI600- Fcγ 1700重组表达载体，酶切图谱分析与预期结果相符； (4)BPI23- Fcγ 1重组蛋白的表达量约占菌体蛋白总量的 20％； (5)复性后重组蛋白具有抗菌活性和激活补体、介导调理吞噬等作用。结论 pBV- BPI600- Fcγ 1700重组表达载体构建成功，并在大肠杆菌中得到表达，获得具有 BPI和 IgGFc双重生物学活性的重组抗菌蛋白。

关键词： pBV-BPI600-Fcγ1700 重线表达载体 RT-PCR

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BPI_(23)-Fcγ1重组融合蛋白在***中的表达

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中华微生物学和免疫学杂志 2000年第5期20卷 451-455页

作者：柯岩安云庆杨贵贞首都医科大学微生物学和免疫学教研室白求恩医科大学免疫学教研室

目的　构建pBV BPI60 0 Fcγ170 0 重组表达载体 ,转化E .coliDH5α诱导表达BPI2 3 Fcγ1抗菌重组蛋白。方法　采用RT PCR技术 ,从HL 6 0细胞和正常人白细胞mRNA中扩增编码BPI2 3 和IgG1Fc(Fcγ1)的基因 ;通过连接反应构建重组克隆载... 详细信息

目的　构建pBV BPI60 0 Fcγ170 0 重组表达载体 ,转化E .coliDH5α诱导表达BPI2 3 Fcγ1抗菌重组蛋白。方法　采用RT PCR技术 ,从HL 6 0细胞和正常人白细胞mRNA中扩增编码BPI2 3 和IgG1Fc(Fcγ1)的基因 ;通过连接反应构建重组克隆载体和重组表达载体 ;转化感受态E .coliDH5α细胞 ,通过温控诱导表达BPI2 3 Fcγ1重组蛋白。结果　 (1)RT PCR获得预期的扩增产物BPI60 0bp和Fcγ170 0bp基因片段 ;(2 )成功构建pUC18 BPI180 、pUC18 BPI4 2 0 、pUC18 Fcγ170 0 重组克隆载体 ,DNA测序结果与文献报道一致 ;(3)成功构建pBV BPI60 0 Fcγ170 0 重组表达载体 ,酶切图谱分析与预期结果相符 ;(4 )转化感受态E .coliDH5α细胞 ,通过温控诱导表达BPI2 3 Fcγ1重组蛋白 ,表达量约占菌体蛋白总量的 2 0 %～ 30 % ;(5 )复性后重组蛋白具有抗菌活性和结合蛋白A的作用。结论　pBV BPI60 0 Fcγ170 0 重组表达载体构建成功 ;在E .coli中得到表达 ,获得具有抗菌活性的BPI2 3

关键词： BPI23-Fcγ1重组蛋白聚合酶链反应抗菌蛋白

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解脲支原体3血清型和14血清型多带抗原B细胞表位预测

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中国人兽共患病学报 2013年第11期29卷 1067-1071页

作者：林巧爱董海艳朱珊丽薛向阳温州医科大学微生物学与免疫学教研室温州325000

目的预测解脲支原体(Ureaplasma urealyticum,Uu3和14血清型多带抗原(multiple banded antigen,MBA)的优势B细胞表位和Th表位。方法利用GOR4和HNN方法预测Uu3和Uu14血清型MBA的二级结构,结合其跨膜区域、亲水性、极性、柔韧性、表面可... 详细信息

目的预测解脲支原体(Ureaplasma urealyticum,Uu3和14血清型多带抗原(multiple banded antigen,MBA)的优势B细胞表位和Th表位。方法利用GOR4和HNN方法预测Uu3和Uu14血清型MBA的二级结构,结合其跨膜区域、亲水性、极性、柔韧性、表面可能性和抗原性等方面特征,预测其优势B细胞表位;同时筛选MHC-Ⅱ类限制性Th表位。合成4个富含B/Th细胞多表位肽,免疫小鼠评价其免疫原性。结果 Uu3血清型和14血清型MBA的B、Th表位具有高度同源性,其共同的富含B/Th细胞抗原表位位于N端31-51、55-75、97-115和154-168肽段。MBA aa31~51(F1)、MBA aa 55~75(F2)、MBA aa 97~115(F3)及MBA aa 154~168(F4)4个多表位肽具有良好的免疫原性,其诱导产生的特异性抗体明显高于PBS对照组(P<0.01)。结论多参数预测Uu MBA B细胞优势表位可为MBA单克隆抗体的制备和Uu表位疫苗设计等研究提供理论依据。

关键词：解脲支原体多带抗原 B细胞表位预测

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HPV16型E7重组蛋白的表达及其多克隆抗体的制备

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细胞与分子免疫学杂志 2014年第2期30卷 167-170,175页

作者：王冰冰涂建欣吕艳侯柏龙刘巧琼林晓云陈韶薛向阳朱珊丽张丽芳温州医科大学分子病毒与免疫研究所/微生物学与免疫学教研室浙江温州325000

目的制备人乳头瘤病毒(HPV)16型E7原核表达蛋白及其多克隆抗体。方法用PCR方法从宫颈癌组织中扩增HPV16 E7基因,克隆至pET21a(+)载体并构建pET21a(+)/HPV16 E7重组质粒,测序鉴定;将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3),经异丙基硫代-β-D-... 详细信息

目的制备人乳头瘤病毒(HPV)16型E7原核表达蛋白及其多克隆抗体。方法用PCR方法从宫颈癌组织中扩增HPV16 E7基因,克隆至pET21a(+)载体并构建pET21a(+)/HPV16 E7重组质粒,测序鉴定;将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3),经异丙基硫代-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导后表达重组蛋白,用Ni-NTA亲和层析法纯化并经SDS-PAGE及Western blot分析鉴定;纯化的HPV16 E7重组蛋白免疫日本大耳白兔制备多克隆抗体,用ELISA检测多克隆抗体的效价,并用Western blot法及免疫荧光技术分析多克隆抗体的特异性。结果 HPV16 E7重组蛋白可通过原核表达系统进行表达和纯化;通过兔免疫后可制备特异性的多克隆IgG抗体,效价达1∶30 000;经Western blot法和免疫荧光染色结果证实兔多克隆抗体可特异性识别HPV16 E7蛋白。结论成功进行了HPV16 E7原核表达并制备了HPV16 E7兔多克隆抗体。

关键词：人乳头瘤病毒 E7蛋白多克隆抗体

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人颗粒酶B融合蛋白的原核表达及其免疫血清的制备

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中国生物制品学杂志 2017年第3期30卷 234-238页

作者：汪文寰冯方方蔡一奇张婵琼岑丹维宋易玲郭刚强张丽芳李文姝温州医科大学微生物学与免疫学教研室浙江温州325035

目的在原核体系中表达人颗粒酶B(granzyme B,Gzm B)融合蛋白,并制备Gzm B免疫血清多克隆抗体。方法构建Gzm B原核表达重组质粒p ET32a-Gzm B,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达重组Gzm B(r Gzm B)蛋白,镍离子螯合亲和层析柱纯化表... 详细信息

目的在原核体系中表达人颗粒酶B(granzyme B,Gzm B)融合蛋白,并制备Gzm B免疫血清多克隆抗体。方法构建Gzm B原核表达重组质粒p ET32a-Gzm B,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达重组Gzm B(r Gzm B)蛋白,镍离子螯合亲和层析柱纯化表达产物。以纯化的r Gzm B蛋白为免疫原,皮下多点注射BALB/c小鼠,共免疫3次,分别于免疫后2、4、6周经小鼠尾静脉采血,分离血清,间接ELISA法检测免疫血清中Gzm B特异性Ig G抗体水平,并确定其抗体最大稀释度,免疫斑点试验检测免疫血清多克隆抗体对Gzm B的特异免疫结合特性。结果质粒p ET32aGzm B经双酶切及测序鉴定证明构建正确;表达的r Gzm B蛋白相对分子质量为48 000;纯化的r Gzm B蛋白免疫小鼠血清中Gzm B特异性Ig G抗体水平随免疫时间延长至第4周达到高峰,随后维持一定水平;抗体最大稀释度为1∶1 600;r Gzm B免疫血清能够特异地结合Gzm B,显示了其免疫结合特性。结论制备了r Gzm B蛋白和Gzm B小鼠免疫血清多克隆抗体,为后续开展Gzm B的靶向杀伤、靶向检测等应用研究奠定了基础。

关键词：颗粒酶B 原核表达多克隆抗体

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人乳头瘤病毒58型L1蛋白B细胞表位预测和分析

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中国病原生物学杂志 2017年第5期12卷 407-411,415页

作者：宋易玲叶晓鲜毛珊珊岑丹维张婵琼蒋朋飞张丽芳温州医科大学微生物学与免疫学教研室浙江温州325035

目的对人乳头瘤病毒58型(HPV58)主要结构蛋白(L1)的B细胞表位进行预测和分析。方法利用生物信息学软件EXPASY在线分析HPV58型L1蛋白的二级结构及生物学特性,包括跨膜趋势、表面可及性、抗原性、亲水性,溶性等,从而对其B细胞表位进行综... 详细信息

目的对人乳头瘤病毒58型(HPV58)主要结构蛋白(L1)的B细胞表位进行预测和分析。方法利用生物信息学软件EXPASY在线分析HPV58型L1蛋白的二级结构及生物学特性,包括跨膜趋势、表面可及性、抗原性、亲水性,溶性等,从而对其B细胞表位进行综合分析和预测。结果通过亲水性参数,Zimmcrman极性,柔韧性参数,表面可及性及抗原性进行综合分析,预测人乳头瘤病毒58型L1蛋白的B细胞表位可能位于其N端的29-37,43,46-58,64-67,74,79-88,93,100-101,103-125,133-139,149,151-180,187-213,220-213,235,238-247,252-271,277-282,286-309,320-323,327-338,341-348,351,353-368,373-396,408,427,419-425,433-444,453-468,470,475-486,488-490,493-494,497-524肽段区域;进一步用Protien Plast在线同源匹配分析,79-88、190-216、373-396、453-468、497-524肽段区段为可能的B细胞表位。结论用多参数预测分析HPV58型L1蛋白可能的B细胞表位,为进一步研究高危型58型L1蛋白的生物学特性提供了理论基础。

关键词：人乳头瘤病毒58型(HPV58) B细胞表位 L1蛋白同源性匹配分析

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