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环境科学学报 2019年第7期39卷 2125-2133页

作者：姜风英程荣周晓峰章晨璐王伍林虹吕建新温州医科大学检验医学院生命科学学院浙江省模式生物技术与应用重点实验室温州325000 温州医科大学公共卫生与管理学院温州325000

为构建一种能够高效、同时吸附水中多种重金属离子的大肠杆菌,利用融合蛋白表达技术,首先将大肠杆菌前脂蛋白信号肽Lpp、膜蛋白OmpA的N端部分氨基酸和铁硫簇组装蛋白IscA的编码基因序列进行融合,构建pET-Lpp-OmpA-IscA表达载体,将此载... 详细信息

为构建一种能够高效、同时吸附水中多种重金属离子的大肠杆菌,利用融合蛋白表达技术,首先将大肠杆菌前脂蛋白信号肽Lpp、膜蛋白OmpA的N端部分氨基酸和铁硫簇组装蛋白IscA的编码基因序列进行融合,构建pET-Lpp-OmpA-IscA表达载体,将此载体导入大肠杆菌BL21菌株.在IPTG诱导下,IscA蛋白可表达于细胞膜表面.然后对IscA膜表面表达菌株对重金属的吸附能力进行评估,包括测定最大吸附容量、绘制吸附浓度依赖曲线和时间依赖曲线,以及对菌株清除工业污水中重金属的性能进行初步探索.研究结果表明,与本底对照菌株相比,IscA蛋白在细胞膜表面表达能够使菌株对水中的Cu^2+、Ni^2+、Cd^2+、Pb^2+、As^3+、Co^2+、Hg^2+这7种重金属的吸附能力提高2~5倍不等,并且在pH为6~8范围内保持其吸附能力基本不变.此菌株能够在30 min内将各种重金属溶液中超标5倍的金属含量降低至最大允许排放浓度以下,并且对吸附的重金属具有不同程度的回收能力和菌株再生能力.此外,该菌株能够同时吸附工业污水中的多种重金属,有效降低各种重金属含量.因此,利用膜表面表达技术对大肠杆菌进行改造,成功提高了大肠杆菌对多种重金属的吸附能力,为利用微生物治理环境重金属污染提供了良好的应用前景.

关键词： IscA 大肠杆菌生物吸附重金属膜表面表达

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某医院肺结核合并症的回顾性分析

某医院肺结核合并症的回顾性分析

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中华医学会第十七届全国临床流行病学和循证医学学术会议

作者：李卫民邓岚兰杨新婷贾俊楠安军高基民首都医科大学附属北京胸科医院国家结核病临床实验室 101149 温州医科大学检验医学学院、生命科学学院浙江省模式生物技术与应用重点实验室 325035 首都医科大学附属北京胸科医院国家结核病临床实验室 101149 温州医科大学检验医学学院、生命科学学院浙江省模式生物技术与应用重点实验室 325035

目的对某结核病专科医院的肺结核合并症进行回顾性横断面分析，为提高结核病的诊断和治疗水平提供科学依据。方法收集2012～2016年间首次于该院住院的HIV阴性、年龄＞15岁的肺结核患者的病例资料，分析肺结核合并症谱、主要合并症的时... 详细信息

目的对某结核病专科医院的肺结核合并症进行回顾性横断面分析，为提高结核病的诊断和治疗水平提供科学依据。方法收集2012～2016年间首次于该院住院的HIV阴性、年龄＞15岁的肺结核患者的病例资料，分析肺结核合并症谱、主要合并症的时间、人群(年龄、性别和职业)分布特征。结果共纳入初次住院的肺结核患者9653例。

关键词：肺结核回顾性分析合并症糖尿病营养不良贫血

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四对结核分枝杆菌毒素-抗毒素系统基因功能的初步研究

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中国人兽共患病学报 2017年第5期33卷 413-417页

作者：刘静仪贾俊楠李卫民张俊杰高基民温州医科大学检验医学院生命科学学院浙江省模式生物技术与应用重点实验室温州325035 首都医科大学附属北京胸科医院国家结核病临床实验室北京101149 北京师范大学生命科学学院教育部细胞增殖及调控生物学重点实验室北京100875

目的探讨结核分枝杆菌毒素-抗毒素(toxin-antitoxin,TA)系统中的4对基因的功能,为研究结核分枝杆菌的传播机制提供基础科学数据。方法选取结核分枝杆菌TA系统VapBC家族中4对基因,包括VapC 4个毒素基因(Rv1720c、Rv2103c、Rv2494和Rv3408... 详细信息

目的探讨结核分枝杆菌毒素-抗毒素(toxin-antitoxin,TA)系统中的4对基因的功能,为研究结核分枝杆菌的传播机制提供基础科学数据。方法选取结核分枝杆菌TA系统VapBC家族中4对基因,包括VapC 4个毒素基因(Rv1720c、Rv2103c、Rv2494和Rv3408)和VapB4个抗毒素基因(Rv1721c、Rv2104c、Rv2493、Rv3407),在大肠杆菌和耻垢分枝杆菌中分别构建严谨型阿拉伯糖诱导质粒体系及乙酰胺诱导穿梭质粒体系观察VapC对细菌生长的抑制作用,及其对应的VapB解除抑制作用。结果在大肠杆菌和耻垢分枝杆菌的实验结果一致,Rv2103c具有一定抑制作用和Rv2104c具有消除抑制作用,其余3对毒素-抗毒素基因未见到明显的对细菌生长的抑制和消除抑制的作用。结论成功构建了VapBC家族在大肠杆菌及耻垢分枝杆菌中的表达体系,并发现了一对TA系统基因对细菌生长的抑制和消除抑制的作用。

关键词：结核分枝杆菌毒素-抗毒素系统 VapBC家族

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不同可变数目串联重复序列组合对中国流行结核分枝杆菌分辨力的评价研究

不同可变数目串联重复序列组合对中国流行结核分枝杆菌分辨力的评...

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中国防痨协会第32届全国学术大会暨首届中国防痨科技奖颁奖大会

作者：陈海霞刘静仪张治国原梅贾俊楠孙照刚黄海荣蔡超高基民李卫民温州医科大学检验医学院生命科学学院浙江省模式生物技术与应用重点实验室首都医科大学附属北京胸科医院国家结核病临床实验室北京市昌平区结核病防治所检验科运城市急救中心检验科北京市结核病胸部肿瘤研究所北京市结核病耐药重点实验室

目的在规范化的结核分枝杆菌数目可变串联重复序列多态性(15-VNTR)基因分型的基础上,构建涵盖我国31个省的VNTR数据库,每个省份优化出一套(VNTR)位点组合,为我国结核病预防控制提供科学依据。方法对2007—2008年全国结核病耐药性基线调... 详细信息

目的在规范化的结核分枝杆菌数目可变串联重复序列多态性(15-VNTR)基因分型的基础上,构建涵盖我国31个省的VNTR数据库,每个省份优化出一套(VNTR)位点组合,为我国结核病预防控制提供科学依据。方法对2007—2008年全国结核病耐药性基线调查的结核分枝杆菌4116株行第15位点VNTR(15-VNTR)基因分型。采用分辨率指数(Hunter-Gaston Index,HGI)分析每个位点的分辨率。据此,依据谱系流行特征,以分辨率高和稳定性强为原则,为31个省设计一套12-VNTR、10-VNTR、8-VNTR、5-VNTR组合并加以评价。结果完成了3966株结核分枝杆菌完整的15-VNTR图谱,涵盖率为96.36%(3966/4116)。通过各个位点HGI的中值比较发现,Qub-11b、MIRU 26、Mtub21、Mtub04、QuB 26、MIRU31、MIRU10属于高分辨率位点;Qub26、MIRU16、Mtub21、Qub-11b在部分地区呈现较差遗传稳定性。内蒙古,重庆,黑龙江地区的最优组合为10-VNTR,其他地区用8-VNTR作为最优组合。结论该数据库的建立,推动了结核分枝杆菌传染源全国范围的追踪和簇调查;一系列优化VNTR组合的推出助推各省通过分析成簇率实现当地疫情的监测和进行群体遗传学的研究。

关键词：分枝杆菌,结核 VNTR 基因分型 Hunter-Gaston Index 成簇率

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构建一种检测水中As^(3+)的敏感型大肠杆菌

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生物工程学报 2016年第8期32卷 1081-1092页

作者：王伍纪松军黄招竹卢彬彬吕建新温州医科大学检验医学院生命科学学院浙江省模式生物技术与应用重点实验室浙江温州325000

为构建一种敏感性强、特异性好的检测砷离子的大肠杆菌荧光报告菌株,本研究利用基因敲除技术,敲除了大肠杆菌中负责向胞外转运砷离子的ars B基因,构建对As^(3+)敏感的菌株;利用egfp基因作为报告基因,构建融合检测载体p ET28b-Pars-ars R... 详细信息

为构建一种敏感性强、特异性好的检测砷离子的大肠杆菌荧光报告菌株,本研究利用基因敲除技术,敲除了大肠杆菌中负责向胞外转运砷离子的ars B基因,构建对As^(3+)敏感的菌株;利用egfp基因作为报告基因,构建融合检测载体p ET28b-Pars-ars R-egfp。然后将检测载体p ET28b-Pars-ars R-egfp转化至ars B基因敲除菌中完成敏感型As^(3+)检测菌株的构建。接着对此微生物传感器进行了检测条件的优化,以及线性检测范围、最低检出限、特异性等性能的确定。研究结果表明,与利用野生大肠杆菌作为检测宿主相比,此敏感型砷检测菌株对检测As^(3+)的灵敏度有显著提高,最适检测As^(3+)浓度范围为0.013-42.71μmol/L,最低检出下限为5.13 nmol/L。因此,本研究利用基因敲除技术对大肠杆菌进行改造,成功地提高了砷检测微生物传感器的灵敏度,为重金属微生物传感器的优化研究工作提供了有用方案。

关键词： As3+检测大肠杆菌 arsB基因基因敲除敏感性

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不同可变数目串联重复序列组合对中国流行结核分枝杆菌分辨力的评价研究

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中华流行病学杂志 2017年第6期38卷 794-799页

作者：陈海霞蔡超刘静仪张治国原梅贾俊楠孙照刚黄海荣高基民李卫民温州医科大学检验医学院生命科学学院浙江省模式生物技术与应用重点实验室 325035 北京市结核病胸部肿瘤研究所北京市结核病耐药重点实验室 101149 首都医科大学附属北京胸科医院国家结核病临床实验室北京101149 北京市昌平区结核病防治所检验科 102200 山西省运城市急救中心检验科 044000 首都医科大学公共卫生学院临床流行病学北京市重点实验室北京100069

目的在规范化的结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis，MTB）可变数目串联重复序列（variable number of tandem repeats，VNTR）基因分型的基础上，构建我国31个省（自治区、直辖市）VNTR数据库，每个省优化一套VNTR位点组合，... 详细信息

目的在规范化的结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis，MTB）可变数目串联重复序列（variable number of tandem repeats，VNTR）基因分型的基础上，构建我国31个省（自治区、直辖市）VNTR数据库，每个省优化一套VNTR位点组合，为我国结核病预防控制策略的制定提供科学依据。方法对2007－2008年全国结核病耐药性基线调查的4 116株MTB15位点VNTR（15-VNTR）基因分型。汉高指数（Hunter-Gaston Index，HGI）分析每个位点的分辨率。依据谱系流行特征，以分辨率高和稳定性强为原则，为各省设计一套VNTR优化组合（12-VNTR、10-VNTR、8-VNTR和5-VNTR），采用HGI和成簇率进行评价。结果完成了涵盖率为96.36%（3 966/4 116）MTB完整15-VNTR图谱。发现QUB11b、MIRU26等7个高分辨率位点；QUB26、MIRU16、Mtub21、QUB11b在部分地区遗传稳定性差。内蒙古自治区、重庆市、黑龙江省的最优组合为10-VNTR，其他各省的最佳组合为8-VNTR。结论 VNTR数据库的建立将推动全国范围MTB传染源的追踪；各省优化VNTR组合的推出有助于当地结核病疫情的监测和群体遗传学的研究。

关键词：结核分枝杆菌可变数目串联重复序列基因分型分辨率成簇率

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结核分枝杆菌单核苷酸多态性特征的分析

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疾病监测 2017年第4期32卷 332-336页

作者：陈海霞贾俊楠李卫民高基民温州医科大学检验医学院生命科学学院浙江省模式生物技术与应用重点实验室浙江温州325035 首都医科大学附属北京胸科医院国家结核病临床实验室北京101149 北京市结核病胸部肿瘤研究所北京101149

目的通过全基因组序列分析结核分枝杆菌(MTB)单核苷酸多态性(SNP)特征,为结核病的预防、控制及治疗提供参考依据。方法从美国国立生物技术信息中心(NCBI)和欧洲核酸数据库(ENA)中共下载来自全球2 372株MTB全基因组序列,原始数据按照质... 详细信息

目的通过全基因组序列分析结核分枝杆菌(MTB)单核苷酸多态性(SNP)特征,为结核病的预防、控制及治疗提供参考依据。方法从美国国立生物技术信息中心(NCBI)和欧洲核酸数据库(ENA)中共下载来自全球2 372株MTB全基因组序列,原始数据按照质控要求去除冗余,BWA v 0.7.12软件将菌株的测序文件回帖到结核杆菌参考基因组H37Rv上;SAMtools v 1.3、Picard v 1.112、Varscan筛选SNPs位点以及去除非特异性SNP位点;采用最大似然法软件RAxML v 8.2.8构建系统进化树;Genepop v 4.5.1软件计算每个SNP位点的遗传分化系数(Fst);SnpEff v 4.3c软件注释。结果初步筛选得到107 654个SNP位点,构建的系统进化树将2 347株MTB明确地划分为7个谱系以及69个亚谱系。优化后得到285个谱系定义的SNP位点,将2 347株MTB准确划分为7个分支及67个亚谱系。结论本研究通过基因组序列分析发现一批基于系统进化的SNP位点,而且基于系统进化285个SNP位点不仅可以用于系统发育及进化相关分析,同时也能够作为基因分型技术靶标,用于结核病分子流行病学。

关键词：结核分枝杆菌单核苷酸多态性基因分型系统进化

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四对结核分枝杆菌毒素-抗毒素系统基因功能的初步研究

四对结核分枝杆菌毒素-抗毒素系统基因功能的初步研究

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中华医学会结核病学分会2017年全国结核病学术大会

作者：李卫民刘静仪贾俊楠张俊杰高基民首都医科大学附属北京胸科医院国家结核病临床实验室温州医科大学检验医学院生命科学学院浙江省模式生物技术与应用重点实验室北京师范大学生命科学学院教育部细胞增殖及调控生物学重点实验室

目的探讨结核分枝杆菌毒素-抗毒素(toxin-antitoxin,TA)系统中4对基因的功能,为研究结核分枝杆菌的传播机制提供基础科学数据。方法选取结核分枝杆菌TA系统VapBC家族中4对基因,包括VapC4个毒素基因(Rv1720c、Rv2103c、Rv2494和Rv3408)和... 详细信息

目的探讨结核分枝杆菌毒素-抗毒素(toxin-antitoxin,TA)系统中4对基因的功能,为研究结核分枝杆菌的传播机制提供基础科学数据。方法选取结核分枝杆菌TA系统VapBC家族中4对基因,包括VapC4个毒素基因(Rv1720c、Rv2103c、Rv2494和Rv3408)和VapB4个抗毒素基因(Rv1721c、Rv2104c、Rv2493、Rv3407),在大肠杆菌和耻垢分枝杆菌中分别构建严谨型阿拉伯糖诱导质粒体系及乙酰胺诱导穿梭质粒体系观察VapC对细菌生长的抑制作用,及其对应的VapB解除抑制作用。结果在大肠杆菌和耻垢分枝杆菌的实验结果一致,Rv2103c具有一定抑制作用和Rv2104c具有消除抑制作用,其余3对毒素-抗毒素基因未见到明显的对细菌生长的抑制和消除抑制的作用。结论成功构建了VapBC家族在大肠杆菌及耻垢分枝杆菌中的表达体系,并发现了一对TA系统基因对细菌生长的抑制和消除抑制的作用。

关键词：结核分枝杆菌毒素-抗毒素系统 VapBC家族

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表皮生长因子受体对苯并芘诱导的人支气管上皮细胞SIRT1活化的影响

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吉林大学学报（医学版） 2016年第4期42卷 731-736,I0003,I0004页

作者：张敏崔运芹宋焕芳吕建祎徐笑红高基民浙江省肿瘤医院医学检验科浙江杭州310022 温州医科大学检验医学院/生命科学学院浙江省模式生物技术与应用重点实验室浙江温州325035

目的:探讨表皮生长因子受体(EGFR)在调控苯并芘(B[a]P)诱导人支气管上皮BEAS-2B细胞沉默信息调节因子1(SIRT1)活化中的作用,阐明EGFR/SIRT1信号转导通路与肺癌发生发展的关系。方法:MOTIF SearchTM分析软件预测SIRT1启动子序列上转录DN... 详细信息

目的:探讨表皮生长因子受体(EGFR)在调控苯并芘(B[a]P)诱导人支气管上皮BEAS-2B细胞沉默信息调节因子1(SIRT1)活化中的作用,阐明EGFR/SIRT1信号转导通路与肺癌发生发展的关系。方法:MOTIF SearchTM分析软件预测SIRT1启动子序列上转录DNA结合位点。培养BEAS-2B细胞,设不加苯并芘的细胞为对照组,苯并芘组细胞暴露于苯并茈(8μmol·L-1)不同时间(6、12、24和48h),RT-PCR和蛋白免疫印迹法检测各组细胞中EGFR mRNA和蛋白表达水平。将SIRT1启动子荧光素酶报告载体转染入BEAS-2B细胞中,采用人表皮细胞生长因子(hEGF)和酪氨酸蛋白激酶抑制剂Genistein处理细胞24h,倒置显微镜观察各组BEAS-2B细胞形态表现,荧光素酶报告基因技术检测SIRT1荧光素酶活性。收集相关肺组织临床标本,免疫组织化学法检测肺组织中EGFR蛋白表达水平。结果:SIRT1启动子序列上含有表皮细胞生长因子(EGF)、铁氧还蛋白(2Fe-2S)和血管性血友病因子(vWF)3个转录因子的DNA结合位点。与对照组比较,苯并芘组细胞中EGFR mRNA表达水平升高(P<0.05),且在12h达到峰值,同时EGFR蛋白表达水平均不同程度升高(P<0.05)。与对照组比较,hEGF组和苯并芘组BEAS-2B中细胞SIRT1荧光素酶活性明显增加(P<0.05),hEGF联合苯并芘组BEAS-2B细胞中SIRT1荧光素酶活性增加更为明显(P<0.001);Genistein大于30μmol·L-1时,细胞排列逐渐稀疏,形态改变明显;Genistein(30μmol·L-1)能够抑制苯并芘诱导的SIRT1荧光素酶活性的增加,与苯并芘组比较差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组织化学法,肺癌组织中EGFR蛋白表达水平明显高于正常肺组织(P<0.001)。结论:苯并芘暴露下,EGFR能够促进SIRT1的表达,从而诱导肺慢性炎症反应,EGFR/SIRT1信号转导通路在肺癌的发生发展过程中发挥一定的作用。

关键词：苯并芘表皮生长因子受体沉默信息调节因子1 信号转导

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分析结核分枝杆菌单核苷酸多态性特征

分析结核分枝杆菌单核苷酸多态性特征

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中华医学会结核病学分会2017年全国结核病学术大会

作者：李卫民陈海霞贾俊楠高基民首都医科大学附属北京胸科医院国家结核病临床实验室北京101149 北京市结核病胸部肿瘤研究所北京101149 温州医科大学检验医学院生命科学学院浙江省模式生物技术与应用重点实验室浙江温州 325035

目的：通过全基因组序列分析结核分枝杆菌(***)单核苷酸多态性(SNP)特征,为结核病的预防、控制及治疗提供科学依据.方法：从National Center for Biotechnology Information(NCBI)和European Nucleotide Archive(ENA)数据库中一共下载... 详细信息

目的：通过全基因组序列分析结核分枝杆菌(***)单核苷酸多态性(SNP)特征,为结核病的预防、控制及治疗提供科学依据.方法：从National Center for Biotechnology Information(NCBI)和European Nucleotide Archive(ENA)数据库中一共下载来自全球2372株结核分枝杆菌全基因组序列,原始数据(Raw data)按照质控要求去除冗余,BWA v 0.7.12软件将菌株的测序文件回帖到结核杆菌参考基因组H37Rv上;SAMtools v 1.3、Picard v 1.112、Varscan筛选SNPs位点以及去除非特异性SNP位点;采用最大似然法软件RAxMLv 8.2.8构建系统进化树;软件Genepop v 4.5.1计算每个SNP位点的遗传分化系数(Fst);软件SnpEff v 4.3c注释.

关键词：结核分枝杆菌 SNP 基因分型系统进化

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