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生物工程学报 2015年第11期31卷 1601-1611页

作者：吕攀攀肖芳兰严锡娟卢彬彬林炜炜许清清张珍珍王伍吕建新温州医科大学检验医学院生命科学学院浙江省模式生物技术与应用重点实验室浙江温州325000

为构建一种能够特异性检测镉离子的大肠杆菌荧光报告菌株,本研究通过对检测元件模式和荧光蛋白的筛选后,以蓝色荧光蛋白mTagBFP2基因作为报告基因,使用双启动子模式,构建融合报告载体Pmer::merR-m-Pmer::mTagBFP2-pMD19-T。然后将报告... 详细信息

为构建一种能够特异性检测镉离子的大肠杆菌荧光报告菌株,本研究通过对检测元件模式和荧光蛋白的筛选后,以蓝色荧光蛋白mTagBFP2基因作为报告基因,使用双启动子模式,构建融合报告载体Pmer::merR-m-Pmer::mTagBFP2-pMD19-T。然后将报告载体转化至*** MC4100菌中,构建特异性检测镉离子的微生物传感器,并对此微生物传感器进行了最佳培养基、起始诱导浓度和时间、最适检测范围等相关参数的确定,以及对特异性进行了测定。研究表明,此微生物传感器检测镉离子背景信号低,选定起始菌液浓度为OD600=0.1,于IHMM培养基中诱导2 h为最佳检测条件,检测镉离子线性浓度范围为0.1-75μmol/L,并且只对Cd2+响应,特异性较高。因此,本研究成功构建了能够特异性检测镉离子的生物传感器,为重金属微生物传感器的优化研究工作提供了有用方案。

关键词：微生物传感器镉离子检测双启动子蓝色荧光蛋白

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碱性成纤维细胞生长因子促进神经损伤修复的研究进展

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中国生物工程杂志 2015年第6期35卷 75-79页

作者：张超项丽娜陈德培吕鑫鑫赵宜桐王璐瑶肖健张宏宇温州医科大学药学院温州325035 浙江省生物技术制药工程重点实验室温州325035

碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,b FGF)是成纤维细胞生长因子家族(FGFs)的成员之一。它是哺乳动物和人体中一种非常微量的活性物质,因其具有广泛的生理功能和重要的临床应用价值受到了国内外学者的高度重视。b ... 详细信息

碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,b FGF)是成纤维细胞生长因子家族(FGFs)的成员之一。它是哺乳动物和人体中一种非常微量的活性物质,因其具有广泛的生理功能和重要的临床应用价值受到了国内外学者的高度重视。b FGF生物活性的多效性以及神经营养的广谱性,为其从基础走向临床提供了保证。而b FGF如何发挥神经损伤修复作用的功能和机制,仍有待进一步的发现及研究,这也是目前国内外探索和开发b FGF新临床药物的研究热点之一。针对b FGF的生物学特点及其在神经损伤修复中的功能,特别是在中枢神经系统和外周神经系统疾病中的研究进展进行了综述。

关键词：碱性成纤维细胞生长因子神经损伤修复信号通路

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四川盆地结核分枝杆菌群体遗传学特征的研究

四川盆地结核分枝杆菌群体遗传学特征的研究

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中国防痨协会2016年全国学术大会

作者：李卫民李颖付育红原梅董玲玲黄海荣高基民 101149 首都医科大学附属北京胸科医院北京市结核病胸部肿瘤研究所国家结核病临床实验室温州医科大学检验医学院生命科学学院浙江省模式生物技术与应用重点实验室

目的:探讨在中国四川盆地流行的结核分枝杆菌群体遗传学特征. 方法:对收集自四川盆地(重庆和四川地区)的413株Mtb行长序列多态性(LSP)谱系鉴定;采用x2检验分析不同谱系Mtb在人群中的分布差异.对上述菌株行15位点数目可变串联重复序列... 详细信息

目的:探讨在中国四川盆地流行的结核分枝杆菌群体遗传学特征. 方法:对收集自四川盆地(重庆和四川地区)的413株Mtb行长序列多态性(LSP)谱系鉴定;采用x2检验分析不同谱系Mtb在人群中的分布差异.对上述菌株行15位点数目可变串联重复序列(VNTR)基因分型,评价各位点的分辨力.构建N-J树分析其系统进化;构建最小跨度树以模拟群体菌株的遗传结构;采用分子方差分析该地区不同谱系菌株的遗传分化;采用贝叶斯模型计算最近共祖年代. 结果:通过LSP可将413株Mtb菌株分为两大谱系,其中北京谱系占56.2％(232/413);欧美谱系占43.8％(181/413).两谱系Mtb在人群中的分布(性别、年龄、民族及耐药性)差异无统计学意义(P＞0.05).北京谱系Mtb的N-J树呈放射状分布,最小跨度树中有72.4％(168/232)的菌株被划分到同一"克隆复合群".欧美谱系Mtb的N-J树呈枝状分布,最小跨度树中呈现出多个"克隆复合群".北京谱系Mtb在重庆和四川两地区间有显著的遗传分化(FST=0.01891,P＜0.05),而欧美谱系Mtb遗传分化不显著(FST=0.00519,P＞0.05).欧美谱系Mtb中最大克隆复合群(共71株)的最近共祖年代为723年(95％CI:517～946年). 结论:北京谱系和欧美谱系Mtb在四川盆地以"互相对抗"形式流行;两谱系Mtb遗传分化存在差异;欧美谱系Mtb的侵入可能与一次历史事件(约720年前的一次战争)有关.

关键词：结核分枝杆菌长序列多态性群体遗传学地区差异

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四川盆地结核分枝杆菌群体遗传学特征的研究

四川盆地结核分枝杆菌群体遗传学特征的研究

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首届京津冀临床流行病学和循证医学协同发展促进会暨2016北京医学会临床流行病学和循证医学分会第二届学术年会

作者：李卫民李颖付育红原梅董玲玲黄海荣高基民首都医科大学附属北京胸科医院北京市结核病胸部肿瘤研究所国家结核病临床实验室温州医科大学检验医学院生命科学学院浙江省模式生物技术与应用重点实验室

探讨在中国四川盆地流行的结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)群体遗传学特征.结果表明北京谱系和欧美谱系MTB在四川盆地以“互相对抗”形式流行;两谱系MTB遗传分化存在差异;欧美谱系MTB的侵入可能与一次历史事件(约720年前... 详细信息

探讨在中国四川盆地流行的结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)群体遗传学特征.结果表明北京谱系和欧美谱系MTB在四川盆地以“互相对抗”形式流行;两谱系MTB遗传分化存在差异;欧美谱系MTB的侵入可能与一次历史事件(约720年前的一次战争)有关。

关键词：结核分枝杆菌群体遗传学北京谱系欧美谱系

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四川盆地结核分枝杆菌群体遗传学特征研究

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中华流行病学杂志 2015年第4期36卷 374-378页

作者：李颖付育红原梅董玲玲黄海荣李卫民高基民温州医科大学检验医学院生命科学学院浙江省模式生物技术与应用重点实验室 325035 首都医科大学附属北京胸科医院北京市结核病胸部肿瘤研究所国家结核病临床实验室

目的探讨四川盆地（重庆、四川地区）流行的结核分枝杆菌（MTB）群体遗传学特征。方法对413株源自四川盆地的MTB进行长序列多态性（LSP）谱系鉴定，采用3（2检验分析不同谱系MTB在人群中的分布差异。对菌株进行15位点数目可变串联重复... 详细信息

目的探讨四川盆地（重庆、四川地区）流行的结核分枝杆菌（MTB）群体遗传学特征。方法对413株源自四川盆地的MTB进行长序列多态性（LSP）谱系鉴定，采用3（2检验分析不同谱系MTB在人群中的分布差异。对菌株进行15位点数目可变串联重复序列基因分型，评价各位点的分辨力。构建N—J树分析其系统进化；构建最小跨度树以模拟群体菌株的遗传结构；采用分子方差分析不同谱系MTB的群体问遗传分化；采用贝叶斯模型计算菌株最近共祖年代。结果通过LSP可将413株MTB分为两大谱系，其中北京谱系占56．2％（232／413），欧美谱系占43．8％（181／413）。两谱系MTB在人群中的分布（性别、年龄、民族以及菌株耐药性）差异无统计学意义（P〉0．05）。北京谱系MTB的N—J树呈放射状分布，最小跨度树中有72．4％（168／232）的菌株被划分到同一“克隆复合群”；欧美谱系MTB的N—J树呈枝状分布，最小跨度树中呈现出多个“克隆复合群”。北京谱系MTB在该地区有显著的群体间遗传分化（F ST=0．01891，P〈0．05），而欧美谱系MTB群体间遗传分化不显著（F ST=0．00519，P〉0．05）。欧美谱系MTB中最大菌株复合群的最近共祖年代为723（95％CI：517-946）年。结论北京谱系和欧美谱系MTB在四川盆地以“互相对抗”形式流行；两谱系MTB的群体间遗传分化存在差异；欧美谱系MTB的侵入可能与一次历史事件（约720年前的战争）有关。

关键词：结核分枝杆菌长序列多态性欧美谱系群体遗传学

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海、淡水养殖日本鳗鲡肌肉和鱼皮营养分析比较

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水生生物学报 2015年第4期39卷 730-739页

作者：胡园周朝生胡利华潘齐存蒋倩倩吴越王瑶华郑伊诺戴勇浙江省海洋水产养殖研究所温州325005 浙江省近岸水域生物资源开发与保护重点实验室温州325005 中国海洋大学海洋生命学院青岛266003 宁波大学教育部应用海洋生物技术重点实验室宁波315211 温州医科大学生命科学学院温州325035

为了比较海、淡水养殖日本鳗鲡(Anguilla japonica)肌肉和鱼皮营养成分差异,采用生物化学方法对海水与淡水养殖日本鳗鲡肌肉和鱼皮的一般营养成分、氨基酸含量、脂肪酸含量和矿物质含量进行测定与分析。结果显示,海、淡水养殖日本鳗鲡... 详细信息

为了比较海、淡水养殖日本鳗鲡(Anguilla japonica)肌肉和鱼皮营养成分差异,采用生物化学方法对海水与淡水养殖日本鳗鲡肌肉和鱼皮的一般营养成分、氨基酸含量、脂肪酸含量和矿物质含量进行测定与分析。结果显示,海、淡水养殖日本鳗鲡鱼皮的水分、粗蛋白和灰分含量均显著性低于肌肉(P<0.05),但鱼皮粗脂肪含量显著高于肌肉(P<0.05)。淡水养殖日本鳗鲡肌肉的粗蛋白含量显著性高于海水养殖日本鳗鲡(P<0.05)。海、淡水养殖日本鳗鲡肌肉总氨基酸含量分别为50.22%和54.10%,鱼皮总氨基酸含量分别为42.56%和45.80%。海、淡水养殖日本鳗鲡鱼皮呈鲜味氨基酸占氨基酸总量显著性高于肌肉(P<0.05)。海、淡水养殖日本鳗鲡肌肉和鱼皮均以不饱和脂肪酸为主(65.96%—67.51%),并以单不饱和脂肪酸C18:1n9含量为主(38.64%—44.79%)。海水养殖日本鳗鲡肌肉矿物质元素(Fe、Ca、Cu、Na)和鱼皮矿物质元素(Fe、Mn、Na)的平均含量均显著高于淡水养殖日本鳗鲡(P<0.05),但Zn含量显著低于淡水养殖日本鳗鲡(P<0.05)。研究表明,不同养殖环境的日本鳗鲡肌肉和鱼皮营养成分丰富,淡水养殖日本鳗鲡肌肉和鱼皮的氨基酸含量和脂肪酸组成方面稍优于海水养殖日本鳗鲡,而海水养殖环境日本鳗鲡肌肉和鱼皮的矿物质元素含量得到较高的富集。

关键词：日本鳗鲡海水养殖淡水养殖肌肉鱼皮营养成分

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重组人成纤维细胞生长因子8b的表达及其对帕金森细胞模型保护作用研究

重组人成纤维细胞生长因子8b的表达及其对帕金森细胞模型保护作用...

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中国生物工程学会第六次全国会员代表大会暨第九届学术年会

作者：陈娜子姜潮李校堃温州医科大学药学院浙江省生物技术与制药工程重点实验室

随着生命科学的迅猛发展,在生物工程技术领域中,细胞工程已愈来愈受到重视。昆虫细胞(IC)特别是鳞翅目昆虫细胞是替代哺乳动物细胞作为生物制造工厂极具吸引力的选择。昆虫细胞生长和重组杆状病毒载体侵染细胞时期的有效整合及杆状病毒... 详细信息

随着生命科学的迅猛发展,在生物工程技术领域中,细胞工程已愈来愈受到重视。昆虫细胞(IC)特别是鳞翅目昆虫细胞是替代哺乳动物细胞作为生物制造工厂极具吸引力的选择。昆虫细胞生长和重组杆状病毒载体侵染细胞时期的有效整合及杆状病毒表达系统(BEVS)的快速发展使其成为大规模生产各类人畜疫苗、基因治疗病毒载体、重组蛋白、多肽类药物和单克隆抗体等生物制品极为重要的手段。重组杆状病毒载体具有重组蛋白生产能力强、生产周期短,安全可靠和易扩大等优点,且昆虫细胞生产的重组蛋白具有天然多聚体蛋白功能,越来越多的公司青睐于用IC-BEVS生产开发生物制品。目前很多核多角体病病毒(NVP)表达系生产的生物制品用于临床试验和投放市场,广泛应用于医药学、农业及生物学的各个领域。成纤维细胞生长因子8(fibroblast growth factor 8,FGF-8)属于成纤维细胞生长因子家族成员,与已发现家族成员具有30%～40%同源性。FGF8最早于雄激素依赖的小鼠乳腺癌细胞株SC-3提取获得。人FGF8具有a、b、e、f四种亚型,FGF8b为其优势表达型,且其与FGF受体的结合能力最强。广泛的文献报道FGF8与胚胎发育,细胞增殖、分化,肿瘤生长,组织损伤修复以及血管生成密切相关。研究表明FGF8是一种广谱神经营养因子,能维持神经细胞存活和促进神经干细胞定向分化成多巴胺(Dopamine,DA)神经元。基于以上特性,FGF8有望能够直接用于治疗退行性神经性疾病,因此受到学者的广泛关注。FGF8在实验研究的需求将会大大增加。本研究通过昆虫杆状病毒载体表达系统表达重组人成纤维细胞生长因子-8b(FGF-8b),纯化后研究其对1-甲基4-苯基吡啶(MPP+)诱导建立的帕金森(Parkinson disease,PD)病细胞模型的保护作用及其抗凋亡机制。目的基因FGF8b按昆虫偏好密码子优化合成后和转移载体pFastbac双酶切连接,连接产物pFastbac-FGF8b鉴定后进一步转化至DH10Bac感受态细胞,目的基因同源转座至Bacmid中,获得穿梭载体Bacmid-FGF8b。重组阳性质粒通过脂质体转染Sf9昆虫细胞。收获的蛋白用SDS-PAGE,Western blot进行鉴定。细胞沉淀超声破碎后通过肝素亲和层析柱纯化获得目的蛋白FGF8b。NIH 3T3细胞检测蛋白促增殖作用。为了研究FGF8b的神经保护作用,利用MPP+诱导PC-12细胞建立帕金森细胞模型检测其促增殖和抗凋亡作用,并进一步通过实时定量PCR和Western blot初步确定其抗凋亡机制。结果显示rhFGF8b成功在昆虫细胞中表达,肝素纯化后蛋白纯度>90%,蛋白产量为2.78mg/L。细胞活性检测证实纯化的重组蛋白能显著促进NIH3T3细胞生长,在0.5 ng/ml～64ng/ml之间呈剂量依赖性。同时FGF8b对帕金森细胞模型有保护作用,并且RT-PCR和Western blot结果显示FGF8b能降低MPP+诱导PC-12细胞建立帕金森细胞模型的caspase3,GRP78和caspase12 mRNA和蛋白水平的表达,表明FGF8b通过介导内质网应激(ER stress)途径对MPP+诱导PC-12细胞建立的帕金森细胞模型起保护作用。这些结果表明FGF8b可能有望用于治疗内质网应激相关的神经退行性疾病。

关键词：人成纤维生长因子-8b 昆虫杆状病毒表达系统(IC-BEVS) 帕金森神经保护作用内质网应激

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环境致癌物诱导慢性炎症致肺癌发生发展的研究进展

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生物化学与生物物理进展 2014年第1期41卷 41-51页

作者：吕建祎张敏金红蕾竹俊兰危金龙代佳黄海山高基民温州医科大学检验医学院/生命科学学院浙江省模式生物技术与应用重点实验室温州325035

近年来,由于工业发展负面影响造成的环境污染及吸烟等不良嗜好导致吸入人体肺部的致癌物急剧增加,致使肺癌的发病率及死亡率逐年升高,已跃居各癌症之首.研究表明,环境致癌物诱导肺部慢性炎症与肺癌的发生发展之间存在着紧密联系,环境致... 详细信息

近年来,由于工业发展负面影响造成的环境污染及吸烟等不良嗜好导致吸入人体肺部的致癌物急剧增加,致使肺癌的发病率及死亡率逐年升高,已跃居各癌症之首.研究表明,环境致癌物诱导肺部慢性炎症与肺癌的发生发展之间存在着紧密联系,环境致癌物如砷、镍及苯并芘等暴露可激活NFAT、NF-κB、AP-1等转录因子,调控炎症因子如TNFα及COX-2等的表达,且这些炎性因子的释放又可正反馈激活转录因子,促进更多的炎性因子产生,进而形成炎性因子产生回路,维持肺部炎性微环境,从而促进肺癌的发生发展.本文就环境致癌物诱导肺部炎症导致肺癌发生发展的分子机制及其相关信号通路进行了综述.

关键词：环境致癌物炎症恶性转化肺癌

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sTNFRII-gAD-Fc融合蛋白在CHO细胞中的高效表达

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免疫学研究 2015年第1期3卷 1-11页

作者：王彩虹柳英蔡秦真杨红枚马丽莎高基民温州医科大学检验医学院、生命科学学院浙江省模式生物技术与应用重点实验室浙江温州烟台市龙口矿务局中心医院ICU 山东烟台

构建了人肿瘤坏死因子受体II胞外区、人脂联素球部与人IgG1 Fc的融合基因sTNFRII-gAD-Fc的真核表达载体,在CHO-S细胞中快速高效表达,探索了无血清悬浮流加培养工艺。应用重组PCR将人IgG1 Fc基因片段与sTNFRII-gAD基因片段融合,构建pMH3-... 详细信息

构建了人肿瘤坏死因子受体II胞外区、人脂联素球部与人IgG1 Fc的融合基因sTNFRII-gAD-Fc的真核表达载体,在CHO-S细胞中快速高效表达,探索了无血清悬浮流加培养工艺。应用重组PCR将人IgG1 Fc基因片段与sTNFRII-gAD基因片段融合,构建pMH3-sTNFRII-gAD-Fc表达载体,电转染至CHO-S细胞,挑选G418抗性的高表达单克隆,斑点杂交半定量分析和Western blot分析sTNFRII-gAD-Fc的表达,Protein A-Agarose纯化,以及拮抗TNFα的生物活性测定。最后在摇瓶、转瓶及生物反应器中进行了逐级放大的无血清悬浮批次及流加培养,即:2.0 ×106 cells/mL的接种密度,当达到4.0 ×106 cells/mL以上时开始流加培养并以每日葡萄糖的残余量2 g/L左右作为流加体积的控制参数。成功构建pMH3- sTNFRII-gAD-Fc表达载体,检测到sTNFRII-gAD-Fc在CHO-S细胞培养上清中以二聚体和多聚体形式表达,获得了高表达(75 μg/mL)单克隆细胞株,且该蛋白具有显著抑制TNFα杀伤L929细胞的活性。在摇瓶中无血清批次培养和转瓶及生物反应器中流加培养时产量分别为10.0 mg/L、18.3 mg/L和20.5 mg/L。利用CHO-S细胞系统成功实现了sTNFRII-gAD-Fc 融合蛋白的快速高效表达,为建立一套高密度、高效表达该融合蛋白的悬浮流加培养中试工艺打下了良好基础。

关键词：可溶性肿瘤坏死因子受体II-脂联素球部人免疫球蛋白G1 Fc TNF拮抗剂 “富含GC”表达体系悬浮流加培养

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四川盆地结核分枝杆菌群体遗传学特征研究

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结核病与胸部肿瘤 2015年第3期 198-202页

目的探讨四川盆地（重庆、四川地区）流行的结核分枝杆菌（MTB）群体遗传学特征。方法对413株源自四川盆地的MTB进行长序列多态性（LSP）谱系鉴定，采用x^2检验分析不同谱系MTB在人群中的分布差异。对菌株进行15位点数目可变串联重复序... 详细信息

目的探讨四川盆地（重庆、四川地区）流行的结核分枝杆菌（MTB）群体遗传学特征。方法对413株源自四川盆地的MTB进行长序列多态性（LSP）谱系鉴定，采用x^2检验分析不同谱系MTB在人群中的分布差异。对菌株进行15位点数目可变串联重复序列基因分型，评价各位点的分辨力。构建N—J树分析其系统进化；构建最小跨度树以模拟群体菌株的遗传结构；采用分子方差分析不同谱系MTB的群体间遗传分化；采用贝叶斯模型计算菌株最近共祖年代。结果通过LSP可将413株MTB分为两大谱系，其中北京谱系占56．2％（232／413），欧美谱系占43．8％（181／413）。两谱系MTB在人群中的分布（性别、年龄、民族以及菌株耐药性）差异无统计学意义（P〉0．05）。北京谱系MTB的N-J树呈放射状分布，最小跨度树中有72．4％（168／232）的菌株被划分到同-“克隆复合群”；欧美谱系MTB的N—J树呈枝状分布，最小跨度树中呈现出多个“克隆复合群”。北京谱系MTB在该地区有显著的群体间遗传分化（Fst=0．01891，P〈0．05），而欧美谱系MTB群体间遗传分化不显著（Fst=0．00519，P〉0．05）。欧美谱系MTB中最大菌株复合群的最近共祖年代为723（95％CI：517～946）年。结论北京谱系和欧美谱系MTB在四川盆地以“互相对抗”形式流行；两谱系MTB的群体间遗传分化存在差异；欧美谱系MTB的侵入可能与一次历史事件（约720年前的战争）有关。

关键词：结核分枝杆菌长序列多态性欧美谱系群体遗传学

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