检索结果-内蒙古大学图书馆

微生物学通报 2014年第1期41卷 96-103页

作者：玄松花赵俊伟孙战强周业成张朝宝余晓丽郭晓奎刘文第张舒林河南中医学院医学免疫学重点实验室河南郑州450008 上海交通大学基础医学院病原生物学教研室上海200025 四川大学生命科学学院四川成都610065 武汉工业学院生物与制药工程学院湖北武汉430023

【目的】建立分离、纯化分枝杆菌脂聚糖的方法,初步比较分析不同菌株来源的脂阿拉伯甘露聚糖(Lipoarabinomannan,LAM)和脂甘露聚糖(Lipomannan,LM)的结构差异及研究脂聚糖刺激对巨噬细胞环氧合酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2)蛋白表达的... 详细信息

【目的】建立分离、纯化分枝杆菌脂聚糖的方法,初步比较分析不同菌株来源的脂阿拉伯甘露聚糖(Lipoarabinomannan,LAM)和脂甘露聚糖(Lipomannan,LM)的结构差异及研究脂聚糖刺激对巨噬细胞环氧合酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2)蛋白表达的影响。【方法】应用Triton X-114液相法提取脂聚糖,电洗脱法分离纯化,基质辅助激光解析电离串联飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF-MS)进行分子量鉴定;基于特异性识别非还原性末端α-D-甘露糖基的刀豆球蛋白(Concanavalin A,Con A)分析新诺分枝杆菌JDM601、结核分枝杆菌H37Rv标准株和耻垢分枝杆菌mc2155脂聚糖的结构差异;进一步用Western blot检测脂聚糖刺激的RAW 264.7巨噬细胞COX-2蛋白的表达。【结果】通过电洗脱法成功纯化出3种菌株脂聚糖;MALDI-TOF/TOF-MS鉴定发现,分子量从小到大依次为新诺分枝杆菌JDM601、耻垢分枝杆菌mc2155和结核分枝杆菌H37Rv来源的脂聚糖。Western blot显示,Con A能与结核分枝杆菌H37Rv标准株来源的LAM相互作用,而不能与新诺分枝杆菌JDM601和耻垢分枝杆菌来源的LAM相互作用;并且发现Con A与新诺分枝杆菌JDM601来源的LM有很强的反应,然而与其余两种来源的LM反应很弱。3种菌株来源的脂聚糖均能刺激RAW 264.7巨噬细胞COX-2蛋白的表达。【结论】首次成功对来源于中国临床分枝杆菌分离株的脂聚糖进行了分离纯化,初步探讨了不同菌株来源分枝杆菌脂聚糖的结构差异,并表明LAM和LM均能刺激巨噬细胞诱导COX-2蛋白的表达,为进一步研究其对宿主的毒力和免疫机制奠定了基础。

关键词：分枝杆菌脂阿拉伯甘露聚糖脂甘露聚糖基质辅助激光解析电离串联飞行时间质谱

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Ang Ⅱ促进大鼠血管平滑肌细胞增殖和迁移

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基础医学与临床 2012年第1期32卷 89-91页

作者：刘玉王海军温进坤李爱英李菁菁韩梅河北医科大学基础医学研究所生物化学与分子生物学研究室河北省医学生物技术重点实验室河北石家庄050017 河北医科大学中医学院生物化学与分子生物学教研室河北石家庄050091 河北大学附属医院普通外科河北保定071000 河北医科大学基础医学院细胞生物学教研室河北石家庄050017

血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）的增殖、迁移和细胞外基质的合成是高血压、动脉粥样硬化和血管成形术后再狭窄等血管重塑性疾病发生、发展的重要细胞病理学基础[1]。血管紧张素Ⅱ（angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ）的促... 详细信息

血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）的增殖、迁移和细胞外基质的合成是高血压、动脉粥样硬化和血管成形术后再狭窄等血管重塑性疾病发生、发展的重要细胞病理学基础[1]。血管紧张素Ⅱ（angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ）的促生长作用参与了高血压、动脉粥样硬化、血管再狭窄等血管增殖性疾病的发生和发展。

关键词：血管平滑肌细胞增殖迁移血管成形术后再狭窄动脉粥样硬化血管增殖性疾病大鼠血管紧张素Ⅱ cells

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KLF5与c-Jun相互作用促进Ang Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖

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中国生物化学与分子生物学报 2011年第7期27卷 632-637页

作者：刘玉王海军李爱英韩梅河北医科大学基础医学研究所生物化学与分子生物学研究室石家庄050017 河北医科大学中医学院生物化学与分子生物学教研室河北省医学生物技术重点实验室石家庄050091 河北大学附属医院普通外科保定071000

KLF5(Krüppel-like factor 5)是KLF家族转录因子中的成员,参与多种与增殖相关基因的转录调节.通过体外培养大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC),以AngⅡ为增殖诱导因素,研究KLF5介导VSMC增殖的机制.研究发现,An... 详细信息

KLF5(Krüppel-like factor 5)是KLF家族转录因子中的成员,参与多种与增殖相关基因的转录调节.通过体外培养大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC),以AngⅡ为增殖诱导因素,研究KLF5介导VSMC增殖的机制.研究发现,AngⅡ可剂量依赖性诱导VSMC增殖,并伴有KLF5和c-Jun蛋白表达水平的升高.为了证实KLF5参与AngⅡ诱导的细胞增殖过程,用siRNA敲低内源性KLF5的表达后,发现细胞增殖活力受到明显的抑制;交互免疫沉淀和GST pulldown分析结果显示,KLF5与c-Jun在体内和体外存在物理学上的相互作用,并且AngⅡ可诱导二者之间的相互缔合.这些结果表明,KLF5通过与c-Jun相互作用进而介导AngⅡ诱导的VSMC增殖.

关键词： Krüppel样因子5 增殖血管紧张素Ⅱ 血管平滑肌细胞

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绞股蓝对环磷酰胺诱发小鼠骨髓微核形成的抑制作用

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湖北中医学院学报 2010年第3期12卷 19-21页

作者：龙再慧倪娅赵刚湖北中医学院医学生物学教研室湖北武汉460065

目的了解中药绞股蓝拮抗常用化疗药物环磷酰胺诱发小鼠骨髓细胞微核形成的作用及其剂量效应。方法将绞股蓝水煎液按低、中、高三种剂量(0.77g/kg、2.30g/kg、6.15g/kg)分别对腹注环磷酰胺的三个实验组小鼠进行灌服,另设阳性对照和阴性对... 详细信息

目的了解中药绞股蓝拮抗常用化疗药物环磷酰胺诱发小鼠骨髓细胞微核形成的作用及其剂量效应。方法将绞股蓝水煎液按低、中、高三种剂量(0.77g/kg、2.30g/kg、6.15g/kg)分别对腹注环磷酰胺的三个实验组小鼠进行灌服,另设阳性对照和阴性对照;制备各组动物的骨髓涂片,计数多染性红细胞的微核发生率。结果中剂量与高剂量的绞股蓝水煎液能显著降低环磷酰胺诱发的小鼠骨髓多染性红细胞的微核率(P<0.05,P<0.01)。结论绞股蓝水提物对环磷酰胺诱发的小鼠骨髓细胞微核具有显著的抑制效应,提示绞股蓝对小鼠等哺乳动物的染色体具有一定的保护作用。

关键词：绞股蓝抗诱变环磷酰胺微核

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《医学分子细胞生物学》的教学实践与探索

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湖北中医学院学报 2009年第4期11卷 71-73页

作者：赵刚倪娅徐云丹湖北中医学院基础医学院医学生物学教研室湖北武汉430065

医学分子细胞生物学(Medical Molecular Cell Biology,MMCB)是我院近三年来在七年制各专业本科生中开设的一门现代基础医学课程,内容涉及细胞生物学和分子生物学两大学科。MMCB课程的主要内容包括细胞内各种超微结构形态、特征、功能以... 详细信息

医学分子细胞生物学(Medical Molecular Cell Biology,MMCB)是我院近三年来在七年制各专业本科生中开设的一门现代基础医学课程,内容涉及细胞生物学和分子生物学两大学科。MMCB课程的主要内容包括细胞内各种超微结构形态、特征、功能以及细胞的代谢、增殖、分化、衰老、凋亡等主要生命活动的分子机理等,内容庞杂,涉及面广,因此具有较高的教学难度。而且,目前国内开设MMCB课程的院校较少,可借鉴的经验也比较缺乏。近年来,笔者在改革教学内容和教学方法方面,对MMCB课程进行了积极探索,积累了一些经验,为今后进一步提高该课程的教学质量奠定了基础。[第一段]

关键词：医学分子细胞生物学课程教学改革实践

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一种基于实验新理念的小鼠微核实验方法

一种基于实验新理念的小鼠微核实验方法

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第八次全国医学遗传学学术会议(中华医学会2009年医学遗传学年会)

作者：赵刚倪娅徐云丹湖北中医学院基础医学院医学生物学教研室

微核试验(micronucleus test,MNT)是遗传毒理学研究中快速检测染色体损伤的一种常用技术,在各种化合物或药物遗传毒性或诱变性的快速初筛方面具有重要应用价值。因此,小鼠红细胞微核标本的制备与观察是医学遗传学实验教学中的一个重要... 详细信息

微核试验(micronucleus test,MNT)是遗传毒理学研究中快速检测染色体损伤的一种常用技术,在各种化合物或药物遗传毒性或诱变性的快速初筛方面具有重要应用价值。因此,小鼠红细胞微核标本的制备与观察是医学遗传学实验教学中的一个重要项目。然而,目前国内医学院校开设的小鼠微核实验多以骨髓多染性红细胞(polychromatic erythrocyte,PCE)作为观察对象。制备微核标本时,一般两人一组处死1只经过诱变剂作用的小鼠,剥离股骨收集骨髓进行细胞涂片再用甲醇固定后染色,按两个学生一只小鼠计算,一个50人的班级做一次微核实验需要消耗25只小鼠。传统方法存在明显的弊端,其一是动物消耗量较大,不符合现代有关动物实验的新理念3R原则(reduction减少、replacement替代、refinement优化)。该原则的第一要求就是在实验中尽可能减少动物的使用量,提高实验动物的利用率。其二,实验中使用的甲醇对人体有毒,且挥发性强,易污染实验室的空气。为了克服传统小鼠微核试验的这两个弊端,使该项目符合当今的实验新理念,我们建立了无需处死动物,不使用甲醇的小鼠尾部血液正染性红细胞(normochromatic erythrocyte,NCE)微核实验方法。方法①小鼠微核的诱导:每个学生实验室分配2～3只小鼠,每只小鼠按2mg/kg的剂量腹腔注射丝裂霉素C溶液,作用48h;②尾巴取血:先用手从小鼠尾巴的近端捋向远端,使尾巴充血。剪去尾巴的2～3mm的尾尖,让流出血滴(5～10μL)直接粘附到一张载玻片上;③血涂片制备:按常规方法制备小鼠血液的涂片。重新捋动小鼠的尾巴,挤出血液制备第二张涂片;如此重复进行,使一只小鼠的尾血制备出10张以上的血涂片;④干燥与固定:在空气中挥动血涂片使其快速干燥。再浸入无水乙醇中固定5min左右,取出晾干;⑤染色:用Giemsa染液染色3min左右;⑥观察:在显微镜的高倍镜下观察并计数1000个NCE细胞,记录含有微核的NCE细胞数,计算微核率。转换油镜仔细观察微核大小和形态。镜下可见,NCE细胞呈现淡桔黄色,所含微核呈小球形,紫红色。讨论PCE细胞是NCE细胞的前身,当小鼠骨髓中的红系干细胞经过数次分裂后会逐渐脱去细胞核(但会保留染色体断片形成的微核)转变成PCE细胞,再进一步发育成NCE,如果PCE中含有微核,则由PCE发育而来并最终进人外周血的NCE也会保留该微核。因此,在开展小鼠微核的教学实验时,完全可以用外周血NCE细胞替代骨髓PCE细胞作为微核观察的靶细胞。利用小鼠尾巴微量全血制备微核标本,既可大幅减少小鼠使用量,又可在不处死动物的前提下持续利用同一只动物,用于不同时间的不同处理条件下小鼠细胞微核率的检测。甲醇是小鼠骨髓细胞微核实验中传统的细胞固定剂,但对人体有毒且挥发性强,对实验者的身体有一定影响。本着在教学实验中倡导绿色与环保的理念,我们用乙醇替代了甲醇作为细胞固定剂,所得到的微核标本质量与用甲醇作固定剂的完全相同。另外,本方法较为简便,明显减少了实验操作步骤,使得学生在实验课上有较多时间在显微镜下寻找辨认含有微核的NCE细胞,观察微核的形态与大小。而且实验成本也得到大幅度降低。

关键词：微核实验新理念

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姜黄素对HeLa细胞p16基因及MGMT基因的去甲基化作用

姜黄素对HeLa细胞p16基因及MGMT基因的去甲基化作用

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湖北省遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会

作者：陈馨赵刚姚群峰湖北中医学院基础医学院医学生物学教研室湖北中医学院医学检验与技术学院生物技术教研室

【目的】姜黄素(curcumin)是从我国传统中药姜黄根茎中提取的一种植物多酚。现代研究表明,姜黄素具有抗氧化、抗突变、抗肿瘤等多方面的药理作用,特别是该物质对多种癌细胞的生长与增殖所表现出较强的抑制作用,使其在临床上恶性肿瘤的... 详细信息

【目的】姜黄素(curcumin)是从我国传统中药姜黄根茎中提取的一种植物多酚。现代研究表明,姜黄素具有抗氧化、抗突变、抗肿瘤等多方面的药理作用,特别是该物质对多种癌细胞的生长与增殖所表现出较强的抑制作用,使其在临床上恶性肿瘤的化疗中具有良好应用前景。然而,姜黄素抗肿瘤的基本机理还未完全搞清楚,目前认为可能涉及诱发肿瘤细胞凋亡、阻断肿瘤细胞的生长信号传导通路、抗氧化和抑制肿瘤血管生成等方面。DNA甲基化是一种与肿瘤形成密切相关的表遗传(epigenetic)机制,它可引起基因表达水平的明显改变,这种变化可以通过细胞分裂遗传下去,并导致基因表达的异常,但不涉及有关DNA序列的改变,即表现型改变,基因型不变。同时,DNA甲基化也是一个可逆的过程,如果能够用药物使肿瘤细胞的甲基化状态发生改变,便可抑制肿瘤细胞的生长的增殖,达到治疗肿瘤的目的。本文研究了不同浓度的姜黄素对体外培养的人宫颈癌HeLa细胞的生长抑制作用及对p16基因和MGMT基因甲基化状态的影响,为揭示姜黄素抑制肿瘤细胞的表遗传学机理奠定基础,也为姜黄素的临床应用提供科学的理论依据。【方法】将人宫颈癌HeLa细胞株在体外培养致对数生长期,加入不同浓度的姜黄素(20、40、60μmol/L)分别处理HeLa细胞48小时。在倒置显微镜观察不同浓度姜黄素处理的HeLa细胞后发生的形态学改变;运用基于酶标仪的MTT方法检测细胞的HeLa增殖情况;利用甲基化特异性PCR(Methylation-specific PCR,MSP)方法检测不同剂量的姜黄素作用前后HeLa细胞中p16基因和MGMT基因甲基化状态的改变。【结果】姜黄素能够抑制HeLa细胞的生长与增殖,诱导该细胞发生凋亡;HeLa细胞中的p16基因和MGMT基因的启动子区CpG岛呈异常甲基化状态,当用姜黄素处理后,低浓度(20μmol/L)的姜黄素对HeLa细胞p16基因和MGMT基因无明显的去甲基化作用,中浓度40μmol/L与高浓度(60μmol/L)姜黄素处理后的HeLa细胞,其p16基因和MGMT基因的启动子区CpG岛呈去甲基化状态。【结论】姜黄素对HeLa细胞的增殖具有明显抑制作用,且表现出剂量依赖性(P<0.01);中浓度和高浓度的姜黄素溶液对HeLa细胞p16基因和MGMT基因具有一定的去甲基化作用。本研究为姜黄素的抗肿瘤机制的揭示提供了有用的资料,也为姜黄素应用于肿瘤临床提供了实验依据。

关键词：姜黄素 p16基因 MGMT DNA甲基化

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一种基于实验新理念的小鼠微核实验方法

一种基于实验新理念的小鼠微核实验方法

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湖北省遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会

作者：赵刚倪娅徐云丹湖北中医学院基础医学院生物学教研室

微核试验(micronucleus test,MNT)是遗传毒理学研究中快速检测染色体损伤的一种常用方法,在各种化合物或药物遗传毒性或诱变性的快速初筛方面具有重要应用价值。因此,小鼠红细胞微核标本的制备与观察是医学遗传学实验教学中的一个重要... 详细信息

微核试验(micronucleus test,MNT)是遗传毒理学研究中快速检测染色体损伤的一种常用方法,在各种化合物或药物遗传毒性或诱变性的快速初筛方面具有重要应用价值。因此,小鼠红细胞微核标本的制备与观察是医学遗传学实验教学中的一个重要项目。然而,目前国内高等医学院校开设的小鼠微核实验多以骨髓多染性红细胞(polychromatic erythrocyte,PCE)作为观察对象,在制备微核标本时,一般是2人一组使用1只经过诱变剂作用的小鼠,经过处死动物、剥离股骨、收集骨髓、细胞涂片、甲醇固定和Giemsa染色后在显微镜下观察。按两个学生一只小鼠计算,一个50人的班级做一次微核实验需要消耗25只小鼠。按照有关实验的现代理念,这种传统的小鼠微核教学实验设计存在明显弊端。其一是动物消耗量较大,不符合动物实验新理念的3R原则(reduction减少、replacement替代、refinement优化)。该原则的第一要求就是在实验中尽可能减少动物的使用量,提高实验动物的利用率。其二,在实验中使用的甲醇对人体具有一定毒性,且挥发性强,易污染实验室的空气。为了克服传统小鼠微核教学实验的这两个弊端,使该项目的实施符合当今国际上倡导的有关动物实验的新理念,经过摸索,我们建立了无需处死动物,不使用甲醇的小鼠尾部血液正染性红细胞(normochromatic erythrocyte,NCE)微核实验方法。该方法操作简便,动物消耗量小、对实验室空气无明显影响,适合于医学遗传学或普通遗传学教学中有关微核的观察实验。

关键词：微核实验教学实验新理念

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得力生注射液对人肝癌细胞(HepG2)增殖的影响

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中医研究 2009年第5期22卷 17-19页

作者：余春红胡继鹰童胜雄湖北中医学院湖北中医学院医学生物学教研室湖北武汉430065 武汉市中西医结合医院湖北武汉430022

目的:研究得力生(以下简称DLS)注射液对人肝癌细胞(HepG2)增殖、生长的影响并初步探讨其机制。方法:通过MTT法检测DLS对HepG2增殖的抑制程度,Hoechst染色法观察细胞凋亡时的形态学变化,同时使用流式细胞术(FCM)检测HepG2的周期分布及凋... 详细信息

目的:研究得力生(以下简称DLS)注射液对人肝癌细胞(HepG2)增殖、生长的影响并初步探讨其机制。方法:通过MTT法检测DLS对HepG2增殖的抑制程度,Hoechst染色法观察细胞凋亡时的形态学变化,同时使用流式细胞术(FCM)检测HepG2的周期分布及凋亡率。结果:DLS以浓度依赖和时间依赖方式显著抑制HepG2的增殖,在经6.25,12.5,25μL/mL DLS处理12 h后,细胞凋亡率分别为17.35%、18.89%、21.30%;阻滞HepG2于G2/M期并诱导凋亡。结论:DLS对体外培养的人肝癌细胞(HepG2)的生长有明显抑制作用,诱导细胞凋亡可能是其作用机制之一。

关键词：得力生注射液/药效学 MTT人肝癌细胞增殖抑制

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