检索结果-内蒙古大学图书馆

华西医科大学学报 2001年第1期32卷 66-69页

作者：吴岩祝彼得潘克俭华西医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室成都610041 成都中医药大学解剖学教研室华西医科大学基础医学院医学生物学与细胞生物学教研室

目的　了解内皮细胞对小鼠粒系、红系和巨核系造血功能的影响 ,为进一步研究血发生及其调控提供理论依据。方法　取剖腹产术后 12小时以内的人脐静脉内皮细胞 ,按 Jaffe法进行培养 ,建立内皮细胞体外培养模型。而后收集原代培养的内皮... 详细信息

目的　了解内皮细胞对小鼠粒系、红系和巨核系造血功能的影响 ,为进一步研究血发生及其调控提供理论依据。方法　取剖腹产术后 12小时以内的人脐静脉内皮细胞 ,按 Jaffe法进行培养 ,建立内皮细胞体外培养模型。而后收集原代培养的内皮细胞上清液 ,应用造血祖细胞体外培养方法进行体外粒 -单系祖细胞克隆形成单位 ( CFU - GM)、早期红系祖细胞克隆形成单位 ( BFU - E)、晚期红系祖细胞克隆形成单位 ( CFU - E)和巨核系祖细胞克隆形成单位 ( CFU - MK)半固体培养。结果　在有内皮细胞上清液存在的各培养体系中 ,集落形成良好。而在同样培养条件下 ,在无内皮细胞上清液存在的体系中 ,需加入外源性的 GM- CSF、EPO和 IL - 3才能表现出对粒系、红系和巨核系造血的刺激作用。结论　 1内皮细胞能够通过分泌造血生长因子 ,支持各系祖细胞的增殖与分化 ;2内皮细胞上清液可作为标准的生长因子来源 ,用于体外干细胞的扩增和某些血液病的治疗 ;3内皮细胞和造血干细胞 /祖细胞的相互作用在体内的造血调控中也可能起了重要作用 ;4在内皮细胞上清液中可能含有尚未能证明的其他造血生长因子。这些因子单独或协同地发挥作用。

关键词：内皮细胞调控细胞因子造血细胞

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黄芪多糖对人肺癌顺铂耐药株A549/DDP细胞耐药性的影响及其机制

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吉林大学学报（医学版） 2020年第6期46卷 1162-1168,I0004页

作者：柳叶陈龙云湖北中医药大学检验学院临床微生物学教研室湖北武汉430065 湖北中医药大学基础医学院生物化学教研室湖北武汉430065

目的:探讨黄芪多糖(APS)对人肺癌顺铂(DDP)耐药A549/DDP细胞耐药性的影响,并阐明其可能的作用机制。方法:将对数生长期A549/DDP细胞分为对照组(不经药物干预)、APS组(给予25、50、100、200和400 mg·L^-1 APS)、DDP组(给予2、4、8... 详细信息

目的:探讨黄芪多糖(APS)对人肺癌顺铂(DDP)耐药A549/DDP细胞耐药性的影响,并阐明其可能的作用机制。方法:将对数生长期A549/DDP细胞分为对照组(不经药物干预)、APS组(给予25、50、100、200和400 mg·L^-1 APS)、DDP组(给予2、4、8、16和32 mg·L^-1 DDP)及APS+DDP组(给予100 mg·L^-1 APS和2、4、8、16和32 mg·L^-1 DDP),药物处理A549/DDP细胞24 h,采用CCK-8法检测各组A549/DDP细胞增殖抑制率,并计算半数抑制浓度(IC50)。将A549/DDP细胞分为对照组(不经药物干预)、APS组(给予100 mg·L^-1 APS)、DDP组(给予11.46 mg·L^-1 DDP)及APS+DDP组(给予100 mg·L^-1 APS和11.46 mg·L^-1 DDP),药物处理细胞24 h,采用Transwell小室法检测各组A549/DDP细胞迁移情况,流式细胞术检测各组A549/DDP细胞凋亡率和线粒体膜电位,Western blotting法检测各组A549/DDP细胞中B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、P糖蛋白(P-gp)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)、蛋白激酶B(AKT)和磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)蛋白表达水平。结果:CCK-8法检测,与DDP组比较,APS+DDP组的A549/DDP细胞IC50降低。Transwell小室法检测,与对照组比较,APS组A549/DDP细胞迁移能力无明显变化;与DDP组比较,APS+DDP组A549/DDP细胞迁移数降低。流式细胞术检测,与对照组比较,APS组A549/DDP细胞凋亡率和线粒体膜电位差异无统计学意义(P>0.05),DDP组A549/DDP细胞凋亡率升高,线粒体膜电位降低(P<0.05);与DDP组比较,APS+DDP组A549/DDP细胞凋亡率升高,线粒体膜电位降低(P<0.05)。Western blotting法检测,与对照组比较,APS组A549/DDP细胞中Bcl-2和P-gp蛋白表达水平降低(P<0.05),p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT比值降低(P<0.05),Bax蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05);与APS组比较,DDP组A549/DDP细胞中Bcl-2和P-gp蛋白表达水平降低(P<0.05),p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT比值降低P<0.05),Bax蛋白表达水平升高(P<0.05);与DDP组比较,APS+DDP组A549/DDP细胞中Bcl-2和P-gp蛋白表达水平降低(P<0.05),p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT比值降低(P<0.05),Bax蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论:APS能逆转A549/DDP细胞耐药性,其机制可能与其阻断PI3K/AKT信号通路和诱导线粒体损伤有关联。

关键词：黄芪多糖 A549/DDP细胞耐药性磷脂酰肌醇3激酶蛋白激酶B

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符合实验教学新理念的小鼠微核实验

符合实验教学新理念的小鼠微核实验

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“细胞活动生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会

作者：徐云丹倪娅赵刚湖北中医药大学-基础医学院-医学生物学教研室

微核试验(micronucleus test,MNT)是细胞遗传学和遗传毒理学研究中快速检测染色体损伤的一种常用方法,在各种化合物遗传毒性的快速检测中具有重要应用价值。因此,小鼠骨髓细胞微核标本制备与观察是细胞生物学或遗传学实验教学中的一个... 详细信息

微核试验(micronucleus test,MNT)是细胞遗传学和遗传毒理学研究中快速检测染色体损伤的一种常用方法,在各种化合物遗传毒性的快速检测中具有重要应用价值。因此,小鼠骨髓细胞微核标本制备与观察是细胞生物学或遗传学实验教学中的一个重要项目。目前,国内高校开设的小鼠微核实验多以骨髓多染性红细胞(polychromatic erythrocyte,PCE)作为观察对象,在微核实验时,一般2人一组使用1只经过诱变剂处理的小鼠,经过处死动物、剥离股骨、收集骨髓、细胞涂片、甲醇固定、Giemsa染色等环节完成制片、然后在显微镜下观察。按2个学生一只小鼠计算,一个50人的班级做一次微核实验需要消耗25只小鼠。按照有关实验的现代理念,这种传统的小鼠微核教学实验设计存在明显弊端。其一是动物消耗量较大,不符合动物实验新理念的3R原则(reduction减少、replacement替代、refinement优化)。该原则的第一要求就是在实验中尽可能减少动物的使用量,提高实验动物的利用率。其二,在实验中使用的甲醇对人体具有一定毒性,且挥发性强,易污染实验室的空气。为了克服传统小鼠微核教学实验的这两个弊端,使该项目的实施符合当今国际上倡导的有关动物实验的新理念,经过摸索,我们建立了无需处死动物,不使用甲醇的小鼠尾血正染性红细胞(norrnochromatic erythrocyte,NCE)微核实验方法。该方法操作简便,动物消耗量小、对实验室空气无明显影响,适合作为细胞生物学或遗传学的微核教学实验。方法:①小鼠微核的诱导:每个学生实验室分配2～3只小鼠,每只小鼠按2mg/kg的剂量腹腔注射丝裂霉素C溶液,作用48h;②尾部取血:先用手从小鼠尾巴的近端捋向远端,使尾巴充血。剪去尾巴的2～3mm的尾尖,让流出血滴(5～10μL)直接粘附到一张载玻片上;③血涂片制备:按常规方法制备小鼠血液的涂片。重新捋动小鼠的尾巴,挤出血液制备第二张涂片;如此重复进行,使一只小鼠的尾血制备出10张以上的血涂片;④干燥与同定:在空气中挥动血涂片使其快速干燥。再浸入无水乙醇中固定5min左右,取出晾干;⑤染色:用Giemsa染液染色3min左右;⑥观察:在显微镜的高倍镜下观察并计数1000个NCE细胞,记录含有微核的NCE细胞数,计算微核率。转换油镜仔细观察微核大小和形态。镜下可见,NCE细胞呈现淡桔黄色,所含微核呈小球形,紫红色,与同一玻片标本中有核细胞的细胞核在着色性上一致。讨论:PCE细胞是NCE细胞的前身,当小鼠骨髓中的红系干细胞经过数次分裂后会逐渐脱去细胞核转变成PCE细胞,再进一步发育成NCE细胞。在此过程中,如果细胞的染色体在有害理化因子的作用下发生断裂等畸变,则受累细胞会保留由染色体断片形成的微核。如果PCE细胞含有微核,则由PCE发育而来并最终进入外周血的NCE细胞也会保留该微核。因此,在开展小鼠微核的教学实验时,完全可以用外周血NCE细胞替代骨髓PCE细胞作为微核观察的靶细胞。在小鼠外周血液中,NCE细胞有较大比例,容易辨认,观察方便,是微核教学实验中一种较为理想的靶细胞。而PCE细胞在外周血中的比例很小,不易寻找,辨认相对困难。利用小鼠尾巴微量全血制备微核标本,既可大幅减少小鼠使用量,又可在不处死动物的前提下重复利用同一只动物,可用于不同时间的不同处理条件下小鼠细胞微核率的检测。实验成本也得到大幅度降低。甲醇是小鼠骨髓细胞微核实验中传统的细胞固定剂,但对人体有毒且挥发性强,对实验者的身体会产生一定影响。本着在教学实验中倡导绿色与环保的理念,我们用对人体无明显危害的乙醇替代了甲醇作为细胞固定剂。实验结果表明,乙醇作固定剂所制备的的微核标本质量与用甲醇作固定剂的完全相同。另外,本方法的程序较为简便,明显减少了实验操作步骤,可使学生在实验课上能较快地制备好微核标本,从而有较多时间在显微镜下寻找辨认含有微核的NCE细胞,并仔细观察微核的形态与大小。

关键词：微核实验新理念实验教学

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熊果酸对大鼠实验性大肠癌的化学预防作用

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现代免疫学 2011年第6期31卷 478-481页

作者：胡晶董兴高胡义陈惠敏韩俊崔显念吕东蔚张秋萍武汉大学基础医学院免疫系武汉430071 湖北民族学院医学院免疫学和微生物学教研室恩施445000 湖北中医药大学生化教研室武汉430065

体外实验证实,熊果酸可抑制人类多种肿瘤细胞的增殖并可诱导肿瘤细胞的凋亡,而对活体动物的抗肿瘤作用鲜有报道。本研究利用二甲基肼诱导大鼠大肠癌模型,同时给予含不同剂量的熊果酸饲料喂养,观察并检测肿瘤的形成部位、数量、体积,并... 详细信息

体外实验证实,熊果酸可抑制人类多种肿瘤细胞的增殖并可诱导肿瘤细胞的凋亡,而对活体动物的抗肿瘤作用鲜有报道。本研究利用二甲基肼诱导大鼠大肠癌模型,同时给予含不同剂量的熊果酸饲料喂养,观察并检测肿瘤的形成部位、数量、体积,并用免疫组织化学方法检测大鼠大肠癌组织中COX-2、Bcl-2和Bax表达的变化,对这些指标进行定性及半定量分析。结果显示,熊果酸可抑制肿瘤的形成,呈剂量依赖性抑制癌组织COX-2的表达,但对Bcl-2、Bax的表达无显著影响。熊果酸对大肠癌有防治作用,其机制可能是通过降低COX-2的表达而实现的。

关键词：大肠癌熊果酸 COX-2 Bcl-2 Bax

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舌癌组织缺氧微环境中脂联素的表达与调控

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中国肿瘤临床 2019年第16期46卷 815-821页

作者：郭晓红丁冲张军林赖晓晶彭圆吴丰华殷明珠李毅赵刚湖北中医药大学基础医学院医学生物学教研室武汉市430065 北京大学口腔医学院中心实验室武汉生物工程学院药学院生药学教研室湖北省病毒载体(基因治疗)工程技术研究中心武汉生物工程学院生命科学与技术学院分子生物学教研室

目的:脂联素(adiponectin,APN)是一种内源性细胞因子,与多种肿瘤的发生发展密切相关。本研究旨在检测舌癌APN及其受体(AdipoR1和AdipoR2)的组织学表达分布特征,探讨APN在局部组织中的表达是否受到缺氧诱导因子HIF-1α的调控。方法:采用... 详细信息

目的:脂联素(adiponectin,APN)是一种内源性细胞因子,与多种肿瘤的发生发展密切相关。本研究旨在检测舌癌APN及其受体(AdipoR1和AdipoR2)的组织学表达分布特征,探讨APN在局部组织中的表达是否受到缺氧诱导因子HIF-1α的调控。方法:采用免疫组织化学检测舌癌组织中APN及其受体的表达分布特征;慢病毒包装HIF-1αshRNA载体并转染舌癌细胞构建稳定沉默HIF-1α的细胞系;应用RT-PCR和蛋白质印迹法(Western blot)检测APN及其受体mRNA和蛋白在缺氧条件下的表达变化。结果:在肿瘤发生早期,即当肿瘤体积较小(T1和T2期)或未发生淋巴结转移(N0期)时,肿瘤组织APN及AdipoR1的表达与癌旁正常上皮相比上调(P<0.05,<0.01),AdipoR2的表达无显著改变。将舌癌细胞缺氧后APN及AdipoR1的表达分别上调,但AdipoR2的表达不变。敲低HIF-1α表达后缺氧处理可同时下调APN及AdipoR1表达。结论:舌癌局部缺氧微环境下,APN-Adi poR1信号通路被激活,该过程受到HIF-1α的调控。

关键词：舌癌缺氧微环境 HIF-1α 脂联素

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病原生物学教学中南亚留学生文化差异问题研究