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衣霉素逆转CD147介导的结肠癌细胞株SW620/5-FU耐药性的实验研究

湖北医药学院学报 2015年第5期34卷 432-435,456页

作者：董晓霞邱力骆志国沈力湖北医药学院基础医学院药理学教研室湖北十堰442000 湖北医药学院附属太和医院肿瘤防治中心湖北十堰442000 湖北医药学院基础医学院生物化学教研室湖北十堰442000

目的:探讨衣霉素对结肠癌5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药细胞株(SW620/5-FU)耐药性的逆转作用及机制。方法:采用药物浓度梯度递增法诱导建立结肠癌耐药细胞株SW620/5-FU;MTT法检测细胞药物敏感性变化;流式细胞术和Lection blot检测N-糖链结构差异... 详细信息

目的:探讨衣霉素对结肠癌5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药细胞株(SW620/5-FU)耐药性的逆转作用及机制。方法:采用药物浓度梯度递增法诱导建立结肠癌耐药细胞株SW620/5-FU;MTT法检测细胞药物敏感性变化;流式细胞术和Lection blot检测N-糖链结构差异;Western blot检测糖蛋白CD147 N-糖基化水平。进一步采用衣霉素作用于SW620/5-FU,观察细胞耐药性状的改变。结果:成功建立结肠癌耐药细胞株SW620/5-FU,其细胞表面N-糖链合成增加,高糖基化CD147表达上升;衣霉素可阻断SW620/5-FU细胞中CD147 N-糖链合成,实现其5-FU耐药性的逆转。结论:衣霉素通过抑制N-糖链合成从而逆转CD147介导的结肠癌细胞株SW620/5-FU的耐药性。

关键词：衣霉素结肠癌耐药 CD147

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流感病毒多表位核酸疫苗CTB-Eg的构建与细胞转染研究

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西部医学 2015年第2期27卷 182-185,189页

作者：寇静远潘兴李婉宜邝玉周琳琳杨靖石新丽陆顺顺黄筱钧邓昭敏秦臻王保宁李明远四川大学华西基础医学与法医学院微生物教研室四川成都610041 湖北医药学院微生物学教研室湖北十堰442000

目的设计并构建含分子内佐剂的流感病毒多表位核酸疫苗CTB-Eg,初步研究其在HEK293T细胞中的转染效率。方法通过生物信息学软件设计并合成了含分子内佐剂的流感病毒多表位基因CTB-Eg,将其插入真核载体pEGFP-C2中,获得了重组质粒pEGFP-C2/... 详细信息

目的设计并构建含分子内佐剂的流感病毒多表位核酸疫苗CTB-Eg,初步研究其在HEK293T细胞中的转染效率。方法通过生物信息学软件设计并合成了含分子内佐剂的流感病毒多表位基因CTB-Eg,将其插入真核载体pEGFP-C2中,获得了重组质粒pEGFP-C2/CTB-Eg;用脂质体法转染HEK293T细胞,通过荧光显微镜观察和PCR法检测其转染效率。结果成功构建了真核表达质粒pEGFP-C2/CTB-Eg,且该重组质粒能在HEK293T细胞中瞬时转染,转染效率在50%～70%之间。结论本研究成功设计、构建了CTB-Eg融合基因,其在HEK293T细胞中转染效率较高,为流感病毒多表位核酸疫苗CTB-Eg在小鼠体内的抗病毒作用研究奠定了坚实基础。

关键词：流感病毒核酸疫苗多表位基因霍乱毒素B亚单位

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厚朴酚抑制NF-κB信号阻止乳腺癌细胞转移的实验研究

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湖北医药学院学报 2015年第3期34卷 224-227,F0002页

作者：余贤军冯婷婷郭阳李珊阮绪芝唐微刘莹湖北医药学院基础医学院湖北十堰442000 安徽医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室安徽合肥230038

目的:探讨天然化合物厚朴酚(Magnolol,Mag)对人乳腺癌细胞转移的抑制作用,并探讨其机制是否与NF-κB信号通路相关。方法:乳腺癌细胞MDA-MB-231经不同浓度Mag处理后,接种到Transwell小室,作用24 h,染色并计穿过Transwell小室的细胞数目;... 详细信息

目的:探讨天然化合物厚朴酚(Magnolol,Mag)对人乳腺癌细胞转移的抑制作用,并探讨其机制是否与NF-κB信号通路相关。方法:乳腺癌细胞MDA-MB-231经不同浓度Mag处理后,接种到Transwell小室,作用24 h,染色并计穿过Transwell小室的细胞数目;用Western blot法检测不同浓度Mag处理的MDA-MB-231细胞NF-κB信号通路蛋白表达情况。结果:Mag显著抑制乳腺癌细胞的侵袭、迁移和黏附等恶性转移行为,Western blot显示Mag抑制了NF-κB信号通路。结论:Mag具有抑制乳腺癌细胞转移的作用,其机制可能与NF-κB信号通路失活相关。

关键词：厚朴酚乳腺癌转移 NF-κB

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蛋白酶体抑制剂诱导t(8;21)急性髓系白血病细胞凋亡

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湖北医药学院学报 2015年第5期34卷 443-446,451页

作者：冯婷婷秦宜德刘莹余贤军安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室安徽合肥230001 湖北医药学院基础医学院生物化学教研室湖北十堰442000

目的：探讨蛋白酶体抑制剂（PSI）对t（8；21）急性髓系白血病治疗的分子生物学机制。方法：t（8；21）白血病细胞Kasumi-1经5，8，10，25，50nmol／LPSI处理后，进行细胞计数和MTT检测，并且使用流式细胞分选和蛋白免疫印迹方法检测不... 详细信息

目的：探讨蛋白酶体抑制剂（PSI）对t（8；21）急性髓系白血病治疗的分子生物学机制。方法：t（8；21）白血病细胞Kasumi-1经5，8，10，25，50nmol／LPSI处理后，进行细胞计数和MTT检测，并且使用流式细胞分选和蛋白免疫印迹方法检测不同浓度的药物处理下细胞的调亡情况。结果：蛋白酶体抑制剂PSI诱导t（8；21）白血病细胞Kasumi-1在5～50nmol／L时间浓度梯度的自血病细胞调亡，以及对患者细胞有抑制增长作用，并发现随着药物作用时间的延长，表征凋亡的caspase．3条带的切割随之愈加的显著。这些结果表明，PSI诱导的细胞凋亡是通过caspase-3激活凋亡途径。结论：PSI可能是一个潜在的治疗t（8；21）白血病，并通过靶向AML1-ETO蛋白和激活凋亡通路治疗白血病的有效药物。

关键词： t(8 21)急性髓系白血病蛋白酶体抑制剂凋亡

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自身免疫病新靶标Kv1.3及其药用多肽研究进展

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湖北医药学院学报 2015年第5期34卷 506-512,F0004页

作者：丁莉李健吴英亮陈宗运湖北医药学院基础医学院生物化学教研室寄生虫学教研室湖北十堰442000 武汉大学生命科学学院病毒学国家重点实验室湖北武汉430072

自身免疫病是机体对自身抗原发生免疫反应而导致自身组织出现临床损害所引起的疾病。全球有5％-8％的人口受到约40种自身免疫性疾病的威胁，目前尚无特效疗法，且病情易反复发作。

关键词： Kv1.3钾通道自身免疫疾病动物模型多肽药物

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幽门螺杆菌多表位重组原核表达工程菌的构建及表达特性研究

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四川大学学报（医学版） 2014年第3期45卷 367-370页

作者：丁娜娜杨靖潘兴周永君李建春祝捷王保宁李明远四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室成都610041 四川万可泰生物技术有限责任公司成都610000 湖北医药学院微生物学教研室十堰442000

目的构建含有幽门螺杆菌尿素酶(UreI、UreB)及粘附素(HpaA)的多表位原核表达质粒pET28a(+)/ureI-ureB-hpaA〔pET28a(+)/IBA〕及相应的原核表达工程菌,研究其表达特性。方法通过生物信息学方法从ureI、ureB和hpaA基因中筛选T细胞和B细胞... 详细信息

目的构建含有幽门螺杆菌尿素酶(UreI、UreB)及粘附素(HpaA)的多表位原核表达质粒pET28a(+)/ureI-ureB-hpaA〔pET28a(+)/IBA〕及相应的原核表达工程菌,研究其表达特性。方法通过生物信息学方法从ureI、ureB和hpaA基因中筛选T细胞和B细胞优势表位基因序列,人工合成并构建原核重组表达质粒pET28a(+)/IBA。经限制性内切酶(NdeⅠ,XhoⅠ)酶切鉴定及DNA测序鉴定后导入大肠杆菌BL21(DE3)。该工程菌经IPTG诱导后,用SDS-PAGE检测重组蛋白(rIBA)的表达情况,以抗幽门螺杆菌悉尼株(SS1株)特异卵黄抗体采用Western blot检测rIBA的抗原性。结果构建的多表位原核表达质粒pET28a(+)/IBA双酶切和测序鉴定与设计序列100%一致。工程菌经IPTG诱导后SDS-PAGE电泳显示在相对分子质量40×103左右有一条明显蛋白条带,Western blot显示有相应位置特异反应条带。结论成功构建幽门螺杆菌多表位重组原核表达质粒pET28a(+)/IBA及相应原核表达工程菌,该工程菌表达的rIBA具有抗原性,表明该重组蛋白与幽门螺杆菌有高度相关性。

关键词：幽门螺杆菌表位尿素酶粘附素工程菌

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Ag85A-HA2原核表达载体的构建及其抗甲型流感病毒免疫效果的研究

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四川大学学报（医学版） 2014年第4期45卷 547-551页

作者：邵京京杨靖戴军孟俊杰裴德翠李虹潘兴李婉宜四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室成都610041 宜宾市第二人民医院检验科宜宾644000 湖北医药学院微生物学教研室十堰442000 四川大学西部妇幼研究院成都610041

目的构建结核杆菌分泌型抗原85A(Ag85A)与流感病毒血凝素(HA)中HA2(Ag85A-HA2)原核表达载体,并表达融合蛋白,研究其抗流感病毒的免疫保护效果。方法构建Ag85A-HA2原核表达载体pET-32a(+)/Ag85A-HA2;异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)... 详细信息

目的构建结核杆菌分泌型抗原85A(Ag85A)与流感病毒血凝素(HA)中HA2(Ag85A-HA2)原核表达载体,并表达融合蛋白,研究其抗流感病毒的免疫保护效果。方法构建Ag85A-HA2原核表达载体pET-32a(+)/Ag85A-HA2;异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达Ag85A-HA2融合蛋白,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表达产物,并使用吸附多聚组氨酸标签(His-Tag)的蛋白纯化柱分离纯化蛋白;甲型流感病毒(influenza A virus,IAV)攻击重组蛋白免疫后的BALB/c小鼠(并设PBS对照组),通过观察小鼠肺病理切片、测定肺指数及肺指数抑制率、死亡保护率等指标分析其免疫保护效果。结果成功构建了原核表达载体pET-32a(+)/Ag85A-HA2;SDS-PAGE电泳分析显示成功表达相对分子质量为70×103的重组融合蛋白;动物实验表明,融合蛋白Ag85A-HA2对IAV攻击后的小鼠肺指数抑制率达到39.30%,死亡保护率达到80%,效果明显高于PBS对照组(P<0.05),肺部病理切片也证实融合蛋白Ag85A-HA2对小鼠肺部的保护效果显著。结论成功构建了Ag85A-HA2原核表达载体并表达出融合蛋白,该融合蛋白在动物体内能发挥良好的抗甲型流感病毒感染的免疫保护效果。

关键词：甲型流感病毒结核杆菌分泌型抗原85A 流感病毒血凝素原核表达融合蛋白免疫效果

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木犀草素抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231中SDF-1α/CXCR4通路的作用

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肿瘤基础与临床 2014年第3期27卷 199-202页

作者：李文仿欧琴张华赵宗彬王耕湖北医药学院附属太和医院普外三科湖北十堰442000 湖北医药学院基础医学院微生物学教研室湖北十堰442000

目的探讨木犀草素对乳腺癌细胞MDA-MB-231中SDF-1α/CXCR4信号通路抑制作用。方法采用不同浓度的木犀草素处理乳腺癌细胞MDA-MB-231,观察乳腺癌细胞MDA-MB-231的细胞增殖、趋化运动及CXCR4蛋白表达。结果木犀草素明显抑制乳腺癌细胞MDA-... 详细信息

目的探讨木犀草素对乳腺癌细胞MDA-MB-231中SDF-1α/CXCR4信号通路抑制作用。方法采用不同浓度的木犀草素处理乳腺癌细胞MDA-MB-231,观察乳腺癌细胞MDA-MB-231的细胞增殖、趋化运动及CXCR4蛋白表达。结果木犀草素明显抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖,明显抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231 CXCR4蛋白表达,并明显抑制SDF-1α/CXCR4对乳腺癌细胞MDA-MB-231的激活。结论木犀草素可抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖及SDF-1α/CXCR4介导的乳腺癌细胞的信号激活作用,在预防乳腺癌复发及转移中可能有重要的作用。

关键词：木犀草素乳腺癌 CXCR4

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免疫抑制蝎毒活性肽Im169的重组表达和功能鉴定

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湖北医药学院学报 2014年第5期33卷 458-463,F0002页

作者：陈宗运朱国新谢明红华敏曹志贱李文鑫吴英亮湖北医药学院基础医学院生物化学教研室湖北十堰442000 湖北医药学院基础医学研究所湖北十堰442000 武汉大学生命科学学院病毒学国家重点实验室湖北武汉430072

目的:筛选鉴定新型蝎毒免疫活性肽。方法:从海南斑等蝎(Isometrus maculates)毒腺组织c DNA文库中筛选和分离蝎毒肽基因,通过GST融合蛋白表达纯化、肠激酶酶切和高压液相色谱(HPLC)分离的方法,获得色谱纯重组蝎毒活性肽,酶联免疫吸附(EL... 详细信息

目的:筛选鉴定新型蝎毒免疫活性肽。方法:从海南斑等蝎(Isometrus maculates)毒腺组织c DNA文库中筛选和分离蝎毒肽基因,通过GST融合蛋白表达纯化、肠激酶酶切和高压液相色谱(HPLC)分离的方法,获得色谱纯重组蝎毒活性肽,酶联免疫吸附(ELISA)实验检测细胞因子,鉴定免疫调节活性。结果:筛选得到一个新的蝎毒活性肽基因Im169,其编码的成熟肽由29个氨基酸组成,其中含有6个半胱氨酸。Im169多肽对T淋巴细胞IL-2、TNF-α和IFN-γ等细胞因子的分泌具有明显的抑制作用,且作用呈浓度依赖性(P<0.05)。序列分析显示:Im169多肽和蝎钾通道毒素的相似性最高,提示其是一个潜在的钾通道毒素多肽。功能机制分析显示:Im169多肽通过抑制T细胞表面的钾通道,从而发挥免疫抑制功能。结论:发现了一个新的蝎毒免疫调节肽,丰富了对蝎毒活性肽的功能认识,为自身免疫疾病的药物开发提供了新的多肽模板。

关键词：蝎毒素免疫抑制重组多肽 cDNA文库

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流感病毒多表位核酸疫苗CTB-Eg的构建及表达特性研究

流感病毒多表位核酸疫苗CTB-Eg的构建及表达特性研究

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中华医学会2014全国微生物学与免疫学学术年会

作者：寇静远潘兴杨靖石新丽黄筱钧邓昭敏秦臻王保宁李明远李婉宜四川大学微生物学教研室湖北医药学院微生物学教研室河北中医学院基础医学院

目的由于流感病毒的基因结构呈节段性分布,当人流感病毒和禽流感病毒同时感染同一个体时,这种特殊的基因排列方式极可能通过其基因重组而产生一种对人类全新的流感病毒株,从而导致流感的全球性暴发流行。因此,流感疫苗的研究焦点是研发...

目的由于流感病毒的基因结构呈节段性分布,当人流感病毒和禽流感病毒同时感染同一个体时,这种特殊的基因排列方式极可能通过其基因重组而产生一种对人类全新的流感病毒株,从而导致流感的全球性暴发流行。因此,流感疫苗的研究焦点是研发对不同亚型流感病毒都具有交叉保护作用的通用型长效疫苗,而多表位基因疫苗的构想有望实现这一目标。本研究设计、构建含分子内佐剂的流感病毒多表位基因疫苗CTB-Eg,并检测其真核表达载体pEGFP-C2/CTB-Eg在HEK293T细胞

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