检索结果-内蒙古大学图书馆

成都医学院学报 2014年第5期9卷 538-544页

作者：潘兴王保宁杨靖李健春祝捷周永君王红仁李明远李婉宜四川大学华西基础医学与法医学院微生物教研室成都610041 四川万可泰生物技术有限责任公司成都610041 湖北医药学院微生物教研室十堰442000

目的初步建立重组幽门螺杆菌多靶点疫苗工程菌（BIB）的高密度发酵及其蛋白纯化工艺。方法以摇瓶发酵结果为基础,放大工艺至50L发酵罐中,对影响目的蛋白收率的因素如发酵培养基、工作种子接种量、诱导剂浓度、诱导起始时间、诱导持续时... 详细信息

目的初步建立重组幽门螺杆菌多靶点疫苗工程菌（BIB）的高密度发酵及其蛋白纯化工艺。方法以摇瓶发酵结果为基础,放大工艺至50L发酵罐中,对影响目的蛋白收率的因素如发酵培养基、工作种子接种量、诱导剂浓度、诱导起始时间、诱导持续时间及诱导剂添加方式等进行优化验证;并利用rBIB蛋白高等电点特性（pI=9.05）,在pH 7.0-7.5的磷酸盐缓冲液中目的蛋白带正电荷,采用阳离子交换层析进行纯化,对阳离子交换层析填料及纯化缓冲液的pH进行优化。结果经高密度发酵后BIB菌体产量为70g/L,蛋白表达量为32%;rBIB蛋白经阳离子交换层析纯化后其纯度为91.8%。结论该工艺的初步建立为深入研究rBIB蛋白性质及其规模化生产奠定了基础。

关键词：幽门螺杆菌疫苗高密度发酵阳离子交换层析尿素酶B亚单位

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幽门螺杆菌在胃癌形成中的作用机制

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四川生理科学杂志 2014年第1期36卷 27-31页

作者：谢铁松雷如军邵义敏杨靖刘益国十堰市铁路医院湖北十堰442716 湖北医药学院基础医学院微生物学教研室湖北十堰442000 四川大学基础医学与法医学院微生物学教研室四川成都610041

尽管近年来胃癌的发病率和死亡率有所下降,但在世界范围内它仍位于常见恶性肿瘤发病率和死亡率的第二位。胃癌的形成是一个多因素、多步骤的复杂过程,幽门螺杆菌感染、宿主遗传因素和环境因素等共同决定了这个过程。本文综述了近年来幽... 详细信息

尽管近年来胃癌的发病率和死亡率有所下降,但在世界范围内它仍位于常见恶性肿瘤发病率和死亡率的第二位。胃癌的形成是一个多因素、多步骤的复杂过程,幽门螺杆菌感染、宿主遗传因素和环境因素等共同决定了这个过程。本文综述了近年来幽门螺杆菌在胃癌形成中的作用机制研究进展,探明幽门螺杆菌与胃癌相关的特异性因子或特异性作用链有助于人类胃癌的防治。

关键词：幽门螺旋杆菌胃癌机制

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布鲁杆菌Ⅳ型分泌系统蛋白VirB9免疫原性检测

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中华地方病学杂志 2013年第3期32卷 263-266页

作者：范金明王发兴张波江玲李蓓湖北医药学院基础医学院微生物教研室十堰442000 湖北医药学院基础医学院第一临床学院十堰442000

目的检测布鲁杆菌Ⅳ型分泌系统蛋白VirB9的免疫原性，寻找潜在的、新的布鲁杆菌亚单位疫苗靶标。方法采用双酶切的方法，将布鲁埃希菌VirB9基因全长克隆至原核表达载体pET32a上，将克隆后载有VirB9基因的pET32a质粒转化至大肠杆菌BL21（... 详细信息

目的检测布鲁杆菌Ⅳ型分泌系统蛋白VirB9的免疫原性，寻找潜在的、新的布鲁杆菌亚单位疫苗靶标。方法采用双酶切的方法，将布鲁埃希菌VirB9基因全长克隆至原核表达载体pET32a上，将克隆后载有VirB9基因的pET32a质粒转化至大肠杆菌BL21（DE3）中，异丙基-13-D-硫代吡喃半乳糖苷（IPTG）诱导重组VirB9蛋白在大肠埃希菌中的表达。利用重组VirB9蛋白所携带的His标签，通过Ni—NAT层析，纯化在大肠杆菌中重组表达的VirB9蛋白．再通过十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶（SDS—PAGE）电泳和二喹啉甲酸（BCA）蛋白定量试剂盒对纯化的蛋白进行纯度及浓度检测。用布鲁杆菌疫苗株S19株免疫BALB／c小鼠，并以磷酸盐缓冲液（PBS）为对照。在免疫4周后，鼠尾取血，血清虎红平板凝集试验、试管凝集试验检查小鼠血清抗体；酶联免疫吸附试验（ELISA）检测$19株免疫小鼠体内抗VirB9抗体滴度。在免疫后第35天，取小鼠脾脏，分离脾细胞，利用Elispot技术，检测VirB9蛋白体外再刺激后分泌细胞因子（干扰素-1，IFN-1）的脾细胞数，酶联斑点图像仪计数斑点，每个斑点代表1个抗原特异性T淋巴细胞，分析VirB9刺激机体产生细胞免疫反应的情况。结果通过酶切克隆的方法成功地将VirB9全长基因741bp克隆至pET32a载体上。SDS—PAGE显示，VirB9蛋白的相对分子质量约43×103，纯度超过97％；BCA法检测，蛋白浓度为1．6异／L。免疫组小鼠血清虎红平板凝集试验阳性，试管凝集试验小鼠血清抗体滴度〉1：800；对照组小鼠血清虎红平板凝集试验阴性，试管凝集试验小鼠血清抗体滴度阴性。免疫组检测到抗VirB9蛋白抗体，抗体滴度均〉1：3200，对照组小鼠体内未检测到抗VirB9蛋白抗体的存在。酶联斑点图像分析显示，用VirB9蛋白体外刺激，免疫组小鼠5×10s个脾细胞中有147个细胞可以分泌IFN-r，对照组仅有38个细胞。结论在布鲁杆菌感染过程中，Ⅳ型分泌系统蛋白VirB9具有免疫原性．能够刺激小鼠产生体液免疫反应与细胞免疫反应。

关键词：布鲁杆菌 IV型分泌系统免疫原性疫苗

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酪氨酸激酶Btk在多发性骨髓瘤中的表达及作用研究

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湖北医药学院学报 2014年第6期33卷 528-532页

作者：余贤军江千里唐微刘莹湖北医药学院基础医学院生物化学教研室湖北十堰442000 南方医科大学附属南方医院血液科广东广州510515

目的:探讨布鲁顿氏酪氨酸激酶(Bruton's tyrosine kinase,Btk)在多发性骨髓瘤(Multiple myeloma,MM)中的作用。方法:荧光定量PCR及免疫印迹法检测MM细胞系中Btk的表达及磷酸化水平;免疫磁珠法分选9例MM患者骨髓中CD138+细胞,荧光定... 详细信息

目的:探讨布鲁顿氏酪氨酸激酶(Bruton's tyrosine kinase,Btk)在多发性骨髓瘤(Multiple myeloma,MM)中的作用。方法:荧光定量PCR及免疫印迹法检测MM细胞系中Btk的表达及磷酸化水平;免疫磁珠法分选9例MM患者骨髓中CD138+细胞,荧光定量PCR分析细胞中Btk表达,结合患者临床资料分析Btk表达和患者预后的关系。结果:Btk在MM细胞系中存在表达,且在地塞米松耐药细胞系中表达量和磷酸化水平高于地塞米松敏感细胞系;2例Btk表达量较高的MM患者预后较差。结论:Btk可能参与MM的地塞米松耐药和患者预后不良。

关键词：多发性骨髓瘤布鲁顿氏酪氨酸激酶(Btk) 预后指标

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卵黄抗体技术在人类胃肠道疾病诊治中的应用

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现代预防医学 2013年第17期40卷 3243-3245页

作者：石新丽杨靖王保宁李明远四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室河北中医学院湖北医药学院

随着细菌耐药性及肿瘤抗药性的不断出现,卵黄抗体技术(IgY技术)正逐渐成为研究热点。本文综述了IgY技术在人类消化道肿瘤的靶向治疗,细菌性、病毒性、真菌性消化道感染疾病的治疗以及寄生虫病的诊断等方面的应用。我们认为IgY技术在人... 详细信息

随着细菌耐药性及肿瘤抗药性的不断出现,卵黄抗体技术(IgY技术)正逐渐成为研究热点。本文综述了IgY技术在人类消化道肿瘤的靶向治疗,细菌性、病毒性、真菌性消化道感染疾病的治疗以及寄生虫病的诊断等方面的应用。我们认为IgY技术在人类胃肠道疾病诊治中有广阔的发展空间。

关键词： IgY技术卵黄抗体胃肠道疾病

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幽门螺杆菌体外培养影响因素探讨

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中国病原生物学杂志 2013年第7期8卷 595-597页

作者：邝玉杨远李婉宜李明远杨靖四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室四川成都610041 湖北医药学院微生物学教研室湖北十堰442000

目的探索影响幽门螺杆菌体外培养的影响因素。方法观察不同培养时间幽门螺杆菌的菌落特点和细菌形态特点,确定幽门螺杆菌的最佳培养时间;通过SYTO9/PI核酸染料对暴露于空气中不同时间的幽门螺杆菌进行死活菌的染色,估计幽门螺杆菌在空... 详细信息

目的探索影响幽门螺杆菌体外培养的影响因素。方法观察不同培养时间幽门螺杆菌的菌落特点和细菌形态特点,确定幽门螺杆菌的最佳培养时间;通过SYTO9/PI核酸染料对暴露于空气中不同时间的幽门螺杆菌进行死活菌的染色,估计幽门螺杆菌在空气中的存活时间。结果培养3d的幽门螺杆菌菌落为针尖大小、形态为典型弯曲杆菌,培养超过3d的幽门螺杆菌菌落直径可达1mm,菌体形态多为球型;荧光染色检查显示,暴露在空气中的幽门螺杆菌随着暴露时间的延长逐渐死亡,4h后几乎全部死亡。结论幽门螺杆菌体外培养最佳培养时间为3d,且菌体形态典型。幽门螺杆菌暴露于空气中的存活时间≤4h。

关键词：幽门螺杆菌培养荧光染色

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Noxa基因的克隆及其诱导A549细胞凋亡的研究

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四川大学学报（医学版） 2013年第5期44卷 713-716,726页

作者：陈登榜曹康杨靖潘渠陈恬李晋川王昕殷建华邹毅魏常友成都医学院成都610083 湖北医药学院微生物学教研室十堰442100 广东省食品药品监督管理局审评认证中心广州510080

目的克隆人Noxa基因,构建真核表达质粒pcDNA-Noxa,将重组质粒pcDNA-Noxa转染人肺癌A549细胞株,并观察重组质粒pcDNA-Noxa诱导A549细胞凋亡的作用。方法使用RT-PCR的方法扩增出Noxa基因,克隆至真核表达质粒pcDNA(-),构建出重组质粒pcDNA-... 详细信息

目的克隆人Noxa基因,构建真核表达质粒pcDNA-Noxa,将重组质粒pcDNA-Noxa转染人肺癌A549细胞株,并观察重组质粒pcDNA-Noxa诱导A549细胞凋亡的作用。方法使用RT-PCR的方法扩增出Noxa基因,克隆至真核表达质粒pcDNA(-),构建出重组质粒pcDNA-Noxa。将重组质粒pcDNA-Noxa转染人肺癌A549细胞株,使用Western blot的方法检测Noxa基因的过表达;使用Hoechst 33258染色,观察A549细胞的凋亡;使用MTT法检测细胞活力。结果经酶切和测序鉴定,重组质粒pcDNA-Noxa构建成功。Western blot检测出Noxa基因的过表达;Hoechst 33258染色和MTT实验发现:重组质粒pcDNA-Noxa能明显诱导A549细胞出现凋亡现象。结论本实验初步探索了Noxa基因的促凋亡作用,为以后进一步深入研究Noxa基因的促凋亡功能基础。

关键词： Noxa 克隆真核表达凋亡

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DNA损伤的同源重组修复机制

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西部医学 2013年第10期25卷 1586-1589页

作者：杨靖石新丽李莎王保宁李明远四川大学基础医学与法医学院微生物学教研室四川成都610041 湖北医药学院基础医学院微生物学教研室湖北十堰442000

自然界生物体的基因组保持其完整性是机体细胞发挥正常功能和维持基本生存的必要条件。基因组在染色体自我复制的过程中由于受到各种内源性因素或者外源性因素的影响,存在多种形式的损伤。DNA的双链断裂(DSB)是DNA最为严重的损伤形式,... 详细信息

自然界生物体的基因组保持其完整性是机体细胞发挥正常功能和维持基本生存的必要条件。基因组在染色体自我复制的过程中由于受到各种内源性因素或者外源性因素的影响,存在多种形式的损伤。DNA的双链断裂(DSB)是DNA最为严重的损伤形式,是诱发细胞学的反应最为复杂的、生物学的后果最为严重的、与恶性肿瘤等等健康相关问题的关系最为密切的损伤类型,如不能得到及时而准确地修复,可能会导致基因的突变、基因组的不稳定、细胞染色体的丢失和重组或者导致细胞的凋亡甚至癌变。现已发现同源重组修复途径(HR)是真核生物中DSB的主要修复途径和方式,本文就HR的组成和修复机制进行综述。

关键词： DNA双链断裂(DSB) 同源重组修复途径(HR) 肿瘤

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抗体的系统性检测方法

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四川生理科学杂志 2013年第3期35卷 121-123页

作者：杨靖孙卫兵邝玉湖北医药学院基础医学院微生物学教研室湖北十堰442000 四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室四川成都610041 湖北省十堰市西苑医院呼吸内科湖北十堰442000

21世纪随着现代生物技术、信息技术在生物医学工程学等研究领域的不断深入,以细胞工程技术和基因工程技术为主体的抗体工程药物近年来取得了突破性进展,其应用已涉及医学、农业、食品、环境等众多领域。当前生物医药正在成为发展潜力无... 详细信息

21世纪随着现代生物技术、信息技术在生物医学工程学等研究领域的不断深入,以细胞工程技术和基因工程技术为主体的抗体工程药物近年来取得了突破性进展,其应用已涉及医学、农业、食品、环境等众多领域。当前生物医药正在成为发展潜力无限的产业,而生物医药领域中发展最快的是抗体工程药物,在基础研究、蛋白纯化、环境与食品监测、疾病诊断预防及治疗和优生优育等方面均有不可替代的重要作用。虽然抗体的制备技术日趋完善,但用于诊断和治疗的抗体必须符合高纯度、高效价、高可用性的要求,对抗体的制备、分离和鉴定就显得尤为重要。本文简要阐述了抗体工程药物制备中对抗体成分的系统性检测方法,包括纯度检测、特异性检测、亲和力检测、效价检测等,并对抗体这种特殊蛋白的常用定量检测方法进行了比较。

关键词：抗体鉴定 ELISA Lowry法 BCA法

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幽门螺杆菌双基因多表位重组原核表达工程菌的构建及其表达特性的研究

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成都医学院学报 2013年第4期8卷 410-414页

作者：杨靖潘兴欧琴周法庭李建春祝捷周永君李明远王保宁四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室成都610041 湖北医药学院微生物学教研室十堰442000 四川万可泰生物技术有限责任公司成都610041

目的构建含幽门螺杆菌尿素酶保守基因序列ureI和ureB的双基因(简称IB)多表位原核表达质粒以及原核表达工程菌,并研究其微生物学特性。方法通过生物信息学方法从ureI和ureB基因中筛选T细胞和B细胞优势表位基因序列,人工合成所选择的表位... 详细信息

目的构建含幽门螺杆菌尿素酶保守基因序列ureI和ureB的双基因(简称IB)多表位原核表达质粒以及原核表达工程菌,并研究其微生物学特性。方法通过生物信息学方法从ureI和ureB基因中筛选T细胞和B细胞优势表位基因序列,人工合成所选择的表位基因序列并构建原核重组表达质粒pET28a(+)/IB。经限制性内切酶(EcoR I,Xho I)鉴定及DNA测序鉴定后,将重组质粒导入大肠杆菌BL21(DE3)。该工程菌经IPTG诱导后,用SDS-PAGE检测重组蛋白(rIB)的表达情况,用Western blot检测rIB的免疫反应性。结果构建的双基因多表位基因序列与所设计的一致;工程菌经IPTG诱导后做SDS-PAGE电泳显示,在28kD左右有一条明显蛋白条带,Western blot结果显示在28kD左右出现特异反应条带。结论成功构建含ureI和ureB双基因序列的原核表达质粒pET28a(+)/IB及工程菌,该工程菌表达的重组蛋白rIB能被抗幽门螺杆菌悉尼株(*** SS1)的特异抗体所识别,表明该新重组蛋白与幽门螺杆菌有高度相关性。

关键词：幽门螺杆菌双基因多表位原核表达

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