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木犀草素抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231中SDF-1α/CXCR4通路的作用

肿瘤基础与临床 2014年第3期27卷 199-202页

作者：李文仿欧琴张华赵宗彬王耕湖北医药学院附属太和医院普外三科湖北十堰442000 湖北医药学院基础医学院微生物学教研室湖北十堰442000

目的探讨木犀草素对乳腺癌细胞MDA-MB-231中SDF-1α/CXCR4信号通路抑制作用。方法采用不同浓度的木犀草素处理乳腺癌细胞MDA-MB-231,观察乳腺癌细胞MDA-MB-231的细胞增殖、趋化运动及CXCR4蛋白表达。结果木犀草素明显抑制乳腺癌细胞MDA-... 详细信息

目的探讨木犀草素对乳腺癌细胞MDA-MB-231中SDF-1α/CXCR4信号通路抑制作用。方法采用不同浓度的木犀草素处理乳腺癌细胞MDA-MB-231,观察乳腺癌细胞MDA-MB-231的细胞增殖、趋化运动及CXCR4蛋白表达。结果木犀草素明显抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖,明显抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231 CXCR4蛋白表达,并明显抑制SDF-1α/CXCR4对乳腺癌细胞MDA-MB-231的激活。结论木犀草素可抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖及SDF-1α/CXCR4介导的乳腺癌细胞的信号激活作用,在预防乳腺癌复发及转移中可能有重要的作用。

关键词：木犀草素乳腺癌 CXCR4

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Bmi-1基因表达与血管内皮细胞衰老的相关性

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湖北医药学院学报 2014年第4期33卷 318-320,331,F0002页

作者：王燕孙晓东王珺王汉琴湖北医药学院基础医学研究所湖北十堰442000 湖北医药学院解剖学教研室湖北十堰442000 湖北医药学院附属太和医院心血管内科湖北十堰442000

目的:探讨Bmi-1基因与人脐静脉内皮细胞(HUVECs)衰老的相关性,为研究血管内皮细胞衰老的分子机制打下基础。方法:采用细胞传代及肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激方法模拟内皮细胞衰老,用SA-β-半乳糖酐酶(SA-β-gal)染色检测衰老,Real-time ... 详细信息

目的:探讨Bmi-1基因与人脐静脉内皮细胞(HUVECs)衰老的相关性,为研究血管内皮细胞衰老的分子机制打下基础。方法:采用细胞传代及肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激方法模拟内皮细胞衰老,用SA-β-半乳糖酐酶(SA-β-gal)染色检测衰老,Real-time PCR检测P16INK4A及Bmi-1基因的表达变化。结果:随着细胞传代次数的增加,HUVECs体积变大,细胞浆内颗粒和空泡增多,β-gal阳性染色率显著增多,P16INK4A mRNA表达逐渐升高(第6、8代与第1代相比P<0.05),同时Bmi-1 mRNA表达下降(第2、4、6、8代与第1代相比均P<0.05)。TNF-α(10 ng/mL)孵育HUVECs 48 h,与对照组相比,P16INK4A mRNA表达明显增加(P<0.05),Bmi-1 mRNA表达下降(P<0.05)。结论:Bmi-1在衰老内皮细胞中表达显著降低,提示其在血管内皮细胞衰老发生发展中起重要作用。

关键词： Bmi-1 内皮细胞衰老 Real-time PCR

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窖蛋白-1在人肺浸润性腺癌中的表达及其与自噬的关系

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武汉大学学报（医学版） 2014年第1期35卷 20-25,36页

作者：宋建梁素美罗小青黄燕华薛敬玲陈洪雷湖北医药学院附属襄阳市第一人民医院肿瘤科湖北襄阳441000 武汉市肿瘤纳米诊断工程技术研究中心分子病理科湖北武汉430070 武汉大学基础医学院病理学教研室湖北武汉430071

目的:探讨窖蛋白-1(Cav-1)在人肺浸润性腺癌(PIA)组织中的表达以及与自噬标志物——微管相关蛋白轻链3B(MAP LC3B)的关系及它们的临床意义。方法:利用量子点免疫荧光组织化学(QDs-IHC)技术检测Cav-1和LC3B蛋白在肺腺癌组织芯片包括68例... 详细信息

目的:探讨窖蛋白-1(Cav-1)在人肺浸润性腺癌(PIA)组织中的表达以及与自噬标志物——微管相关蛋白轻链3B(MAP LC3B)的关系及它们的临床意义。方法:利用量子点免疫荧光组织化学(QDs-IHC)技术检测Cav-1和LC3B蛋白在肺腺癌组织芯片包括68例PIA组织和10例非癌性肺组织中的表达;同时在10例PIA和10例非癌性肺组织中利用定量实时PCR检测Cav-1和LC3B mRNA的变化。结果:与非癌变肺组织相比,Cav-1和LC3B蛋白和mRNA在肺浸润性腺癌肿瘤细胞的表达均显著降低(P<0.05)。Cav-1在肿瘤细胞和基质的表达均与腺泡为主型PIA的病理分级显著相关(P<0.05),而与其他临床病理参数均无关(P>0.05)。LC3B在贴壁型的PIA阳性率为60.0%(9/15)显著高于腺泡为主型PIA的阳性率26.3%(10/38)(P<0.05),与其他临床病理参数均无关(P>0.05)。Cav-1和LC3B蛋白在肿瘤细胞的表达呈显著正相关(P=0.028,r=0.267)。结论:无论是在肿瘤细胞还是基质,Cav-1表达缺失可促进肺浸润性腺癌的形成,其机制可能与肿瘤细胞自噬不足有关。

关键词：肺腺癌窖蛋白-1 癌相关成纤维细胞自噬

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免疫抑制蝎毒活性肽Im169的重组表达和功能鉴定

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湖北医药学院学报 2014年第5期33卷 458-463,F0002页

作者：陈宗运朱国新谢明红华敏曹志贱李文鑫吴英亮湖北医药学院基础医学院生物化学教研室湖北十堰442000 湖北医药学院基础医学研究所湖北十堰442000 武汉大学生命科学学院病毒学国家重点实验室湖北武汉430072

目的:筛选鉴定新型蝎毒免疫活性肽。方法:从海南斑等蝎(Isometrus maculates)毒腺组织c DNA文库中筛选和分离蝎毒肽基因,通过GST融合蛋白表达纯化、肠激酶酶切和高压液相色谱(HPLC)分离的方法,获得色谱纯重组蝎毒活性肽,酶联免疫吸附(EL... 详细信息

目的:筛选鉴定新型蝎毒免疫活性肽。方法:从海南斑等蝎(Isometrus maculates)毒腺组织c DNA文库中筛选和分离蝎毒肽基因,通过GST融合蛋白表达纯化、肠激酶酶切和高压液相色谱(HPLC)分离的方法,获得色谱纯重组蝎毒活性肽,酶联免疫吸附(ELISA)实验检测细胞因子,鉴定免疫调节活性。结果:筛选得到一个新的蝎毒活性肽基因Im169,其编码的成熟肽由29个氨基酸组成,其中含有6个半胱氨酸。Im169多肽对T淋巴细胞IL-2、TNF-α和IFN-γ等细胞因子的分泌具有明显的抑制作用,且作用呈浓度依赖性(P<0.05)。序列分析显示:Im169多肽和蝎钾通道毒素的相似性最高,提示其是一个潜在的钾通道毒素多肽。功能机制分析显示:Im169多肽通过抑制T细胞表面的钾通道,从而发挥免疫抑制功能。结论:发现了一个新的蝎毒免疫调节肽,丰富了对蝎毒活性肽的功能认识,为自身免疫疾病的药物开发提供了新的多肽模板。

关键词：蝎毒素免疫抑制重组多肽 cDNA文库

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TCRγ9/δ2(OT3)-Fc融合蛋白体内抗肿瘤效果研究

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湖北医药学院学报 2014年第2期33卷 106-109,F0002页

作者：郭阳郑静胡愉崔莲仙何维湖北医药学院基础医学院免疫教研室湖北十堰442000 北京协和医学院基础学院中国医学科学院基础医学研究所免疫学系北京100005

目的:研究TCRγ9/δ2(OT3)-Fc融合蛋白在体内抗肿瘤效果。方法:通过同位素99mTc标记技术观察TCRγ9/δ2(OT3)-Fc在荷瘤裸鼠体内的显像和分布,观察TCRγ9/δ2(OT3)-Fc对荷瘤裸鼠肿瘤生长和生存期的影响。结果:在荷瘤裸鼠体内99mTc-TCRγ9... 详细信息

目的:研究TCRγ9/δ2(OT3)-Fc融合蛋白在体内抗肿瘤效果。方法:通过同位素99mTc标记技术观察TCRγ9/δ2(OT3)-Fc在荷瘤裸鼠体内的显像和分布,观察TCRγ9/δ2(OT3)-Fc对荷瘤裸鼠肿瘤生长和生存期的影响。结果:在荷瘤裸鼠体内99mTc-TCRγ9/δ2(OT3)-Fc与肿瘤组织有明显的结合,并且其可抑制荷瘤裸鼠肿瘤生长速度,延长小鼠生存期。结论:本研究初步证实TCRγ9/δ2(OT3)-Fc在荷瘤裸鼠体内有一定的抗肿瘤效果,为肿瘤靶向性抗体治疗提供了新的思路。

关键词： TCRγ9 δ2(OT3)-Fc 肿瘤靶向治疗荷瘤裸鼠

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酪氨酸激酶Btk在多发性骨髓瘤中的表达及作用研究

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湖北医药学院学报 2014年第6期33卷 528-532页

作者：余贤军江千里唐微刘莹湖北医药学院基础医学院生物化学教研室湖北十堰442000 南方医科大学附属南方医院血液科广东广州510515

目的:探讨布鲁顿氏酪氨酸激酶(Bruton's tyrosine kinase,Btk)在多发性骨髓瘤(Multiple myeloma,MM)中的作用。方法:荧光定量PCR及免疫印迹法检测MM细胞系中Btk的表达及磷酸化水平;免疫磁珠法分选9例MM患者骨髓中CD138+细胞,荧光定... 详细信息

目的:探讨布鲁顿氏酪氨酸激酶(Bruton's tyrosine kinase,Btk)在多发性骨髓瘤(Multiple myeloma,MM)中的作用。方法:荧光定量PCR及免疫印迹法检测MM细胞系中Btk的表达及磷酸化水平;免疫磁珠法分选9例MM患者骨髓中CD138+细胞,荧光定量PCR分析细胞中Btk表达,结合患者临床资料分析Btk表达和患者预后的关系。结果:Btk在MM细胞系中存在表达,且在地塞米松耐药细胞系中表达量和磷酸化水平高于地塞米松敏感细胞系;2例Btk表达量较高的MM患者预后较差。结论:Btk可能参与MM的地塞米松耐药和患者预后不良。

关键词：多发性骨髓瘤布鲁顿氏酪氨酸激酶(Btk) 预后指标

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流感病毒多表位核酸疫苗CTB-Eg的构建及表达特性研究

流感病毒多表位核酸疫苗CTB-Eg的构建及表达特性研究

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中华医学会2014全国微生物学与免疫学学术年会

作者：寇静远潘兴杨靖石新丽黄筱钧邓昭敏秦臻王保宁李明远李婉宜四川大学微生物学教研室湖北医药学院微生物学教研室河北中医学院基础医学院

目的由于流感病毒的基因结构呈节段性分布,当人流感病毒和禽流感病毒同时感染同一个体时,这种特殊的基因排列方式极可能通过其基因重组而产生一种对人类全新的流感病毒株,从而导致流感的全球性暴发流行。因此,流感疫苗的研究焦点是研发...

目的由于流感病毒的基因结构呈节段性分布,当人流感病毒和禽流感病毒同时感染同一个体时,这种特殊的基因排列方式极可能通过其基因重组而产生一种对人类全新的流感病毒株,从而导致流感的全球性暴发流行。因此,流感疫苗的研究焦点是研发对不同亚型流感病毒都具有交叉保护作用的通用型长效疫苗,而多表位基因疫苗的构想有望实现这一目标。本研究设计、构建含分子内佐剂的流感病毒多表位基因疫苗CTB-Eg,并检测其真核表达载体pEGFP-C2/CTB-Eg在HEK293T细胞

关键词：

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幽门螺杆菌在胃癌形成中的作用机制

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四川生理科学杂志 2014年第1期36卷 27-31页

作者：谢铁松雷如军邵义敏杨靖刘益国十堰市铁路医院湖北十堰442716 湖北医药学院基础医学院微生物学教研室湖北十堰442000 四川大学基础医学与法医学院微生物学教研室四川成都610041

尽管近年来胃癌的发病率和死亡率有所下降,但在世界范围内它仍位于常见恶性肿瘤发病率和死亡率的第二位。胃癌的形成是一个多因素、多步骤的复杂过程,幽门螺杆菌感染、宿主遗传因素和环境因素等共同决定了这个过程。本文综述了近年来幽... 详细信息

尽管近年来胃癌的发病率和死亡率有所下降,但在世界范围内它仍位于常见恶性肿瘤发病率和死亡率的第二位。胃癌的形成是一个多因素、多步骤的复杂过程,幽门螺杆菌感染、宿主遗传因素和环境因素等共同决定了这个过程。本文综述了近年来幽门螺杆菌在胃癌形成中的作用机制研究进展,探明幽门螺杆菌与胃癌相关的特异性因子或特异性作用链有助于人类胃癌的防治。

关键词：幽门螺旋杆菌胃癌机制

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布鲁杆菌Ⅳ型分泌系统蛋白VirB9免疫原性检测

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中华地方病学杂志 2013年第3期32卷 263-266页

作者：范金明王发兴张波江玲李蓓湖北医药学院基础医学院微生物教研室十堰442000 湖北医药学院基础医学院第一临床学院十堰442000

目的检测布鲁杆菌Ⅳ型分泌系统蛋白VirB9的免疫原性，寻找潜在的、新的布鲁杆菌亚单位疫苗靶标。方法采用双酶切的方法，将布鲁埃希菌VirB9基因全长克隆至原核表达载体pET32a上，将克隆后载有VirB9基因的pET32a质粒转化至大肠杆菌BL21（... 详细信息

目的检测布鲁杆菌Ⅳ型分泌系统蛋白VirB9的免疫原性，寻找潜在的、新的布鲁杆菌亚单位疫苗靶标。方法采用双酶切的方法，将布鲁埃希菌VirB9基因全长克隆至原核表达载体pET32a上，将克隆后载有VirB9基因的pET32a质粒转化至大肠杆菌BL21（DE3）中，异丙基-13-D-硫代吡喃半乳糖苷（IPTG）诱导重组VirB9蛋白在大肠埃希菌中的表达。利用重组VirB9蛋白所携带的His标签，通过Ni—NAT层析，纯化在大肠杆菌中重组表达的VirB9蛋白．再通过十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶（SDS—PAGE）电泳和二喹啉甲酸（BCA）蛋白定量试剂盒对纯化的蛋白进行纯度及浓度检测。用布鲁杆菌疫苗株S19株免疫BALB／c小鼠，并以磷酸盐缓冲液（PBS）为对照。在免疫4周后，鼠尾取血，血清虎红平板凝集试验、试管凝集试验检查小鼠血清抗体；酶联免疫吸附试验（ELISA）检测$19株免疫小鼠体内抗VirB9抗体滴度。在免疫后第35天，取小鼠脾脏，分离脾细胞，利用Elispot技术，检测VirB9蛋白体外再刺激后分泌细胞因子（干扰素-1，IFN-1）的脾细胞数，酶联斑点图像仪计数斑点，每个斑点代表1个抗原特异性T淋巴细胞，分析VirB9刺激机体产生细胞免疫反应的情况。结果通过酶切克隆的方法成功地将VirB9全长基因741bp克隆至pET32a载体上。SDS—PAGE显示，VirB9蛋白的相对分子质量约43×103，纯度超过97％；BCA法检测，蛋白浓度为1．6异／L。免疫组小鼠血清虎红平板凝集试验阳性，试管凝集试验小鼠血清抗体滴度〉1：800；对照组小鼠血清虎红平板凝集试验阴性，试管凝集试验小鼠血清抗体滴度阴性。免疫组检测到抗VirB9蛋白抗体，抗体滴度均〉1：3200，对照组小鼠体内未检测到抗VirB9蛋白抗体的存在。酶联斑点图像分析显示，用VirB9蛋白体外刺激，免疫组小鼠5×10s个脾细胞中有147个细胞可以分泌IFN-r，对照组仅有38个细胞。结论在布鲁杆菌感染过程中，Ⅳ型分泌系统蛋白VirB9具有免疫原性．能够刺激小鼠产生体液免疫反应与细胞免疫反应。

关键词：布鲁杆菌 IV型分泌系统免疫原性疫苗

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幽门螺杆菌多靶点疫苗工程菌BIB发酵及纯化工艺研究

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成都医学院学报 2014年第5期9卷 538-544页

作者：潘兴王保宁杨靖李健春祝捷周永君王红仁李明远李婉宜四川大学华西基础医学与法医学院微生物教研室成都610041 四川万可泰生物技术有限责任公司成都610041 湖北医药学院微生物教研室十堰442000

目的初步建立重组幽门螺杆菌多靶点疫苗工程菌（BIB）的高密度发酵及其蛋白纯化工艺。方法以摇瓶发酵结果为基础,放大工艺至50L发酵罐中,对影响目的蛋白收率的因素如发酵培养基、工作种子接种量、诱导剂浓度、诱导起始时间、诱导持续时... 详细信息

目的初步建立重组幽门螺杆菌多靶点疫苗工程菌（BIB）的高密度发酵及其蛋白纯化工艺。方法以摇瓶发酵结果为基础,放大工艺至50L发酵罐中,对影响目的蛋白收率的因素如发酵培养基、工作种子接种量、诱导剂浓度、诱导起始时间、诱导持续时间及诱导剂添加方式等进行优化验证;并利用rBIB蛋白高等电点特性（pI=9.05）,在pH 7.0-7.5的磷酸盐缓冲液中目的蛋白带正电荷,采用阳离子交换层析进行纯化,对阳离子交换层析填料及纯化缓冲液的pH进行优化。结果经高密度发酵后BIB菌体产量为70g/L,蛋白表达量为32%;rBIB蛋白经阳离子交换层析纯化后其纯度为91.8%。结论该工艺的初步建立为深入研究rBIB蛋白性质及其规模化生产奠定了基础。

关键词：幽门螺杆菌疫苗高密度发酵阳离子交换层析尿素酶B亚单位

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