检索结果-内蒙古大学图书馆

实验室是高等学校从事教学、科研的重要基地,也是高等学校实施素质教育培养学生创新和提高实践能力的重要场所。实验室管理建设研究是目前教学改革中的一大课题,全国各地高校都在进行实验室管理建设的研究。我经历了湖北医药学院两年多的计算机实验室的实践教学工作,总结提出我对湖北医药学院计算机实验室管理建设的研究及展望。

关键词：高校计算机实验室管理

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分段扩增法克隆大鼠5-脂肪氧合酶cDNA并鉴定其序列

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中华老年心脑血管病杂志 2016年第3期18卷 300-304页

作者：董晓柯尊平王俊峰周明李军许海军谭利党书毅十堰市太和医院(湖北医药学院附属太和医院)心内科 442000 湖北医药学院计算机实验教学中心

目的 5-脂肪氧合酶(5-LO)是炎性介质白三烯合成过程中的限速酶,本研究克隆大鼠5-LO cDNA编码区,旨在为利用大鼠5-LO分析白三烯在血管壁炎症中的作用做准备。方法从SD大鼠胚肝中提取mRNA并逆转录成cDNA,找出5-LO cDNA中独特的内切酶位点... 详细信息

目的 5-脂肪氧合酶(5-LO)是炎性介质白三烯合成过程中的限速酶,本研究克隆大鼠5-LO cDNA编码区,旨在为利用大鼠5-LO分析白三烯在血管壁炎症中的作用做准备。方法从SD大鼠胚肝中提取mRNA并逆转录成cDNA,找出5-LO cDNA中独特的内切酶位点,再设计2对引物,扩出都含此酶切位点的5-LO cDNA片段。用高保真酶分段扩增出2个5-LO cDNA片段,再正确拼接,克隆成功后酶切鉴定并测序。将获取的cDNA序列与NCBI和Ensembl数据库比较序列的差异。结果用Oligo(dT)和随机引物从SD大鼠胚肝总mRNA中逆转录cDNA。以5-LO cDNA独特的PmlⅠ内切酶位点为分界点,扩增出5′端1339bp和3′端790bp的5-LO cDNA片段,将2个片段正确地拼接在pBluescriptⅡSK(+)中。经EcoRⅠ和XhoⅠ酶切和测序显示,重组质粒中包含有5-LO cDNA编码区全长2025bp,它与Ensembl数据库中的序列完全一致,但与NCBI数据库中的序列有较大的差异。结论用分段扩增法从SD大鼠胚肝中成功克隆出全长5-LO cDNA编码区,并证实了其序列的正确性。

关键词：脂氧合酶 DNA 互补 RNA 信使质粒白三烯类克隆分子

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不同腹腔灌洗液分离培养原代大鼠腹腔巨噬细胞的效率比较及细胞鉴定

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湖北医药学院学报 2017年第5期36卷 418-421,428,F0003页

作者：董晓柯尊平周明王俊峰党书毅李军谭利十堰市太和医院.湖北医药学院附属医院心内科湖北医药学院胚胎干细胞研究湖北省重点实验室湖北医药学院计算机实验教学中心湖北十堰442000

目的:探索最优化的腹腔巨噬细胞分离与培养方法,为体外研究巨噬细胞提供一种简便易行、高效的方法。方法:分别用0.9%氯化钠溶液(对照组)、PBS、无血清高糖DMEM、10%血清高糖DMEM灌洗大鼠腹腔5 min,无菌状态下吸出灌洗液,离心后收集腹腔... 详细信息

目的:探索最优化的腹腔巨噬细胞分离与培养方法,为体外研究巨噬细胞提供一种简便易行、高效的方法。方法:分别用0.9%氯化钠溶液(对照组)、PBS、无血清高糖DMEM、10%血清高糖DMEM灌洗大鼠腹腔5 min,无菌状态下吸出灌洗液,离心后收集腹腔巨噬细胞,对比不同灌洗液获取细胞数量和活性的差异,通过形态观察、HE染色、吉姆萨染色和CD68免疫组织化学染色对培养的腹腔巨噬细胞进行鉴定。结果:统计每毫升不同腹腔灌洗液获得的细胞数,结果发现PBS组和10%FBS高糖DMEM组与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),无血清高糖DMEM进行腹腔灌洗后获得的细胞数明显多于其他各组(4.13±0.15)×106/m L,差异有统计学意义(P<0.05)。台盼兰染色显示DMEM组[(97.83±0.65)%]和10%FBS DMEM组[(97.90±1.10)%]细胞活性较高,与对照组[(95.50±0.76)%]相比差异有统计学意义(P<0.05),PBS组[(96.17±1.04)%]细胞活性与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),所有灌洗液获得巨噬细胞活性均在95%以上。分离培养的细胞经HE染色、吉姆萨染色和CD68免疫组化染色鉴定为巨噬细胞。结论:无血清高糖DMEM是高效获取大鼠腹腔巨噬细胞的灌洗液,该方法是一种简易实用的体外分离大鼠腹腔巨噬细胞的方法。

关键词：腹腔巨噬细胞大鼠原代培养鉴定免疫组织化学

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大鼠5-脂肪氧合酶cDNA的重组腺病毒制备及在大鼠血管外膜成纤维细胞中的表达

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岭南心血管病杂志 2016年第2期22卷 201-206页

作者：董晓柯尊平王俊峰周明谭利党书毅湖北医药学院附属太和医院心内科湖北省十堰市442000 湖北医药学院胚胎干细胞研究湖北省重点实验室湖北省十堰市442000 湖北医药学院计算机实验教学中心湖北省十堰市442000

目的利用细菌内同源重组法快速构建携带大鼠5-脂肪氧合酶(5-lipoxygenase,5-LO)cDNA的重组腺病毒质粒和制备表达大鼠5-LO的重组腺病毒,并在大鼠原代血管外膜成纤维细胞中实现过表达。方法聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)... 详细信息

目的利用细菌内同源重组法快速构建携带大鼠5-脂肪氧合酶(5-lipoxygenase,5-LO)cDNA的重组腺病毒质粒和制备表达大鼠5-LO的重组腺病毒,并在大鼠原代血管外膜成纤维细胞中实现过表达。方法聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增大鼠5-LOcDNA片段,亚克隆至腺病毒穿梭质粒中,构建成转移质粒pshuttle-CMV-5LO;用PmeI线性化的pshuttle-CMV-5LO转化含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的感受态BJ5183,通过同源重组获得阳性重组质粒pAdEasy-1-5LO。重组质粒经鉴定后用Pad酶切,转入HEK293细胞,包装成重组腺病毒Ad-1-5LO,经纯化,鉴定,滴度测定,转染体外培养的大鼠原代血管外膜成纤维细胞,Western blot检测腺病毒载体在体外的过表达。结果 5-LOcDNA成功地插入到穿梭质粒中,pshuttle-CMV-5LO与pAdEasy-1在BJ5183中成功发生了同源重组,得到了重组腺病毒质粒pAdEasy-1-5LO,重组腺病毒经PCR和酶切鉴定表明携带有目的基因5-LOcDNA,滴度约为1.0×10^(15)pfu/L,转染大鼠原代血管外膜成纤维细胞后经Western blot检测,细胞内5-LO的表达明显增加。结论细菌内同源重组法构建腺病毒载体具有高效、省时、省力的特点,制备出的高滴度重组腺病毒Ad-1-5LO实现了在血管外膜成纤维细胞中的过表达,为研究5-LO途径在血管重构中的作用奠定了基础。

关键词： 5-脂肪氧合酶白三烯腺病毒载体同源重组克隆

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基于物联网的计算机实验室管理模式研究

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无线互联科技 2013年第8期10卷 17-17页

作者：李明柯尊平朱根湖北医药学院计算机实验教学中心湖北十堰442000

实验室的管理模式是一项非常重要的任务,以往的计算机实验室的管理模式存在非常多的不足。运用物联网来实现计算机实验室的管理,可以实现动态管理、随时管理,可以将工作量有效的降低、将工作效率合理的提升。

关键词：物联网计算机实验室管理模式

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