检索结果-内蒙古大学图书馆

华中农业大学学报 2017年第5期36卷 30-38页

作者：何璋超高知枭毕凯赵莹程家森谢甲涛付艳苹姜道宏陈桃华中农业大学植物科学技术学院/华中农业大学农业微生物学国家重点实验室/华中农业大学湖北省作物病害监测和安全控制重点实验室武汉430070

为探寻根肿菌侵染拟南芥后期寄主代谢的生物标志物,将罹患根肿病的油菜根切块进行组织培养,获得较为纯化的、单一的根肿菌接种体,与拟南芥种子在1/2MS培养基上共培养,利用液相色谱-质谱联用(LCMS)技术的非靶向代谢组学方法分析根肿菌侵... 详细信息

为探寻根肿菌侵染拟南芥后期寄主代谢的生物标志物,将罹患根肿病的油菜根切块进行组织培养,获得较为纯化的、单一的根肿菌接种体,与拟南芥种子在1/2MS培养基上共培养,利用液相色谱-质谱联用(LCMS)技术的非靶向代谢组学方法分析根肿菌侵染后期拟南芥根部代谢物差异。组织培养结果表明,根肿菌可以在愈伤组织中生长和繁殖;共培养结果显示45d后拟南芥侧根尖端肿大,显微观察显示根肿菌能完成侵染循环;代谢组数据PCA和PLS-DA分析结果显示试验组(接种根肿菌)和对照组(未接种根肿菌)明显分离;OPLSDA分析和t检验结果表明重要的差异代谢物包括油菜素内酯、类黄酮、木质素、萜类、甾体皂苷和磷脂等物质。提示这些物质可能在根肿菌侵染后期时拟南芥与根肿菌的相互作用中起重要作用。

关键词：根肿菌拟南芥组织培养代谢变化 LC-MS

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核盘菌病毒与寄主互作的分子机制研究

核盘菌病毒与寄主互作的分子机制研究

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中国菌物学会第七届全国会员代表大会暨2017年学术年会

作者：吴松松郑丹李波程家森付艳苹陈桃姜道宏谢甲涛华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北省作物病害监测和安全控制重点实验室华中农业大学植物科学技术学院

真菌病毒(mycovirus,或fungal virus)是一类感染真菌并在其中复制的病毒,广泛存在于植物病原真菌之中。有些病毒可以引起具有传染特性的真菌毒力衰退(低毒)现象,具有潜在的应用价值。将携带低毒相关病毒的低毒菌株施用到田间,有可能诱... 详细信息

真菌病毒(mycovirus,或fungal virus)是一类感染真菌并在其中复制的病毒,广泛存在于植物病原真菌之中。有些病毒可以引起具有传染特性的真菌毒力衰退(低毒)现象,具有潜在的应用价值。将携带低毒相关病毒的低毒菌株施用到田间,有可能诱发病原真菌群体致病力出现持久性衰退,抑制病害的发生和流行,达到高效、持久安全控制真菌病害的目的。同时,利用低毒相关病毒与核盘菌分子互作模式,可解析植物病原真菌发育、致病等分子机理,将对作物真菌病害防控研究具有显著的促进作用。我们前期采集核盘菌24000余株,筛选获得菌落形态异常及致病力降低(或丧失)的核盘菌菌株约500余株。通过高通量深度测序分析,发现核盘菌群体中含有丰富的病毒资源,已获得包括dsRNA、ssRNA、环状ss DNA病毒在内的180余种病毒,分别隶属于23个科,且多数病毒为未曾报道或分类地位不确定的新病毒。其中,病毒SsMYRV4分离自核盘菌低毒菌株SX10,该病毒基因组包含12条dsRNA片段,是典型的真菌呼肠孤病毒,与核盘菌低毒特性相关。当含有SsRYMV4的核盘菌菌株与不亲和性菌株接触时,SsMYRV4抑制寄主核盘菌G蛋白基因、及多数营养体亲和性相关基因(含有het基因保守结构域)的表达,从而降低寄主由于程序性细胞死亡反应(PCD)而引发的不亲和性反应。细胞染色、显微观察均证实携带SsMYRV4的菌株能够与其它隶属于不同营养体亲和群的个体发生菌丝融合。与其它弱毒相关病毒(如SsDRV和SsMV1等)共侵染同一菌株时,SsMYRV4促进其它病毒在不同VIC个体间传播。因此,Ss MYRV4及其感染的核盘菌可以作为病毒的传播"桥梁",促进病毒在核盘菌群体中的传播。SsMYRV4这种特性为其他具有生防潜力、但受限于菌丝营养体不亲和性限制的RNA病毒的防病应用提供了可能,病毒介导的低毒菌株多数表现出营养生长缺陷,野外存活能力较差的特性,该特性也是真菌病毒实践应用存在的缺陷之一。SsMYRV4可以增强寄主对环境的适应能力(如增加耐高渗能力和耐活性氧的能力等)。研究结果为揭示真菌非我识别分子机制研究提供新的研究思路,同时为利用真菌病毒控制作物病害提供了新的策略。

关键词：核盘菌真菌病毒互作分子机制

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感染病毒条件下砂梨PpmiR397a的鉴定及表达分析

感染病毒条件下砂梨PpmiR397a的鉴定及表达分析

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中国植物病理学会2017年学术年会

作者：杨岳昆王国平洪霓王利平华中农业大学植物科学技术学院湖北省作物病害监测与安全控制重点实验室华中农业大学农业微生物学国家重点实验室

苹果茎沟病毒(Apple stem grooving virus,ASGV)是我国栽培梨上普遍携带的一种病毒。miRNA是一类非编码21-24nt小RNA,在转录水平或翻译水平上通过调控靶基因进而对植物生长发育、信号转导、抗病抗逆中起重要调控作用。前期研究经小RNA... 详细信息

苹果茎沟病毒(Apple stem grooving virus,ASGV)是我国栽培梨上普遍携带的一种病毒。miRNA是一类非编码21-24nt小RNA,在转录水平或翻译水平上通过调控靶基因进而对植物生长发育、信号转导、抗病抗逆中起重要调控作用。前期研究经小RNA高通量测序发现并获得了ASGV感染条件下砂梨(Pyrus pyrifolia)茎尖部位表达的一些保守的miRNAs以及梨特有的新的miRNAs。已有文献报道miR397a通过靶标漆酶基因在维管束细胞壁形成,木质素合成中发挥功能。为探究病毒感染条件下PpmiR397a在梨中的功能,本研究选取了砂梨"金水二号"小RNA文库中生物信息学分析存在的miR397a(命名为PpmiR397a),采用茎环引物反转录法(Stem-loop RT-PCR)对PpmiR397a成熟体进行了克隆鉴定。预测PpmiR397a前体在梨基因组DNA上的位置,克隆获得相应的前体序列,对其进行克隆,构建了PpmiR397a超量表达载体,为探究PpmiR397a在梨中基因功能提供材料。进而采用RLM-RACE法验证了PpmiR397a与梨漆酶家族成员Lac4基因(命名为Pp-Lac4)在miRNA结合处的第10和第11位碱基间存在靶标切割关系,克隆获得了Pp-Lac4基因的CDS序列,明确其在漆酶家族中的分类地位。结合有毒和无毒梨离体植株茎尖和基部的横截石蜡切片显微观察,结合qRT-PCR对病毒感染条件下PpmiR397a及其对应的靶基因Pp-Lac4在梨不同组织部位进行表达量联合分析,结果显示,无毒梨植株茎尖和茎基部部位木质化程度均高于感染ASGV病毒植株部位,且Pp-Lac4基因不同部位表达量与木质化程度正相关,PpmiR397a与PpLac4存在负调控关系。本研究结果初步表明携带ASGV与无病毒梨植株的木质化程度差异与PpmiR397a对靶基因Pp-Lac4的调控存在一定的相关性,相关研究还在进一步试验中。

关键词：砂梨 miRNA 苹果茎沟病毒茎环引物反转录法

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真菌病毒对梨轮纹病菌差异基因表达的影响

真菌病毒对梨轮纹病菌差异基因表达的影响

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中国植物病理学会2017年学术年会

作者：王利华罗慧洪霓王国平王利平华中农业大学植物科学技术学院湖北省作物病害监测与安全控制重点实验室华中农业大学农业微生物学国家重点实验室

梨轮纹病是由葡萄座腔菌[Botryosphaeria dothidea(Moug:Fr)Ces&De Not]引起的真菌病害,能够造成梨树枝条枯死、枝干粗皮和溃疡,果实腐烂。轮纹病在我国南北梨产区的为害呈逐年加重趋势,弱毒相关病毒导致植物病原真菌致病力衰退,可... 详细信息

梨轮纹病是由葡萄座腔菌[Botryosphaeria dothidea(Moug:Fr)Ces&De Not]引起的真菌病害,能够造成梨树枝条枯死、枝干粗皮和溃疡,果实腐烂。轮纹病在我国南北梨产区的为害呈逐年加重趋势,弱毒相关病毒导致植物病原真菌致病力衰退,可作为梨轮纹病生物防治的另一条重要途径。真菌病毒导致植物病原真菌的弱毒相关特性是病毒与寄主在长期进化过程中相互作用的结果,被病毒侵染后寄主基因表达受到影响。研究介导梨轮纹病菌毒力衰退相关真菌病毒与寄主互作,从转录水平上分析病毒与寄主互作关系,旨在明确真菌病毒引起梨轮纹病菌致病力衰退的关键基因及梨轮纹病菌应答病毒侵染的分子机制,挖掘防治梨轮纹病潜在的基因资源,为梨轮纹病害防治提供新途径。本研究以复合感染产黄青霉病毒(BdCV1)和双分体病毒(BdPV1)的梨轮纹菌株LW-1、单独感染BdCV1的LW-C、单独感染BdPV1的LW-P以及无病毒感染的Mock菌株作为四组材料,构建了4个文库(分别命名为LW-CP,LW-C,LW-P和Mock),进行de novo测序,共获得30 058个Unigene基因,平均长度为2 128bp,在7大基因数据库进行了注释,明确了功能分类。分析真菌病毒感染条件下梨轮纹病菌3组对比文库,获得了LW-CP/Mock上调表达基因5 605个,下调基因3 301个;LW-C/Mock上调表达基因4 478个,下调基因4 311个;LW-P/Mock上调表达基因2 596个,下调表达基因2 328个。以上结果表明:受BdCV1病毒感染的差异表达基因数量最多,推测BdCV1对梨轮纹病菌寄主基因表达影响明显。采用RT-qPCR对病毒感染条件下候选的9个差异基因表达量进行分析,检测结果与转录组测序得到的表达趋势一致,验证了RNAseq测序结果的可靠性,明确了这些差异基因在病毒感染条件下的表达模式。另外,在梨轮纹病菌中检测到参与基因沉默途径的几个关键基因(Ago、Dicer和Rd和)且在病毒感染条件下为上调表达。对病毒感染条件下3组对比文库的差异表达基因进行GO功能注释和KEGG通路分析,结果显示,这些基因主要在代谢途径以及生物合成二级代谢途径中显著富集,参与细胞复制、信号转导、抗病防御等途径;相关关键基因功能研究还在进一步试验中。

关键词：沙梨梨轮纹病葡萄座腔菌 De novo测序真菌病毒产黄青霉病毒

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来源于湖北地区的梨轮纹病菌菌株携带真菌病毒多样性的研究

来源于湖北地区的梨轮纹病菌菌株携带真菌病毒多样性的研究

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中国植物病理学会第十三届青年学术研讨会

作者：罗慧王利华胡旺成洪霓王国平王利平华中农业大学植物科学技术学院湖北省作物病害监测与安全控制重点实验室华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070

梨轮纹病是主要由葡萄座腔菌(Botryosphaeria dothidea)引起的一类真菌病害,在我国梨产区以及栽培园中均有感染,造成梨树枝干、果实产生轮纹状病斑,通常与腐烂病和干腐病混合感染导致梨树衰退和死亡.真菌病毒(mycovirus)是一类以真菌为...

梨轮纹病是主要由葡萄座腔菌(Botryosphaeria dothidea)引起的一类真菌病害,在我国梨产区以及栽培园中均有感染,造成梨树枝干、果实产生轮纹状病斑,通常与腐烂病和干腐病混合感染导致梨树衰退和死亡.真菌病毒(mycovirus)是一类以真菌为寄主的病毒,它在真菌中普遍存在,大多数对病原真菌的营养生长,菌落形态,致病力等无影响,也有少部分对真菌的生长速率,产孢能力,致病力等生物学特性有严重影响.目前,应用低毒相关病毒防治病原真菌是研究的热点,如板栗疫病和油菜菌核病,均对真菌病害起到很好的生防效果.随着梨轮纹病危害逐年加重,寻找新的、安全有效的措施防治梨轮纹病显得尤为迫切,弱毒相关病毒导致病原真菌致病力衰退,可作为果树病害生防的另一条重要途径.本实验室随机采集来源于"湖北省武汉市果树茶叶研究所砂梨种质资源圃"发病梨树枝干病样,对其进行分离和纯化,经鉴定共获得了 13份梨轮纹病菌菌株,对其进行离体接种"皇冠"梨果和"丰水"叶片,测定其致病力.结果表明,13份分离株均能在梨果和叶片上形成典型的黄褐色或深褐色大小不同的轮纹状病斑,表明来源于湖北地区的梨轮纹病菌菌株对其寄主梨具有不同程度的致病性.对13份分离株进行dsRNA提取和检测,发现12份菌株均携带分子量不同大小的dsRNA片段,感染真菌病毒率为92.3％(12/13).对13份分离株携带dsRNA片段大小及带型进行观察,3份分离株携带的dsRNA带型一致,均含有分子量在1～7 kb之间的7条dsRNA条带,初步推测复合感染2种以上真菌病毒.其他9份菌株的dsRNA条带位置均位于以上分离株携带7条带型中的某一条或2条条带以上带型位置.以上结果初步表明,来源于湖北地区梨轮纹病菌携带真菌病毒具有多样性,将其dsRNA进行cDNA克隆和测序,明确其病毒种类,为真菌病毒的分类提供新资源,也为果树轮纹病害生物防治提供真菌病毒资源.

关键词：

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核盘菌弱毒菌株DT-8菌剂研发及其田间应用研究

核盘菌弱毒菌株DT-8菌剂研发及其田间应用研究

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中国植物病理学会2016年学术年会

作者：曲正谢甲涛付艳萍陈桃程家森姜道宏湖北省作物病害监测和安全控制重点实验室华中农业大学植物科学技术学院华中农业大学农业微生物学国家重点实验室

菌核病是由核盘菌引起的重要病害,严重影响了油菜、大豆和向日葵等作物及蔬菜的生产安全。本课题组前期从感染油菜的菌株DT-8中分离和鉴定了一种核盘菌低毒衰退相关DNA病毒1(SsHADV-1),该DNA病毒不仅可导致核盘菌毒力衰退,而且可以在核... 详细信息

菌核病是由核盘菌引起的重要病害,严重影响了油菜、大豆和向日葵等作物及蔬菜的生产安全。本课题组前期从感染油菜的菌株DT-8中分离和鉴定了一种核盘菌低毒衰退相关DNA病毒1(SsHADV-1),该DNA病毒不仅可导致核盘菌毒力衰退,而且可以在核盘菌不同营养亲和型菌株间进行有效传播,具有很大的生防价值,有潜力发展成一种新型生物"杀菌剂"。本研究在前期研究的基础上,通过优化发酵条件,发现在100r/min,不调节pH值,初始接种浓度为9%的条件下,获得的发酵产物干重最高,可达(5.329±0.750)g/L。产物经研磨,添加防腐剂0.05%硫酸链霉素、防霉剂液体石蜡油、保护剂4%海藻糖、防冻剂甘油、紫外保护剂核黄素后,得到了活菌数达10CFU/mL的水悬浮剂。制剂的悬浮率达91.83%,消泡性优良,在4℃下贮藏28d后带毒率达65%,且贮藏期间没有腐败发霉现象。这些发酵条件、助剂和剂型的优化,为DT-8菌株的规模化生产和商品制剂开发奠定了基础。田间防效实验在湖北省鄂州市、江陵县试验田进行。设置蕾薹期喷施、始花期喷施、盛花期喷施3个单独生长期喷施处理,蕾薹期、始花期连续喷施和蕾薹期、始花期、盛花期连续喷施2个不同生长期连续喷施处理。每次以每亩施用10%的发酵液15L为标准进行喷施。在收获期调查各处理发病情况,证明我们研制的DT-8制剂在油菜蕾薹期、始花期、盛花期连续喷施后,油菜菌核病的发病程度均显著降低,可以起到明显的防病效果,具有一定的应用前景。

关键词：弱毒菌株 DT-8 剂型

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腐烂病菌的GFP标记及其在梨叶片组织中的侵染和扩展观察

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果树学报 2015年第6期32卷 1195-1200,I0004,I0005页

作者：贾娜娜翟立峰白晴陈晓忍王彩霞洪霓王国平华中农业大学植物科学技术学院湖北省作物病害监测与安全控制重点实验室武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 青岛农业大学山东青岛266109

【目的】明确梨腐烂病菌强、弱致病力菌株在梨树叶片组织中的侵染及扩展情况。【方法】利用农杆菌介导的遗传转化(agrobacterium-mediated transformation technique,ATMT)方法对梨腐烂病菌强、弱致病力菌株进行绿色荧光蛋白(green loor... 详细信息

【目的】明确梨腐烂病菌强、弱致病力菌株在梨树叶片组织中的侵染及扩展情况。【方法】利用农杆菌介导的遗传转化(agrobacterium-mediated transformation technique,ATMT)方法对梨腐烂病菌强、弱致病力菌株进行绿色荧光蛋白(green looresent protein,GFP)标记,并筛选出和野生型菌株比较在生长速度、培养特性以及致病力都没有发生显著变化的阳性转化子菌株;利用荧光显微技术观察其在梨树叶片组织中的侵染和扩展,比较强、弱致病力菌株的侵染差异。【结果】强、弱致病力菌株在叶片上侵染存在差异。菌丝主要在叶片的上表皮扩展,菌丝扩展前端的叶片组织颜色发生变化,形成一段变色带,强致病力菌株侵染形成的变色带较弱致病力菌株形成的变色带宽,强致病力菌株菌丝在叶片组织上的分布较稀疏。【结论】梨腐烂病菌菌丝主要在叶片的上表皮组织扩展;强致病力菌株的侵入能力较强,其在叶片上扩展时菌丝分布较稀疏,扩展前端形成的变色带宽。

关键词：梨腐烂病菌农杆菌介导遗传转化绿色荧光蛋白标记侵染扩展

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核盘菌和灰葡萄孢受病毒SsPV1感染后弱毒特性的研究

核盘菌和灰葡萄孢受病毒SsPV1感染后弱毒特性的研究

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中国菌物学会2015年学术年会

作者：谢甲涛程家森陈桃付艳苹姜道宏华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北省作物病害监测和安全控制重点实验室华中农业大学植物科学技术学院

核盘菌和灰葡萄孢同属于核盘菌科的世界性分布重要植物病原真菌,在我国造成的危害重大。采用PEG介导灰葡萄孢原生质体的方法,将源自核盘菌弱毒菌株WF-1中的双分病毒科病毒Sclerotinia sclerotiorum partitivirus 1（SsPV1）转染灰葡萄... 详细信息

核盘菌和灰葡萄孢同属于核盘菌科的世界性分布重要植物病原真菌,在我国造成的危害重大。采用PEG介导灰葡萄孢原生质体的方法,将源自核盘菌弱毒菌株WF-1中的双分病毒科病毒Sclerotinia sclerotiorum partitivirus 1（SsPV1）转染灰葡萄孢菌株KY-1后,导致被转染的灰葡萄孢菌株KY-1V表型发生变化。相比于野生型灰葡萄孢菌株,被病毒感染的菌株在PDA培养基上生长速度缓慢,产分生孢子时间提前且产孢子量显著增加,后期产菌核数量少或不产菌核,对番茄、拟南芥等植物的致病力减低。表明病毒SsPV1在灰葡萄孢中可以引致毒力衰退特性,目前已报道的双分病毒可以侵染真菌、植物及原生动物,但是感染该类病毒的自然寄主均不表现明显病毒症状。真菌病毒难以突破营养体亲和型限制进行有效传播是真菌病毒作物生物防治资源进行应用时的瓶颈。菌株WF-1与雪腐核盘菌和小核盘菌对峙培养后,发现对峙后的雪腐核盘菌和小核盘菌生长速度减缓、致病力减弱,呈现弱毒特性。dsRNA提取及RT-PCR证实病毒SsPV1已转移至两个不同种的核盘菌菌株中。首次证明真菌中的dsRNA可以在不同种的真菌间水平传播,表明菌株SsPV1的侵染力强,同时也预示SsPV1在灰葡萄孢不同种间可能也具有强传播能力。因此,SsPV1是可以引致真菌毒力衰退且具有较强传播特性的一种极具生防潜力的新型真菌病毒。

关键词：植物病原真菌核盘菌灰葡萄孢真菌病毒弱毒现象

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荸荠感染两种RNA病毒的鉴定

荸荠感染两种RNA病毒的鉴定

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中国植物病理学会第十二届青年学术研讨会

作者：张方鹏洪霓王国平王利平华中农业大学植物科学技术学院湖北省作物病害监测与安全控制重点实验室华中农业大学农业微生物学国家重点实验室

荸荠属莎草科（Cyperaceae）荸荠属（Eleocharis ***.）一种营养价值较高的水生蔬菜。在生产中,荸荠一经感染病毒,通过球茎无性繁殖后代带毒,导致荸荠产量和品质的降低。目前,国内外对于荸荠病毒病的报道仅有CMV感染和一种DNA病毒（未... 详细信息

荸荠属莎草科（Cyperaceae）荸荠属（Eleocharis ***.）一种营养价值较高的水生蔬菜。在生产中,荸荠一经感染病毒,通过球茎无性繁殖后代带毒,导致荸荠产量和品质的降低。目前,国内外对于荸荠病毒病的报道仅有CMV感染和一种DNA病毒（未发表）。本研究于2014年至今对湖北团风县及广西农科院资源圃的荸荠样品进行了疑似病毒病害调查,采集其叶状茎材料进行小RNA测序,通过数据分析发现样品中潜带两种新的正单链RNA病毒,暂且命名为Water chestnut virus 1（WCV1）和Water chestnut virus 2（WCV2）。利用数据拼接得到的contigs设计引物对其序列进行扩增,获得的序列进行生物信息学分析,WCV1基因组含有的开放阅读框分别编码甲基转移酶（Met）、解旋酶（Hel）、依赖RNA的RNA聚合酶（RdRp）、热激70蛋白（HSP70h）、外壳蛋白（CP）。基于RdRp和HSP70h氨基酸序列分析,WCV1与长线形病毒科（Closteroviridae）其他成员的相似性分别为30%9%和27%7%;与Closteroviridae病毒其他几个属成员进化树分析,WCV1独立为一个组群,推测WCV1为Closteroviridae新属的一个成员。另外,WCV2基因组编码的开放阅读框主要有外壳蛋白（CP）、NTP结合结构域（NTPbinding domin）、蛋白酶（Pro）、依赖RNA的RNA聚合酶（RdRp）;基于RdRp氨基酸序列分析,WCV2与伴生病毒科（Secoviridae）矮化病毒属（Waikavirus）成员相似性最高,为55%7%,在系统进化中与该属其他成员聚集为独立分支,推测WCV2为Waikavirus的一个新成员。此外,基于WCV1HSP70h保守区域以及WCV2 RdRp区域设计引物对采集自湖北团风和广西农科院的样品进行检测。结果表明,湖北样品中携带有WCV1,广西样品复合感染WCV1和WCV2,且WCV1核苷酸序列分析表明来源于湖北和广西样品的相似性为98%9%。本研究首次明确了荸荠样品感染两种新的RNA病毒,相关内容还在进一步研究中。

关键词：荸荠小RNA测序 Closteroviridae Secoviridae HSP70h RdRp

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荸荠潜带一种DNA病毒,为Soymovirus一个新种

荸荠潜带一种DNA病毒,为Soymovirus一个新种

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中国植物病理学会2015年学术年会

作者：张方鹏洪霓王国平王利平华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学植物科学技术学院湖北省作物病害监测与安全控制重点实验室

荸荠是一种营养价值较高的蔬菜,目前报道仅感染黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)。2012年至今对荸荠种植区和资源圃进行了疑似病毒病害调查,发现一些荸荠样品表现为扭曲、矮化、褪绿等症状。本研究从湖北团风县采集的表现为褪绿... 详细信息

荸荠是一种营养价值较高的蔬菜,目前报道仅感染黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)。2012年至今对荸荠种植区和资源圃进行了疑似病毒病害调查,发现一些荸荠样品表现为扭曲、矮化、褪绿等症状。本研究从湖北团风县采集的表现为褪绿,皱缩,扭曲疑似病毒病症状荸荠样品,于华农果树脱毒中心温室进行盆栽保存,取其叶状茎材料进行深度测序,将所得片段进行拼接后得到contigs,在数据库中比对发现与Peanut chlorotic streak virus(PCSV)核苷酸序列相似性较高,设计引物扩增其基因组全长序列,获得该DNA病毒的基因组全长序列为7.5kb,全长核苷酸序列同源性与大豆褪绿斑驳病毒属(Soymovirus)成员最高,为48%2%。软件预测其该病毒基因组全长序列含有8个ORFs,基于序列生物信息学分析推测其ORFⅠ编码运动蛋白(movement protein,MP)ORFⅣ编码外壳蛋白(coat protein,CP),ORFV编码多聚蛋白,包括逆转录酶蛋白,天冬氨酸蛋白酶和核糖核酸酶(reverse transcriptase,aspartic proteinase和ribonuclease H),ORFⅥ编码转录激活蛋白(translational transactivator protein),其他几个ORFs在数据库中比对不到任何同源性,其功能未知。WCV不同ORFs核苷酸序列与花椰菜花叶病毒科(Caulimoviridae)不同成员进化树分析显示该病毒聚集在Soymovirus组群中,与该组群其他种病毒处于不同分支,该DNA病毒为该属中一新成员,暂命名为WCV(Water chestnut DNA virus)。此外,采集自广西和湖北疑似病毒症状和无任何症状表现的荸荠样品进行WCV检测,结果表明100%荸荠潜带WCV;进而采用WCV cp基因标记探针进行Southern杂交,发现荸荠植物基因组DNA有杂交条带,结果表明WCV序列整合于荸荠基因组,为内源性DNA病毒,是否存在游离形式正在研究中。另外,通过对荸荠样品小RNA序列分析,结果表明来源于WCV的荸荠小RNA(virus-derived small RNAs,vsRNA)主要为21和22nt,22nt为峰值,vsRNA对负义链具有一定的偏向性;vsRNA在WCV基因组中分布不均匀,在一些区域存在沉默热点,推测该病毒触发了寄主基因沉默机制,相关研究需进一步证实。

关键词：荸荠 Soymovirus Southern杂交小RNA测序 virus-derived small RNAs

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