检索结果-内蒙古大学图书馆

中国植物病理学会2015年学术年会

作者：刘娟张雪娇洪霓王国平王利平华中农业大学植物科学技术学院湖北省作物病害监测与安全控制重点实验室华中农业大学农业微生物学国家重点实验室石河子大学

我国梨产区种植的梨树普遍感染苹果茎沟病毒(Apple stem grooving virus,ASGV),对树势、产量和品质都有严重影响。目前,防治梨树病毒的有效措施是获得无病毒苗木,而热处理结合茎尖组织培养是获取无病毒苗的主要方法,但有关热处理脱除病... 详细信息

我国梨产区种植的梨树普遍感染苹果茎沟病毒(Apple stem grooving virus,ASGV),对树势、产量和品质都有严重影响。目前,防治梨树病毒的有效措施是获得无病毒苗木,而热处理结合茎尖组织培养是获取无病毒苗的主要方法,但有关热处理脱除病毒的分子机理尚不清楚,严重影响了病毒的脱除效率。最近文献也报道了许多关于外界环境条件下植物寄主体内microRNA(miRNA)调控与病毒之间的互作研究。本研究对37℃热处理和作为对照的24℃正常培养1 d和5d的感染ASGV沙梨"金水二号"茎尖组织部位混合样品进行取样作为研究材料,采用小RNA高通量测序发掘了热处理条件下沙梨茎尖组织部位相应的miRNAs,鉴定了保守的和新的miRNAs;对其高温条件下梨差异表达miRNAs调控的靶标基因进行GO功能分析,结果表明miRNAs调控的靶基因涉及代谢,刺激反应等生物过程,参与抗病防卫反应,激素信号转导途径等,揭示了高温诱导下miRNA在梨寄主基因调控网络方面有重要作用,推测其在寄主与病原互作中起重要调控作用。此外对热处理条件miRNAs及靶基因与病毒累积量之间的关系进行了分析,结果表明高温条件下差异表达的miRNAs在梨茎尖与基部部位的表达模式不同,具有组织特异性。关联分析了miRNA靶标基因在梨茎尖和基部的表达模式,结果表明茎部组织miRNA大多负调控相应抗病防御作用的靶标基因。Real-time检测结果显示ASGV cp基因在热处理条件下梨茎尖和基部表达量均降低,表明高温抑制了病毒在寄主体内的复制。因此,高温处理条件下miRNA及调控靶标基因在梨茎尖和基部表达模式与病毒积累量之间的对应分析结果揭示了miRNA参与调控靶标基因在降低梨茎尖病毒浓度过程中具有重要的调控作用。研究结果为明确高温热处理脱梨茎尖除病毒的分子机理提供了一定的信息。

关键词：沙梨热处理高通量小RNA测序 ASGV miRNA

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砂梨离体植株不同组织部位提取总RNA的效果分析

砂梨离体植株不同组织部位提取总RNA的效果分析

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中国植物病理学会第十届全国会员代表大会暨2014年学术年会及第四届中美植物病理学学术研讨会

作者：刘娟洪霓王国平王利平华中农业大学植物科学技术学院/湖北省作物病害监测与安全控制重点实验室/农业微生物学国家重点实验室

砂梨离体植株中富含单宁、多糖,在提取核酸时易污染,使其降解,提取质量差。因此,本研究对砂梨离体植株不同部位材料核酸提取进行了不同方法的效果比较,旨在确定用于提取砂梨不同部位组织部位获得高质量的核酸提取效果最佳方法。以砂梨... 详细信息

砂梨离体植株中富含单宁、多糖,在提取核酸时易污染,使其降解,提取质量差。因此,本研究对砂梨离体植株不同部位材料核酸提取进行了不同方法的效果比较,旨在确定用于提取砂梨不同部位组织部位获得高质量的核酸提取效果最佳方法。以砂梨离体植株"金水2号"叶片和茎秆为材料,采用改进的CTAB、实验室建立的SDS-过柱法（专利号:ZL201010509840.2）和Trizol（Invitrogen公司）法提取样品核酸总RNA。结果表明,采用Trizol法,样品上样量超过0.1g,核酸降解;叶片样品上样量最适为0.05g左右,裂解于1mL溶液中,电泳可清楚观察到28S、18S和5S三条核糖体RNA完整带型,无DNA条带污染,OD/OD值都在1.8～2.0,无蛋白污染,质量好。提取茎秆部位样品,电泳检测无完整的核酸RNA条带,总RNA均存在不同程度的降解。采用SDS-过柱法提取总RNA,琼脂糖电泳可以看出叶片、茎尖、茎秆中部和茎基部组织材料所提取的RNA完整性都很好,没有拖尾现象,但却有较高浓度的基因组DNA污染。对比Trizol方法和SDS-过柱法,本研究采用了CTAB法提取"金水2号"叶片和茎秆的茎尖、中部和基部组织样品,最适上样量为0.05～0.1g/mL。电泳可清楚观察到28S、18S和5S三条核糖体RNA,带型完整,无可见条带的DNA污染,紫外分光光度计检测OD/OD值也均在1.8～2.0,无蛋白污染。结果表明,采用CTAB法可以有效提取其砂梨离体组织不同部位总RNA,用于病毒检测及其RNA-sequence转录组测序等后继试验研究。

关键词：砂梨 CTAB SDS-过柱法 total RNA

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砂梨离体植株不同组织部位提取总RNA的效果分析

砂梨离体植株不同组织部位提取总RNA的效果分析

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中国植物病理学会2014年学术年会

作者：刘娟洪霓王国平王利平华中农业大学植物科学技术学院/湖北省作物病害监测与安全控制重点实验室/农业微生物学国家重点实验室武汉430070

砂梨离体植株中富含单宁、多糖,在提取核酸时易污染,使其降解,提取质量差.因此,本研究对砂梨离体植株不同部位材料核酸提取进行了不同方法的效果比较,旨在确定用于提取砂梨不同部位组织部位获得高质量的核酸提取效果最佳方法.以砂梨离... 详细信息

砂梨离体植株中富含单宁、多糖,在提取核酸时易污染,使其降解,提取质量差.因此,本研究对砂梨离体植株不同部位材料核酸提取进行了不同方法的效果比较,旨在确定用于提取砂梨不同部位组织部位获得高质量的核酸提取效果最佳方法.以砂梨离体植株"金水2号"叶片和茎秆为材料,采用改进的CTAB、实验室建立的SDS-过柱法(专利号：ZL2010 10509840.2)和Trizol(Invitrogen公司)法提取样品核酸总RNA.结果表明,采用Trizol法,样品上样量超过0.1g,核酸降解;叶片样品上样量最适为0.05g左右,裂解于1mL溶液中,电泳可清楚观察到28S、18S和5S三条核糖体RNA完整带型,无DNA条带污染,OD260/OD280值都在1.8 ～2.0,无蛋白污染,质量好.提取茎秆部位样品,电泳检测无完整的核酸RNA条带,总RNA均存在不同程度的降解.采用SDS-过柱法提取总RNA,琼脂糖电泳可以看出叶片、茎尖、茎秆中部和茎基部组织材料所提取的RNA完整性都很好,没有拖尾现象,但却有较高浓度的基因组DNA污染.对比Trizol方法和SDS-过柱法,本研究采用了CTAB法提取"金水2号"叶片和茎秆的茎尖、中部和基部组织样品,最适上样量为0.05 ～0.1g/mL.电泳可清楚观察到28S、18S和5S三条核糖体RNA,带型完整,无可见条带的DNA污染,紫外分光光度计检测OD260/OD280值也均在1.8 ～2.0,无蛋白污染.结果表明,采用CTAB法可以有效提取其砂梨离体组织不同部位总RNA,用于病毒检测及其RNA-sequence转录组测序等后继试验研究.

关键词：砂梨 CTAB SDS-过柱法 total RNA

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我国梨树腐烂病菌致病力分化分析

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果树学报 2013年第4期30卷 657-664页

作者：张美鑫翟立峰周玉霞陈晓忍贾娜娜洪霓王国平华中农业大学植物科学技术学院.湖北省作物病害监测与安全控制重点实验室华中农业大学.农业微生物学国家重点实验室武汉430070

【目的】研究明确我国梨树腐烂病菌致病力的分化状况。【方法】梨离体枝条经打孔法造成伤口后接种梨树腐烂病菌,通过接种在5个梨系统(白梨、沙梨、秋子梨、西洋梨和新疆梨)不同品种上观测和比较不同来源菌株的致病力差异,并根据各菌株... 详细信息

【目的】研究明确我国梨树腐烂病菌致病力的分化状况。【方法】梨离体枝条经打孔法造成伤口后接种梨树腐烂病菌,通过接种在5个梨系统(白梨、沙梨、秋子梨、西洋梨和新疆梨)不同品种上观测和比较不同来源菌株的致病力差异,并根据各菌株的综合致病力强弱划分为不同类型,分析致病力分化与菌株来源间的相关性。【结果】研究发现来源于我国14省市5个梨系统的91份梨树腐烂病菌株在不同梨品种上的致病力均存在显著性差异,但同一菌株在5个梨品种上的症状反应程度有异。根据各供试菌株在不同梨品种上的综合致病力强弱可将其划分为3个类型,其中强致病力菌株16份,占17.6%;中致病力菌株70份,占76.9%;弱致病力菌株5份,占5.5%。来源于不同地区和梨系统的菌株之间其致病类型的分布比例存在明显的差异,这种差异可能与其梨系统的抗病性相关。【结论】来源于我国不同地区和梨系统的梨树腐烂病菌存在明显的致病力分化,其综合致病力可划分为强、中、弱3个致病类型,以中等致病力菌株为优势群体。

关键词：梨树腐烂病菌菌株致病力分化

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梨腐烂病致病力的室内快速测定方法研究

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果树学报 2013年第2期30卷 317-322,F0003页

作者：张美鑫翟立峰周玉霞陈晓忍贾娜娜洪霓王国平华中农业大学植物科学技术学院湖北省作物病害监测与安全控制重点实验室华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070

【目的】为了研究建立我国梨腐烂病致病力室内快速、稳定的测定方法,【方法】以‘丰水梨’的离体枝条、叶片、嫩梢和果实为材料,采用不同方法造成伤口后接种梨腐烂病的强致病力菌株F-AH-3a,在25℃下保湿培养后观测各处理的发病程度,并... 详细信息

【目的】为了研究建立我国梨腐烂病致病力室内快速、稳定的测定方法,【方法】以‘丰水梨’的离体枝条、叶片、嫩梢和果实为材料,采用不同方法造成伤口后接种梨腐烂病的强致病力菌株F-AH-3a,在25℃下保湿培养后观测各处理的发病程度,并在‘丰水梨’和‘康德梨’上用梨腐烂病致病力已知的菌株对测定方法进行验证。【结果】叶片伤口接种,叶正面的病斑较背面的大,经6针与1和3针刺伤处理产生的病斑大小之间存在显著性差异;嫩梢和果实伤口接种,不同处理产生的病斑大小之间无显著性差异;枝条伤口接种3d后,经打孔、环割、烫打及10针刺伤处理的枝条发病率均为100%,而经3针刺伤、烫伤和芽痕处理的分别为55%、40%和15%。前4种处理病斑的长度显著大于后3种处理。在‘丰水梨’和‘康德梨’品种上,用5个梨腐烂病致病力已知菌株对测定方法进行验证的结果表明,各菌株通过枝条打孔接种后产生的病斑,在其长度之间的差异与菌株致病力已知的强弱相吻合。【结论】采用枝条打孔接种法的测定效果显著、稳定,且操作简单,可用于梨腐烂病菌致病力的室内快速测定。

关键词：梨腐烂病致病力室内测定枝条打孔接种

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我国梨腐烂病病原菌的初步鉴定及序列分析

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果树学报 2013年第1期30卷 140-146,F0004页

作者：周玉霞程栎菁张美鑫翟立峰洪霓王国平王利平华中农业大学植物科学技术学院湖北省作物病害监测与安全控制重点实验室华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070

【目的】为了对我国梨腐烂病病原菌进行初步鉴定和序列分析,【方法】从我国15个省（市）梨产区采集腐烂病样品并观察其田间危害症状,通过组织分离法分离获得168份梨腐烂病菌分离株,从中选取72份进行单孢纯化,共获得79份梨腐烂病菌纯化... 详细信息

【目的】为了对我国梨腐烂病病原菌进行初步鉴定和序列分析,【方法】从我国15个省（市）梨产区采集腐烂病样品并观察其田间危害症状,通过组织分离法分离获得168份梨腐烂病菌分离株,从中选取72份进行单孢纯化,共获得79份梨腐烂病菌纯化分离株;观察在PDA、25℃黑暗条件下病原菌菌落形态以及产孢体形态,并对其在梨枝条上产生的分生孢子器徒手切片置显微镜下观察其结构特征和分生孢子形态;采用菌丝块接种法测定梨腐烂病菌在‘翠冠’梨离体枝条上的致病力。对部分菌株rDNA-ITS进行PCR扩增、测序,利用BLAST软件与GenBank数据库进行序列相似性分析,并用MEGA 4.1和邻接法构建系统发育树。【结果】根据梨腐烂病菌各分离株在PDA上的菌落形态特征可分为Ⅰ型和Ⅱ型两种菌落类型,不同梨腐烂病菌分离株在PDA上产生多种类型的产孢体,不同梨腐烂病菌菌株在离体梨树枝条上的致病力存在差异,我国梨腐烂病菌的rDNA-ITS核苷酸序列一致率为99.98%~100%,与苹果腐烂病菌分别聚在同一亚组的两个分支。【结论】我国梨腐烂病病原菌存在不同的菌落类型,其rDNA-ITS核苷酸序列分析显示均为*** ***。

关键词：梨腐烂病苹果腐烂病 rDNA-ITS 致病力

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芋病毒病田间调查及毒氟磷对芋病毒病的防治效果

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长江蔬菜 2012年第16期 108-110页

作者：王彦芬 Syeda Amber Kazmi 曲林宁王国平刘玉平洪霓华中农业大学植物科学技术学院湖北省作物病害监测与安全控制重点实验室武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉市蔬菜科学研究所

对芋病毒病及类似病害症状进行调查,其症状表现主要分为羽状花叶、叶片向上卷曲并伴有黄化或花叶、脉间黄化、明亮褪绿黄斑、褪绿斑点(斑驳)及叶片皱缩和叶缘黄化。采用RT-PCR和PCR技术对随机采集的32份表现症状的鄂芋一号样品进行了芋... 详细信息

对芋病毒病及类似病害症状进行调查,其症状表现主要分为羽状花叶、叶片向上卷曲并伴有黄化或花叶、脉间黄化、明亮褪绿黄斑、褪绿斑点(斑驳)及叶片皱缩和叶缘黄化。采用RT-PCR和PCR技术对随机采集的32份表现症状的鄂芋一号样品进行了芋花叶病毒(DsMV)和芋杆状病毒(TaBV)2种病毒的检测,检出率均为68.8%。同时,利用30%毒氟磷可湿性粉剂500倍液和1 000倍液对芋病毒病进行田间药效试验,第一次施药后10 d调查,毒氟磷可湿性粉剂500倍液和1 000倍液的防治效果分别为30.9%和24.9%;第二次施药后15 d调查,500倍液和1 000倍液防治效果分别为72.8%和59.4%。田间药剂试验结果表明,毒氟磷可湿性粉剂500倍液比1 000倍的防治效果好,从田间芋头长势可看出,毒氟磷对芋头生长有明显的促进作用。

关键词：芋病毒病防治效果毒氟磷

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柑橘衰退病毒中国分离物的全基因组测序分析

柑橘衰退病毒中国分离物的全基因组测序分析

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中国植物病理学会2012年学术年会

作者：吴官维唐敏王国平洪霓华中农业大学植物科学技术学院/湖北省作物病害监测和安全控制实验室农业微生物学国家重点实验室

柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)属于长线形病毒科(Closteroviridae),长线形病毒属(Closterovirus),是目前已知的最大的植物病毒,对世界柑橘生产影响很大(Martelli等,2002;Moreno等,2008)。CTV为正单链RNA病毒,基因组全长约19.3kb,包括12个开放阅读框,编码至少17种蛋白,3′端无poly(A)尾结构。为了探究CTV的起源、进化及基因功能等,国外学者对CTV的分子变异及基因组序列特点进行了大量的研究,目前已报道或在GenBank登录有来自不同国家或地区的15个CTV分离物全基因组序列,而尚无来源于中国的CTV全基因组序列的报道。本研究前期通过蚜传试验获得单一侵染甜橙的CTV分离物AT-1,对其CP基因进行Hinf/RFLP分析表明该分离物为第3组群,为中国CTV分离物的优势组群。本研究选取该分离物进行了全基因组测序及序列分析。通过对已报道CTV分离物基因组序列进行的多重比对,针对11个相对保守位点设计引物,预期扩增产物大小为0.9～2.2 kb,各扩增片段之间重叠区域为100～300bp,两端非翻译区采用5′-race和3′-race扩增得到。随机选取各扩增产物的3个克隆进行测序。序列分析结果表明,各扩增片段的克隆间的核苷酸相似性均达到99.9%以上,该结果进一步证明该柑橘样品为分离物AT-1单一侵染。对各测序片段用ContigExpress软件进行序列拼接,重叠区域相似性≥99%视为来源于同一序列。CTV-AT-1全基因组大小为19 252nt(GenBank accession ***061137),与来自西班牙的T318A大小相同,且相似性最高,达96.7%,其次为来自日本的NUagA(96.6%)、来自美国佛罗里达的SY568(94.2%)和以色列的VT(93.8%),均属于VT组群;与属于T36组群的埃及分离物Qaha、墨西哥分离物Mexico和美国佛罗里达分离物T36相似性最低,为77.0%～77.6%。NJ法构建的全基因组系统进化树进一步证明,AT-1与NUagA和VT等分离物遗传距离较近,聚在同一分支。基因组5′和3′非编码区序列分析表明,AT-1分别与VT和来自新西兰的NZ-B18相似性最高,分别为98.0%和98.9%。CTV-AT-1分离物的阅读框未出现缺失和移码现象,但其P61基因相比VT、T36、T385和NZ-M16等分离物,在N端多了3个aa(Q536th-N537th-R538th),相比T318A和NZ-B18等分离物,N端多了1个氨基酸(R538th)。

关键词： CTV AT-1 全基因组柑橘

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樱桃坏死锈斑病毒cp基因原核表达、抗血清制备及应用

樱桃坏死锈斑病毒cp基因原核表达、抗血清制备及应用

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中国植物病理学会2012年学术年会

作者：周菊芳曲林宁王利平王国平洪霓华中农业大学植物科学技术学院/湖北省作物病害检测和安全控制实验室农业微生物学国家重点实验室

樱桃坏死锈斑病毒(cherry necrotic rusty mottle virus,CNRMV)为线形病毒科(Flexiviridae)凹陷病毒属(Foveavirus)的暂定种,基因组全长约为8.4 kb的+ssRNA病毒。CNRMV主要在北美、欧洲、新西兰和亚洲的日本有发生报道。已发现CNRMV能... 详细信息

樱桃坏死锈斑病毒(cherry necrotic rusty mottle virus,CNRMV)为线形病毒科(Flexiviridae)凹陷病毒属(Foveavirus)的暂定种,基因组全长约为8.4 kb的+ssRNA病毒。CNRMV主要在北美、欧洲、新西兰和亚洲的日本有发生报道。已发现CNRMV能侵染李属(Prunus)植物中的甜樱桃(Prunus avium)和樱花(*** L.),感病植株叶片表现褐色坏死斑和锈状褪绿斑等症状,该病毒能通过嫁接传播,尚未发现传播该病毒的昆虫介体。目前尚无该病毒的血清学试剂市售,对该病毒的检测多采用RT-PCR技术。本研究于2011年从我国山东烟台随机采集了3份酸樱桃(*** L.)和9份甜樱桃样品,采用RT-PCR方法从2份酸樱桃和1份表现褪绿斑

关键词：抗血清原核表达制备及应用

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CTV茎痘株系诱导墨西哥梾檬（Citrus aurantifolia）差异表达EST文库的构建

CTV茎痘株系诱导墨西哥梾檬（Citrus aurantifolia）差异表达EST...

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中国植物病理学会2012年学术年会

作者：杨帆王国平洪霓华中农业大学植物科学技术学院/湖北省作物病害检测和安全控制实验室农业微生物学国家重点实验室

柑橘衰退病毒（Citrus tristeza virus,CTV）是一种正单链RNA（+ssRNA）病毒,为长线性病毒科（Closteroviridae）长线性病毒属（Closterovirus）成员,能够侵染现有的绝大多数柑橘品种或近缘种。其引起的柑橘衰退病在世界各大柑橘产区均...

柑橘衰退病毒（Citrus tristeza virus,CTV）是一种正单链RNA（+ssRNA）病毒,为长线性病毒科（Closteroviridae）长线性病毒属（Closterovirus）成员,能够侵染现有的绝大多数柑橘品种或近缘种。其引起的柑橘衰退病在世界各大柑橘产区均有发生,是柑橘产业为害最为严重的病毒病之一。已有的研究结果表明,植物病毒在侵入寄主以及在寄主植株内复制、移动的过程中会改变寄主细胞正常的基因表达谱,造成某些基因表达量出现较大变化。这一变化过程由于可能揭示病毒与寄主互作过程中的关键基因及其作用途径而被广泛研究。本研究中所使用的CTV分离物N21能够在其指示植物墨西哥梾檬上产生明显的茎陷点症状。为了分析这种CTV茎痘株系对墨西哥梾檬基因表达的影响,筛选与病毒侵染过程相关的基因。分别以健康和感染N21的墨西哥梾檬作为Driver和Tester,运用抑制差减杂交技术（Suppression Subtractive Hybridization,SSH）,构建了一个正向和反向库容量各为7 000个克隆的差减文库。经反向Northern杂交筛选,最终获得657 EST序列。使用BlastX和Blast2GO软件对这些序列的同源性及生物学功能进行分析表明:除去未找到同源序列的117个EST片段,剩下的EST片段来源于430个基因,依据其生物学功能可分为8个大类。类别及其所占比例分别为:代谢,25.8%;蛋白质代谢,14.9%;抗逆及防御反应,14%;能量,8%;转录,10.5%;转运,9.8%;信号转导,6%;其他功能,2.3%;未知功能,7.2%。随机挑选25个EST片段进行荧光定量PCR验证,结果表明这些基因在Tester和Driver中的表达差异在1.5～10倍。选取表达差异较大的EST片段进行进一步分析,以期得到这些片段在寄主不同部位随CTV侵染时间的表达变化趋势。为筛选与CTV侵染密切相关的寄主基因打下基础。

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