检索结果-内蒙古大学图书馆

黑龙江畜牧兽医 2023年第8期 72-75,137页

作者：张睿郭云清张腾飞张文婷卢琴罗青平郭利伟长江大学动物科学学院湖北荆州434025 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所武汉430064 农业农村部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室武汉430064 畜禽病原微生物学湖北省重点实验室武汉430064

2021年9月份湖北省黄冈市某鸡场的产蛋鸡发生以产蛋量下降为主要症状的疾病,为了确定感染的病原,试验采集肝脏、脾脏及大脑等组织进行细菌(鸭源鸡杆菌)、病毒(禽流感病毒、传染性支气管炎病毒)及支原体(鸡毒支原体、滑液囊支原体)的分... 详细信息

2021年9月份湖北省黄冈市某鸡场的产蛋鸡发生以产蛋量下降为主要症状的疾病,为了确定感染的病原,试验采集肝脏、脾脏及大脑等组织进行细菌(鸭源鸡杆菌)、病毒(禽流感病毒、传染性支气管炎病毒)及支原体(鸡毒支原体、滑液囊支原体)的分离培养,采用RT-PCR对分离菌株进行鉴定,并对分离菌株进行生化试验和药敏试验。结果表明:禽流感病毒、传染性支气管炎病毒、鸡毒支原体、滑液囊支原体RT-PCR结果均为阴性;16S rRNA基因和鸭源鸡杆菌的保守基因infB、atpD、rpoB、23S rRNA菌液RT-PCR结果均为阳性;测序结果在NCBI中进行同源性比对,16S rRNA基因与鸭源鸡杆菌的核苷酸相似性大于99%,23S rRNA基因和管家基因ropB、atpD、infB序列与鸭源鸡杆菌的核苷酸相似性均大于99%。该分离菌株能发酵多种糖类,不能发酵乳糖,不能分解尿素和明胶,不产生苯丙氨酸。分离菌株对头孢曲松、阿米卡星、诺氟沙星、氧氟沙星、呋喃妥因、链霉素、复方新诺明及大观霉素高度敏感,而对四环素、克林霉素耐药。说明该鸡场蛋鸡感染了鸭源鸡杆菌,建议该鸡场选择敏感抗生素进行治疗,并且按照药物的休药期合理安排用药。

关键词：蛋鸡鸭源鸡杆菌分离鉴定生化特性药敏试验

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表达禽腺病毒血清4型Fiber2蛋白的重组耐热新城疫病毒的构建及免疫效果评估

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中国畜牧兽医 2022年第2期49卷 650-659页

作者：商雨李林涛李丽徐英英冯贺龙汪宏才张蓉蓉曾哲王红琳罗青平邵华斌温国元湖北省农业科学院畜牧兽医研究所农业农村部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室畜禽病原微生物学湖北重点实验室武汉430064

【目的】研究针对新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)和禽腺病毒(Fowl adenovirus,FAdV)的耐热基因工程疫苗。【方法】利用反向遗传学操作技术将NDV耐热株的HN基因替换到LaSota疫苗株上,再将禽腺病毒血清4型(Fowl adenovirus sero... 详细信息

【目的】研究针对新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)和禽腺病毒(Fowl adenovirus,FAdV)的耐热基因工程疫苗。【方法】利用反向遗传学操作技术将NDV耐热株的HN基因替换到LaSota疫苗株上,再将禽腺病毒血清4型(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)的Fiber2基因插入到其基因组上,构建表达Fiber2蛋白的重组耐热NDV质粒pTS-HN-Fiber2。通过病毒拯救技术拯救重组NDV rTS-HN-Fiber2,并测定其生物学特性和作为疫苗候选株的免疫原性和攻毒保护性。【结果】rTS-HN-Fiber2的鸡胚平均致死时间>168 h,且脑内接种致病指数为0,属于弱毒的范畴;在细胞上的生长曲线结果表明,rTS-HN-Fiber2与亲本LaSota株有相似的生长曲线,但最终的生长滴度略低于LaSota株;rTS-HN-Fiber2在56℃处理15 min后,病毒滴度下降约10^(3) TCID_(50)/mL,而LaSota株56℃处理5 min几乎无感染性;间接免疫荧光试验结果表明,rTS-HN-Fiber2能表达Fiber2蛋白。免疫和攻毒试验结果显示,rTS-HN-Fiber2能产生NDV抗体,且能显著提高雏鸡在FAdV-4强毒下的存活率,减轻FAdV-4强毒引起的组织病变,降低组织中的病毒载量。【结论】本研究成功构建了表达FAdV-4 Fiber2蛋白的重组耐热NDV,该病毒保持了亲本LaSota株的弱毒生物学特性,但热稳定性有显著提升;重组NDV免疫雏鸡可产生针对NDV和FAdV-4强毒的保护,该重组NDV可作为开发针对FAdV-4和NDV二联基因工程疫苗的候选病毒株。

关键词：禽腺病毒血清4型(FAdV-4) 新城疫病毒(NDV) Fiber2蛋白重组病毒耐热

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一株猪圆环病毒2d基因型毒株的全基因组序列及其衣壳蛋白的小鼠免疫原性分析

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畜牧兽医学报 2023年第10期54卷 4289-4299页

作者：李畅周平温平杨克礼刘威郭锐刘泽文袁芳艳高婷宋浩菲田永祥周丹娜湖北省农业科学院畜牧兽医研究所农业农村部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室武汉430064 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所畜禽病原微生物学湖北省重点实验室武汉430064 湖北省兽药监察所武汉430070 华中农业大学生猪健康养殖协同创新中心武汉430070

旨在确定引起湖北省某规模化猪场断奶仔猪多系统衰竭综合征(postweaning multisystemic wasting syndrome,PMWS)的主要病原。本研究采集该猪场具有PMWS典型临床症状的仔猪组织样品,经PCR检测,发现其存在猪圆环病毒2型(porcine circoviru... 详细信息

旨在确定引起湖北省某规模化猪场断奶仔猪多系统衰竭综合征(postweaning multisystemic wasting syndrome,PMWS)的主要病原。本研究采集该猪场具有PMWS典型临床症状的仔猪组织样品,经PCR检测,发现其存在猪圆环病毒2型(porcine circovirus 2,PCV2)感染。对阳性样品中PCV2全基因组进行扩增和测序后,与国内外流行毒株进行全基因组和ORF2基因的比对,分析其核苷酸同源性。通过猪肾上皮细胞系PK-15对病毒进行分离培养和鉴定,对其核衣壳蛋白Cap的抗原表位和小鼠免疫原性进行分析和评估。病毒分离鉴定结果表明,成功分离到1株PCV2毒株(名称:XY2022;GenBank登录号:OM249965.1),全基因组长度为1767 nt,在PK-15细胞上的毒价为10~(5.70)TCID_(50)·mL^(-1);序列分析结果显示,XY2022属于PCV2d,与参考毒株的全基因组核苷酸相似性为94.3%~99.8%,ORF2核苷酸相似性为89.2%~99.6%;Cap的免疫原性分析和测定结果显示,相比于其他基因型毒株的Cap,XY2022 Cap的线性免疫优势区、线性中和表位和构象中和表位均存在差异位点,PCV2d(XY2022)Cap和PCV2b(WH)Cap均可诱导小鼠机体产生抗PCV2的中和抗体,但2d Cap诱导的中和抗体水平更稳定。本研究为湖北省PCV2的流行病学研究和变异毒株的防控提供了参考,可为研究PCV2致病机制和开发新型疫苗提供材料。

关键词：猪圆环病毒2型分离鉴定序列分析免疫原性

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水禽细小病毒病流行病学及防控研究进展

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黑龙江畜牧兽医 2023年第16期 24-28页

作者：马瑶罗青平张蓉蓉曾哲温国元商雨汪宏才湖北省农业科学院畜牧兽医研究所武汉430064 武汉轻工业大学武汉430023 农业农村部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室武汉430064 畜禽病原微生物学湖北重点实验室武汉430064

我国是水禽养殖大国,也是禽肉、禽蛋消费大国。细小病毒是危害水禽重要病原之一,常引起鹅和番鸭的发病甚至死亡,造成严重的经济损失。为了有效防控水禽细小病毒(Waterfowl parvovirus,WPVs)的流行,减少经济损失,国内外学者研制各种疫苗... 详细信息

我国是水禽养殖大国,也是禽肉、禽蛋消费大国。细小病毒是危害水禽重要病原之一,常引起鹅和番鸭的发病甚至死亡,造成严重的经济损失。为了有效防控水禽细小病毒(Waterfowl parvovirus,WPVs)的流行,减少经济损失,国内外学者研制各种疫苗用于WPVs的预防。文章从WPVs流行病学及防控措施(疫苗、卵黄抗体及生物安全管理)方面进行综述,旨在为水禽细小病毒病的综合防控提供参考。

关键词：水禽细小病毒流行病学疫苗卵黄抗体生物安全

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鸭坦布苏病毒非结构蛋白亚细胞定位及其在IFN-β信号通路中的作用

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中国畜牧兽医 2024年第12期51卷 5470-5478页

作者：张蓉蓉潘爱銮吴娟方兵兵汪最卢琴张腾飞温国元罗青平湖北省农业科学院畜牧兽医研究所农业农村部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室畜禽病原微生物学湖北省重点实验室武汉430064 武汉伊莱瑞特生物科技股份有限公司武汉430074 武汉科前生物股份有限公司武汉430070

【目的】探究鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)非结构蛋白的亚细胞定位及其在β-干扰素(IFN-β)信号通路中的作用。【方法】通过RT-PCR法扩增DTMUV的7个非结构蛋白(NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B和NS5)基因,将其克隆至真核... 详细信息

【目的】探究鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)非结构蛋白的亚细胞定位及其在β-干扰素(IFN-β)信号通路中的作用。【方法】通过RT-PCR法扩增DTMUV的7个非结构蛋白(NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B和NS5)基因,将其克隆至真核表达载体pCAGGS-HA,构建重组真核表达质粒,并分别转染至HEK-293T细胞,通过Western blotting检测蛋白表达;利用间接免疫荧光试验检测非结构蛋白的亚细胞定位情况,通过双荧光素酶报告试验研究DTMUV的非结构蛋白对鸭源IFN-β启动子活性的影响。【结果】试验成功构建DTMUV的7个非结构蛋白带HA标签的真核表达质粒。Western blotting结果显示,真核表达非结构蛋白均正常表达,NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B和NS5蛋白分子质量大小分别为38、25、14.4、68、13.9、28和100 ku。间接免疫荧光试验结果显示,7个非结构蛋白在细胞内的表达形态不一,主要定位在细胞浆中。双荧光素酶报告试验结果表明,与对照组相比,过表达NS2B和NS4B蛋白后,鸭源IFN-β启动子活性极显著降低(P<0.01)。【结论】本研究成功构建了DTMUV的7个非结构蛋白的真核表达质粒,非结构蛋白主要表达于细胞浆中,其中NS2B和NS4B蛋白具有颉颃IFN-β活性的功能。试验结果为DTMUV的免疫逃逸研究提供了一定的理论依据,并为深入探究DTMUV在宿主天然免疫信号通路中的作用机制提供了试验材料。

关键词：鸭坦布苏病毒非结构蛋白亚细胞定位 IFN-β信号通路

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竹叶黄酮对鸡胚接种新城疫疫苗免疫效果的影响

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中国畜牧兽医 2024年第9期51卷 4174-4181页

作者：姜鑫瑞冯贺龙杨宏春蒋立人汪宏才曾哲左波张腾飞罗青平商雨温国元华中农业大学动物科学技术学院/动物医学院武汉430070 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所农业农村部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室畜禽病原微生物学湖北重点实验室武汉430064 广西大学动物科学技术学院南宁530004 湖北洪山实验室武汉430070

【目的】探究竹叶黄酮(bamboo leaf flavonoid,BLF)作为疫苗佐剂对新城疫(ND)疫苗鸡胚接种的免疫效果影响。【方法】试验选取18胚龄SPF种蛋108枚,随机分为3组:Control组(不注射任何物质)、TS组(注射0.1 mL 103.0 EID 50/0.1 mL的新城疫... 详细信息

【目的】探究竹叶黄酮(bamboo leaf flavonoid,BLF)作为疫苗佐剂对新城疫(ND)疫苗鸡胚接种的免疫效果影响。【方法】试验选取18胚龄SPF种蛋108枚,随机分为3组:Control组(不注射任何物质)、TS组(注射0.1 mL 103.0 EID 50/0.1 mL的新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)TS09-C疫苗株)和BLF+TS组(注射0.1 mL含2%BLF和103.0 EID 50/0.1 mL的NDV TS09-C疫苗株的混合液),每组36枚种蛋。试验期间,统计种蛋的孵化率和雏鸡的存活率,在雏鸡7、14、21、28日龄时,每组随机选取3只进行屠宰,采集脾脏、法氏囊、胸腺组织,统计免疫器官指数;采集雏鸡翅下静脉血液,测定血清抗体和细胞因子水平;在雏鸡28日龄时使用NDV强毒株F48E9进行攻毒保护试验,攻毒后每天观察试验雏鸡状态,记录体重变化情况,并于攻毒后第3天每组随机选取3只雏鸡进行屠宰,取十二指肠、肺脏和气管组织并检测雏鸡不同组织病毒载量。【结果】鸡胚接种后,BLF+TS组雏鸡孵化率为100%,存活率为97.22%。与TS组相比,21~28日龄时BLF+TS组雏鸡的脾脏、法氏囊和胸腺指数以及血清中白细胞介素-6(interleukin 6,IL-6)和γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)含量均显著升高(P<0.05)。攻毒试验结果显示,攻毒后BLF+TS组雏鸡存活率为100%,攻毒后2~4 d BLF+TS组雏鸡体重增长速度显著低于健康对照组(P<0.05);攻毒后3~7 d时BLF+TS雏鸡体重增长速度显著高于TS组(P<0.05)。BLF+TS组雏鸡攻毒后呼吸道和消化道组织的病毒载量显著低于TS组(P<0.05)。【结论】BLF作为免疫佐剂可安全进行鸡胚接种,而且能够帮助雏鸡建立早期免疫保护,进一步提高ND疫苗免疫效果,研究结果为开发高效鸡胚免疫疫苗佐剂提供借鉴和参考。

关键词：鸡胚接种竹叶黄酮新城疫疫苗疫苗佐剂

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鹌鹑源FAdV4 Fiber 2、ORF29区序列分析及其致病性研究

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中国动物传染病学报 2022年第5期30卷 36-42页

作者：卢琴罗青平张腾飞罗玲汪宏才王红琳温国元张蓉蓉商雨邵华斌湖北省农业科学院畜牧兽医研究所武汉430064 农业农村部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室武汉430064 微生物学畜禽病原湖北省重点实验室武汉430064

本实验室前期在鹌鹑中分离到了1株4型禽腺病毒(FAdV-4)HB1812株,为了解该病毒全基因组序列和致病性,进行了全基因组测序和致病性实验。结果显示:HB1812株与国内的FAdV-4型流行毒株HN151025和JSJ13株的同源性最高,Fiber 2序列中G219A/D、... 详细信息

本实验室前期在鹌鹑中分离到了1株4型禽腺病毒(FAdV-4)HB1812株,为了解该病毒全基因组序列和致病性,进行了全基因组测序和致病性实验。结果显示:HB1812株与国内的FAdV-4型流行毒株HN151025和JSJ13株的同源性最高,Fiber 2序列中G219A/D、E230Q、S260T、I299V、S304A、P307A、V319I、A380T、S389T、A400G、Q403Q、S406I、T412S、T434S、D438E、S452A、A458N和V477L位点存在点突变,ORF29区缺失了RMITPLYTRPP共11个氨基酸;致病性试验结果,HB1812株对SPF鸡具有致病性,可见典型的心包积液及肝脏发黄等临床症状,HE镜检可见心肌纤维排列紊乱及部分心肌断裂,心肌间隙可见大量红细胞,肝脏可见炎性细胞浸润并伴随少量肝细胞坏死。该研究是国内首次报道鹌鹑源禽腺病毒,为我国FAdV-4的传播方式、灭活疫苗的研制奠定基础。

关键词：鹌鹑源 FAdV-4 Fiber 2 ORF29 致病性

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链球菌的危害及天然化合物抗链球菌作用的研究进展

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黑龙江畜牧兽医 2023年第5期 22-26页

作者：谭怡青周丹娜袁芳艳刘泽文杨克礼刘威郭锐李畅黎璐田永祥高婷湖北省农业科学院畜牧兽医研究所农业农村部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室/畜禽病原微生物学湖北省重点实验室武汉430064 华中农业大学动物医学院生猪健康养殖协同创新中心武汉430070

链球菌种类众多,对人类危害严重的三种链球菌为肺炎链球菌、变异链球菌与猪链球菌。目前,肺炎链球菌是导致儿童、老人死亡的重要病原菌,变异链球菌是龋齿的主要病因,而猪链球菌是人畜共患病原菌,上述三种链球菌对畜牧业和人类健康造成... 详细信息

链球菌种类众多,对人类危害严重的三种链球菌为肺炎链球菌、变异链球菌与猪链球菌。目前,肺炎链球菌是导致儿童、老人死亡的重要病原菌,变异链球菌是龋齿的主要病因,而猪链球菌是人畜共患病原菌,上述三种链球菌对畜牧业和人类健康造成重大危害。然而,随着抗生素的不合理使用,这三种链球菌的耐药性逐年升高。天然化合物有毒副作用较小、不易产生耐药性的特点,是开发抗链球菌药物的重要资源宝库。文章综述了不同种类天然化合物(茶多酚类、生物碱类、黄酮类、抗菌肽类、精油类等)抗链球菌的作用(结合溶血素、作用于ATP酶、抑制拓扑异构酶、影响细菌生长分裂等),以期为研发抗链球菌的天然化合物提供参考。

关键词：肺炎链球菌猪链球菌变异链球菌天然化合物溶血素抗菌替代抗生素

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新城疫载体系统表达天蚕素AD抗菌肽及其抑菌效果

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中国兽医学报 2023年第9期43卷 1820-1827页

作者：任项霏冯贺龙徐英英李丽杨宏春王鑫商雨阳柳君周祖涛李自力刘梅罗青平胡思顺温国元华中农业大学动物科学技术学院/动物医学院湖北武汉430070 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所湖北武汉430064 农业农村部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室湖北武汉430064 畜禽病原微生物学湖北省重点实验室湖北武汉430064 湖北洪山实验室湖北武汉430070 湖北省预防兽医学重点实验室湖北武汉430070

为探究天蚕素AD抗菌肽是否能在新城疫病毒(NDV)载体系统中表达,且通过该种表达系统得到的CAD是否有生物活性。采用同源重组的方式将CAD插入至NDV载体pTS09-C中,并利用反向遗传操作系统成功拯救出重组病毒rTS-CAD,该重组病毒能在SPF鸡胚... 详细信息

为探究天蚕素AD抗菌肽是否能在新城疫病毒(NDV)载体系统中表达,且通过该种表达系统得到的CAD是否有生物活性。采用同源重组的方式将CAD插入至NDV载体pTS09-C中,并利用反向遗传操作系统成功拯救出重组病毒rTS-CAD,该重组病毒能在SPF鸡胚中稳定增殖。通过生物学特性分析,在NDV TS09-C株的P和M基因之间插入CAD基因并未改变其的弱毒和增殖特性。间接免疫荧光试验证实重组病毒能在BHK-21细胞中稳定表达CAD抗菌肽。抑菌试验结果显示,NDV载体系统表达的CAD对金黄色葡萄球菌(G+)和大肠杆菌(G-)均有一定的抑制作用:在微孔板法抑菌试验中,重组病毒表达的CAD抗菌肽对金黄色葡萄球菌的抑制率为79.6%~91.7%,对大肠杆菌的抑制率为87.5%~89.8%;在与DF-1细胞共培养试验中,重组病毒表达的CAD抗菌肽对金黄色葡萄球菌的抑制率可以达到74.5%~77.7%,对大肠杆菌的抑制率为35.0%~45.0%。本研究表明,NDV载体系统能够成功表达出有活性的CAD抗菌肽,且有良好的抑菌效果。这一研究为探索NDV载体表达抗菌肽和进一步研究CAD的局部效应奠定了一定的理论基础。

关键词：天蚕素AD 新城疫病毒载体反向遗传操作系统抗菌肽

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鸭源新型鹅细小病毒抗体间接ELISA检测方法的建立及应用

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中国兽医学报 2023年第10期43卷 2042-2049页

作者：马瑶汪宏才唐晟姚伦曾哲罗青平曾驰商雨温国元湖北省农业科学院畜牧兽医研究所湖北武汉430064 武汉轻工业大学生命科学与技术学院湖北武汉430023 农业农村部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室湖北武汉430064 畜禽病原微生物学湖北重点实验室湖北武汉430064 湖北洪山实验室湖北武汉430070

新型鹅细小病毒(novel goose parvovirus,NGPV)是由鹅细小病毒(goose parvovirus,GPV)变异而来,可感染雏鸭,引起以鸭短喙侏儒综合征为主要特征的传染性疾病。2015年该病在我国鸭群中大暴发,严重影响鸭出栏率,给我国的养殖行业带来巨大... 详细信息

新型鹅细小病毒(novel goose parvovirus,NGPV)是由鹅细小病毒(goose parvovirus,GPV)变异而来,可感染雏鸭,引起以鸭短喙侏儒综合征为主要特征的传染性疾病。2015年该病在我国鸭群中大暴发,严重影响鸭出栏率,给我国的养殖行业带来巨大的经济损失。为建立一种鸭源NGPV抗体的间接ELISA检测方法,用于鸭感染细小病毒的血清学检测和鸭免疫细小病毒疫苗后抗体水平监测,本研究利用生物信息学预测了NGPV YICH株的结构蛋白VP3的抗原表位,选择了抗原富集区域(aa250~525)进行原核表达,经蛋白纯化获得了可溶性的VP3截短蛋白VP3-tr。以VP3-tr为包被抗原,经过棋盘滴定方法优化各个反应条件,建立了NGPV抗体的间接ELISA检测方法。利用优化后的间接ELISA方法对30份GPV阴性鸭血清进行检测,确定阴阳性临界值为0.219。ELISA方法的灵敏性、特异性和重复性检测结果表明,该方法灵敏度较高,特异性良好,不与鸭坦布苏病毒、新城疫病毒、禽流感病毒、鸭疫里默杆菌、大肠杆菌病原阳性血清发生交叉反应;批内和批间重复试验的变异系数均小于6%,重复性良好。用该方法与Western blot检测方法分别对147份临床血清样品进行检测,结果表明ELISA检测阳性率为85.0%,Western blot检测率为69.4%,两者符合率为84.4%。综上所述,本研究成功建立了鸭源NGPV抗体的间接ELISA检测方法,为鸭感染NGPV后的感染情况监测以及疫苗免疫评估提供了更简便可靠的方法。

关键词：新型鹅细小病毒 VP3蛋白间接ELISA

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