检索结果-内蒙古大学图书馆

湖北农业科学 2024年第6期63卷 218-222页

作者：汪宏才商雨马瑶曾哲张蓉蓉姚伦罗玲李丽温国元罗青平湖北省农业科学院畜牧兽医研究所武汉430064 湖北省农业科学院农业农村部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室武汉430064 湖北省农业科学院畜禽病原微生物学湖北重点实验室武汉430064 湖北洪山实验室武汉430070

为了建立水禽细小病毒(WPV)快速检测方法,根据序列比对结果在水禽细小病毒NS基因SF3保守区域内设计特异性引物,建立SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR通用检测方法。该方法的扩增效率(E)为90.0%,相关系数(R~2)=0.99,标准曲线方程为y=-3.607x+38.... 详细信息

为了建立水禽细小病毒(WPV)快速检测方法,根据序列比对结果在水禽细小病毒NS基因SF3保守区域内设计特异性引物,建立SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR通用检测方法。该方法的扩增效率(E)为90.0%,相关系数(R~2)=0.99,标准曲线方程为y=-3.607x+38.77;除WPV出现S形扩增曲线外,新城疫病毒(NDV)、H9亚型禽流感病毒(H9 AIV)、鸭坦布苏病毒(DTMUV)、鸭肝炎病毒(DHAV)、鸭肠炎病毒(DEV)、鸭呼肠孤病毒(DRV)样品均未出现S形阳性扩增曲线;批内变异系数(CV)为0.15%~0.23%,批间变异系数为0.09%~0.28%。结果表明,SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法重复性好、灵敏度高和特异性强。临床样品检测结果表明,SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR与普通PCR的符合率达98.4%,灵敏度是普通PCR的1 000倍。SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法不仅能定性检测WPV,还可以进行定量检测,可用于种鸭场、种鹅场的WPV净化检测,也可用于WPV临床大量样品的快速检测。

关键词：水禽细小病毒检测方法 SYBR GreenⅠ 荧光定量PCR

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基于鸡白痢沙门菌LPS的D群沙门菌抗体间接ELISA检测方法的建立

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中国兽医学报 2022年第12期42卷 2401-2406页

作者：蒋凤娇程伊洛汪最张文婷卢琴郭云清罗青平邵华斌张腾飞湖北省农业科学院畜牧兽医研究所、农业农村部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室/畜禽病原微生物学湖北省重点实验室湖北武汉430064 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070

通过热酚水法提取并纯化鸡白痢沙门菌的脂多糖(lipopolysaccharide,LPS),以LPS作为包被抗原,建立D群沙门菌抗体间接ELISA检测方法。结果显示,通过方阵滴定法等确定抗原包被质量浓度为2.233 mg/L;血清最佳稀释度为1∶200,最佳作用时间为6... 详细信息

通过热酚水法提取并纯化鸡白痢沙门菌的脂多糖(lipopolysaccharide,LPS),以LPS作为包被抗原,建立D群沙门菌抗体间接ELISA检测方法。结果显示,通过方阵滴定法等确定抗原包被质量浓度为2.233 mg/L;血清最佳稀释度为1∶200,最佳作用时间为60 min;最适封闭条件为5%脱脂乳封闭60 min;酶标二抗最适工作质量浓度为1∶8000,作用60 min;底物显色时间为15 min;阴阳性判定标准为S/P值≥0.5。特异性、敏感性和重复性验证表明,该方法可特异性检测鸡白痢沙门菌等D群沙门菌的阳性血清,与鼠伤寒沙门菌、大肠杆菌等家禽病原菌的阳性血清无交叉反应,其检测灵敏度是鸡白痢平板凝集的400倍,批间重复和批内重复变异系数均小于10%。对临床血清的检测结果表明,该方法与Biochek公司的D群抗体检测试剂盒的阳性符合率为94.67%,阴性符合率为98.11%,总符合率为98.59%。结果表明,该检测方法可用于临床鸡白痢沙门菌等D群沙门菌感染的抗体检测。

关键词：鸡白痢沙门菌脂多糖 D群沙门菌间接ELISA 抗体检测

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一株鸭疫里氏杆菌的分离、鉴定与生物学特性分析

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湖北农业科学 2024年第9期63卷 156-160,166页

作者：王博焘郭云清张腾飞张文婷卢琴胡巧罗青平翟新国河北工程大学生命科学与食品工程学院河北邯郸056000 农业农村部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室/畜禽病原微生物学湖北省重点实验室/畜牧兽医研究所湖北省农业科学院武汉430064 湖北洪山实验室武汉430064

为确定引起2022年湖北省襄阳市某规模化鸭场的鸭急性死亡病因,对病料进行病原菌分离、对分离株进行生化特性鉴定、耐药性测定、动物回归试验及全基因组测序。结果表明,急性死亡的鸭病原菌仅有鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer)分... 详细信息

为确定引起2022年湖北省襄阳市某规模化鸭场的鸭急性死亡病因,对病料进行病原菌分离、对分离株进行生化特性鉴定、耐药性测定、动物回归试验及全基因组测序。结果表明,急性死亡的鸭病原菌仅有鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer)分离鉴定为阳性。药敏结果显示分离菌株对药物敏感性较高,仅对环丙沙星、氧氟沙星耐药;动物回归试验结果显示分离菌株可引起雏鸭急性死亡,剖检可见典型的浆膜炎症状。组织病理学切片显示心脏、肝脏被膜有明显纤维性渗出,心肌细胞有炎性浸润、脾脏实质内可见淋巴细胞数量明显减少、脑组织可见较多的血管淤血扩张。毒力测定显示分离菌株的半数致死量为3.06×106CFU/mL。

关键词：鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer) 生化特性回归试验病理变化毒力

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黄芪多糖对新城疫活疫苗免疫增强的作用

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中南农业科技 2023年第5期44卷 49-51页

作者：汪宏才商雨温国元任项霏罗玲张蓉蓉曾哲徐英英罗青平湖北省农业科学院畜牧兽医研究所武汉430064 农业农村部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室武汉430064 畜禽病原微生物学湖北重点实验室武汉430064

黄芪多糖(Astragalus polysaccharides,APS)具有免疫调节作用,在中医上应用十分广泛。为了验证APS对家禽疫苗的免疫增强作用,在新城疫(Newcastle Disease,ND)活疫苗稀释液中添加APS,以滴鼻点眼的方式免疫雏鸡,通过血清抗体检测和强毒攻... 详细信息

黄芪多糖(Astragalus polysaccharides,APS)具有免疫调节作用,在中医上应用十分广泛。为了验证APS对家禽疫苗的免疫增强作用,在新城疫(Newcastle Disease,ND)活疫苗稀释液中添加APS,以滴鼻点眼的方式免疫雏鸡,通过血清抗体检测和强毒攻击保护试验来评价APS对疫苗的免疫增强作用。结果表明,以104.0EID50抗原含量免疫雏鸡,免疫后14 d,添加APS组血清抗体HI效价显著高于未添加组,且攻毒保护率达到100%,证明了黄芪多糖对新城疫活疫苗的免疫作用显著增强。

关键词：黄芪多糖新城疫活疫苗佐剂免疫增强

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基于F和HN蛋白的基因Ⅶ型新城疫病毒嵌合疫苗的构建及免疫效力评估

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中国畜牧兽医 2022年第11期49卷 4346-4355页

作者：李丽王国康商雨徐英英冯贺龙汪宏才张蓉蓉曾哲罗青平邵华斌曾驰温国元湖北省农业科学院畜牧兽医研究所武汉430064 农业农村部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室武汉430064 畜禽病原微生物学湖北重点实验室武汉430064 武汉轻工大学生物与制药工程学院武汉430023

【目的】试验旨在构建一种基因Ⅶ型新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)嵌合疫苗,并对其免疫效力进行评估。【方法】利用反向遗传学技术,以含有禽偏禽腮腺炎病毒2型(Avian metaavulavirus-2,AMAV-2)Y2株基因组的重组质粒pT7-Y2为模... 详细信息

【目的】试验旨在构建一种基因Ⅶ型新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)嵌合疫苗,并对其免疫效力进行评估。【方法】利用反向遗传学技术,以含有禽偏禽腮腺炎病毒2型(Avian metaavulavirus-2,AMAV-2)Y2株基因组的重组质粒pT7-Y2为模板,将Y2株的F和HN蛋白的胞外区替换为基因Ⅶ型NDV HB0901株的F和HN蛋白的胞外区,将HB0901株的F蛋白裂解位点突变为LaSota弱毒株的F蛋白裂解位点,构建嵌合重组病毒rY2-FHNR株。对rY2-FHNR株的增殖特性、致病力及遗传稳定性等生物学特性进行检测,并通过接种2周龄SPF鸡评估rY2-FHNR株的免疫原性及其免疫血清与Y2株的交叉反应性,利用NDV NP蛋白的间接ELISA方法对免疫血清进行检测,验证其鉴别诊断效果。【结果】试验成功获得了嵌合重组病毒rY2-FHNR株,生物学特性检测结果显示,rY2-FHNR株在鸡胚中的增殖滴度和致病性符合弱毒特征,其鸡胚传代的遗传稳定性良好。rY2-FHNR株可诱导机体产生针对NDV的抗体,且免疫血清不与rY2株抗原发生交叉反应。通过NDV NP ELISA抗体检测方法可以实现区分疫苗免疫与野毒感染。【结论】本试验研发了一种基因Ⅶ型NDV嵌合候选疫苗,为基因Ⅶ型NDV的监测、防控和净化提供了技术支撑。

关键词：新城疫病毒(NDV) 基因Ⅶ型禽偏禽腮腺炎病毒血清2型(AMAV-2) 反向遗传技术嵌合疫苗

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基于全基因组序列合成的禽副黏病毒Ⅱ型反向遗传操作系统的建立

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中国兽医学报 2022年第3期42卷 464-471页

作者：王国康李丽贾妙妙冯贺龙曾驰罗青平温国元湖北省农业科学院畜牧兽医研究所湖北武汉430064 农业农村部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室湖北武汉430064 畜禽病原微生物学湖北省重点实验室湖北武汉430064 武汉轻工大学生物与制药工程学院湖北武汉430023

为建立禽副黏病毒Ⅱ型(avian paramyxovirus 2,APMV-2)的反向遗传操作平台,对NCBI已经公布的12条APMV-2全基因组序列进行分析比对,选取较为保守的F8株为模板,将该毒株基因组中特有的10处核苷酸突变为其他毒株共有的一致序列,增加一段大... 详细信息

为建立禽副黏病毒Ⅱ型(avian paramyxovirus 2,APMV-2)的反向遗传操作平台,对NCBI已经公布的12条APMV-2全基因组序列进行分析比对,选取较为保守的F8株为模板,将该毒株基因组中特有的10处核苷酸突变为其他毒株共有的一致序列,增加一段大部分毒株共有的非编码区序列,获得了1株新的APMV-2(命名为Y2株)的全基因组序列。通过人工合成和克隆的方法,构建并获得了Y2株全长cDNA克隆质粒和3个分别表达NP、P和L的辅助质粒。将4个重组质粒共转染至感染痘病毒的BHK-21细胞,成功拯救出APMV-2Y2株。生物学特性测定结果显示,Y2株的鸡胚最低致死剂量的平均致死时间(MDT)大于168h,1日龄雏鸡的脑内致病指数(ICPI)为0.09,判定为弱毒株,鸡胚尿囊液的病毒含量为10^(8.83) EID_(50)/mL,HA效价为9log_(2)。病毒增殖曲线测定结果显示,Y2株感染BHK-21细胞后60h滴度达到峰值。APMV-2Y2株反向遗传操作系统的建立为该病原的致病机理研究及新型禽用疫苗研发提供了依据。

关键词：禽副黏病毒Ⅱ型反向遗传技术新城疫病毒人工合成

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基于马赛克HA序列的H9亚型禽流感灭活疫苗的免疫效力分析

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畜牧兽医学报 2021年第12期52卷 3569-3577页

作者：李丽唐国毅冯贺龙薛玉涵任助王国康贾妙妙商雨罗青平邵华斌温国元湖北省农业科学院畜牧兽医研究所武汉430064 农业部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室武汉430064 畜禽病原微生物学湖北省重点实验室武汉430064

H9亚型禽流感在我国家禽中广泛流行,给养禽业造成巨大经济损失的同时,也严重威胁着公共卫生安全。H9亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)具有高度遗传变异性,导致流行株和疫苗株之间抗原匹配性差,从而影响疫苗的临床保护效果,急... 详细信息

H9亚型禽流感在我国家禽中广泛流行,给养禽业造成巨大经济损失的同时,也严重威胁着公共卫生安全。H9亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)具有高度遗传变异性,导致流行株和疫苗株之间抗原匹配性差,从而影响疫苗的临床保护效果,急需研发一种高效、具有交叉保护性的通用型H9亚型禽流感疫苗。马赛克疫苗是针对遗传多样性病原体设计,通过整合所有抗原序列获得一条抗原表位覆盖最广泛的嵌合蛋白,并制备疫苗。本研究参考mosaic疫苗设计原则,设计、优化并合成了一条H9亚型禽流感病毒的mosaic血凝素(hemagglutinin,HA)基因序列,采用反向遗传操作技术,以H1N1亚型流感病毒PR8株为骨架,以mosaic H9 HA序列替换PR8株的HA片段,获得重组病毒rPR8-HAm/H9。将其制备为灭活疫苗并免疫SPF雏鸡,监测抗体水平、攻毒保护效果,评价其交叉保护效果。结果表明,重组病毒rPR8-HAm/H9灭活疫苗免疫SPF雏鸡,可诱导机体产生较高水平的HI抗体和中和抗体,可显著抑制攻毒后病毒的脱落,对H9N2 AIV JM0305株的攻毒保护率为80%。rPR8-HAm/H9灭活疫苗可以对异源H9N2 AIV JM0305株产生较好的交叉攻毒保护,为研发基于马赛克技术的禽流感通用疫苗提供了前期基础。

关键词：禽流感病毒 H9亚型 mosaic疫苗交叉保护性

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禽腺病毒4型荧光定量PCR检测方法的建立与初步评估

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中国兽医杂志 2022年第2期58卷 22-26页

作者：王国康卢琴贾妙妙李丽冯贺龙邵华斌罗青平曾驰温国元武汉轻工大学生物与制药工程学院湖北武汉430023 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所湖北武汉430064 农业农村部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室湖北武汉430064 畜禽病原微生物学湖北省重点实验室湖北武汉430064

为了对禽腺病毒4型(FAdV-4)引发的鸡心包积水-肝炎综合征的病原学监测和疫情诊断提供技术支撑,本研究经对部分发表在NCBI的禽腺病毒4型序列进行比对,在其六邻体基因上找到一段相对保守序列,并设计出PCR引物和TaqMan探针。以FAdV-4 HB151... 详细信息

为了对禽腺病毒4型(FAdV-4)引发的鸡心包积水-肝炎综合征的病原学监测和疫情诊断提供技术支撑,本研究经对部分发表在NCBI的禽腺病毒4型序列进行比对,在其六邻体基因上找到一段相对保守序列,并设计出PCR引物和TaqMan探针。以FAdV-4 HB1510株作为标准品,通过反应条件优化,建立了FAdV-4荧光定量PCR检测方法,并对其敏感性、特异性和重复性进行了分析。结果显示,该方法的灵敏度为10 EID_(50)/mL,为常规PCR方法的10倍;组内和组间重复性良好;与鸡减蛋综合征病毒、大肠杆菌等禽类病原的核酸无交叉反应。通过对65份临床样品进行检测,FAdV-4荧光定量PCR和常规PCR的检测符合率为90.7%。因此,FAdV-4荧光定量PCR的快速、敏感、特异等优点使其在禽腺病毒4型的早期检测及预防、控制等方面有较好的应用前景。

关键词：禽腺病毒4型 TaqMan探针荧光定量PCR 检测

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茶多酚的抗菌抗病毒作用

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动物医学进展 2022年第4期43卷 107-111页

作者：高婷袁芳艳刘泽文刘威周丹娜杨克礼段正赢郭锐梁婉王宁宁周锐田永祥湖北省农业科学院畜牧兽医研究所农业农村部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室畜禽病原微生物学湖北省重点实验室湖北武汉430064 华中农业大学动物医学院生猪健康养殖协同创新中心湖北武汉430070

茶多酚是茶叶中多酚类物质的总称,具有强效的抗菌与杀毒作用,对革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌、DNA病毒及RNA病毒都具有抑制活性。由于茶多酚无毒副作用、具有保健功能等特点,对机体无刺激,因此被广泛应用于食品化工、医疗卫生等行业。茶... 详细信息

茶多酚是茶叶中多酚类物质的总称,具有强效的抗菌与杀毒作用,对革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌、DNA病毒及RNA病毒都具有抑制活性。由于茶多酚无毒副作用、具有保健功能等特点,对机体无刺激,因此被广泛应用于食品化工、医疗卫生等行业。茶多酚抗菌杀毒的作用使其有望成为防治疾病的新型生物活性分子,为感染性疾病防控研究提供新思路。作者通过对国内外有关茶多酚在抗菌杀毒方面文献的搜集整理,综述了茶多酚抗菌杀毒的作用方式,以期为了解茶多酚在微生物领域的应用及其作用机制提供参考。

关键词：茶多酚抗菌作用抗病毒作用

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某规模化猪场外环境中非洲猪瘟监测及防控建议

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养殖与饲料 2023年第2期22卷 69-72页

作者：郭锐周丹娜刘泽文杨克礼高婷袁芳艳刘威李畅夏三林邱振乾田永祥农业农村部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室/湖北省农业科学院畜牧兽医研究所武汉430064 畜禽病原微生物学湖北省重点实验室武汉430064 宜城市农业技术推广中心湖北宜城441400

国内养殖企业经过近5年的摸索,已经总结出1套完善的非洲猪瘟生物安全防控技术体系,其中猪场场外环境中ASFV的监测环节是最为重要的部分。笔者对贵州某集团种猪场1年的监测数据进行分析发现,车辆风险系数较高,其次是人员和物资,值得注意... 详细信息

国内养殖企业经过近5年的摸索,已经总结出1套完善的非洲猪瘟生物安全防控技术体系,其中猪场场外环境中ASFV的监测环节是最为重要的部分。笔者对贵州某集团种猪场1年的监测数据进行分析发现,车辆风险系数较高,其次是人员和物资,值得注意的是2-3月和6-8月为该地区的疫情高发期,这与阴冷潮湿、调猪频率、周边疫情等因素有密切关系。因此,场外监测是猪场防控中最为重要的一道防线,尤其重视车辆和人的监测,同时,笔者提出通过了解当前非洲猪瘟流行特点、提高猪群健康度、有效降低猪场环境病毒的载量和重视硬件生物安全改造等措施,在场内外环境和生产管理过程中构建好猪场的生物安全体系,可有效阻断非洲猪瘟病毒的传播途径。

关键词：规模化猪场非洲猪瘟外环境监测生物安全体系

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