检索结果-内蒙古大学图书馆

山羊支原体山羊肺炎亚种MCCG-0521乳酸脱氢酶基因的克隆表达及其编码氨基酸的生物学分析

动物医学进展 2023年第2期44卷 35-40页

作者：刘威蒋鹏程杨克礼袁芳艳周丹娜刘泽文高婷郭锐孙裴田永祥湖北省农业科学院畜牧兽医研究所/农业农村部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室/畜禽病原微生物学湖北省重点实验室湖北武汉430064 安徽农业大学动物科技学院安徽合肥230036

旨在获得山羊支原体山羊肺炎亚种MCCG-0521乳酸脱氢酶(L-lactate dehydrogenase,LDH)的蛋白表达产物,分析其编码氨基酸的生物学特性,为进一步研究LDH蛋白的功能奠定基础。试验完成了LDH基因的克隆和密码子改造,成功将LDH基因中473、761... 详细信息

旨在获得山羊支原体山羊肺炎亚种MCCG-0521乳酸脱氢酶(L-lactate dehydrogenase,LDH)的蛋白表达产物,分析其编码氨基酸的生物学特性,为进一步研究LDH蛋白的功能奠定基础。试验完成了LDH基因的克隆和密码子改造,成功将LDH基因中473、761、779 nt处的A突变为G,使改造后的LDH基因能在大肠埃希氏菌Rosetta中正确表达。SDS-PAGE电泳结果显示,IPTG诱导目的蛋白表达后获得一条大小约34 ku的蛋白条带,Western blot结果表明获得的原核表达产物可与抗6×His tag的单克隆抗体发生特异性反应,研究采用DNAStar Protean模块分析了LDH的二级结构、蛋白骨架柔性区域和可能的B细胞抗原优势表位,为进一步研究其功能奠定了基础。

关键词：山羊支原体山羊肺炎亚种 MCCG-0521 乳酸脱氢酶密码子改造二级结构

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鸡传染性喉气管炎抗体间接ELISA检测方法的建立及应用

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中国动物传染病学报 2023年

作者：王梓晨贺言王鑫李丽商雨姚伦汪宏才张蓉蓉罗青平代江红曾哲曾驰温国元武汉轻工大学生命科学与技术学院湖北省农业科学院畜牧兽医研究所农业农村部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室畜禽病原微生物学湖北重点实验室湖北洪山实验室

鸡传染性喉气管炎（Infectious laryngotracheitis， ILT）是一种可引起鸡生长缓慢、产蛋下降甚至死亡的呼吸道传染病。为建立一种ILTV抗体间接ELISA检测方法，本研究利用生物信息学预测了ILTV WG株结构蛋白gB的抗原表位，选择抗原富集... 详细信息

鸡传染性喉气管炎（Infectious laryngotracheitis， ILT）是一种可引起鸡生长缓慢、产蛋下降甚至死亡的呼吸道传染病。为建立一种ILTV抗体间接ELISA检测方法，本研究利用生物信息学预测了ILTV WG株结构蛋白gB的抗原表位，选择抗原富集区域gB2（aa326-665）进行原核表达，纯化获得截短蛋白gB2。以gB2为包被抗原，利用棋盘滴定法优化反应条件，建立ILTV抗体间接ELISA检测方法。通过对30份ILTV阴性鸡血清的检测结果进行分析，确定阴阳临界值为0.223。ELISA方法的灵敏性、特异性和重复性检测结果表明，该方法特异性良好，重复性良好，灵敏度较高，不与传染性支气管炎、新城疫、禽流感、禽白血病、鸡白痢沙门氏菌和支原体的阳性血清发生交叉反应；批内和批间重复试验的变异系数均小于5%；血清稀释到1∶12 800时，检测结果仍为阳性。用该方法与商品化试剂盒进行临床样本的检测，阳性符合率为94%。本方法相比于其它ELISA检测方法的指标，特别是灵敏度，均有一定提升。综上所述，本研究成功建立了ILTV抗体间接ELISA检测方法，为防控ILT以及评估疫苗免疫效果提供了更简便可靠的方法。

关键词：传染性喉气管炎病毒 gB蛋白间接ELISA

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杨梅素和二氢杨梅素抑菌效果评估及其在杨树花中含量的测定

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黑龙江畜牧兽医 2023年第19期 107-111,116页

作者：姜博达张文婷张腾飞刘廷江廖卫东郭云清卢琴罗青平杨玉莹长江大学动物科学学院湖北荆州434025 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所农业农村部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室/畜禽病原微生物学湖北省重点实验室武汉430064 湖北洪山实验室武汉430070

为了研究杨树花中潜在的抑菌活性成分杨梅素及二氢杨梅素对鸡白痢沙门氏菌的作用机制及其在杨树花中的含量,试验采用微量稀释法测定杨树花中杨梅素及二氢杨梅素对鸡白痢沙门氏菌的最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC);采用菌落计数法... 详细信息

为了研究杨树花中潜在的抑菌活性成分杨梅素及二氢杨梅素对鸡白痢沙门氏菌的作用机制及其在杨树花中的含量,试验采用微量稀释法测定杨树花中杨梅素及二氢杨梅素对鸡白痢沙门氏菌的最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC);采用菌落计数法测定两种成分对鸡白痢沙门氏菌的杀菌曲线;利用结晶紫染色法测定两种成分对鸡白痢沙门氏菌生物被膜形成的抑制率;建立用高效液相色谱测定杨树花中杨梅素和二氢杨梅素含量的方法。结果表明:杨梅素和二氢杨梅素对鸡白痢沙门氏菌的MIC分别为312.5μg/mL和625μg/mL,MBC分别为625μg/mL和1 250μg/mL。两种药物在1/2MIC浓度以上均对鸡白痢沙门氏菌有明显的杀灭效果;2MIC浓度时,杨梅素组细菌在10小时时被杀灭,二氢杨梅素组在8小时时被杀灭。同时1/2MIC杨梅素对生物被膜形成的抑制率达到64.6%(P<0.01)。建立的液相色谱方法线性关系、精密度、重复性良好,杨树花中杨梅素的含量为185.26μg/g、二氢杨梅素的含量为485.94μg/g。说明杨梅素及二氢杨梅素对鸡白痢沙门氏菌均有较好的体外杀菌效果且在杨树花中含量较高,其可能是杨树花发挥抑菌作用的重要活性成分。

关键词：杨树花杨梅素二氢杨梅素鸡白痢沙门氏菌体外抑菌

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新城疫病毒Mukteswar株反向遗传平台的建立

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动物医学进展 2023年第2期44卷 30-35页

作者：魏家阳李丽王国康徐英英曾哲罗青平邵华斌温国元商雨潘兹书武汉大学生命科学学院湖北武汉430072 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所农业农村部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室畜禽病原微生物学湖北重点实验室湖北武汉430064

为了建立新城疫疫苗株Mukteswar株的反向遗传操作系统,根据Mukteswar株的基因序列设计了9对引物,扩增获得基因组片段,通过Overlap PCR和In-Fusion无缝克隆的技术,将9个片段拼接和插入至pACNR-T7中,获得了Mukteswar株全长cDNA克隆质粒pAC... 详细信息

为了建立新城疫疫苗株Mukteswar株的反向遗传操作系统,根据Mukteswar株的基因序列设计了9对引物,扩增获得基因组片段,通过Overlap PCR和In-Fusion无缝克隆的技术,将9个片段拼接和插入至pACNR-T7中,获得了Mukteswar株全长cDNA克隆质粒pAC-Mukteswar。将其和3个辅助质粒(pVAX-NP、pVAX-P和pcDNA-L)共转染至预先感染了痘病毒vTF7-3的BHK-21细胞,成功拯救出重组病毒rMukteswar。对rMukteswar的生长曲线、最小致死剂量的平均致死时间(MDT)等生物学特性进行测定,结果显示rMukteswar具有和野生株相似的增殖特性和毒力。成功建立了新城疫疫苗株Mukteswar的反向遗传操作系统,为研发高效率表达外源病原体蛋白的新城疫载体疫苗奠定了基础。

关键词：新城疫病毒 Mukteswar株反向遗传操作系统

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一例鸭源鸡杆菌感染蛋鸡的诊断

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黑龙江畜牧兽医 2023年第8期 72-75,137页

作者：张睿郭云清张腾飞张文婷卢琴罗青平郭利伟长江大学动物科学学院湖北荆州434025 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所武汉430064 农业农村部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室武汉430064 畜禽病原微生物学湖北省重点实验室武汉430064

2021年9月份湖北省黄冈市某鸡场的产蛋鸡发生以产蛋量下降为主要症状的疾病,为了确定感染的病原,试验采集肝脏、脾脏及大脑等组织进行细菌(鸭源鸡杆菌)、病毒(禽流感病毒、传染性支气管炎病毒)及支原体(鸡毒支原体、滑液囊支原体)的分... 详细信息

2021年9月份湖北省黄冈市某鸡场的产蛋鸡发生以产蛋量下降为主要症状的疾病,为了确定感染的病原,试验采集肝脏、脾脏及大脑等组织进行细菌(鸭源鸡杆菌)、病毒(禽流感病毒、传染性支气管炎病毒)及支原体(鸡毒支原体、滑液囊支原体)的分离培养,采用RT-PCR对分离菌株进行鉴定,并对分离菌株进行生化试验和药敏试验。结果表明:禽流感病毒、传染性支气管炎病毒、鸡毒支原体、滑液囊支原体RT-PCR结果均为阴性;16S rRNA基因和鸭源鸡杆菌的保守基因infB、atpD、rpoB、23S rRNA菌液RT-PCR结果均为阳性;测序结果在NCBI中进行同源性比对,16S rRNA基因与鸭源鸡杆菌的核苷酸相似性大于99%,23S rRNA基因和管家基因ropB、atpD、infB序列与鸭源鸡杆菌的核苷酸相似性均大于99%。该分离菌株能发酵多种糖类,不能发酵乳糖,不能分解尿素和明胶,不产生苯丙氨酸。分离菌株对头孢曲松、阿米卡星、诺氟沙星、氧氟沙星、呋喃妥因、链霉素、复方新诺明及大观霉素高度敏感,而对四环素、克林霉素耐药。说明该鸡场蛋鸡感染了鸭源鸡杆菌,建议该鸡场选择敏感抗生素进行治疗,并且按照药物的休药期合理安排用药。

关键词：蛋鸡鸭源鸡杆菌分离鉴定生化特性药敏试验

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表达禽腺病毒血清4型Fiber2蛋白的重组耐热新城疫病毒的构建及免疫效果评估

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中国畜牧兽医 2022年第2期49卷 650-659页

作者：商雨李林涛李丽徐英英冯贺龙汪宏才张蓉蓉曾哲王红琳罗青平邵华斌温国元湖北省农业科学院畜牧兽医研究所农业农村部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室畜禽病原微生物学湖北重点实验室武汉430064

【目的】研究针对新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)和禽腺病毒(Fowl adenovirus,FAdV)的耐热基因工程疫苗。【方法】利用反向遗传学操作技术将NDV耐热株的HN基因替换到LaSota疫苗株上,再将禽腺病毒血清4型(Fowl adenovirus sero... 详细信息

【目的】研究针对新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)和禽腺病毒(Fowl adenovirus,FAdV)的耐热基因工程疫苗。【方法】利用反向遗传学操作技术将NDV耐热株的HN基因替换到LaSota疫苗株上,再将禽腺病毒血清4型(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)的Fiber2基因插入到其基因组上,构建表达Fiber2蛋白的重组耐热NDV质粒pTS-HN-Fiber2。通过病毒拯救技术拯救重组NDV rTS-HN-Fiber2,并测定其生物学特性和作为疫苗候选株的免疫原性和攻毒保护性。【结果】rTS-HN-Fiber2的鸡胚平均致死时间>168 h,且脑内接种致病指数为0,属于弱毒的范畴;在细胞上的生长曲线结果表明,rTS-HN-Fiber2与亲本LaSota株有相似的生长曲线,但最终的生长滴度略低于LaSota株;rTS-HN-Fiber2在56℃处理15 min后,病毒滴度下降约10^(3) TCID_(50)/mL,而LaSota株56℃处理5 min几乎无感染性;间接免疫荧光试验结果表明,rTS-HN-Fiber2能表达Fiber2蛋白。免疫和攻毒试验结果显示,rTS-HN-Fiber2能产生NDV抗体,且能显著提高雏鸡在FAdV-4强毒下的存活率,减轻FAdV-4强毒引起的组织病变,降低组织中的病毒载量。【结论】本研究成功构建了表达FAdV-4 Fiber2蛋白的重组耐热NDV,该病毒保持了亲本LaSota株的弱毒生物学特性,但热稳定性有显著提升;重组NDV免疫雏鸡可产生针对NDV和FAdV-4强毒的保护,该重组NDV可作为开发针对FAdV-4和NDV二联基因工程疫苗的候选病毒株。

关键词：禽腺病毒血清4型(FAdV-4) 新城疫病毒(NDV) Fiber2蛋白重组病毒耐热

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水禽细小病毒病流行病学及防控研究进展

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黑龙江畜牧兽医 2023年第16期 24-28页

作者：马瑶罗青平张蓉蓉曾哲温国元商雨汪宏才湖北省农业科学院畜牧兽医研究所武汉430064 武汉轻工业大学武汉430023 农业农村部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室武汉430064 畜禽病原微生物学湖北重点实验室武汉430064

我国是水禽养殖大国,也是禽肉、禽蛋消费大国。细小病毒是危害水禽重要病原之一,常引起鹅和番鸭的发病甚至死亡,造成严重的经济损失。为了有效防控水禽细小病毒(Waterfowl parvovirus,WPVs)的流行,减少经济损失,国内外学者研制各种疫苗... 详细信息

我国是水禽养殖大国,也是禽肉、禽蛋消费大国。细小病毒是危害水禽重要病原之一,常引起鹅和番鸭的发病甚至死亡,造成严重的经济损失。为了有效防控水禽细小病毒(Waterfowl parvovirus,WPVs)的流行,减少经济损失,国内外学者研制各种疫苗用于WPVs的预防。文章从WPVs流行病学及防控措施(疫苗、卵黄抗体及生物安全管理)方面进行综述,旨在为水禽细小病毒病的综合防控提供参考。

关键词：水禽细小病毒流行病学疫苗卵黄抗体生物安全

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竹叶黄酮对鸡胚接种新城疫疫苗免疫效果的影响

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中国畜牧兽医 2024年第9期51卷 4174-4181页

作者：姜鑫瑞冯贺龙杨宏春蒋立人汪宏才曾哲左波张腾飞罗青平商雨温国元华中农业大学动物科学技术学院/动物医学院武汉430070 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所农业农村部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室畜禽病原微生物学湖北重点实验室武汉430064 广西大学动物科学技术学院南宁530004 湖北洪山实验室武汉430070

【目的】探究竹叶黄酮(bamboo leaf flavonoid,BLF)作为疫苗佐剂对新城疫(ND)疫苗鸡胚接种的免疫效果影响。【方法】试验选取18胚龄SPF种蛋108枚,随机分为3组:Control组(不注射任何物质)、TS组(注射0.1 mL 103.0 EID 50/0.1 mL的新城疫... 详细信息

【目的】探究竹叶黄酮(bamboo leaf flavonoid,BLF)作为疫苗佐剂对新城疫(ND)疫苗鸡胚接种的免疫效果影响。【方法】试验选取18胚龄SPF种蛋108枚,随机分为3组:Control组(不注射任何物质)、TS组(注射0.1 mL 103.0 EID 50/0.1 mL的新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)TS09-C疫苗株)和BLF+TS组(注射0.1 mL含2%BLF和103.0 EID 50/0.1 mL的NDV TS09-C疫苗株的混合液),每组36枚种蛋。试验期间,统计种蛋的孵化率和雏鸡的存活率,在雏鸡7、14、21、28日龄时,每组随机选取3只进行屠宰,采集脾脏、法氏囊、胸腺组织,统计免疫器官指数;采集雏鸡翅下静脉血液,测定血清抗体和细胞因子水平;在雏鸡28日龄时使用NDV强毒株F48E9进行攻毒保护试验,攻毒后每天观察试验雏鸡状态,记录体重变化情况,并于攻毒后第3天每组随机选取3只雏鸡进行屠宰,取十二指肠、肺脏和气管组织并检测雏鸡不同组织病毒载量。【结果】鸡胚接种后,BLF+TS组雏鸡孵化率为100%,存活率为97.22%。与TS组相比,21~28日龄时BLF+TS组雏鸡的脾脏、法氏囊和胸腺指数以及血清中白细胞介素-6(interleukin 6,IL-6)和γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)含量均显著升高(P<0.05)。攻毒试验结果显示,攻毒后BLF+TS组雏鸡存活率为100%,攻毒后2~4 d BLF+TS组雏鸡体重增长速度显著低于健康对照组(P<0.05);攻毒后3~7 d时BLF+TS雏鸡体重增长速度显著高于TS组(P<0.05)。BLF+TS组雏鸡攻毒后呼吸道和消化道组织的病毒载量显著低于TS组(P<0.05)。【结论】BLF作为免疫佐剂可安全进行鸡胚接种,而且能够帮助雏鸡建立早期免疫保护,进一步提高ND疫苗免疫效果,研究结果为开发高效鸡胚免疫疫苗佐剂提供借鉴和参考。

关键词：鸡胚接种竹叶黄酮新城疫疫苗疫苗佐剂

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鹌鹑源FAdV4 Fiber 2、ORF29区序列分析及其致病性研究

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中国动物传染病学报 2022年第5期30卷 36-42页

作者：卢琴罗青平张腾飞罗玲汪宏才王红琳温国元张蓉蓉商雨邵华斌湖北省农业科学院畜牧兽医研究所武汉430064 农业农村部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室武汉430064 微生物学畜禽病原湖北省重点实验室武汉430064

本实验室前期在鹌鹑中分离到了1株4型禽腺病毒(FAdV-4)HB1812株,为了解该病毒全基因组序列和致病性,进行了全基因组测序和致病性实验。结果显示:HB1812株与国内的FAdV-4型流行毒株HN151025和JSJ13株的同源性最高,Fiber 2序列中G219A/D、... 详细信息

本实验室前期在鹌鹑中分离到了1株4型禽腺病毒(FAdV-4)HB1812株,为了解该病毒全基因组序列和致病性,进行了全基因组测序和致病性实验。结果显示:HB1812株与国内的FAdV-4型流行毒株HN151025和JSJ13株的同源性最高,Fiber 2序列中G219A/D、E230Q、S260T、I299V、S304A、P307A、V319I、A380T、S389T、A400G、Q403Q、S406I、T412S、T434S、D438E、S452A、A458N和V477L位点存在点突变,ORF29区缺失了RMITPLYTRPP共11个氨基酸;致病性试验结果,HB1812株对SPF鸡具有致病性,可见典型的心包积液及肝脏发黄等临床症状,HE镜检可见心肌纤维排列紊乱及部分心肌断裂,心肌间隙可见大量红细胞,肝脏可见炎性细胞浸润并伴随少量肝细胞坏死。该研究是国内首次报道鹌鹑源禽腺病毒,为我国FAdV-4的传播方式、灭活疫苗的研制奠定基础。

关键词：鹌鹑源 FAdV-4 Fiber 2 ORF29 致病性

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鸭坦布苏病毒非结构蛋白亚细胞定位及其在IFN-β信号通路中的作用

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中国畜牧兽医 2024年第12期51卷 5470-5478页

作者：张蓉蓉潘爱銮吴娟方兵兵汪最卢琴张腾飞温国元罗青平湖北省农业科学院畜牧兽医研究所农业农村部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室畜禽病原微生物学湖北省重点实验室武汉430064 武汉伊莱瑞特生物科技股份有限公司武汉430074 武汉科前生物股份有限公司武汉430070

【目的】探究鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)非结构蛋白的亚细胞定位及其在β-干扰素(IFN-β)信号通路中的作用。【方法】通过RT-PCR法扩增DTMUV的7个非结构蛋白(NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B和NS5)基因,将其克隆至真核... 详细信息

【目的】探究鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)非结构蛋白的亚细胞定位及其在β-干扰素(IFN-β)信号通路中的作用。【方法】通过RT-PCR法扩增DTMUV的7个非结构蛋白(NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B和NS5)基因,将其克隆至真核表达载体pCAGGS-HA,构建重组真核表达质粒,并分别转染至HEK-293T细胞,通过Western blotting检测蛋白表达;利用间接免疫荧光试验检测非结构蛋白的亚细胞定位情况,通过双荧光素酶报告试验研究DTMUV的非结构蛋白对鸭源IFN-β启动子活性的影响。【结果】试验成功构建DTMUV的7个非结构蛋白带HA标签的真核表达质粒。Western blotting结果显示,真核表达非结构蛋白均正常表达,NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B和NS5蛋白分子质量大小分别为38、25、14.4、68、13.9、28和100 ku。间接免疫荧光试验结果显示,7个非结构蛋白在细胞内的表达形态不一,主要定位在细胞浆中。双荧光素酶报告试验结果表明,与对照组相比,过表达NS2B和NS4B蛋白后,鸭源IFN-β启动子活性极显著降低(P<0.01)。【结论】本研究成功构建了DTMUV的7个非结构蛋白的真核表达质粒,非结构蛋白主要表达于细胞浆中,其中NS2B和NS4B蛋白具有颉颃IFN-β活性的功能。试验结果为DTMUV的免疫逃逸研究提供了一定的理论依据,并为深入探究DTMUV在宿主天然免疫信号通路中的作用机制提供了试验材料。

关键词：鸭坦布苏病毒非结构蛋白亚细胞定位 IFN-β信号通路

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