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中草药 2019年第18期50卷 4389-4397页

作者：唐三丁煌杨筱倩陈仙蕾黄小平邓常清湖南中医药大学分子病理实验室中西医结合心脑疾病防治湖南省重点实验室细胞生物学与分子技术湖南省高校重点实验室

目的从血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)转运蛋白角度探讨冰片配伍黄芪甲苷(astragalosides IV,AST IV)和三七总皂苷(Panax notoginseng saponins,PNS)在脑缺血再灌注状态下促进药物成分入脑的作用。方法采用大鼠局灶性脑缺血再灌... 详细信息

目的从血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)转运蛋白角度探讨冰片配伍黄芪甲苷(astragalosides IV,AST IV)和三七总皂苷(Panax notoginseng saponins,PNS)在脑缺血再灌注状态下促进药物成分入脑的作用。方法采用大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,ig给予冰片、AST IV、PNS及其配伍药物,2,3,5-氯化三苯四氮唑(2,3,5-triphenyl tetrazolium chloride,TTC)染色法测定脑组织损伤,Western blotting法检测脑组织外排蛋白P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)和多药耐药相关蛋白1(multidrug resistance protein-1,MRP-1)、MRP-2、MRP-4、MRP-5及摄取蛋白有机阳离子转运体3(organic cation transporter3,OCT3)、有机阴离子转运多肽-2(organicaniontransportingpolypeptides-2,OATP-2)蛋白的表达,real-timePCR法检测脑组织多药耐药(multidrug resistance,mdr)基因mdr1a、mdr1b和mrp-1、mrp-2、mrp-4、mrp-5 mRNA表达。结果 TTC染色结果显示,脑缺血再灌注后,大鼠脑组织出现明显梗死灶。各药物能显著减少脑梗死体积,ASTIV+PNS的效应强于AST IV与PNS单用,冰片+AST IV+PNS的效应强于各药物单用及AST IV+PNS。外排蛋白和基因检测显示,脑缺血再灌注后,大鼠脑组织P-gp、MRP-1、MRP-2、MRP-4、MRP-5蛋白表达均显著增多。与模型组比较,冰片能显著下调大鼠脑组织P-gp、MRP-2、MRP-4蛋白表达水平,PNS能显著下调MRP-4、MRP-5蛋白表达水平,AST IV、AST IV+PNS与冰片+AST IV+PNS能显著下调P-gp、MRP-2、MRP-4、MRP-5蛋白表达水平,且冰片+AST IV+PNS的效应显著强于各药物单用及AST IV+PNS,AST IV+PNS的效应显著强于AST IV或PNS单用。基因表达结果与蛋白表达结果类似。摄取蛋白检测结果显示,与对照组比较,脑缺血再灌注后大鼠脑组织OCT-3蛋白表达在模型组及各给药组变化均不明显,而模型组OATP-2蛋白表达水平显著降低。PNS、AST IV+PNS及冰片+AST IV+PNS能显著上调OATP-2蛋白表达水平,且AST IV+PNS的效应显著强于AST IV、PNS单用,冰片+ASTIV+PNS的效应显著强于各药物单用及ASTIV+PNS。结论脑缺血再灌注后,脑组织损伤,BBB的主要外排蛋白和基因表达均显著增强,而摄取蛋白OATP-2表达显著降低。冰片配伍AST IV及PNS后,能增强抗缺血性脑损伤的作用,其作用可能与下调BBB中外排蛋白P-gp、MRP-2、MRP-4、MRP-5和相应基因表达,同时上调摄取蛋白OATP-2表达,促使脑组织中冰片、AST IV及PNS有效成分的吸收与富集而发挥药理作用有关。

关键词：冰片黄芪甲苷三七总皂苷脑缺血再灌注血脑屏障转运蛋白

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冰片配伍黄芪甲苷与三七总皂苷对脑缺血/再灌注后血脑屏障通透性的影响

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中国药理学通报 2019年第11期35卷 1516-1523页

作者：丁煌唐三杨筱倩刘晓丹黄小平邓常清湖南中医药大学分子病理实验室中西医结合心脑疾病防治湖南省重点实验室细胞生物学与分子技术湖南省高校重点实验室

目的探讨冰片、黄芪甲苷(AST Ⅳ)和三七总皂苷(PNS)配伍对脑缺血/再灌注后血脑屏障(BBB)的影响。方法脑缺血/再灌注大鼠灌胃给药,观察神经功能缺损症状,测定脑组织含水量和BBB通透性、闭锁小带蛋白1(ZO-1)、ZO-2、咬合蛋白(Occludin)... 详细信息

目的探讨冰片、黄芪甲苷(AST Ⅳ)和三七总皂苷(PNS)配伍对脑缺血/再灌注后血脑屏障(BBB)的影响。方法脑缺血/再灌注大鼠灌胃给药,观察神经功能缺损症状,测定脑组织含水量和BBB通透性、闭锁小带蛋白1(ZO-1)、ZO-2、咬合蛋白(Occludin)及闭合蛋白5(Claudin-5)表达。结果脑缺血/再灌注后,大鼠出现神经功能缺损症状,神经功能评分和脑含水量增加,BBB破坏。各药物能不同程度减轻上述病理改变,冰片+AST Ⅳ+PNS效应最强,优于药物单用及AST Ⅳ+PNS。脑缺血/再灌注后,ZO-1、ZO-2、Occludin、Claudin-5表达减少。各药物使ZO-1增加,除AST Ⅳ外,上调Occludin表达;冰片+AST Ⅳ+PNS还明显上调ZO-2,且上调ZO-1、ZO-2、Occludin的效应优于药物单用及AST Ⅳ+PNS。结论冰片、AST Ⅳ和PNS能不同程度降低脑缺血/再灌注后BBB通透性的增加,减轻脑水肿,对抗脑组织损伤,三药合用有增强效应,机制可能与协同抑制缺血后ZO-1、ZO-2、Occludin表达下调,保护BBB有关。

关键词：冰片黄芪甲苷三七总皂苷脑缺血/再灌注血脑屏障紧密连接蛋白

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黄芪甲苷配伍三七总皂苷对OGD/R大鼠骨髓间充质干细胞增殖、凋亡、迁移及神经分化的影响

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中草药 2019年第23期50卷 5795-5801页

作者：刘晓丹丁煌邓常清湖南中医药大学分子病理实验室中西医结合心脑疾病防治湖南省重点实验室细胞生物学与分子技术湖南省高校重点实验室

目的观察黄芪甲苷(ASTIV)配伍三七总皂苷(PNS)对氧糖剥夺后再复糖复氧(OGD/R)大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖、凋亡、迁移及神经分化的影响。方法全骨髓贴壁法分离、培养、扩增、纯化BMSCs,流式细胞仪检测BMSCs表面标志物CD29、CD90、... 详细信息

目的观察黄芪甲苷(ASTIV)配伍三七总皂苷(PNS)对氧糖剥夺后再复糖复氧(OGD/R)大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖、凋亡、迁移及神经分化的影响。方法全骨髓贴壁法分离、培养、扩增、纯化BMSCs,流式细胞仪检测BMSCs表面标志物CD29、CD90、CD34、CD45阳性表达率。取第3代BMSCs,采用AST IV与PNS高(100μmol/L+60μmol/L)、中(50μmol/L+30μmol/L)、低(25μmol/L+15μmol/L)剂量配伍预处理24 h,以OGD/R建立缺血再灌注损伤模型,同时设立对照组和模型组。CCK-8法测定细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞迁移,巢蛋白(Nestin)/神经元特异性烯醇化酶(NSE)、Nestin/胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光双标观察BMSCs向神经元及星形胶质细胞分化情况。结果成功培养分离BMSCs,流式细胞仪检测CD29、CD90阳性率分别为94.23%、94.69%;而CD34、CD45阳性表达率分别为5.76%、5.31%;与对照组比较,模型组细胞存活数量明显减少(P<0.05)、细胞凋亡率显著增加(P<0.05),与模型组比较,AST IV与PNS不同剂量配伍均能促进BMSCs增殖(P<0.05、0.01),并抑制细胞凋亡(P<0.05、0.01);与对照组比较,模型组、AST IV与PNS不同剂量配伍均能促进BMSCs迁移(P<0.05),与模型组比较,AST IV与PNS不同剂量配伍组的迁移细胞数量明显增加(P<0.05);与对照组比较,模型组与AST IV与PNS不同剂量配伍组均能促进BMSCs向神经元及星形胶质细胞分化(P<0.01),与模型组比较,ASTIV与PNS不同剂量配伍组的Nestin/NSE、Nestin/GFAP阳性表达率明显增高(P<0.01)。结论ASTIV配伍PNS在体外能促进缺血再灌注模型BMSCs增殖、迁移,抑制其凋亡,并诱导其向神经元、星形胶质细胞定向分化。

关键词：黄芪甲苷三七总皂苷骨髓间充质干细胞脑缺血再灌注凋亡迁移神经分化

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补阳还五汤苷类有效组分及其有效成分配伍对血管平滑肌细胞增殖及相关信号转导通路的影响

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中国中药杂志 2016年第10期41卷 1889-1897页

作者：曹浪邓常清湖南中医药大学分子病理实验室中西医结合心脑疾病防治湖南省重点实验室细胞生物学与分子技术湖南省高校重点实验室湖南长沙410208

研究补阳还五汤苷类有效组分和其主要有效成分黄芪甲苷、苦杏仁苷、芍药苷及其配伍抗血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)增殖的作用,阐明其抗VSMC增殖的主要药效物质,并从细胞信号转导途径研究其作用机制。大鼠口服给药... 详细信息

研究补阳还五汤苷类有效组分和其主要有效成分黄芪甲苷、苦杏仁苷、芍药苷及其配伍抗血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)增殖的作用,阐明其抗VSMC增殖的主要药效物质,并从细胞信号转导途径研究其作用机制。大鼠口服给药后制备含药血浆。培养大鼠主动脉VSMC,采用血小板衍生生长因子(platelet derived growth factor,PDGF)刺激VSMC增殖,加入含药血浆,测定细胞增殖活性、细胞周期及其相关蛋白表达、细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)、磷脂酰肌醇3激酶(phos-phatidylinositol-3-kinase/protein kinase B,PI3K/Akt)、Janus激酶/信号转导与激活因子(Janus kinase/signal transducer and activator of transcription,JAK/STAT)信号通路相关蛋白表达。结果显示,PDGF刺激后,VSMC增殖活性增强(P<0.01),G0/G1期细胞减少(P<0.01),S/M期细胞增多(P<0.01),同时细胞周期相关蛋白PCNA,cyclin D1蛋白表达增强(P<0.01)。苷类组分、3个主要有效成分黄芪甲苷、芍药苷、苦杏仁苷及其配伍均可抑制细胞增殖(P<0.05或P<0.01),作用呈量效关系和时效关系;且可使G0/G1期细胞增多(P<0.01),S/M期细胞减少(P<0.01),PCNA,cyclin D1蛋白表达下调(P<0.01),3个有效成分配伍的作用强于单个有效成分(P<0.05)。PDGF诱导VSMC增殖后,p-ERK1/2表达增强(P<0.01),PI3K表达降低(P<0.01),p-PI3K表达增强(P<0.01),STAT3表达降低(P<0.01),p-STAT3表达增高(P<0.01)。苷类有效组分和主要有效成分黄芪甲苷、芍药苷、苦杏仁苷及其配伍可使p-ERK1/2表达降低(P<0.05),PI3K表达升高(P<0.01),p-PI3K表达降低(P<0.05或P<0.01),STAT3表达升高(P<0.01),p-STAT3表达下调(P<0.05或P<0.01)。上述结果表明PDGF可诱导VSMC细胞周期转化,使VSMC增殖。其机制与ERK,PI3K/Akt,JAK/STAT信号通路激活有关。补阳还五汤苷类有效组分和其主要有效成分黄芪甲苷、芍药苷、苦杏仁苷及其配伍可抑制VSMC细胞周期转换,具有抗VSMC增殖的作用,其作用机制与其抑制PI3K/Akt、丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)、JAK/STAT 3个信号通路激活有关。黄芪甲苷、芍药苷、苦杏仁苷为其抗VSMC增殖的主要有效成分,三者配伍对VSMC增殖的抑制具有增强作用。

关键词：补阳还五汤苷类有效组分黄芪甲苷苦杏仁苷芍药苷血管平滑肌细胞增殖细胞周期

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黄芪甲苷与人参皂苷Rg1配伍抗PC12细胞氧糖剥夺/复糖复氧后自噬性损伤相互作用的研究

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中国药理学通报 2017年第2期33卷 235-243页

作者：丁煌李静娴唐标刘晓丹李玲唐映红邓常清黄小平湖南中医药大学分子病理实验室中西医结合心脑疾病防治湖南省重点实验室细胞生物学与分子技术湖南省高校重点实验室湖南长沙410208

目的探讨黄芪甲苷和人参皂苷Rg1配伍对PC12细胞氧糖剥夺后再复糖复氧(oxygen glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)诱导的细胞自噬性损伤的影响及其相互作用。方法以PC12细胞建立OGD/R自噬性损伤模型,分别设立黄芪甲苷和人参皂苷Rg... 详细信息

目的探讨黄芪甲苷和人参皂苷Rg1配伍对PC12细胞氧糖剥夺后再复糖复氧(oxygen glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)诱导的细胞自噬性损伤的影响及其相互作用。方法以PC12细胞建立OGD/R自噬性损伤模型,分别设立黄芪甲苷和人参皂苷Rg1不同剂量,药物干预细胞后,以激光共聚焦显微镜检测自噬体评价药物对细胞自噬性损伤的作用,并计算药物的半数抑制浓度(median inhibitory concentration,IC_(50))。以黄芪甲苷和人参皂苷Rg1的IC_(50)为1个剂量单位,按Isobologram法分别设立黄芪甲苷与人参皂苷Rg1不同比例(1∶2、1∶1、2∶1)的配伍,研究药物对细胞自噬的影响,计算各比例配伍的IC_(50),采用Isobologram及95%可信区间和相互作用指数γ分析黄芪甲苷与人参皂苷Rg1配伍抑制自噬的相互作用性质。在此基础上,以黄芪甲苷与人参皂苷Rg1的IC_(50)剂量进行1∶1配伍,以细胞存活率、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)漏出率、自噬体数量及p62蛋白表达评价药物配伍对细胞损伤和细胞自噬的影响。结果黄芪甲苷与人参皂苷Rg1抑制自噬的IC_(50)及其95%可信区间分别为(27.22±0.614)mg·L^(-1)[25.96,29.03]、(13.68±1.334)mg·L^(-1)[10.27,16.95]。黄芪甲苷与人参皂苷Rg1在1∶1配伍时呈现协同增效作用,而黄芪甲苷与人参皂苷Rg1在1∶2和2∶1配伍时,呈拮抗作用。以黄芪甲苷和人参皂苷Rg1的IC_(50)剂量进行1∶1配伍验证,结果显示单用黄芪甲苷和人参皂苷Rg1以及配伍均能增强细胞存活率,减轻LDH漏出,减少自噬体数量和LC3-Ⅱ蛋白数量,增加p62蛋白表达,且配伍组效应强于黄芪甲苷与人参皂苷Rg1单用组。析因设计实验分析表明,以黄芪甲苷和人参皂苷Rg1的IC_(50)剂量进行1∶1配伍时,对细胞存活、LDH漏出及自噬体形成均存在交互作用。结论在缺糖缺氧2h再复糖复氧24 h,细胞出现过度自噬和细胞损伤,黄芪甲苷和人参皂苷Rg1以IC_(50)剂量进行1∶1配伍时,对细胞自噬性损伤具有协同抑制作用。

关键词：黄芪甲苷人参皂苷Rg1 配伍 PC12细胞细胞自噬 Isobologram分析相互作用

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黄芪甲苷与三七有效成分配伍对小鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡和内质网应激的影响

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中草药 2015年第15期46卷 2257-2264页

作者：黄小平欧阳国丁煌邓常清唐映红湖南中医药大学分子病理实验室中西医结合心脑疾病防治湖南省重点实验室细胞生物学与分子技术湖南省高校重点实验室湖南长沙410208

目的从内质网应激角度探讨黄芪甲苷和三七主要有效成分配伍对小鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的影响和作用机制。方法将 C57BL/6 小鼠随机分为假手术组、模型组、黄芪甲苷(ASTIV,40 mg/kg)组、人参皂苷Rg1(Rg1,50 mg/kg))组、人参皂苷Rb... 详细信息

目的从内质网应激角度探讨黄芪甲苷和三七主要有效成分配伍对小鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的影响和作用机制。方法将 C57BL/6 小鼠随机分为假手术组、模型组、黄芪甲苷(ASTIV,40 mg/kg)组、人参皂苷Rg1(Rg1,50 mg/kg))组、人参皂苷Rb1(Rb1,40 mg/kg)组、三七皂苷R1(R1,10 mg/kg)组、4 种有效成分配伍(ASTIV+Rg1+Rb1+R1)组、ASTIV+Rg1 组、ASTIV+Rb1 组、ASTIV+R1 组及阳性对照依达拉奉组。各组小鼠预先给药3 d 后,夹闭双侧颈总动脉造成脑缺血再灌注模型,再灌注24 h 后,TUNEL 法检测海马CA1 区神经细胞凋亡,计算凋亡率;Western-blotting 法测定脑组织半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、Caspase-12 和磷酸化的c-jun 氨基末端激酶1/2(p-JNK1/2)蛋白表达。结果脑缺血 20 min 再灌注24 h 后,小鼠海马CA1 区神经细胞凋亡率和Caspase-3 蛋白表达量增加。各给药组均能降低海马CA1 区神经细胞凋亡率,抑制Caspase-3 蛋白的表达。且ASTIV+Rg1 与ASTIV+R1 降低凋亡率和Caspase-3 蛋白表达的效应分别强于各有效成分单用;4 种有效成分配伍降低细胞凋亡率的效应强于各有效成分单用及ASTIV+Rb1,抑制Caspase-3 蛋白表达的效应强于各有效成分单用及ASTIV+Rb1、ASTIV+R1。脑缺血再灌注后,小鼠脑组织GRP78和Caspase-12、p-JNK1/2 蛋白表达增多,ASTIV、Rg1、R1 及各配伍组均能进一步上调脑组织GRP78 蛋白表达,且各有效成分配伍的效应分别强于各有效成分单用,4 种有效成分配伍的效应强于ASTIV+Rb1 及ASTIV+R1。R1、4 种有效成分配伍、ASTIV+Rg1、ASTIV+R1 均能降低Caspase-12 蛋白的表达,4 种有效成分配伍的效应强于各有效成分单用及ASTIV+Rb1。ASTIV、Rg1、4 种有效成分配伍、ASTIV+Rg1、ASTIV+Rb1 组脑组织p-JNK1/2 蛋白表达显著减少,4 种有效成分配伍下调p-JNK1/2 的效应强于各有效成分单用及ASTIV+Rg1、ASTIV+R1。结论黄芪甲苷与三七的主要有效成分配伍能增强对脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的抑制作用,其机制与通过不同环节减轻内质网应激有关。ASTIV+Rb1 可能主要作用于JNK 通路,ASTIV+R1 可能主要作用于Caspase-12 通路,而4 种有效成分配伍和ASTIV+Rg1 均能作用于Caspase-12 和JNK 通路。

关键词：黄芪甲苷人参皂苷Rg1 人参皂苷Rb1 三七皂苷R1 配伍脑缺血再灌注神经细胞凋亡内质网应激

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冰片配伍黄芪甲苷和三七总皂苷对脑缺血/再灌注损伤后神经血管单元的保护作用

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中国药理学通报 2020年第10期36卷 1470-1476页

作者：欧阳波杨筱倩丁煌刘晓丹黄小平邓常清湖南中医药大学分子病理实验室中西医结合心脑疾病防治湖南省重点实验室细胞生物学与分子技术湖南省高校重点实验室湖南长沙410208

目的观察冰片配伍黄芪甲苷(astragalosideⅣ,ASTⅣ)和三七总皂苷(panax notoginseng saponins,PNS)对大鼠脑缺血/再灌注后神经血管单元(NVU)的保护作用。方法脑缺血/再灌注大鼠灌胃给药,测定神经功能缺损、脑梗死体积和海马CA1区胶质纤... 详细信息

目的观察冰片配伍黄芪甲苷(astragalosideⅣ,ASTⅣ)和三七总皂苷(panax notoginseng saponins,PNS)对大鼠脑缺血/再灌注后神经血管单元(NVU)的保护作用。方法脑缺血/再灌注大鼠灌胃给药,测定神经功能缺损、脑梗死体积和海马CA1区胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、神经元特异性核蛋白(NeuN)、层黏连蛋白(LN)、水通道蛋白-4(AQP-4)及基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达。结果冰片配伍ASTⅣ和PNS能显著改善大鼠神经功能评分(P<0.05),降低脑梗死体积(P<0.05)和脑组织GFAP表达(P<0.01),增加NeuN、LN表达(P<0.01),抑制脑组织AQP-4、MMP-9蛋白表达(P<0.05)。结论冰片配伍ASTⅣ和PNS对脑缺血/再灌注后具有脑保护作用,其机制可能是减轻了神经元和微血管基底膜损伤、抑制星形胶质细胞过度活化、抑制水通道开放和保护血脑屏障而减轻脑水肿,从而对NVU发挥保护作用。

关键词：冰片黄芪甲苷三七总皂苷脑缺血/再灌注神经血管单元胶质纤维酸性蛋白神经元特异性核蛋白层黏连蛋白基质金属蛋白酶9 水通道蛋白4

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黄芪和三七的主要有效成分配伍对脑缺血/再灌注小鼠NF-κB信号通路及炎性因子表达的影响

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中国药理学通报 2015年第1期31卷 141-146页

作者：黄小平卢金冬丁煌邓冰湘唐映红邓常清湖南中医药大学分子病理实验室中西医结合心脑疾病防治湖南省重点实验室细胞生物学与分子技术湖南省高校重点实验室湖南长沙410208

目的从炎症反应探讨黄芪和三七主要有效成分配伍抗脑缺血/再灌注损伤的机制。方法将C57BL/6小鼠随机分为假手术组、模型组、黄芪甲苷(ASTⅣ)组、人参皂苷Rg1(Rg1)组、人参皂苷Rb1(Rb1)组、三七皂苷R1(R1)组、4种有效成分配伍组、ASTⅣ+... 详细信息

目的从炎症反应探讨黄芪和三七主要有效成分配伍抗脑缺血/再灌注损伤的机制。方法将C57BL/6小鼠随机分为假手术组、模型组、黄芪甲苷(ASTⅣ)组、人参皂苷Rg1(Rg1)组、人参皂苷Rb1(Rb1)组、三七皂苷R1(R1)组、4种有效成分配伍组、ASTⅣ+Rg1组、ASTⅣ+Rb1组、ASTⅣ+R1组及阳性对照药依达拉奉组。预先给药3 d,末次给药1 h后,结扎双侧颈总动脉,造成脑缺血20 min,再灌注24h。RT-PCR法测定TNF-α、IL-1β、ICAM-1 mRNA表达,Western blot法测定脑组织p-IκBα蛋白及胞质、胞核NF-κB蛋白表达,计算NF-κB核转位率。结果 1脑缺血/再灌注后,脑组织TNF-α、IL-1β、ICAM-1 mRNA表达增加。ASTⅣ可降低TNF-αmRNA表达,Rg1可降低ICAM-1 mRNA的表达,R1能同时下调TNF-α、ICAM-1 mRNA的表达。ASTⅣ与Rg1、Rb1、R1配伍对TNF-α、IL-1β、ICAM-1 mRNA的表达均有不同程度的抑制作用,且以4种有效成分配伍组和ASTⅣ+R1组对炎性细胞因子表达的抑制效应更加明显。2脑缺血/再灌注后,脑组织p-IκBα蛋白表达明显增加,胞质NF-κB蛋白表达明显减少,而胞核NF-κB蛋白表达增加,NF-κB核转位率升高。ASTⅣ、Rg1、R1及各有效成分配伍均能抑制IκB磷酸化,减少NF-κB核转位的发生,且配伍组的效应大于各有效成分单用,4种有效成分配伍组的效应大于ASTⅣ+Rb1和ASTⅣ+Rg1组。结论黄芪和三七的主要有效成分配伍能通过抑制缺血/再灌注后脑组织NF-κB信号通路的激活,减少炎性细胞因子的生成,从而减轻脑缺血后脑组织的继发性炎症反应,发挥对脑组织的保护作用。

关键词：黄芪黄芪甲苷三七人参皂苷 Rg1 人参皂苷Rb1 三七皂苷R1 有效成分配伍脑缺血/再灌注信号通路炎性细胞因子

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冰片配伍黄芪甲苷和三七总皂苷通过Notch信号通路对大鼠脑缺血再灌注损伤模型的神经保护作用

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中草药 2020年第23期51卷 5990-5997页

作者：欧阳波刘晓丹杨筱倩丁煌黄小平邓常清湖南中医药大学分子病理实验室中西医结合心脑疾病防治湖南省重点实验室细胞生物学与分子技术湖南省高校重点实验室湖南长沙410208

目的从Notch信号通路探讨冰片配伍黄芪甲苷(astragaloside Ⅳ,AST Ⅳ)和三七总皂苷(Panaxnotoginseng saponins,PNS)对大鼠脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia reperfusion injury,CIRI)模型的神经保护作用。方法 SD大鼠随机分为假手术组、模型组、冰片(7.5 mg/kg)组、PNS(25 mg/kg)组、AST Ⅳ(10 mg/kg)组、AST Ⅳ(10 mg/kg)+PNS(25 mg/kg)组、冰片(7.5 mg/kg)+AST Ⅳ(10 mg/kg)+PNS(25 mg/kg)低剂量组、冰片(15 mg/kg)+AST Ⅳ(20mg/kg)+PNS(50 mg/kg)高剂量组、依达拉奉(4 mg/kg)组。假手术组、模型组ig 0.5%CMC-Na,依达拉奉组ip相应药物,其余各组ig相应药物,2次/d,间隔12h。末次给药后2h采用线栓法阻断大鼠右侧大脑中动脉,建立CIRI模型。缺血2 h,再灌注22 h后,进行神经功能缺损评分;HE染色法观察缺血皮质区病理变化;免疫组化法检测神经元特异性核蛋白(neuron specific nuclear,NeuN)、内皮屏障抗原蛋白(endothelial barrier antigen,EBA)表达;Western blotting法检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、Notch1、Notch胞内域(intracellular domain of Notch,NICD)蛋白表达。结果模型组大鼠神经功能缺损评分和细胞损伤率显著增加(P<0.01);各给药组大鼠神经功能缺损评分和细胞损伤率显著降低(P<0.05、0.01),冰片+AST Ⅳ+PNS组的效应强于各药物单用及AST Ⅳ+PNS组(P<0.05、0.01)。模型组大鼠缺血皮质区Neu N、EBA蛋白表达均显著降低(P<0.01);各给药组Neu N、EBA蛋白表达显著增加(P<0.05、0.01),冰片+AST Ⅳ+PNS组的效应强于各药物单用及AST Ⅳ+PNS组(P<0.05、0.01)。模型组大鼠缺血皮质区VEGF蛋白表达显著增加(P<0.05),NICD、Notch1蛋白表达无显著变化;冰片+ASTⅣ+PNS组VEGF、NICD、Notch1蛋白表达显著上调(P<0.01),且3种药物配伍的效应强于各药物单用及AST Ⅳ+PNS(P<0.05、0.01)。结论冰片、AST Ⅳ、PNS具有抗脑缺血再灌注后神经元和脑微血管损伤的作用,3种药物配伍的作用强于各药物单用及AST Ⅳ+PNS,其作用可能与激活Notch信号通路、上调VEGF表达,从而发挥对缺血脑组织的保护作用有关。

关键词：冰片黄芪甲苷三七总皂苷脑缺血再灌注损伤神经元微血管

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冰片对黄芪甲苷和三七总皂苷配伍有效成分在脑缺血/再灌注模型大鼠脑组织分布的影响

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中草药 2019年第7期50卷 1649-1656页

作者：刘晓丹杨筱倩唐三丁煌黄小平邓常清湖南中医药大学分子病理实验室中西医结合心脑疾病防治湖南省重点实验室细胞生物学与分子技术湖南省高校重点实验室湖南长沙410208

目的探讨冰片是否具有促进黄芪甲苷(AST IV)和三七总皂苷(PNS)配伍时主要有效成分透过大脑中动脉栓塞(MCAO)再灌注模型大鼠血脑屏障的作用。方法大鼠随机分为假手术组、模型组、冰片组、AST IV组、PNS组、AST IV+PNS组、冰片+AST IV+PNS... 详细信息

目的探讨冰片是否具有促进黄芪甲苷(AST IV)和三七总皂苷(PNS)配伍时主要有效成分透过大脑中动脉栓塞(MCAO)再灌注模型大鼠血脑屏障的作用。方法大鼠随机分为假手术组、模型组、冰片组、AST IV组、PNS组、AST IV+PNS组、冰片+AST IV+PNS组,制备MCAO再灌注大鼠模型,以液相色谱-质谱联用法(LC-MS/MS)测定大鼠患侧与健侧大脑皮层、小脑中AST IV和PNS有效成分(人参皂苷Rg1、Rb1和三七皂苷R1)的含量。结果 AST IV无论是单用还是与PNS、冰片配伍,其口服后主要分布在大脑皮层,尤其是患侧大脑皮层。冰片+AST IV+PNS能使患侧与健侧大脑皮层中AST IV含量显著增加。PNS单用,其有效成分人参皂苷Rg1、Rb1和三七皂苷R1主要分布在患侧小脑。冰片+AST IV+PNS能使患侧大脑皮层中人参皂苷Rb1含量显著增加,使健侧和患侧大脑皮层中人参皂苷Rg1含量增加,使大脑皮层尤其是患侧大脑皮层及小脑中三七皂苷R1含量增加。结论大鼠脑缺血再灌注后,AST IV与PNS的有效成分人参皂苷Rb1、Rg1及三七皂苷R1在大脑皮层和小脑均有一定的分布。AST IV单用时,AST IV主要分布在大脑皮层;PNS单用时,人参皂苷Rb1、Rg1及三七皂苷R1主要分布在小脑。冰片与AST IV、PNS合用后,能促进AST IV及人参皂苷Rb1、Rg1及三七皂苷R1向大脑皮层富集,尤其是向缺血再灌注侧大脑皮层富集;而且能不同程度地促进AST IV,人参皂苷Rb1、Rg1及三七皂苷R1在大脑皮层的吸收,尤其是在患侧大脑皮层的吸收。

关键词：脑缺血再灌注冰片黄芪甲苷三七总皂苷配伍血脑屏障药物吸收人参皂苷Rb1 人参皂苷Rg1 三七皂苷R1

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