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中华危重病急救医学 2024年第2期36卷 166-171页

作者：徐朝军张胜康张怡周代勇明润宇宋岚湖南中医药大学第一附属医院心胸外科长沙410007 湖南中医药大学医学院生物化学与分子生物学教研室长沙410208

目的从调控中性粒细胞(PMN)凋亡探讨血必净注射液对体外循环(CPB)所致急性肺损伤(ALI)的防治作用。方法按随机数字表法将30只雄性SD大鼠分为假手术组(Sham组)、CPB模型组(CPB组)、血必净预处理组(XBJ组),每组10只。CPB组和XBJ组CPB 60 ... 详细信息

目的从调控中性粒细胞(PMN)凋亡探讨血必净注射液对体外循环(CPB)所致急性肺损伤(ALI)的防治作用。方法按随机数字表法将30只雄性SD大鼠分为假手术组(Sham组)、CPB模型组(CPB组)、血必净预处理组(XBJ组),每组10只。CPB组和XBJ组CPB 60 min后停机;Sham组不行CPB。XBJ组CPB前2 h腹腔注射4 mL/kg血必净注射液;Sham组和CPB组注射等量生理盐水。CPB后4 h,取动脉血进行血气分析,计算呼吸指数(RI);取肺组织测定肺系数(LI)和肺含水率。收集支气管肺泡灌洗液(BALF)获取PMN,检测天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)活性,并用流式细胞仪检测细胞凋亡率;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测微小RNA-142-3p(miR-142-3p)、FoxO1 mRNA表达;蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测FoxO1蛋白表达。此外,将HL-60细胞分为对照寡核苷酸转染组、miR-142-3p模拟物转染组和miR-142-3p拮抗物转染组,转染48 h后双荧光素酶报告基因检测miR-142-3p与FoxO1结合的活性。结果与Sham组相比,CPB组大鼠RI、LI及肺含水率显著升高,BALF获取PMN中caspase-3活性和细胞凋亡率显著降低,miR-142-3p表达下降,FoxO1蛋白表达增加。与CPB组比较,XBJ组大鼠RI、LI、肺含水率显著降低〔RI:0.281±0.066比0.379±0.071,LI:4.50±0.26比5.71±0.42,肺含水率:(80.31±3.25)%比(84.59±3.41)%,均P<0.01〕,BALF获取PMN中caspase-3活性和细胞凋亡率显著升高〔caspase-3活性:0.350±0.021比0.210±0.014,凋亡率:(15.490±1.382)%比(8.700±0.701)%,均P<0.01〕,miR-142-3p表达显著上调(2-ΔΔCt:2.61±0.17比0.62±0.05,P<0.01),FoxO1蛋白表达显著降低〔FoxO1/GAPDH(相对表达量):0.81±0.04比1.22±0.06,P<0.01〕。而3组间FoxO1 mRNA表达差异无统计学意义。生物信息学分析结果表明,miR-142-3p可以结合FoxO13’’非翻译区(3’’UTR)。与转染无关对照寡核苷酸序列比较,转染miR-142-3p模拟物可以降低HL-60细胞FoxO1蛋白表达〔FoxO1/GAPDH(相对表达量):0.48±0.06比1.00±0.05,P<0.01〕,而转染miR-142-3p拮抗物后FoxO1蛋白表达上升〔FoxO1/GAPDH(相对表达量):1.37±0.21比1.00±0.05,P<0.05〕,但转染miR-142-3p模拟物或拮抗物对FoxO1 mRNA表达均无影响。荧光素酶报告基因显示,miR-142-3p可以与FoxO13’’UTR结合抑制FoxO1表达。结论血必净注射液可能通过miR-142-3p/FoxO1轴促进肺泡PMN凋亡,发挥防治CPB所致ALI的作用。

关键词：体外循环急性肺损伤血必净注射液微小RNA-142-3p FoxO1 凋亡

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雷公藤甲素诱导人肺腺癌A549细胞凋亡机制的研究

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中华肿瘤防治杂志 2008年第16期15卷 1227-1229页

作者：宋岚徐朝军黄春林张彩平乔新惠南华大学生物化学与分子生物学教研室湖南衡阳421001 湖南中医药大学第一附属医院胸心外科湖南长沙410007

目的:探讨雷公藤甲素(TP)诱导肺腺癌A549细胞凋亡的机制。方法:体外细胞培养,待细胞处于对数生长期时加入4.0μg/mLTP处理24和48h;Western blot检测Sur-vivin、Bcl-2和Fas蛋白质表达;Caspase检测试剂检测Caspase-3和Caspase-9活性。结果... 详细信息

目的:探讨雷公藤甲素(TP)诱导肺腺癌A549细胞凋亡的机制。方法:体外细胞培养,待细胞处于对数生长期时加入4.0μg/mLTP处理24和48h;Western blot检测Sur-vivin、Bcl-2和Fas蛋白质表达;Caspase检测试剂检测Caspase-3和Caspase-9活性。结果:4.0μg/mLTP呈时间依赖性降低Survivin和Bcl-2的表达(与对照组比较P<0.05),升高Fas的表达(与对照组比较P<0.05),TP作用后Caspase-3和Caspase-9活性增强,作用24、48h后Caspase-3活性分别为1.32±0.07和1.46±0.03,Caspase-9活性分别为2.36±0.06和2.41±0.03,与对照组比较,P<0.01。结论:降低Survivin和Bcl-2表达,促进Fas表达可能是TP诱导A549细胞凋亡的机制之一。

关键词：肺肿瘤腺癌雷公藤内酯/药理学细胞凋亡

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还少丹对D-半乳糖致衰老模型小鼠免疫功能的影响

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中国中医药信息杂志 2012年第5期19卷 36-37页

作者：胡梅刘群良张波谭峰程莉娟湖南中医药大学生物化学教研室湖南长沙410208

目的观察还少丹对D-半乳糖致衰老模型小鼠免疫功能的影响,并探讨其延缓衰老的机制。方法将小鼠随机分成对照组、模型组和还少丹低、高剂量组。采用皮下注射D-半乳糖溶液制备亚急性衰老模型,还少丹低、高剂量组给予相应剂量的还少丹水煎... 详细信息

目的观察还少丹对D-半乳糖致衰老模型小鼠免疫功能的影响,并探讨其延缓衰老的机制。方法将小鼠随机分成对照组、模型组和还少丹低、高剂量组。采用皮下注射D-半乳糖溶液制备亚急性衰老模型,还少丹低、高剂量组给予相应剂量的还少丹水煎液灌胃,对照组和模型组给予等量的蒸馏水灌胃,连续6周。测定各组小鼠胸腺指数和脾脏指数、脾组织IL-2水平及T淋巴细胞的增殖活性。结果与对照组比较,模型组小鼠胸腺和脾脏指数、IL-2水平和T淋巴细胞增殖活性明显降低(P<0.01);与模型组比较,还少丹低、高剂量组均能增加胸腺指数和脾脏指数,提高IL-2水平和T淋巴细胞增殖活性,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论还少丹可通过增加胸腺和脾脏指数来保护免疫器官,通过提高IL-2的水平及T淋巴细胞的增殖活性增加机体免疫活性,这可能是还少丹发挥抗衰老作用的机制之一。

关键词：还少丹抗衰老 D-半乳糖白细胞介素-2 T淋巴细胞增殖活性小鼠

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雷公藤甲素抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖及胶原合成的研究

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中国临床药理学与治疗学 2008年第5期13卷 499-503页

作者：徐朝军宋岚尹晓清郭正宇杨进湖南中医药大学第一附属医院胸心外科南华大学生物化学与分子生物学教研室

目的:探讨雷公藤甲素对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的新生大鼠心肌成纤维细胞(cardi-acfibroblasts,CFb)增殖及α1(Ⅰ)型前胶原合成的影响。方法:建立AngⅡ诱导新生大鼠心肌纤维化细胞模型。采用四氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖;分别采用... 详细信息

目的:探讨雷公藤甲素对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的新生大鼠心肌成纤维细胞(cardi-acfibroblasts,CFb)增殖及α1(Ⅰ)型前胶原合成的影响。方法:建立AngⅡ诱导新生大鼠心肌纤维化细胞模型。采用四氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖;分别采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot印迹法检测大鼠心肌成纤维细胞α1(Ⅰ)型前胶原mRNA及蛋白表达。结果:雷公藤甲素以剂量依赖性方式抑制心肌成纤维细胞增殖和α1(Ⅰ)型前胶原合成。结论:雷公藤甲素可以通过抑制AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖和α1(Ⅰ)型前胶原合成从而抑制心肌纤维化。

关键词：雷公藤甲素心肌成纤维细胞血管紧张素Ⅱ α1(Ⅰ)型前胶原

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雷公藤甲素对人肺腺癌A_(549)细胞增殖和凋亡的影响

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中国临床药理学与治疗学 2006年第11期11卷 1275-1278页

作者：宋岚徐朝军张彩平乔新惠南华大学生物化学与分子生物学教研室湖南中医药大学第一附属医院胸心外科

目的:研究雷公藤甲素对人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用MTT实验检测雷公藤甲素对体外培养的人肺腺癌A549细胞增殖的影响,运用流式细胞术、基因组DNA电泳观察凋亡特征性“梯状”条带检测细胞凋亡,采用caspase活性定量检测... 详细信息

目的:研究雷公藤甲素对人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用MTT实验检测雷公藤甲素对体外培养的人肺腺癌A549细胞增殖的影响,运用流式细胞术、基因组DNA电泳观察凋亡特征性“梯状”条带检测细胞凋亡,采用caspase活性定量检测试剂盒分析caspase-9,3的活化。结果:雷公藤甲素对体外培养的A549细胞具有明显的抑制作用。流式细胞仪检测显示雷公藤甲素可以显著诱导A549细胞凋亡,DNA电泳显示雷公藤甲素作用于A549细胞后出现凋亡细胞特有的DNA阶梯状条带。雷公藤甲素作用后A549细胞caspase-9,caspase-3活性明显升高。结论:雷公藤甲素可能通过线粒体信号通路抑制肺腺癌A549细胞的生长并诱导其凋亡。

关键词：雷公藤甲素肺癌细胞凋亡

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骨关节炎患者软骨细胞Fas基因增强子区甲基化水平与Fas蛋白表达的相关性

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中国老年学杂志 2017年第13期37卷 3188-3190页

作者：陈夏彭丹陶怀沈奕周政中南大学湘雅二医院骨科湖南长沙410011 湖南中医药大学医学院生物化学与分子生物学教研室湖南中医药大学干细胞调控与应用实验室

目的通过观察骨关节炎(OA)软骨细胞中Fas基因甲基化水平与Fas蛋白表达的相关性,探讨Fas基因增强子区异常甲基化在OA发生和发展中的作用。方法采用亚硫酸氢钠方法处理基因组DNA,甲基化特异性PCR技术和免疫组织化学法分别检测14例健康人... 详细信息

目的通过观察骨关节炎(OA)软骨细胞中Fas基因甲基化水平与Fas蛋白表达的相关性,探讨Fas基因增强子区异常甲基化在OA发生和发展中的作用。方法采用亚硫酸氢钠方法处理基因组DNA,甲基化特异性PCR技术和免疫组织化学法分别检测14例健康人和35例OA患者软骨细胞中Fas基因增强子区甲基化水平和相关蛋白表达情况。结果 OA组Fas基因增强子区低甲基化率及软骨细胞Fas蛋白表达阳性率均明显高于健康对照组(P<0.01),且Fas基因低甲基化及蛋白表达与性别,年龄无明显相关性(P>0.05)。Fas增强子低甲基化与Fas蛋白表达呈显著正相关(P<0.01)。结论 OA患者关节软骨细胞Fas基因增强子区呈低甲基化状态,通过上调Fas蛋白表达参与OA的发生发展。

关键词：骨关节炎 Fas增强子甲基化

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小鼠间充质干细胞脂向分化过程中miRNA-143的表达

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基础医学与临床 2012年第1期32卷 12-15页

作者：凌宏艳胡小波奉水东杨丝丝何剑琴张恺芳廖端芳南华大学生理学教研室湖南长沙410208 南华大学生物化学与分子生物学教研室湖南长沙410208 南华大学流行病学教研室湖南衡阳421001 湖南中医药科大学药学院湖南长沙410208

目的探讨小鼠间充质干细胞(MSCs)脂向分化过程中miRNA-143(miR-143)的表达,为阐明MSCs脂向分化的调控机制提供新线索。方法采用全骨髓体外分离结合差速贴壁法纯化扩增C57BL/6小鼠MSCs,将第5代MSCs采用脂肪细胞分化诱导剂进行成脂诱导。... 详细信息

目的探讨小鼠间充质干细胞(MSCs)脂向分化过程中miRNA-143(miR-143)的表达,为阐明MSCs脂向分化的调控机制提供新线索。方法采用全骨髓体外分离结合差速贴壁法纯化扩增C57BL/6小鼠MSCs,将第5代MSCs采用脂肪细胞分化诱导剂进行成脂诱导。运用miRNA芯片技术比较MSCs组和脂肪细胞组中miR-143的表达,并通过实时定量PCR技术验证。结果成功分离、纯化和培养MSCs;MSCs经脂肪诱导剂诱导后,胞内大量脂滴形成,油红O染色阳性。MiRNA芯片及实时定量PCR结果均表明miR-143在MSCs脂向分化过程中显著上调(3.73±0.42 vs 1.00±0.14,P<0.01)。结论 miR-143可能参与调控MSCs的脂向分化。

关键词： miRNA-143 间充质干细胞脂向分化 miRNA芯片实时定量PCR

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姜黄素通过调节PCSK9促进肝细胞摄取血浆LDL-C

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中国药理学通报 2020年第10期36卷 1415-1421页

作者：王楚瑶蒋素素向德彪杨慧仙邵倞琦李博洁袁育林贺卫和张敏龙石银田英张彩平廖端芳南华大学衡阳医学院生物化学与分子生物学教研室湖南衡阳421001 湖南中医药大学药学院药理学教研室湖南长沙410208 南华大学衡阳医学院心血管疾病研究所湖南衡阳421001

目的明确姜黄素调节PCSK9促进肝细胞摄取LDL的作用。方法利用实验室现有的慢病毒感染HepG2和LO2两种细胞,分别构建过表达PCSK9(RNAi-PCSK9)和干扰PCSK9(OE-PCSK9)细胞模型,通过倒置荧光显微镜检测慢病毒转染效率;Western blot检测蛋白表... 详细信息

目的明确姜黄素调节PCSK9促进肝细胞摄取LDL的作用。方法利用实验室现有的慢病毒感染HepG2和LO2两种细胞,分别构建过表达PCSK9(RNAi-PCSK9)和干扰PCSK9(OE-PCSK9)细胞模型,通过倒置荧光显微镜检测慢病毒转染效率;Western blot检测蛋白表达;油红O染色分析姜黄素对细胞中脂质摄取情况;酶法检测细胞内胆固醇含量。结果镜下观察细胞内可见清晰绿色荧光。Western blot结果显示干扰PCSK9组降低PCSK9表达,升高LDLR表达;过表达PCSK9组增加PCSK9表达,降低LDLR表达。油红O结果显示姜黄素/瑞舒伐他汀处理24 h后RNAi/OEPCSK9组细胞内脂质含量均增加。胆固醇含量测定姜黄素/瑞舒伐他汀处理24 h后RNAi-PCSK9组总胆固醇(total cholesterol,TC)/游离胆固醇(free cholesterol,FC)含量升高,OEPCSK9组TC/FC含量均下降。结论姜黄素特异性降低PCSK9表达继而促进肝细胞摄取LDL-C。

关键词：姜黄素血脂异常前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶Kexin-9型低密度脂蛋白胆固醇胆固醇慢病毒转染

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医学生物化学实验教学中Web Quest模式的应用

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基础医学教育 2014年第12期16卷 1089-1091页

作者：陶怀程莉娟宋岚何迎春湖南中医药大学医学院生物化学教研室长沙410208

为了培养学生自主探究和创造性问题解决能力,在生物化学实验教学中采用Web Quest教学模式,将理论课教学内容与临床实际应用紧密联系,使学生从被动接受者转变为知识主动探索者,自主建构所需的知识体系,激发了学生学习兴趣,加强了学生多... 详细信息

为了培养学生自主探究和创造性问题解决能力,在生物化学实验教学中采用Web Quest教学模式,将理论课教学内容与临床实际应用紧密联系,使学生从被动接受者转变为知识主动探索者,自主建构所需的知识体系,激发了学生学习兴趣,加强了学生多元创新思维和问题解决能力的培养,提高了实验教学质量。

关键词：医学生物化学实验教学网络环境自主学习

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医学院校生物化学课堂中的提问技巧

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基础医学教育 2013年第8期15卷 751-753页

作者：陈伶利卢芳国周赛男程莉娟宋岚湖南中医药大学医学院生物化学教研室长沙410208

在医学院校生物化学教学中运用PBL教学法须注意以下几个方面:提问要关注学生生活;教师应精心设计问题,激发创新思维;提问要分层次,因人而异;提问要掌握评价策略,有针对地反馈评价,从而提高教学效果。

关键词：生物化学教学方法提问技巧

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