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中草药 2023年第9期54卷 2940-2952页

作者：龙雨青曾娟王玲付学森刘紫璇童巧珍周日宝刘湘丹湖南中医药大学药学院湖南长沙410208 湘产大宗道地药材种质资源及规范化种植重点研究室湖南长沙410208 湖南省普通高等学校中药现代化研究重点实验室湖南长沙410208

成簇的规律间隔的短回文重复序列系统(clustered regularly interspaced short palindromicrepeats/CRISPR-associated system,CRISPR/Cas)起源于细菌和古细菌的免疫反应。目前改造的II型CRISPR/Cas9系统是一项突破性的基因组编辑技术,通过引导RNA识别靶基因序列位点实现基因组水平上的DNA序列精准修饰。该项技术已在主要农作物的抗病、抗逆和增产等方面广泛应用,在药用植物有效成分的合成和提高、抗病抗逆等研究中具有广阔的应用潜力。通过对CRISPR/Cas9系统的发现完善、结构和原理及在药用植物中的应用情况等进行综述,为该技术在药用植物研究领域中的推广应用提供参考。

关键词：成簇的规律间隔的短回文重复序列系统药用植物基因功能抗病抗逆分子育种

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枳壳中药材品质三维多组分分析及影响因素研究

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中国中药杂志 2023年第1期48卷 265-272页

作者：刘紫璇付学森王玲刘湘丹周日宝湖南中医药大学药学院湖南长沙410208 湘产大宗道地药材种质资源及规范化种植重点研究室湖南长沙410208 湖南省普通高等学校中药现代化研究重点实验室湖南长沙410208

该研究主要进行枳壳中药材品质三维多组分分析探究其有效成分含量比例一致性规律,分析枳壳品质影响因素。采用三维多组分分析模式,分析65篇文献中839个枳壳样本,对其中符合2020年版《中国药典》枳壳含量标准的386个样本中黄酮类成分柚... 详细信息

该研究主要进行枳壳中药材品质三维多组分分析探究其有效成分含量比例一致性规律,分析枳壳品质影响因素。采用三维多组分分析模式,分析65篇文献中839个枳壳样本,对其中符合2020年版《中国药典》枳壳含量标准的386个样本中黄酮类成分柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、芸香柚皮苷、川陈皮素,香豆素类成分橙皮内酯、葡萄内酯,生物碱类成分辛弗林的含量数据进行提取,统一调整为百分含量(质量分数),计算各个成分间的含量比值;研究文献分析枳壳中药材品质影响因素。研究结果表明新橙皮苷和柚皮苷含量比值为0.4~1.2,芸香柚皮苷和柚皮苷含量比值为0.02~0.16,橙皮苷和柚皮苷含量比值为0.01~0.3,川陈皮素和柚皮苷的含量比值为0.000 588 3~0.069 68,辛弗林和柚皮苷含量比值为0.02~0.042,葡萄内酯和柚皮苷含量比值为0.001~0.01,橙皮内酯和柚皮苷含量比值为0.000 4~0.035;枳壳品质与药材产地、品种、采收时间、炮制方法等密切相关,采收时间对枳壳药材品质影响较大,产地和品种影响药材成分累积及品质。该研究发现黄酮组分间、黄酮和香豆素组分间、黄酮和生物碱组分间比值均有波动性;生产基地应进行枳壳品种、采收期、加工方法优选,为高品质枳壳药材生产提供科学依据。

关键词：枳壳指标成分三维多组分品质评价

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中药羊踯躅治疗类风湿关节炎的研究进展

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中国中药杂志 2023年第21期48卷 5690-5700页

作者：梅文亚刘湘丹王志辉于俊保何佳蔚张惊宇周日宝刘笑蓉湖南中医药大学药学院湖南长沙410208 湘产大宗道地药材种质资源及规范化种植重点研究室湖南长沙410208 湖南省普通高等学校中药现代化研究重点实验室湖南长沙410208

类风湿关节炎(RA)作为一种慢性自身免疫性疾病,发病率和致残率极高,给患者造成了极大痛苦,因发病机制复杂,至今尚未完全阐明,其治疗仍是医学界亟待攻破的难题,采用西药治疗虽具有一定疗效,需长期使用且价格昂贵,并存在多发感染、恶性肿... 详细信息

类风湿关节炎(RA)作为一种慢性自身免疫性疾病,发病率和致残率极高,给患者造成了极大痛苦,因发病机制复杂,至今尚未完全阐明,其治疗仍是医学界亟待攻破的难题,采用西药治疗虽具有一定疗效,需长期使用且价格昂贵,并存在多发感染、恶性肿瘤等不良反应。中药羊踯躅是我国一味传统民间药材,具有祛风除湿、镇静止痛等药理作用,民间常用于治疗风湿骨病顽疾,近年来,现代临床及药理学研究表明羊踯躅二萜类成分为羊踯躅中的有效成分,具有免疫调节、抗炎、镇痛等作用,可有效治疗RA,具有广泛的应用前景,但羊踯躅具有一定的毒性,严重阻碍了其临床推广应用,造成羊踯躅资源浪费。该文从化学成分、抗炎、镇痛等角度综述了近年来羊踯躅防治RA作用机制的研究进展,并总结了羊踯躅的不良反应,以期为寻找抗类风湿关节炎天然药物及中药羊踯躅减毒增效的方法提供新思路,明确羊踯躅及其提取物的安全性和有效性,为其应用前景提供一定理论依据,进一步加强羊踯躅资源的开发利用。

关键词：羊踯躅类风湿关节炎 rhodojaponin-Ⅲ 二萜类化合物作用机制

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灰毡毛忍冬CHI和CHS基因的克隆及功能研究

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中国中药杂志 2022年第9期47卷 2419-2429页

作者：曾娟龙雨青李灿曾梅杨敏周新茹刘湘丹周日宝湖南中医药大学药学院湖南长沙410208 湘产大宗道地药材种质资源及规范化种植重点研究室湖南长沙410208 湖南省普通高等学校中药现代化研究重点实验室湖南长沙410208

该研究基于灰毡毛忍冬常规品种和湘蕾品种转录组数据,筛选到黄酮生物合成关键限速酶基因CHI和CHS的Unigene序列并克隆全长cDNA序列,通过在线生物信息学分析软件和qRT-PCR分析编码蛋白特性和不同花期、不同部位下CHI、CHS基因的表达模式,... 详细信息

该研究基于灰毡毛忍冬常规品种和湘蕾品种转录组数据,筛选到黄酮生物合成关键限速酶基因CHI和CHS的Unigene序列并克隆全长cDNA序列,通过在线生物信息学分析软件和qRT-PCR分析编码蛋白特性和不同花期、不同部位下CHI、CHS基因的表达模式,HPLC测定木犀草苷含量并结合表达量做相关性分析。结果显示,灰毡毛忍冬2个品种中CHI、CHS基因,分别包含627、1170 bp的ORF区,且CHI蛋白和CHS蛋白均为稳定、带亲水性的非分泌型蛋白。qRT-PCR结果表明2个品种CHI、CHS基因在不同花发育阶段及茎、叶中均有差异表达,且在关键花期表达差异明显,结合HPLC数据,木犀草苷含量与基因相对表达量之间呈现负相关性。推测灰毡毛忍冬中CHI、CHS基因参与调控黄酮化合物的累积,可进一步进行其功能研究。该研究首次克隆了灰毡毛忍冬中CHI、CHS基因并进行表达分析,丰富了灰毡毛忍冬黄酮生物合成研究,为进一步探究灰毡毛忍冬中木犀草苷等黄酮类成分差异的分子机制以及良种选育提供研究基础。

关键词：灰毡毛忍冬查尔酮异构酶查尔酮合成酶基因克隆表达分析含量测定

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灰毡毛忍冬MYB转录因子家族成员的挖掘及鉴定

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中国中药杂志 2023年第8期48卷 2103-2115页

作者：曾娟龙雨青付学森王玲刘紫璇周日宝刘湘丹湖南中医药大学药学院湖南长沙410208 湘产大宗道地药材种质资源及规范化种植重点研究室湖南长沙410208 湖南省普通高等学校中药现代化研究重点实验室湖南长沙410208

MYB转录因子作为最大的转录因子家族之一,在调控花发育过程中起到重要作用。该文首次从灰毡毛忍冬转录组数据中鉴定出3条1R-MYB,47条R2R3-MYB,2条3R-MYB和1条4R-MYB转录因子,对其理化性质、保守结构域、家族进化关系及蛋白结构、功能信... 详细信息

MYB转录因子作为最大的转录因子家族之一,在调控花发育过程中起到重要作用。该文首次从灰毡毛忍冬转录组数据中鉴定出3条1R-MYB,47条R2R3-MYB,2条3R-MYB和1条4R-MYB转录因子,对其理化性质、保守结构域、家族进化关系及蛋白结构、功能信息及表达进行分析。结果表明,不同品种灰毡毛忍冬中53个MYB转录因子家族成员基因在保守基序、蛋白理化性质及结构、功能等各有不同,表明其在进化中具有保守性和多样性。表达分析表明LmMYB在品种间(野生型、湘蕾型)及器官间(花、叶)均存在转录水平上的显著差异,且部分基因特殊表达。在53条LmMYB中有43条在花、叶中均有表达,其中9个LmMYB成员在2个品种灰毡毛忍冬中在转录水平上存在显著差异,且在野生品种中上调表达。结合家族进化分析和表达分析推测LmMYB蛋白主要在生长发育、逆境胁迫、类黄酮次生代谢等方面发挥重要转录因子调控功能。该研究结果为后续研究灰毡毛忍冬MYB转录因子家族具体功能机制提供了理论基础和参考依据。

关键词：灰毡毛忍冬 MYB 生物信息学转录因子

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基于SCoT分子标记分析白术种质资源遗传多样性及DNA指纹图谱构建

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生物技术通报 2024年第11期40卷 142-151页

作者：李晴石雨荷朱珏李晓玲侯超文童巧珍湖南中医药大学药学院长沙410208 湘产大宗道地药材种质资源及规范化种植重点研究室长沙410208 湖南省普通高等学校中药现代化研究重点实验室长沙410208

【目的】采用SCoT分子标记技术对17份白术种质资源进行遗传多样性分析及DNA指纹图谱构建,为白术种质的鉴定、保存和新品种选育提供一定的理论依据。【方法】从92条SCoT引物中筛选得到13条核心引物用于白术分子标记,利用Popgene1.32软件... 详细信息

【目的】采用SCoT分子标记技术对17份白术种质资源进行遗传多样性分析及DNA指纹图谱构建,为白术种质的鉴定、保存和新品种选育提供一定的理论依据。【方法】从92条SCoT引物中筛选得到13条核心引物用于白术分子标记,利用Popgene1.32软件和NTSYS-pc 2.10e软件进行白术种质资源多样性分析和聚类分析,以核心引物SCoT-9、SCoT-12和SCoT-41组合构建白术DNA分子指纹图谱。【结果】13条SCoT核心引物扩增17份白术样品共得到192条条带,其中,多态性条带165条,平均百分率85.94%;遗传相似系数(GS)和遗传距离(GD)分别介于0.5781-0.8750和0.1335-0.5480,白术种质的观测等位基因数(Na)为1.8594,有效等位基因数(Ne)为1.4180,Nei's遗传多样性指数(He)为0.2563,Shannon信息指数(I)为0.3968,聚类分析得到白术栽培品一类,而大围山野生品被单独聚为一类;所构建的17份白术种质资源DNA指纹图谱,可以将样品区分并准确鉴定。【结论】白术种质资源具有较为丰富的遗传多样性,但不同产地白术栽培品之间遗传差异低,表明地理位置并不是判断白术亲缘关系远近的决定性因素。

关键词：白术 SCoT分子标记遗传多样性分析 DNA指纹图谱

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灰毡毛忍冬UGTPg17、UGTPg36基因克隆及功能研究

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生物技术通报 2023年第10期39卷 256-267页

作者：杨敏龙雨青曾娟曾梅周新茹王玲付学森周日宝刘湘丹湖南中医药大学药学院长沙410208 湘产大宗道地药材种质资源及规范化种植重点研究室长沙410208 湖南省普通高等学校中药现代化研究重点实验室长沙410208

克隆灰毡毛忍冬糖基转移酶UGTPg17、UGTPg36基因,并进行其不同花期表达量与皂苷含量相关性分析。根据灰毡毛忍冬转录组Unigene序列设计特异性引物进行UGTPg17、UGTPg36克隆;使用生物信息学网站对克隆的UGTPg17、UGTPg36编码蛋白进行理... 详细信息

克隆灰毡毛忍冬糖基转移酶UGTPg17、UGTPg36基因,并进行其不同花期表达量与皂苷含量相关性分析。根据灰毡毛忍冬转录组Unigene序列设计特异性引物进行UGTPg17、UGTPg36克隆;使用生物信息学网站对克隆的UGTPg17、UGTPg36编码蛋白进行理化性质、蛋白结构和进化关系等分析;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析基因在不同花期表达情况;HPLC法测定灰毡毛忍冬皂苷含量;利用SPSS分析基因表达量与皂苷含量相关性。UGTPg17、UGTPg36基因开放阅读框长度分别为1410 bp、1428 bp,分别编码469、475个氨基酸,分别包含4、7个糖基化位点,均属于不稳定、亲水性蛋白,不具跨膜区域;UGTPg36蛋白不存在信号肽序列,UGTPg17蛋白平均S值>0.5,推测其可能含有信号肽。UGTPg17、UGTPg36在不同花期中表达均为上升趋势,皂苷含量在不同花期中存在波动,两者相关性分析得出,2个UGT基因与皂苷含量呈极显著负相关。成功从灰毡毛忍冬中克隆了UGTPg17、UGTPg36基因,其在不同花期表达存在差异性,且相关性分析表明UGTPg17、UGTPg36基因与灰毡毛忍冬皂苷生物合成相关,为进一步探索其具体功能奠定了基础。

关键词：灰毡毛忍冬糖基转移酶基因克隆生物信息学表达分析皂苷含量

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基于化学模式识别和网络药理学的羊踯躅质量标志物预测分析

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中国药学杂志 2024年第21期59卷 2030-2041页

作者：梅文亚于俊保邓婷刘湘丹童巧珍王志辉刘笑蓉周日宝湖南中医药大学药学院长沙410208 湘产大宗道地药材种质资源及规范化种植重点研究室长沙410208 湖南省普通高等学校中药现代化研究重点实验室长沙410208

目的基于高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)和网络药理学筛选羊踯躅质量标志物(quality markers, Q-marker),比较羊踯躅不同部位、不同花期、不同产地Q-marker含量,挖掘羊踯躅潜在药用价值并推测其可能的作用机制。方法采用HP... 详细信息

目的基于高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)和网络药理学筛选羊踯躅质量标志物(quality markers, Q-marker),比较羊踯躅不同部位、不同花期、不同产地Q-marker含量,挖掘羊踯躅潜在药用价值并推测其可能的作用机制。方法采用HPLC-ELSD建立羊踯躅指纹图谱,进行聚类分析(hierarchical cluster analysis, HCA)、主成分分析(principal component analysis, PCA)、正交偏最小二乘法判别分析(orthogonal partial least squares discriminant analysis, OPLS-DA),利用网络药理学方法构建“成分-靶点-通路-药理作用-功效”网络图,并进行疾病预测,筛选羊踯躅的Q-marker并进行定量分析。结果本研究建立了11批羊踯躅药材的指纹图谱,共标定10个共有峰,经分析得到4个差异性成分,预测闹羊花毒素-Ⅲ、闹羊花毒素-Ⅱ、金丝桃苷、槲皮苷为羊踯躅的Q-marker候选成分并进行网络药理学分析,涉及84个靶点蛋白,包括ATK1、TNF、INS等,作用于159条信号通路,对肿瘤、自身免疫性疾病、心血管疾病等存在潜在治疗作用。成分含量测定结果显示羊踯躅以盛开期花入药可能具有更好的疗效,并以S10产地最优。结论通过化学模式识别、指纹图谱及网络药理学预测了羊踯躅的Q-marker,证明羊踯躅可通过多靶点、多途径治疗疾病,为完善建立羊踯躅质量控制标准及其对疾病治疗机制的进一步探索提供参考。

关键词：羊踯躅指纹图谱质量标志物化学模式识别网络药理学

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基于高效液相指纹图谱及网络药理学预测分析山银花质量标志物

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天然产物研究与开发 2023年第2期35卷 208-220,241页

作者：周新茹王志辉龙雨青曾梅杨敏童巧珍周日宝刘湘丹湖南中医药大学药学院湘产大宗道地药材种质资源及规范化种植重点研究室湖南省普通高等学校中药现代化研究重点实验室长沙410208

山银花具清热解毒、疏散风热功效,应用前景广阔。目前《中国药典》仅将绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙及川续断皂苷乙作为山银花质量评价指标,不能全面评价山银花质量。本研究建立了山银花HPLC指纹图谱,对29批山银花进行相似度评价,应用聚类... 详细信息

山银花具清热解毒、疏散风热功效,应用前景广阔。目前《中国药典》仅将绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙及川续断皂苷乙作为山银花质量评价指标,不能全面评价山银花质量。本研究建立了山银花HPLC指纹图谱,对29批山银花进行相似度评价,应用聚类分析和正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)初步筛选出山银花8个潜在Q-Marker;通过网络药理学构建“成分-靶点-通路”网络图,进一步分析验证山银花潜在Q-Marker的有效性。本研究发现绿原酸、异绿原酸A、新绿原酸、獐芽菜苷、异绿原酸B、灰毡毛忍冬皂苷乙、咖啡酸、川续断皂苷乙可作为山银花质量标志物,其为较全面评价山银花药材质量提供了科学依据。

关键词：山银花 HPLC指纹图谱多元统计分析网络药理学质量标志物

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HPLC指纹图谱结合化学计量法对比研究博落回不同器官化学组分

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天然产物研究与开发 2022年第7期34卷 1098-1109页

作者：杨敏刘笑蓉曾梅周新茹王志辉童巧珍周日宝刘湘丹湖南中医药大学药学院湘产大宗道地药材种质资源及规范化种植重点研究室湖南省普通高等学校中药现代化研究重点实验室长沙410208

本研究采用HPLC法分别建立博落回根、叶、果、茎化学指纹图谱,并测定其原阿片碱、别隐品碱、血根碱、白屈菜红碱4种生物碱含量;采用正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)对博落回根、叶、果进行质量评价。指纹图谱结果表明,17批根样品共... 详细信息

本研究采用HPLC法分别建立博落回根、叶、果、茎化学指纹图谱,并测定其原阿片碱、别隐品碱、血根碱、白屈菜红碱4种生物碱含量;采用正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)对博落回根、叶、果进行质量评价。指纹图谱结果表明,17批根样品共标定10个共有峰,14批叶样品共标定9个共有峰,14批果样品共标定9个共有峰,10批茎样品共标定6个共有峰。博落回不同器官4种生物碱总含量高低顺序依次为:果>根>叶>茎;果中以上4种生物碱含量均较高,根和叶中原阿片碱、别隐品碱含量高,茎中以上4种生物碱含量均低;博落回根资源量大且原阿片碱、别隐品碱含量高于果和叶,可同博落回果、叶作为以上生物碱提取原料进行开发利用。OPLS-DA结果以VIP>1计,别隐品碱及白屈菜红碱可作为博落回根潜在质量标志物;血根碱、白屈菜红碱可作为博落回叶潜在质量标志物;原阿片碱、别隐品碱、血根碱可作为博落回果的潜在质量标志物。本研究结果为博落回根、叶、果、茎的鉴别评价及博落回根的开发利用提供了研究依据。

关键词：博落回器官 HPLC指纹图谱含量测定正交偏最小二乘法-判别分析

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