检索结果-内蒙古大学图书馆

生物工程学报 2019年第9期35卷 1662-1675页

作者：彭胜男何昊城苑爽芹穰杰胡胜标孙运军余子全黄伟涛胡益波丁学知夏立秋省部共建淡水鱼类发育生物学国家重点实验室湖南师范大学生命科学学院微生物分子生物学湖南省重点实验室

fcl基因编码的GDP-岩藻糖合成酶(GDP fucose synthetase,GFS),能催化由GDP-D-甘露糖合成GDP-L-岩藻糖过程中的两步差向异构酶和还原酶反应;还参与氨基糖和核糖的生物合成,是调控生物体糖代谢、核苷酸代谢的关键酶之一。通过前期基因组... 详细信息

fcl基因编码的GDP-岩藻糖合成酶(GDP fucose synthetase,GFS),能催化由GDP-D-甘露糖合成GDP-L-岩藻糖过程中的两步差向异构酶和还原酶反应;还参与氨基糖和核糖的生物合成,是调控生物体糖代谢、核苷酸代谢的关键酶之一。通过前期基因组测序表明须糖多孢菌Saccharopolyspora pogona中存在fcl基因。利用基因工程技术构建了fcl基因的过表达菌株S. pogona-fcl和敲除菌株S. pogona-Δfcl。结果表明该基因对菌株生长发育、蛋白表达及其转录水平、杀虫活性、丁烯基多杀菌素的生物合成均存在影响。经HPLC分析显示,S. pogona-Δfcl的丁烯基多杀菌素产量增加为野生型菌株的130%,***-fcl的丁烯基多杀菌素产量降低了25%。生测结果显示,与野生型菌株相比***-Δfcl对棉铃虫的杀虫活性明显增强,而***-fcl的杀虫活性降低。利用扫描电镜观察发现,S. pogona-Δfcl菌丝体表面出现褶皱,呈现短棒状,S. pogona-fcl菌丝形态与野生型菌株一致。以上结果表明,fcl基因的敲除影响菌丝体的生长发育,能促进丁烯基多杀菌素的生物合成和增强杀虫活性,该基因的过表达抑制了丁烯基多杀菌素的生物合成和降低了杀虫活性。SDS-PAGE结果表明,三株菌株在96 h时蛋白表达差异最为明显。对差异蛋白通过实时荧光定量聚合酶链式反应结果显示,三菌株蛋白的转录水平存在显著表达差异。通过研究结果构建了网络代谢调控图,分析fcl基因对须糖多孢菌生长发育及丁烯基多杀菌素生物合成代谢调控网络途径的影响,初步构建了fcl基因调控的代谢途径,为揭示丁烯基多杀菌素生物合成的调控机制及相关后续研究提供了实验依据。

关键词：须糖多孢菌丁烯基多杀菌素 fcl基因生物合成生长发育

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苏云金芽胞杆菌等离子复合体诱变提高抗鳞翅目害虫的杀虫毒力

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微生物学报 2022年第4期62卷 1390-1400页

作者：彭金莉朱梓榕陈文慧罗斯思周朋吉全梅芳孙运军夏立秋丁学知湖南师范大学生命科学学院省部共建淡水鱼类发育生物学国家重点实验室微生物分子生物学湖南省重点实验室湖南长沙410081

【目的】苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)D18对鳞翅目、鞘翅目等农业害虫具有杀虫毒力,本研究拟通过复合诱变育种,筛选出杀虫毒力更高的突变菌。【方法】经四轮室温常压等离子体(ARTP)诱变和一轮ARTP-NTG复合诱变后,镜检形... 详细信息

【目的】苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)D18对鳞翅目、鞘翅目等农业害虫具有杀虫毒力,本研究拟通过复合诱变育种,筛选出杀虫毒力更高的突变菌。【方法】经四轮室温常压等离子体(ARTP)诱变和一轮ARTP-NTG复合诱变后,镜检形态观察与生物毒力测定筛选高毒力菌株,SDS-PAGE检测Cry蛋白,qRT-PCR定量cry基因的表达,揭示突变菌株毒力提高的原因。【结果】复合诱变筛选到2株高毒力突变菌株An-L5-1和An-L5-7,与出发菌株Bt D18相比,An-L5-1和An-L5-7的生长衰亡期略微提前;芽胞形成能力增强;Cry蛋白表达量分别提高了80.47%和88.31%;对小菜蛾和黏虫的杀虫毒力显著增强。【结论】突变菌株An-L5-1和An-L5-7杀虫活性提高主要是由于毒力基因cry1Aa、cry2Aa和调控基因sigK的表达显著上调。

关键词：苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白室温常压等离子体复合诱变

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LytSR和PdtaSR双组分系统对须糖多孢菌丁烯基多杀菌素生物合成的影响

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微生物学报 2022年第3期62卷 1033-1048页

作者：万千千罗粤雯何昊城夏梓源穰杰朱梓榕曹丽夏立秋微生物分子生物学湖南省重点实验室省部共建淡水鱼类发育生物学国家重点实验室湖南师范大学生命科学学院湖南长沙410081

【目的】须糖多孢菌(Saccharopolysporapogona)基因组中存在一些双组分系统(two-component system,TCS),包括一个LytR调控因子和一个PdtaR转录抗终止调节因子,我们旨在通过基因工程技术改造分析这两个双组分系统蛋白在须糖多孢菌中的作... 详细信息

【目的】须糖多孢菌(Saccharopolysporapogona)基因组中存在一些双组分系统(two-component system,TCS),包括一个LytR调控因子和一个PdtaR转录抗终止调节因子,我们旨在通过基因工程技术改造分析这两个双组分系统蛋白在须糖多孢菌中的作用。【方法】本研究利用融合PCR和属间接合转移技术,构建了S. pogona-?lytR和S. pogona-PdtaR工程菌株,研究它们对须糖多孢菌丁烯基多杀菌素生物合成的影响。【结果】HPLC检测和质谱鉴定表明,与原始菌相比,S. pogona-?lytR中丁烯基多杀菌素产量有所提高,而S. pogona-PdtaR中产量下调,表明lytR和pdtaR对丁烯基多杀菌素生物合成有负调控作用。此外,生长曲线测定和表型分析结果表明,S. pogona-?lytR和S. pogona-PdtaR对须糖多孢菌的生长发育和孢子形成也产生了一定的影响。【结论】本研究为进一步阐明丁烯基多杀菌素生物合成的调控机制奠定了理论基础。

关键词：须糖多孢菌丁烯基多杀菌素双组分系统调控因子

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抗肿瘤靶向工程菌的高密度发酵及菌粉研制

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食品科学 2018年第2期39卷 105-111页

作者：王灿莫湘涛张峰吴柳娟李躺夏立秋湖南师范大学生命科学学院微生物分子生物学湖南省重点实验室淡水鱼类发育生物学国家重点实验室湖南长沙410081

为获得侵袭性抗肿瘤靶向工程菌株Ec NA高菌体浓度的培养基配方,在单因素试验的基础上,通过PlackettBurman试验筛选出对菌体浓度影响最显著的因素为酵母抽提物、K_2HPO_4用量,对显著影响因素进行中心组合试验响应面分析。结果表明最佳培... 详细信息

为获得侵袭性抗肿瘤靶向工程菌株Ec NA高菌体浓度的培养基配方,在单因素试验的基础上,通过PlackettBurman试验筛选出对菌体浓度影响最显著的因素为酵母抽提物、K_2HPO_4用量,对显著影响因素进行中心组合试验响应面分析。结果表明最佳培养基成分为:可溶性淀粉2 g/L、酵母抽提物50.3 g/L、K_2HPO_4 14.26 g/L、KH_2PO_43 g/L、MgSO_4 0.3 g/L、微量元素母液2 mL/L、接种量3%。发酵后溶液中菌体OD600 nm达到7.602,菌体生物量达到2.96×109 CFU/mL,比优化前提高了78.3%。以冻干保护剂在冷冻干燥过程中对工程菌株的保护效果为研究对象,通过正交试验得到制成菌粉的最佳保护剂配方为脱脂乳14.25 g/100 mL、蔗糖3 g/100 mL、抗坏血酸钠3 g/100 mL,优化后菌体冻干粉存活率可达86.32%,利于制成延长贮存期的口服菌粉胶囊。

关键词：抗肿瘤靶向工程菌高密度发酵响应面分析法冻干保护剂菌粉制剂

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丝状真菌蛋白表达系统研究进展

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中国生物工程杂志 2020年第5期40卷 94-104页

作者：胡益波皮畅钰张哲向柏宇夏立秋湖南师范大学生命科学学院淡水鱼类发育生物学国家重点实验室长沙410081 湖南师范大学生命科学学院微生物分子生物学湖南省重点实验室长沙410081

丝状真菌以其优秀的表达分泌能力和良好的环境适应能力,使得其在蛋白质表达领域应用越来越广泛。近几十年来,通过诱变、培养优化及遗传改造等手段,使得包含曲霉属、木霉属、青霉属等在内的丝状真菌被开发成高效表达宿主。为促进丝状真... 详细信息

丝状真菌以其优秀的表达分泌能力和良好的环境适应能力,使得其在蛋白质表达领域应用越来越广泛。近几十年来,通过诱变、培养优化及遗传改造等手段,使得包含曲霉属、木霉属、青霉属等在内的丝状真菌被开发成高效表达宿主。为促进丝状真菌蛋白表达系统的开发,结合作者的研究工作,对工业上丝状真菌表达宿主、蛋白质表达元件及其改造策略进行综述,并探讨了当前丝状真菌表达系统开发过程中的不足之处,为新型丝状真菌表达系统的研究提供参考和启示。

关键词：丝状真菌表达系统蛋白质表达宿主启动子

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GlnA基因对刺糖多孢菌生长发育及多杀菌素合成的影响

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中国生物防治学报 2018年第4期34卷 625-638页

作者：肖洁刘朱东彭胜男何昊城穰杰刘熊丁学知夏立秋湖南师范大学生命科学学院/微生物分子生物学湖南省重点实验室/省部共建淡水鱼类发育生物学国家重点实验室长沙410081

谷氨酰胺合成酶(GS,glutamine synthetase)是由Gln A基因编码的生物体中最古老也是最广泛存在的酶,它参与许多生物体中的氮和碳代谢,是生物体氮代谢的关键酶之一,对微生物的生命活动起着重要作用。本文研究了Gln A基因对刺糖多孢菌Sacch... 详细信息

谷氨酰胺合成酶(GS,glutamine synthetase)是由Gln A基因编码的生物体中最古老也是最广泛存在的酶,它参与许多生物体中的氮和碳代谢,是生物体氮代谢的关键酶之一,对微生物的生命活动起着重要作用。本文研究了Gln A基因对刺糖多孢菌Saccharopolyspora spinosa的生长发育及次级代谢产物合成的影响,从刺糖多孢菌基因组中克隆了gln A基因的部分片段,将其与穿梭载体p OJ260连接,构建敲除载体p OJ260-gln A,通过接合转移将其导入刺糖多孢菌野生菌中,获得刺糖多孢菌敲除菌株***-△gln A;同时,利用重叠延伸PCR将gln A基因置于红霉素强启动子Perm E下,并将融合片段Perm E-gln A与穿梭载体p OJ260进行酶切酶连,构建过量表达载体p OJ260-Perm E-gln A,通过接合转移将其导入刺糖多孢菌中,获得了刺糖多孢菌过量表达菌株***-gln A。表型分析发现,gln A基因的敲除对刺糖多孢菌的菌丝形态、孢子萌发等方面都有显著的抑制作用。HPLC检测分析发现,过量表达菌株中多杀菌素产量相比原始菌株提高到170%;该研究表明gln A基因对刺糖多孢菌的生长发育与多杀菌素的合成有一定的影响,为研究其在链霉菌次级代谢过程中的作用奠定了重要基础。

关键词：刺糖多孢菌多杀菌素谷氨酰胺合成酶阻断过量表达

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PadR对须糖多孢菌丁烯基多杀菌素生物合成及转运相关蛋白表达的影响

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湖南师范大学自然科学学报 2019年第5期42卷 44-51页

作者：何思颖柏丹夏伦万千千罗粤雯邱玉玲夏立秋湖南师范大学生命科学学院微生物分子生物学湖南省重点实验室淡水鱼类发育生物国家重点实验室

为研究padR基因表达对须糖多孢菌(Saccharopolyspora pogona)次级代谢产物生物合成及相关蛋白表达的影响,在对须糖多孢菌基因组测序结果的基础上,从基因组中克隆了padR基因上、下游同源臂,利用融合PCR将硫链丝菌素抗性基因插入上、下游... 详细信息

为研究padR基因表达对须糖多孢菌(Saccharopolyspora pogona)次级代谢产物生物合成及相关蛋白表达的影响,在对须糖多孢菌基因组测序结果的基础上,从基因组中克隆了padR基因上、下游同源臂,利用融合PCR将硫链丝菌素抗性基因插入上、下游同源臂之间,将融合片段与穿梭载体pOJ260连接,构建敲除载体pOJ260-UHA-tsr-DHA。通过接合转移将其导入野生型须糖多孢菌中,通过同源臂双交换获得须糖多孢菌敲除菌株***-ΔpadR。经HPLC检测分析,敲除菌株次级代谢产物丁烯基多杀菌素产量与原始菌株相比提高了27.3%,且有7个转运相关蛋白出现表达上调。这一研究表明padR基因的敲除能够有效促进须糖多孢菌丁烯基多杀菌素的生物合成。该研究对优化须糖多孢菌丁烯基多杀菌素的生物合成途径具有一定的指导意义,为研究padR基因表达在链霉菌次级代谢产物合成中的作用打下了基础。

关键词：须糖多孢菌 PadR 转录调控因子转运蛋白丁烯基多杀菌素

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应用遗传算法和神经网络优化多杀菌素发酵培养基

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湖南师范大学自然科学学报 2017年第5期40卷 36-43页

作者：张峰吴柳娟李躺王灿胡益波丁学知夏立秋湖南师范大学生命科学学院微生物分子生物学湖南省重点实验室省部共建淡水鱼类发育生物学国家重点实验室中国长沙410081

通过优化刺糖多孢菌发酵合成多杀菌素培养基成分,改善培养条件,从而提高多杀菌素产量.在单因素以及Plackett-Burman试验设计的基础上,采用Box-Behnken试验设计方法对发酵培养基组分中的玉米浆、可溶性淀粉、丙酸钠进行研究,运用遗传算... 详细信息

通过优化刺糖多孢菌发酵合成多杀菌素培养基成分,改善培养条件,从而提高多杀菌素产量.在单因素以及Plackett-Burman试验设计的基础上,采用Box-Behnken试验设计方法对发酵培养基组分中的玉米浆、可溶性淀粉、丙酸钠进行研究,运用遗传算法优化的BP神经网络建立多杀菌素产量与培养基组分浓度之间的预测模型,采用循环算法对此模型进行寻优,得到三种组分的最佳配比为:玉米浆7 g/L、可溶性淀粉16 g/L、丙酸钠2 g/L,多杀菌素产量达到(550.22±3.84)mg/L,采用上述方法优化后的培养基使得多杀菌素产量比原始培养基产量(225mg/L)提高145%.本研究结果可为培养基优化提供一种有效的建模方法.

关键词：刺糖多孢菌多杀菌素发酵培养基优化神经网络遗传算法

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叶柄粘球菌CA3的分离鉴定及其抗肿瘤活性初步研究

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湖南师范大学自然科学学报 2018年第1期41卷 24-29页

作者：廖继燕吴雨婧周偲龚亮夏立秋湖南师范大学生命科学学院微生物分子生物学湖南省重点实验室淡水鱼类发育生物国家重点实验室中国长沙410081

为寻找新的粘细菌次级代谢产物,分别采用滤纸片和大肠杆菌两种诱导法诱导粘细菌子实体的形成,挑取子实体多次转接以纯化菌株,从中筛选获得1株粘细菌CA3.通过菌体形态观察、生理生化试验和16S rDNA同源性分析的方法对其进行鉴定归类,确... 详细信息

为寻找新的粘细菌次级代谢产物,分别采用滤纸片和大肠杆菌两种诱导法诱导粘细菌子实体的形成,挑取子实体多次转接以纯化菌株,从中筛选获得1株粘细菌CA3.通过菌体形态观察、生理生化试验和16S rDNA同源性分析的方法对其进行鉴定归类,确认其为叶柄粘球菌(Myxococcus stipitatus)新菌CA3.对粘球菌CA3发酵上清液进行细胞毒性试验,结果表明其对肿瘤细胞B16和SMMC-7721有很强的抑制效果,为后续的抗肿瘤活性组分结构解析和抗肿瘤机制的研究提供了重要基础.

关键词：粘细菌粘球菌 16S rDNA 抗肿瘤活性

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大孢粘球菌抗肿瘤活性蛋白WGF5分离方法的优化与活性分析

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湖南师范大学自然科学学报 2017年第6期40卷 44-48页

作者：魏慧黄海燕于芳楠刘熊丁学知夏立秋湖南师范大学生命科学学院微生物分子生物学湖南省重点实验室淡水鱼类发育生物学国家重点实验室中国长沙410081

为从Myxococcus macrosporus STXZ54发酵液中高效地分离纯化出抗肿瘤活性蛋白WGF5,收集STXZ54发酵上清液,先后利用优化后的硫酸铵沉淀方法沉淀蛋白,强阳离子交换、分子筛色谱分离等方法对蛋白粗提物进行精细分离.利用CCK-8试剂盒,倒置... 详细信息

为从Myxococcus macrosporus STXZ54发酵液中高效地分离纯化出抗肿瘤活性蛋白WGF5,收集STXZ54发酵上清液,先后利用优化后的硫酸铵沉淀方法沉淀蛋白,强阳离子交换、分子筛色谱分离等方法对蛋白粗提物进行精细分离.利用CCK-8试剂盒,倒置显微镜、扫描电子显微镜等观察WGF5对肿瘤细胞形态的影响,台盼蓝染色进一步检测WGF5对肿瘤细胞的毒力.实验结果观察到WGF5能够显著改变肿瘤细胞形态,与原分离体系相比较,优化后的抗肿瘤活性蛋白分离方法更为高效,简便易行.

关键词：大孢粘球菌抗肿瘤活性蛋白方法优化

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