检索结果-内蒙古大学图书馆

湖南师范大学自然科学学报 2005年第3期28卷 80-84页

作者：黄欣琼朱传炳王跃群李永青袁婺洲吴秀山湖南师范大学生命科学院蛋白质化学与发育生物学教育部重点实验室心脏发育研究中心中国长沙410081

有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号途径是细胞信号转导过程的重要组成部分.MAPK将膜转导蛋白与其细胞内的关键调控靶蛋白联系起来,从而介导胞外的多种信号并将这些信号级联放大后传递给相应的下游因子,通过激活包括SRE,ELK-1,AP-1等在... 详细信息

有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号途径是细胞信号转导过程的重要组成部分.MAPK将膜转导蛋白与其细胞内的关键调控靶蛋白联系起来,从而介导胞外的多种信号并将这些信号级联放大后传递给相应的下游因子,通过激活包括SRE,ELK-1,AP-1等在内的多种转录因子,最终开启细胞特定功能基因的表达.锌指蛋白是人类最大的基因家族之一,其蛋白产物主要通过与DNA相互作用而起转录因子作用,调节靶基因的表达以适应生物体发育、分化、成熟过程的需要.运用MAPK信号途径对锌指基因ZNF569的结构域进行了转录活性分析.分析表明在COS-7细胞中过表达ZNF569蛋白可以使MAPK信号途径的两个下游转录因子AP-1和SRE的转录抑制活性显著下降.ZNF569在核质内的亚细胞定位分析进一步证明了其作为转录因子的作用.对ZNF569的分段report assays分析表明,ZNF569可能通过KRAB框和C2H2锌指结构域行使其抑制转录的作用.这些结果表明,ZNF569可以通过MAPK信号途径参与了对细胞生命活动的调控过程.

关键词： ZNF569 锌指蛋白 MAPK 转录因子

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CRISPR/Cas9系统对斑马鱼fhl1a基因敲除有效性的研究

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湖南师范大学自然科学学报 2017年第3期40卷 21-26页

作者：陈思行陈发蔡湾湾吴燕廖艳伟邓云吴秀山王跃群湖南师范大学蛋白质化学及鱼类发育生物学教育部重点实验室心脏发育研究中心中国长沙410081

为研究fhl1a基因在心脏发育中的作用,利用CRISPR/Cas9系统敲除斑马鱼fhl1a基因.在斑马鱼fhl1a基因的三号外显子处选取打靶位点,构建sgRNA表达载体.将体外转录的sgRNA和Cas9 mRNA混合物分别显微注射到斑马鱼单细胞期的受精卵中以期实现... 详细信息

为研究fhl1a基因在心脏发育中的作用,利用CRISPR/Cas9系统敲除斑马鱼fhl1a基因.在斑马鱼fhl1a基因的三号外显子处选取打靶位点,构建sgRNA表达载体.将体外转录的sgRNA和Cas9 mRNA混合物分别显微注射到斑马鱼单细胞期的受精卵中以期实现对目的靶基因fhl1a的敲除.随后收集部分72 h胚胎进行PCR检测和产物直接测序,确定有无突变.为进一步验证突变是否可稳定遗传,选择具有敲除了的F_0与野生型斑马鱼进行外交,对获得的F_1进行逐一剪尾,提取DNA进行PCR和测序分析.结果显示F_1获得了不同程度的插入、缺失等突变类型.研究结果证明所设计的fhl1a基因CRISPR/Cas9敲除系统能在斑马鱼体内有效地形成基因突变,该突变能稳定地遗传到下一代个体,这为进一步研究fhl1a基因在心脏发育中的具体调控机制打下了基础.

关键词： CRISPR/Cas9 fhl1a基因斑马鱼敲除

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斑马鱼hand2基因的克隆、抗体制备及分析

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湖南师范大学自然科学学报 2010年第1期33卷 108-113页

作者：朱婷黄文王跃群李永青袁婺洲莫小阳万永奇吴秀山邓云湖南师范大学蛋白质化学及鱼类发育生物学教育部重点实验室心脏发育研究中心中国长沙410081

为利用斑马鱼动物模型进一步研究bHLH转录因子家庭重要成员hand2基因在心脏发育中的功能,采用生物信息学结合RT-PCR的方法获得了斑马鱼hand2基因.将所得片段插入原核表达载体pGEX-4T-1中,并通过IPTG诱导表达出GST-Hand2融合蛋白,经GST... 详细信息

为利用斑马鱼动物模型进一步研究bHLH转录因子家庭重要成员hand2基因在心脏发育中的功能,采用生物信息学结合RT-PCR的方法获得了斑马鱼hand2基因.将所得片段插入原核表达载体pGEX-4T-1中,并通过IPTG诱导表达出GST-Hand2融合蛋白,经GST亲和层析法纯化后,免疫新西兰大白兔制备了多克隆抗体,利用western b lotting和免疫组化的方法对抗体进行分析.分析表明:斑马鱼hand2基因成熟肽编码区含有627 bp,编码208个氨基酸,与人Hand2蛋白的同源性达到83%;IPTG诱导表达后,表达的融合蛋白占菌体总蛋白的71%,经GST纯化获得SDS-PAGE电泳下单一条带.融合蛋白相对分子质量约为49 000.分析表明,制备的抗体具有很好的特异性.

关键词： hand2 斑马鱼原核表达多克隆抗体

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TCF25干扰慢病毒载体的构建与鉴定

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湖南师范大学自然科学学报 2016年第2期39卷 23-28,F0003页

作者：李佑锋彭浩高建芳高晶陈宇吴秀山李永青湖南师范大学蛋白质化学及鱼类发育生物学教育部重点实验室心脏发育研究中心中国长沙410005

为构建一个针对TCF25(transcription factor 25)基因的慢病毒干扰载体,设计并合成3组针对TCF25的短发夹RNA序列(shRNA),通过基因重组技术连入p LL3.7载体,酶切鉴定及DNA测序后,重组正确的p LL3.7质粒与病毒包装质粒共转染293FT细胞,培养... 详细信息

为构建一个针对TCF25(transcription factor 25)基因的慢病毒干扰载体,设计并合成3组针对TCF25的短发夹RNA序列(shRNA),通过基因重组技术连入p LL3.7载体,酶切鉴定及DNA测序后,重组正确的p LL3.7质粒与病毒包装质粒共转染293FT细胞,培养48 h后,分别收集细胞培养上清液,感染H9C2细胞,Western-blot检测TCF25在H9C2细胞中的表达.结果显示TCF25蛋白在H9C2细胞中的表达被抑制.这说明TCF25的慢病毒干扰载体构建成功.

关键词： TCF25基因 293FT细胞 H9C2细胞慢病毒载体

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心肌细胞形成和分化过程中钙信号转导调控的研究进展

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遗传 2004年第2期26卷 227-230页

作者：王跃群刘明耀吴秀山湖南师范大学生命科学学院发育生物学及蛋白质化学教育部重点实验室心脏发育研究中心湖南长沙410081

脊椎动物心肌细胞形成和分化是胚胎细胞一系列特定基因的精确转录表达过程,细胞内Ca2+信号转导系统在此起着重要的作用。该文对Ca2+依赖性转录过程:Ca2+/CaM/CaN/NF AT/GATA 4转录信号途径和Ca2+/CaM/CaMK/HDAC/MEF2转录信号途径指导下... 详细信息

脊椎动物心肌细胞形成和分化是胚胎细胞一系列特定基因的精确转录表达过程,细胞内Ca2+信号转导系统在此起着重要的作用。该文对Ca2+依赖性转录过程:Ca2+/CaM/CaN/NF AT/GATA 4转录信号途径和Ca2+/CaM/CaMK/HDAC/MEF2转录信号途径指导下的心肌细胞的形成与分化研究进展作一综述。

关键词：心肌细胞形成分化钙离子信号转导调控基因脊椎动物

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果蝇Mef2基因多克隆抗体的制备及检测

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湖南师范大学自然科学学报 2012年第5期35卷 64-67页

作者：朱玲徐腊梅盛立翔吴秀山莫小阳湖南师范大学蛋白质化学及鱼类发育生物学教育部重点实验室心脏发育研究中心中国长沙410081

为了在果蝇模型中进一步研究Mef2基因的功能,制备了Mef2多克隆抗体.以果蝇cDNA文库为模板,PCR扩增出亲水性和特异性均好的果蝇Mef2基因片段,将其克隆入pET-28a原核表达载体,然后将重组质粒转化入大肠杆菌菌株Rossetea,用IPTG诱导表达融... 详细信息

为了在果蝇模型中进一步研究Mef2基因的功能,制备了Mef2多克隆抗体.以果蝇cDNA文库为模板,PCR扩增出亲水性和特异性均好的果蝇Mef2基因片段,将其克隆入pET-28a原核表达载体,然后将重组质粒转化入大肠杆菌菌株Rossetea,用IPTG诱导表达融合蛋白.融合蛋白先经Ni-IDA凝胶柱纯化,再免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,然后用不同浓度的抗体分别进行Western-blot实验检测抗体效价.所得结果显示获得了较高效价的果蝇Mef2多克隆抗体.

关键词： Mef2 原核表达多克隆抗体

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Pericardin蛋白的表达纯化以及多克隆抗体的制备

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湖南师范大学自然科学学报 2012年第2期35卷 67-70页

作者：赵碧峰唐雄卓李发祥肖丽娜杨荣江志钢吴秀山王跃群湖南师范大学蛋白质化学及鱼类发育生物学教育部重点实验室心脏发育研究中心中国长沙410081

Pericardin基因是果蝇心脏发育的标记基因,在果蝇心脏发育过程中起着重要的作用.从果蝇体内提取出总RNA,反转录得到果蝇的cDNA,将其作为模板.通过生物信息学分析,选择Pericardin基因抗原亲水区,选取特异性高的片段.将PCR片段克隆到原核... 详细信息

Pericardin基因是果蝇心脏发育的标记基因,在果蝇心脏发育过程中起着重要的作用.从果蝇体内提取出总RNA,反转录得到果蝇的cDNA,将其作为模板.通过生物信息学分析,选择Pericardin基因抗原亲水区,选取特异性高的片段.将PCR片段克隆到原核表达pET28a(+)载体上,转入***后通过IPTG(Isopropylβ-D-thiogal-actoside)诱导表达His融合蛋白,蛋白经分离纯化后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体.经Western Blot检测抗体的效价和特异性.结果显示,获得了Pericardin原核表达重组融合蛋白及高效价的特异性兔抗Pericardin多克隆抗体,为Pericardin功能的进一步研究奠定了基础.

关键词： Pericardin 果蝇原核表达多克隆抗体

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斑马鱼HAS2基因的克隆、抗体制备及分析

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湖南师范大学自然科学学报 2010年第3期33卷 73-77页

作者：杨建华杨青吴秀山袁婺洲王跃群李永青莫小阳万永奇湖南师范大学蛋白质化学及鱼类发育生物学教育部重点实验室心脏发育研究中心中国长沙410081

HAS2是斑马鱼心脏发育的一个标志基因,为了利用斑马鱼动物模型进一步研究HAS2基因在心脏发育中的功能,采用生物信息学结合RT-PCR的方法获得了斑马鱼HAS2基因的片段.将所得的片段插入原核表达载体pGEX-4T-1中,并将重组质粒(pGEX-4T-1-HA... 详细信息

HAS2是斑马鱼心脏发育的一个标志基因,为了利用斑马鱼动物模型进一步研究HAS2基因在心脏发育中的功能,采用生物信息学结合RT-PCR的方法获得了斑马鱼HAS2基因的片段.将所得的片段插入原核表达载体pGEX-4T-1中,并将重组质粒(pGEX-4T-1-HAS2)转化大肠杆菌(***)BL21,IPTG诱导表达GST-HAS2融合蛋白;通过尿素洗涤沉淀蛋白并切胶回收纯化融合蛋白,免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,并用Western blot检测抗体活性.生物信息学分析结果表明:斑马鱼HAS2基因的开放阅读框含有1 658 bp,编码552个氨基酸;SDS-PAGE电泳分析显示,IPTG诱导表达的融合蛋白相对分子质量约为4.5×104;Western blotting分析表明,制备的抗体具有良好的特异性.

关键词： HAS2 斑马鱼原核表达多克隆抗体

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斑马鱼心脏标记基因pitx2的多克隆抗体的制备

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湖南师范大学自然科学学报 2010年第2期33卷 98-101页

作者：王华张云吴秀山袁婺洲湖南师范大学蛋白质化学及鱼类发育生物学教育部重点实验室心脏发育研究中心中国长沙410081

pitx2基因是一类bicoid相关的同源异型框因子成员,介导心脏左右不对称发育和内脏器官的偏侧化.pitx2基因位于Nodal信号途径的下游,直接由Nodal信号分子控制.用PCR技术扩增斑马鱼pitx2基因的部分编码区,并将其插入到原核表达载体pGEX-4T-... 详细信息

pitx2基因是一类bicoid相关的同源异型框因子成员,介导心脏左右不对称发育和内脏器官的偏侧化.pitx2基因位于Nodal信号途径的下游,直接由Nodal信号分子控制.用PCR技术扩增斑马鱼pitx2基因的部分编码区,并将其插入到原核表达载体pGEX-4T-1中,经过酶切和测序鉴定后,将重组质粒(pGEX-4T-1-pitx2)转入BL21感受态细胞,通过IPTG诱导表达融合蛋白,用GST珠亲和纯化,将纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,并用Western Blot检测抗体.获得了pitx2原核表达重组融合蛋白及高效价的特异性兔抗pitx2多克隆抗体.提取斑马鱼不同器官和组织蛋白,用自制的多克隆抗体检测pitx2基因在斑马鱼中的表达情况,发现pitx2基因特异性地在心脏、脑、肌肉、小肠和肝脏表达,尤其在心脏中有很高的表达,表明制备的抗体特异性非常好.

关键词： pitx2 融合蛋白多克隆抗体

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果蝇血液发育标记基因mrj的多克隆抗体制备及检测

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湖南师范大学自然科学学报 2012年第4期35卷 55-58页

作者：雷旻音杨哲黄婷刘丹李永青吴秀山湖南师范大学蛋白质化学及鱼类发育生物学教育部重点实验室心脏发育研究中心中国长沙410081

mrj是黑腹果蝇中一个蛋白编码基因.根据已报道的mrj基因序列,利用生物信息学分析选取果蝇mrj基因抗原亲水区,通过PCR扩增出其部分编码区序列,将其连接到pET-28a原核表达载体上.经酶切及测序鉴定质粒构建成功后,将重组质粒(pET-28a-mrj)... 详细信息

mrj是黑腹果蝇中一个蛋白编码基因.根据已报道的mrj基因序列,利用生物信息学分析选取果蝇mrj基因抗原亲水区,通过PCR扩增出其部分编码区序列,将其连接到pET-28a原核表达载体上.经酶切及测序鉴定质粒构建成功后,将重组质粒(pET-28a-mrj)转入Rosetta菌后通过IPTG(Isopropy1β-D-thiogalactoside)诱导表达出带His标签的重组融合蛋白后用镍柱纯化.将纯化的蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,并用Western Blot检测抗体的效价和特异性.

关键词： mrj基因果蝇多克隆抗体

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