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基于TMT蛋白质组学探讨黄精多糖对顺铂诱导C2C12细胞肌管萎缩的作用机制

北京中医药大学学报 2023年第6期46卷 790-800页

作者：唐雪阳周融融方晓阳黄傲曾宏亮谢景金剑张水寒湖南中医药大学科技创新中心长沙410208 湖南省中医药研究院中药资源研究所湖南省中医药研究院附属医院湖南省中医药研究院医学实验动物中心

目的基于串联质量标签(TMT)标记的定量蛋白质组学研究黄精多糖改善顺铂诱导小鼠成肌细胞(C2C12细胞)肌管萎缩的蛋白质代谢轮廓,探讨黄精多糖的作用机制。方法将C2C12细胞培养至肌管,分为4组:正常组、顺铂组、黄精多糖组、顺铂+黄精多糖... 详细信息

目的基于串联质量标签(TMT)标记的定量蛋白质组学研究黄精多糖改善顺铂诱导小鼠成肌细胞(C2C12细胞)肌管萎缩的蛋白质代谢轮廓,探讨黄精多糖的作用机制。方法将C2C12细胞培养至肌管,分为4组:正常组、顺铂组、黄精多糖组、顺铂+黄精多糖组。按如下方法处理。正常组:不含血清的高糖DMEM培养基;顺铂组:不含血清的高糖DMEM培养基+50μmol/L顺铂;黄精多糖组:不含血清的高糖DMEM培养基+0.200 mg/L黄精多糖;顺铂+黄精多糖组:不含血清的高糖DMEM培养基+50μmol/L顺铂+0.200 mg/L黄精多糖。各组均避光培养24 h。CCK8法检测C2C12细胞活力,免疫荧光法检测肌管直径和细胞融合指数,TMT蛋白质组学表征黄精多糖改善顺铂致C2C12细胞肌管萎缩的蛋白质代谢轮廓。结果CCK8法结果显示,黄精多糖可促进C2C12细胞活力,顺铂致C2C12肌管萎缩的造模浓度为50μmol/L,黄精多糖的给药质量浓度为0.200 mg/L。免疫荧光法结果显示,与顺铂组比较,顺铂+黄精多糖组萎缩肌管的直径和融合指数升高(P<0.01)。蛋白质组学结果显示,以磷酸泛酰-半胱氨酸连接酶、双功能损伤控制性磷酸酶、2-磷酸-D-甘油酸水解酶、CCR4-NOT转录复合体亚基9为代表的43个蛋白在正常组、顺铂组和顺铂+黄精多糖组3组间发生了连续性的调节变化,核糖体、鞘脂类代谢、鞘糖脂生物合成相关代谢通路调节在黄精多糖改善顺铂所致的C2C12肌管萎缩中作用明显。结论黄精多糖能改善顺铂所致C2C12肌管萎缩,其机制可能与下调鞘磷脂磷酸二酯酶2介导的神经酰胺积累有关。

关键词：黄精多糖成肌细胞顺铂萎缩蛋白质组学

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胆囊收缩素刺激小鼠胰腺腺泡肽链的延伸及其分子机制

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中南大学学报（医学版） 2009年第12期34卷 1202-1208页

作者：谢群汤参娥苏涛张欣段朝军中南大学湘雅医院医学实验研究中心长沙410007 湖南省中医药研究院长沙410006

目的:研究胆囊收缩素(cholecystokinin,CCK)、碳酸胆碱(carbachol,CCh)及血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)体外刺激小鼠胰腺腺泡细胞肽链的延伸及其作用的分子机制。方法:采用3H-亮氨酸掺入法分别测定基础状态及CCK,CCh... 详细信息

目的:研究胆囊收缩素(cholecystokinin,CCK)、碳酸胆碱(carbachol,CCh)及血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)体外刺激小鼠胰腺腺泡细胞肽链的延伸及其作用的分子机制。方法:采用3H-亮氨酸掺入法分别测定基础状态及CCK,CCh及VIP处理后胰腺腺泡细胞肽链延伸率;Western印迹分析基础状态和上述促分泌素处理后真核细胞延伸因子(eEF2)及其激酶磷酸化水平,进一步用MEK抑制剂(PD98059)、SAPK/P38抑制剂(SB202190)、mTOR抑制剂(rapamycin)处理细胞,分别阻断MEK,SAPK/P38和mTOR3种信号通路和磷酸酶抑制剂花萼海绵诱癌素A预处理再用CCK处理胰腺腺泡,分析eEF2及其激酶eEF2K磷酸化水平。结果:体外除VIP外,其他2种促分泌素均能诱导胰腺腺泡细胞肽链的延伸。CCK和CCh处理后真核细胞延伸因子eEF2Thr56去磷酸化及其激酶Ser366磷酸化水平增加,PD98059,SB202190和rapamycin特异性抑制MEK,SAPK/P38和mTOR信号通路以及磷酸酶抑制剂花萼海绵诱癌素A均能部分性逆转CCK诱导的eEF2去磷酸化。结论:CCK可通过MEK,SAPK/P38和mTOR信号通路诱导真核细胞延伸因子eEF2Thr56去磷酸化,参与小鼠胰腺腺泡细胞肽链的延伸调节。

关键词：胆囊收缩素肽链的延伸胰腺腺泡

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丹参调控糖脂代谢作用研究进展

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中南药学 2024年第3期22卷 733-741页

作者：黄傲方晓洋何维维文馨月成飞徐琳本曾宏亮湖南中医药大学湖南省中医药研究院长沙410208 湖南省中医药研究院医学实验动物中心长沙410013 湖南省中医药研究院中药资源研究所长沙410013

丹参(Salviae Miltiorrhizae Radix et Rhizoma)是唇形科、鼠尾草属多年生直立草本植物,其干燥根和根茎常用于心血管疾病的治疗,为我国传统医学中的常见药材。研究结果表明,丹参提取物及主要活性成分丹酚酸、丹参酮等通过调节炎症、过... 详细信息

丹参(Salviae Miltiorrhizae Radix et Rhizoma)是唇形科、鼠尾草属多年生直立草本植物,其干燥根和根茎常用于心血管疾病的治疗,为我国传统医学中的常见药材。研究结果表明,丹参提取物及主要活性成分丹酚酸、丹参酮等通过调节炎症、过氧化等多靶点多信号途径改善糖脂代谢。本文梳理了近年来的研究成果,总结丹参及其活性物质调控糖脂代谢的作用与机制研究进展,以期为丹参应用于糖尿病与肥胖等代谢性疾病的防治提供参考。

关键词：丹参糖代谢脂代谢信号通路研究进展

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食消饮改善食积小鼠的药效作用研究

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中南药学 2024年第11期22卷 2864-2870页

作者：何维维方晓洋郭麦平黄傲许豹吴宏伟徐琳本张水寒曾宏亮蔡萍湖南中医药大学长沙410208 中药资源研究所湖南省中医药研究院长沙410013 医学实验动物中心湖南省中医药研究院长沙410013

目的探讨食消饮对食积小鼠的药效作用。方法将120只ICR小鼠随机均分为两个实验(实验A和B),每个实验的小鼠均分为正常组,模型组,食消饮低、中、高剂量组和健胃消食片组。食积模型构建后,各给药组灌胃相应受试药物,每日2次,连续7 d。其中... 详细信息

目的探讨食消饮对食积小鼠的药效作用。方法将120只ICR小鼠随机均分为两个实验(实验A和B),每个实验的小鼠均分为正常组,模型组,食消饮低、中、高剂量组和健胃消食片组。食积模型构建后,各给药组灌胃相应受试药物,每日2次,连续7 d。其中实验A小鼠用于脏器系数、血清生化指标、小肠免疫组化、结肠HE染色以及肠道菌群的检测,实验B小鼠用于胃排空率和小肠推进率实验。结果与模型组相比,食消饮高剂量组小鼠脾脏脏器系数明显升高,中、高剂量组小鼠血清生化指标均得到明显改善,小肠推进率升高、胃内残留率降低。免疫组化结果显示,食积模型小鼠小肠中C-kit表达明显降低,食消饮中、高剂量和健胃消食片组小鼠中C-kit表达明显升高。HE结果显示,食消饮中、高剂量组小鼠结肠绒毛长度均增加、隐窝深度均降低、绒毛长度/隐窝深度的比值增加。粪便菌群计数结果显示,食消饮高剂量组小鼠粪便中乳杆菌和双歧杆菌增加,肠杆菌、肠球菌和产气荚膜梭菌均减少。结论食消饮能通过调控小肠C-kit表达、胃肠动力相关激素分泌、肠道菌群丰度、肠道黏膜结构等改善食积模型小鼠的胃肠动力与功能。

关键词：食消饮食积小鼠肠道菌群药效研究

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基于全转录组技术研究慢性应激抑郁模型中微小RNA、长链非编码RNA及环状RNA的表达谱及调控网络

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解剖学报 2023年第4期54卷 405-413页

作者：孟盼张熙杨蕙刘检方锐王枭冶葛金文刘彤彤赵洪庆王宇红湖南中医药大学中西医结合学院长沙410208 湖南省脑科医院科研部长沙410007 湖南中医药大学第一附属医院医学实验中心长沙410007 湖南省中医药研究院长沙410006 湖南中医药大学科技创新中心长沙410208

目的筛选慢性应激抑郁模型大鼠海马组织中微小RNA(miRNA)、长链非编码RNA(lncRNA)、环状RNA(circRNA)的表达谱及其竞争性内源RNA(ceRNA)调控网络,探讨抑郁症潜在的病理生理机制。方法 12只SD大鼠分为空白组和模型组,采用慢性温和不可... 详细信息

目的筛选慢性应激抑郁模型大鼠海马组织中微小RNA(miRNA)、长链非编码RNA(lncRNA)、环状RNA(circRNA)的表达谱及其竞争性内源RNA(ceRNA)调控网络,探讨抑郁症潜在的病理生理机制。方法 12只SD大鼠分为空白组和模型组,采用慢性温和不可预测性应激(CUMS)构建抑郁症大鼠模型,取大鼠海马组织进行全转录组分析,并用生物信息学方法找出可能存在的lncRNA-miRNA-mRNA、circRNA-miRNA-mRNA调控网络。结果根据|差异倍数(fold change)|≥1.5和P≤0.05共鉴定出29个差异miRNAs(上调21个,下调8个),686个差异lncRNAs(上调163个,下调523个),8个差异circRNAs(上调3个,下调5个)。基因本体论(GO)和京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路分析显示,miRNAs的靶基因主要富集于细胞膜内的高尔基体和钙离子结合过程;LncRNAs靶基因的功能涉及核酸结合的调节、细胞因子和蛋白质泛素化等;CircRNAs的宿主基因主要集中在细胞刺激反应、代谢进程、催化活性等过程中。LncRNAs和circRNAs相互竞争的ceRNA网络显示,非编码RNA(ncRNA)与突触可塑性相关的mRNA之间存在复杂相互作用,如与轴突导向相关的Wnt-ta蛋白(WNT5a)和Ⅷ型胶原α1(COL8α1),以及神经发育相关的层黏连蛋白A2(LAMA2)。结论 LncRNA和circRNA的ceRNA网络显示,ncRNA和mRNA之间的复杂相互作用与抑郁症的神经可塑性受损有关。

关键词：微小RNA 长链非编码RNA 环状RNA 抑郁症神经可塑性全转录组技术大鼠

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基于lncRNA/mRNA表达谱探讨百事乐胶囊调控慢性应激抑郁症模型大鼠海马损伤的机制

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中药新药与临床药理 2023年第3期34卷 312-321页

作者：刘彤彤侯光菡蔺晓源杨蕙刘检张熙王枭冶王宇红葛金文孟盼湖南中医药大学科技创新中心湖南长沙410208 长沙市第四医院湖南长沙410006 湖南中医药大学第一附属医院医学实验中心湖南长沙410007 湖南省脑科医院湖南长沙410007 湖南省中医药研究院湖南长沙410006

目的基于长链非编码RNA(lncRNA)/信使RNA(mRNA)表达谱探讨百事乐胶囊(贯叶金丝桃、人参、姜黄)调控慢性应激抑郁症模型大鼠海马损伤的可能机制。方法将SD大鼠随机分为空白组、模型组及百事乐胶囊高、低剂量组(2.88、0.72 g·kg^(-1... 详细信息

目的基于长链非编码RNA(lncRNA)/信使RNA(mRNA)表达谱探讨百事乐胶囊(贯叶金丝桃、人参、姜黄)调控慢性应激抑郁症模型大鼠海马损伤的可能机制。方法将SD大鼠随机分为空白组、模型组及百事乐胶囊高、低剂量组(2.88、0.72 g·kg^(-1)),每组8只;采用28 d慢性温和不可预测性应激联合孤养的方式构建抑郁症大鼠模型,造模同时灌胃给药,每日1次。采用开野试验和新奇摄食试验评价大鼠模型的抑郁样行为;采用ELISA法检测血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)的水平;采用高通量芯片测序筛选出组间差异的海马组织lncRNA/mRNA表达谱,预测差异表达的lncRNA靶基因,并取lncRNA、mRNA的差异共集基因;对差异共集基因进行GO功能富集分析和KEGG通路富集分析;采用Western Blot法验证差异性蛋白胰岛素生长因子2(Igf2)、核糖体蛋白L36(Rpl36)的表达情况。结果(1)与空白组比较,模型组大鼠4 min内的水平、垂直活动量均显著降低(P<0.01),摄食潜伏期显著延长(P<0.01),血清TNF-α、IL-6水平显著升高(P<0.01)。与模型组比较,百事乐胶囊高剂量组大鼠的水平、垂直活动量明显增加(P<0.05,P<0.01),摄食潜伏期显著缩短(P<0.01),血清TNF-α、IL-6水平明显降低(P<0.05,P<0.01)。(2)模型组与空白组比较,差异共集基因有152个,其中上调100个,下调52个;百事乐胶囊高剂量组与模型组比较,差异共集基因有150个,其中上调88个,下调62个;百事乐胶囊低剂量组与模型组比较,差异共集基因有119个,其中上调58个,下调61个。Igf2、Rpl36为百事乐胶囊高剂量组的主要逆向调节基因。百事乐胶囊主要调控与生物学过程(突触化学传递)和细胞组分(细胞连接)密切相关的差异共集基因的表达,可能通过影响MAPK信号转导通路、胰岛素信号改善抑郁症模型大鼠的海马损伤。(3)与空白组比较,模型组大鼠海马组织Igf2、Rpl36蛋白表达显著下调(P<0.01)。与模型组比较,百事乐胶囊高剂量组大鼠海马组织Igf2、Rpl36蛋白表达显著上调(P<0.01)。结论百事乐胶囊可能通过影响差异共集基因Igf2介导的MAPK信号途径和胰岛素信号途径,调控神经元的存活及突触可塑性,以及可能通过Rpl36减少神经元凋亡,从而发挥抗抑郁作用。

关键词：百事乐胶囊抑郁症长链非编码RNA/信使RNA表达谱海马损伤胰岛素生长因子2 核糖体蛋白L36 大鼠

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基于UPLC-Q-Exactive-MS技术鉴定接骨七厘片的化学成分及血中移行成分

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药学前沿 2024年第12期28卷 605-616页

作者：方晓洋周融融沈冰冰何维维肖洁徐瑾曾宏亮张水寒湖南中医药大学中医药研究院长沙410208 湖南省中医药研究院中药资源研究所长沙410013 湖南省中医药研究院附属医院中心实验室长沙410006 湖南省中医药研究院医学实验动物中心长沙410013 湖南金沙药业有限责任公司长沙410015

目的采用超高效液相色谱串联四极杆静电场轨道阱质谱(UPLC-Q-Exactive-MS)技术对接骨七厘片的化学成分及大鼠血中移行成分进行定性分析,为该制剂的体内有效物质研究提供参考。方法体外色谱条件:Hypersil GOLD C18色谱柱(50 mm×2.1 ... 详细信息

目的采用超高效液相色谱串联四极杆静电场轨道阱质谱(UPLC-Q-Exactive-MS)技术对接骨七厘片的化学成分及大鼠血中移行成分进行定性分析,为该制剂的体内有效物质研究提供参考。方法体外色谱条件:Hypersil GOLD C18色谱柱(50 mm×2.1 mm,1.9µm),流动相为0.1%甲酸水溶液和甲醇(梯度洗脱),柱温为30℃,进样量为5µL;体外质谱条件:样品经电喷雾电离,采用正负离子双模式检测,扫描范围为m/z100~1500。体内色谱条件:ACQUITYHPLCHSST3色谱柱(100mm×2.1mm,1.8µm),流动相为95%水+5%乙腈和47.5%乙腈+47.5%异丙醇+5%水(梯度洗脱),柱温为40℃,进样量为8µL。体内质谱条件:样品经电喷雾电离,采用正负离子双模式检测,扫描范围为m/z 70~1050。连续7 d灌胃给予SD大鼠接骨七厘片,通过腹主动脉取血获得含药血清及空白血清样品(雌、雄性接骨七厘片含药血清组和雌、雄性空白血清组)。采用非靶向LC-MS技术并利用Progenesis QI软件进行对比分析,鉴定大鼠血中移行成分。结果体外共鉴定出75种化合物,体内共鉴定出98种化合物,结合体内外鉴定的化学成分,共鉴定出7种入血成分,分别为甲基异茜草素、花生四烯酸、柠檬酸、焦谷氨酸、3-吲哚丙酸、16-羟基棕榈酸、油酸酰胺。结论该方法高效、准确灵敏,为今后在接骨七厘片药效物质基础和质量控制研究提供科学参考。

关键词：接骨七厘片成分分析含药血清超高效液相色谱串联四极杆静电场轨道阱质谱化学成分代谢产物入血成分

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彩色多普勒检测糖尿病视网膜病变血流动力学变化及临床价值

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实用预防医学 2009年第1期16卷 1-2页

作者：谢群苏涛段朝军湖南省中医药研究院附属医院B超室湖南长沙410006 中南大学湘雅医院医学实验研究中心

目的探讨糖尿病患者眼球动脉血流动力学指标的变化及其临床价值。方法采用彩色多普勒成像技术,对40例糖尿病患者(无视网膜病变组与视网膜病变组各20例)与30例正常人的OA、CRA和CRV、CRA/CRV流速比值的血流动力学变化进行检测。结果无视... 详细信息

目的探讨糖尿病患者眼球动脉血流动力学指标的变化及其临床价值。方法采用彩色多普勒成像技术,对40例糖尿病患者(无视网膜病变组与视网膜病变组各20例)与30例正常人的OA、CRA和CRV、CRA/CRV流速比值的血流动力学变化进行检测。结果无视网膜病变组和视网膜病变组与正常人组相比,OA的内径变小,收缩期血流速度和舒张期血流速度均降低(P<0.05),阻力指数增高(P<0.05);视网膜病变组与无视网膜病变组和正常人组相比,CRA流速降低(P<0.05);CRV流速在糖尿病无视网膜病变组增高(P<0.05),而在视网膜病变组呈降低趋势。CRA/CRV流速比值变小。结论高频彩超可动态检测眼球后血流状态,对临床上评价糖尿病视网膜病变的程度有重要的参考价值。

关键词：高频彩超糖尿病视网膜病变血流动力学

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甘蔚乐对小鼠抗疲劳作用的研究

甘蔚乐对小鼠抗疲劳作用的研究

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第十七届中南地区实验动物科技交流会

作者：童敏肖梅英龚莉张逸中南大学湘雅二医院实验动物中心湖南省中医药研究院深圳施之健定向营养研究院广东深圳 5180202 中南大学湘雅二医院医学心理学中心长沙 410010

目的:研究由黄精多糖、玉米低聚肽、黑茶茶多酚、氨基酸等为主要原料制备的功能营养剂甘蔚乐的抗疲劳作用.方法:50只昆明小鼠随机分为空白对照组(给予蒸馏水)、阳性对照组(给予西洋参)、甘蔚乐低剂量组(250mg·kg－1)、中剂量组(500... 详细信息

目的:研究由黄精多糖、玉米低聚肽、黑茶茶多酚、氨基酸等为主要原料制备的功能营养剂甘蔚乐的抗疲劳作用.方法:50只昆明小鼠随机分为空白对照组(给予蒸馏水)、阳性对照组(给予西洋参)、甘蔚乐低剂量组(250mg·kg－1)、中剂量组(500mg·kg－1)和高剂量组(1000mg·kg－1),每组10只;连续灌胃给药21天后,进行负重游泳测验,检测血中尿素氮、血乳酸、肝糖原和肌糖原含量.结果:与西洋参类似,甘蔚乐组可显著延长小鼠负重游泳时间,降低血乳酸、血中尿素氮含量;提高肝糖原和肌糖原含量(P＜0.05).结论:甘蔚乐具有良好的抗疲劳作用.

关键词：甘蔚乐临床实验抗疲劳作用

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