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左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠海马神经血管单元联动损伤的调控作用及其机制

北京中医药大学学报 2020年第11期43卷 918-926页

作者：刘检刘林杨蕙韩远山王宇红湖南中医药大学第一附属医院湖南410007 湖南省中药粉体与创新药物省部共建国家重点实验室培育基地湖南中医药大学科技创新中心

目的探讨左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症(DD)大鼠海马神经血管单元(NVU)联动损伤的调控作用及其潜在机制。方法原代分离、纯化和培养SD大鼠海马神经元(Ne)、星形胶质细胞(As)与脑微血管内皮细胞(Bm),并对其进行免疫荧光染色鉴定;采... 详细信息

目的探讨左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症(DD)大鼠海马神经血管单元(NVU)联动损伤的调控作用及其潜在机制。方法原代分离、纯化和培养SD大鼠海马神经元(Ne)、星形胶质细胞(As)与脑微血管内皮细胞(Bm),并对其进行免疫荧光染色鉴定;采用高糖联合皮质酮及Transwell小室干预构建DD海马NVU细胞模型;实验设正常组、模型组、空白血清组、左归降糖解郁方含药血清组。造模及给药18 h后,检测海马NVU跨内皮细胞电阻值(TEER)及4 h渗漏试验液面高度值;采用ELISA法分别检测Bm分泌蛋白白血病抑制因子(LIF)及As分泌蛋白转化生长因子β(TGF-β)、胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)含量;采用免疫荧光联合高内涵细胞成像(HCA)分别检测Bm结构蛋白的闭合蛋白-1(claudin-1)、紧密连接蛋白(occludin)及As结构蛋白的胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、缝隙连接蛋白-43(CX43)表达水平;采用CCK-8法检测NVU中海马神经元细胞活力;采用Tunel染色法检测NVU中海马神经元细胞凋亡情况。结果与正常组比较,模型组及空白血清组TEER值明显降低、4 h渗漏试验液面高度值明显升高,Bm分泌蛋白LIF及As分泌蛋白TGF-β、GDNF含量明显降低,Bm结构蛋白claudin-1、occludin及As结构蛋白GFAP、CX43表达下调,海马神经元细胞存活率下降,同时细胞凋亡明显增多;与模型组比较,左归降糖解郁方含药血清组TEER值显著增加、4 h渗漏试验液面高度值明显下降,分泌蛋白LIF、TGF-β、GDNF及结构蛋白claudin-1、occludin、GFAP、CX43表达显著上调,同时海马神经元细胞存活率增加,细胞凋亡显著减少。结论左归降糖解郁方对DD大鼠海马NVU联动损伤具有明显的调控作用,其作用机制与改善海马NVU屏障功能、分泌功能及基础结构有关。

关键词：左归降糖解郁方糖尿病并发抑郁症神经血管单元联动损伤凋亡大鼠

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产后抑郁动物模型及行为学评价方法研究进展

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中国实验动物学报 2018年第1期26卷 133-138页

作者：唐娅辉曾贵荣吴莉峰王宇红姜德建湖南省中药粉体与创新药物省部共建国家重点实验室培育基地长沙410208 湖南省药物安全评价研究中心新药药效与安全评价湖南省重点实验室长沙410331

产后抑郁症(postpartum depression,PPD)是产褥期精神综合征中最常见的一种类型。由于PPD疾病的复杂多变以及产妇分娩后所处的特殊时期,使得临床上研究该疾病存在很多局限性。因此,制备与建立临床接近PPD动物模型及行为学评价方法对研... 详细信息

产后抑郁症(postpartum depression,PPD)是产褥期精神综合征中最常见的一种类型。由于PPD疾病的复杂多变以及产妇分娩后所处的特殊时期,使得临床上研究该疾病存在很多局限性。因此,制备与建立临床接近PPD动物模型及行为学评价方法对研究其发病机制具有重要作用。本综述主要介绍了常用的产后抑郁症动物模型以及行为学评价方法,为深入研究PPD发病机制及药物开发提供实验方法。

关键词：产后抑郁症行为学评价方法

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百事乐胶囊对慢性应激抑郁模型大鼠海马神经元凋亡的影响

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中国实验方剂学杂志 2013年第19期19卷 203-207页

作者：孟盼王宇红张秀丽向韵尹玲桃韩远山湖南中医药大学长沙410208 湖南省中药粉体与创新药物省部共建国家重点实验室培育基地长沙410208

目的:探讨百事乐胶囊对慢性应激抑郁模型大鼠行为活动、海马神经元凋亡及凋亡因子B细胞淋巴瘤/白血病2(Bcl-2),Bcl-2相关x蛋白(Bax)表达的影响。方法:将SD大鼠随机分为6组,即空白对照、抑郁模型、氟西汀、百事乐胶囊高、中、低(2.88,1.4... 详细信息

目的:探讨百事乐胶囊对慢性应激抑郁模型大鼠行为活动、海马神经元凋亡及凋亡因子B细胞淋巴瘤/白血病2(Bcl-2),Bcl-2相关x蛋白(Bax)表达的影响。方法:将SD大鼠随机分为6组,即空白对照、抑郁模型、氟西汀、百事乐胶囊高、中、低(2.88,1.44,0.72 g·kg-1)剂量组,采用慢性温和不可预见性应激加孤养的方式建立抑郁模型,造模同时ig给药,连续21d,测定各组大鼠体重变化,Open-field、1%蔗糖偏食度测定大鼠行为学变化,TUNEL染色测定海马神经元凋亡变化,免疫组化检测海马Bcl-2,Bax的表达。结果:与正常组比较,模型组体重增加、水平及垂直活动次数、蔗糖偏食度明显下降(P<0.01),凋亡细胞所占比例及凋亡细胞计数明显增加(P<0.01);Bcl-2表达下降(P<0.01),Bax表达上升(P<0.01)。百事乐胶囊高剂量在第14、21天提升模型大鼠体重(P<0.01),中剂量在第21天升高模型大鼠体重(P<0.05);高、中剂量能提升模型大鼠水平或垂直活动次数(P<0.01或P<0.05);高、中剂量能提高模型大鼠蔗糖偏食度,降低CA1,CA3区凋亡细胞所占比例及凋亡细胞计数(P<0.01或P<0.05),且高剂量能降低模型大鼠DG区凋亡细胞所占比例及凋亡细胞计数,升高海马CA3区Bcl-2并降低Bax的表达(P<0.05)。结论:百事乐胶囊能通过减少海马神经元的凋亡而达到抗抑郁的作用。

关键词：百事乐胶囊抑郁症海马凋亡 B细胞淋巴病白血病2

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基于网络药理学研究复方钩藤降压片治疗高血压的作用机制

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中国中药杂志 2018年第7期43卷 1360-1365页

作者：龙红萍蔺晓源王宇红任卫琼邵乐张稳谭元生湖南中医药大学第一附属医院湖南长沙410007 湖南省中药粉体与创新药物省部共建国家重点实验室培育基地湖南长沙410208 湖南中医药大学湖南长沙410208

该文通过网络药理学研究预测复方钩藤降压片潜在的主要活性成分和作用靶点,探讨其多成分-多靶点-多通路的治疗高血压的可能作用机制。采用整合药理学平台（TCMIP）构建复方钩藤降压片成分靶标-疾病靶标网络,通过网络分析方法筛选关键节... 详细信息

该文通过网络药理学研究预测复方钩藤降压片潜在的主要活性成分和作用靶点,探讨其多成分-多靶点-多通路的治疗高血压的可能作用机制。采用整合药理学平台（TCMIP）构建复方钩藤降压片成分靶标-疾病靶标网络,通过网络分析方法筛选关键节点,并在此基础上对关键节点进行通路富集分析,探索复方钩藤降压片治疗高血压可能参与的生物过程。靶点网络特征分析显示,所预测复方钩藤降压片中有35个活性成分与前列腺素内源性过氧化物合酶（PTGS1,PTGS2）、ATP合成酶（ATP1A1,ATP5A1,ATP5C1,ATP5B）等29个主要蛋白有很强的相互作用,富集到血压调节、G-蛋白耦合受体激活、心肌细胞肾上腺素能信号转导和血小板激活等15条通路,参与对高血压病理过程不同环节的调控。该研究初步揭示了复方钩藤降压片治疗高血压的潜在活性成分及其可能的作用机制,为进一步的药效物质基础和作用机制实验研究提供了理论依据。

关键词：网络药理学高血压复方钩藤降压片 PTGS

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强骨生血口服液对去卵巢致骨质疏松大鼠的治疗作用及其机制

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中草药 2017年第23期48卷 4935-4940页

作者：唐娅辉刘学武刘锐曾贵荣贾昀涛张妙红许志周仕达王宇红姜德建湖南省中药粉体与创新药物省部共建国家重点实验室培育基地湖南长沙410208 湖南省药物安全评价研究中心新药药效与安全评价湖南省重点实验室湖南长沙410331 中南大学药学院湖南长沙410013 湖南省天劲制药有限责任公司湖南长沙410205

目的探讨强骨生血口服液对雌性去卵巢大鼠骨质疏松的治疗作用及作用机制。方法将18周龄雌性SD大鼠按体质量随机分为假手术、模型组、仙灵骨葆胶囊(0.54 g/kg)组和强骨生血口服液低、中、高剂量(2.7、5.4、10.8 m L/kg)组,除假手术外,其... 详细信息

目的探讨强骨生血口服液对雌性去卵巢大鼠骨质疏松的治疗作用及作用机制。方法将18周龄雌性SD大鼠按体质量随机分为假手术、模型组、仙灵骨葆胶囊(0.54 g/kg)组和强骨生血口服液低、中、高剂量(2.7、5.4、10.8 m L/kg)组,除假手术外,其余各组进行双侧卵巢切除术制备骨质疏松模型。术后3 d开始给药,连续90 d。于给药第45、90天分别检测血钙、血清I型前胶原羧基末端肽(CTX-I)、骨钙、股骨羟脯氨酸水平,股骨腰椎骨密度(BMD)、断裂载荷、最大载荷值以及组织病理学检测。结果与模型组比较,强骨生口服液低、中剂量可抑制去卵巢诱导的大鼠血钙、骨钙、BMD的降低,降低血清CTX-I水平,改善骨生物力学性能;强骨生口服液高剂量可显著抑制去卵巢诱导的大鼠血钙、骨钙、BMD的降低,降低血清CTX-I水平,改善骨生物力学性能。结论强骨生血口服液对去卵巢诱导的大鼠骨质疏松具有延缓和治疗作用,其机制与减少骨钙丢失,降低CTX-I水平有关。

关键词：强骨生血口服液骨质疏松症卵巢切除骨密度骨钙 I型前胶原羧基末端肽

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HPLC-ESI-ITMS法分析蜜炙前后款冬花中毒性成分克氏千里光碱的变化

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中成药 2019年第3期41卷 694-697页

作者：吴笛雷昌唐林湖南中医药大学第一附属医院湖南长沙410007 湖南省中药粉体与创新药物省部共建国家重点实验室培育基地湖南长沙410208

目的建立款冬花中毒性成分克氏千里光碱的含有量测定方法,考察蜜炙对其影响。方法采用高效液相色谱-电喷雾离子阱质谱联用技术进行定量分析,比较蜜炙前后款冬花中克氏千里光碱的含有量。结果所建立的含有量测定方法经方法学验证,并成功... 详细信息

目的建立款冬花中毒性成分克氏千里光碱的含有量测定方法,考察蜜炙对其影响。方法采用高效液相色谱-电喷雾离子阱质谱联用技术进行定量分析,比较蜜炙前后款冬花中克氏千里光碱的含有量。结果所建立的含有量测定方法经方法学验证,并成功应用于款冬花及其蜜炙品中克氏千里光碱含有量的测定;款冬花蜜炙后,克氏千里光碱含有量显著降低。结论该方法简便快速、准确灵敏,可用于款冬花的质量控制的完善提供参考;蜜炙对款冬花可能具有一定的减毒作用。

关键词：款冬花克氏千里光碱蜜炙 HPLC-ESI-ITMS

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HPLC法同时测定款冬花中7种成分

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中成药 2019年第5期41卷 1080-1084页

作者：吴笛雷昌唐林湖南中医药大学第一附属医院湖南长沙410007 湖南省中药粉体与创新药物省部共建国家重点实验室培育基地湖南长沙410208

目的建立HPLC法同时测定款冬Tussilago farfara L.花中绿原酸、芦丁、异槲皮苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、款冬酮的含有量。方法款冬花70%甲醇提取物的分析采用依利特Hypersil ODS2色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相甲醇... 详细信息

目的建立HPLC法同时测定款冬Tussilago farfara L.花中绿原酸、芦丁、异槲皮苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、款冬酮的含有量。方法款冬花70%甲醇提取物的分析采用依利特Hypersil ODS2色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相甲醇-乙腈-0.1%磷酸溶液,梯度洗脱;检测波长220 nm;柱温25℃;体积流量1 mL/min。结果 7种成分在各自范围内线性关系良好(R^2≥0.999 4),平均加样回收率99.0%～102.2%,RSD 1.8%～2.8%。结论该方法准确稳定,重复性好,可用于款冬花的质量控制。

关键词：款冬花化学成分 HPLC

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脑泰方Ⅱ号含药血清对LPS诱导的小胶质细胞极化的调节作用

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北京中医药大学学报 2020年第5期43卷 408-413页

作者：张秀丽雷昌刘洋葛金文孟盼张君宇任永镇资冬朱伟湖南中医药大学科技创新中心湖南410208 湖南省中药粉体与创新药物省部共建国家重点实验室培育基地湖南中医药大学心脑疾病中西医结合防治湖南省重点实验室

目的探明脑泰方Ⅱ号含药血清对LPS诱导的HAPI小胶质细胞形态、M1/M2型极化标记分子及炎性因子的影响。方法建立LPS诱导的HAPI细胞炎症模型,将培养的细胞分为:空白组、LPS模型组、脑泰方Ⅱ号组、米诺环素组。高内涵观察细胞形态与数量的... 详细信息

目的探明脑泰方Ⅱ号含药血清对LPS诱导的HAPI小胶质细胞形态、M1/M2型极化标记分子及炎性因子的影响。方法建立LPS诱导的HAPI细胞炎症模型,将培养的细胞分为:空白组、LPS模型组、脑泰方Ⅱ号组、米诺环素组。高内涵观察细胞形态与数量的变化,Real-time PCR检测M1型标志分子MHCⅡ、iNOS、MCP-1、CD11b,M2型标志分子Arg1、Mrc1、Ym1,促炎性因子IL-1β、IL-6、IL-12、TNF-α,抗炎性因子IL-4、IL-10、TGF-βmRNA水平。结果与正常组比较,LPS模型组细胞胞体变大,并呈多极化或阿米巴型,突触变粗变短;其M1型标记分子与促炎性因子的mRNA水平显著升高(P<0.01);而M2型标记分子Mrc1与抗炎性因子IL-4、TGF-β的mRNA水平显著降低(P<0.01)。经脑泰方Ⅱ号干预后,细胞胞体胀大部分恢复,突触变长,且细胞数量增多;M1型标记分子MHCⅡ、iNOS、CD11b与促炎性因子的mRNA水平显著降低(P<0.01),M2型标记分子与抗炎性因子的mRNA水平显著升高(P<0.01)。与米诺环素组比,脑泰方Ⅱ号对M1型标志分子mRNA水平的降低作用无明显优势(P>0.05),对促炎性因子IL-6、IL-12、TNF-α的mRNA水平的降低作用虽优于米诺环素组(P<0.01),但对IL-1β的调节作用与米诺环素组相比无显著差异(P>0.05);其对M2型标志分子的Mrc1、Ym1及抗炎性因子IL-4、TGF-βmRNA水平的提升作用均明显优于米诺环素组(P<0.01或P<0.05)。结论脑泰方Ⅱ号可通过对细胞形态、M1/M2型标记分子与炎性因子的调节作用抑制LPS诱导的HAPI细胞M1型极化,并促进M2型极化。脑泰方Ⅱ号对M2型标志分子及抗炎性因子的调节作用较米诺环素具有一定优势。

关键词：脑泰方Ⅱ号小胶质细胞极化 M1型标记分子 M2型标记分子促炎性因子抗炎性因子

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MCAO大鼠皮质小胶质细胞极化的研究及脑泰方Ⅱ号的干预

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中国药理学通报 2020年第9期36卷 1298-1303页

作者：张秀丽雷昌刘洋葛金文张君宇任永镇资冬王婧朱伟湖南中医药大学科技创新中心湖南省中药粉体与创新药物省部共建国家重点实验室培育基地湖南中医药大学心脑疾病中西医结合防治湖南省重点实验室湖南长沙410208

目的探讨局灶性脑缺血(middle cerebral artery occlusion,MCAO)大鼠皮质小胶质细胞(microglia,MG)极化的变化规律,揭示脑泰方Ⅱ号调节MG极化的方式与特点。方法将SD大鼠随机分为正常组、假手术组、MCAO模型组、米诺环素组、脑泰方Ⅱ号... 详细信息

目的探讨局灶性脑缺血(middle cerebral artery occlusion,MCAO)大鼠皮质小胶质细胞(microglia,MG)极化的变化规律,揭示脑泰方Ⅱ号调节MG极化的方式与特点。方法将SD大鼠随机分为正常组、假手术组、MCAO模型组、米诺环素组、脑泰方Ⅱ号组,于造模后d 1、3、5、7激光共聚焦观察MG形态;Real time-PCR法检测M1/M2型表面标记分子表达。结果 MCAO模型组MG胞体胀大,突触变粗、短,分支减少;脑泰方Ⅱ号可明显促进突触分支与MG增殖。模型组M1/M2型标志分子随时间被不同程度活化;脑泰方Ⅱ号自d 3后(米诺环素自d 1后)可逐步明显抑制M1型标记分子,促进M2型标记分子表达(P <0.05或P <0.01);脑泰方Ⅱ号对M1/M2型标记分子的调节作用均在d 5后明显优于米诺环素(P <0.05或P <0.01)。结论 MCAO大鼠皮质MG极化具有时序性;脑泰方Ⅱ号可抑制MG M1型极化,促进其M2型极化,其调节作用较米诺环素具有一定的滞后性,但显示出良好的持续性。

关键词：缺血性卒中皮质小胶质细胞极化 M1型标志分子 M2型标志分子脑泰方Ⅱ号

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改良的胎鼠海马神经元原代培养及模拟糖尿病并发抑郁环境对其的损伤作用

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神经解剖学杂志 2016年第4期32卷 459-465页

作者：刘检王宇红徐雅岚孟盼刘林杨蕙韩远山湖南中医药大学第一附属医院长沙410007 湖南省中药粉体与创新药物省部共建国家重点实验室培育基地长沙410208

目的:建立一种改良的胎鼠海马神经元原代培养方法,研究模拟糖尿病并发抑郁(diabetes mellitus with depression,DD)环境对其的损伤作用。方法:取胎龄18 d的SD大鼠,体视显微镜下分离海马,0.25%胰蛋白酶和0.2%胶原酶(1∶1)消化后进行体外... 详细信息

目的:建立一种改良的胎鼠海马神经元原代培养方法,研究模拟糖尿病并发抑郁(diabetes mellitus with depression,DD)环境对其的损伤作用。方法:取胎龄18 d的SD大鼠,体视显微镜下分离海马,0.25%胰蛋白酶和0.2%胶原酶(1∶1)消化后进行体外培养,分别观察培养后4 h、24 h、5 d、8 d、14 d海马神经元的基本形态结构;神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE)免疫细胞化学染色进行细胞鉴定。采用高糖联合皮质酮造模构建类似糖尿病并发抑郁症状的模拟DD环境,MTT法检测神经元的存活率;流式AnnexinV/PI双染和Hoechst荧光染色检测神经元的凋亡情况。结果:经NSE免疫细胞化学鉴定,培养7 d后的神经元纯度达95%以上,细胞胞体成球形,树突分支明显,并相互交织成丰富的神经网络;高糖、皮质酮及两者联用造模18 h后,与正常对照组相比,MTT检测细胞存活率分别为53.1%、64.3%和56.7%,P<0.05;流式细胞仪检测正常对照组、高糖组、皮质酮组、两者联用组Q3区的比例(分别为71.6%、47.9%、53.6%和39.2%),明显低于阴性对照组(98.5%),P<0.05。后四者Q2+Q4区总比例分别为24.4%、46.6%、40.4%、67.0%;Hoechst染色结果提示上述三个造模组的神经元细胞核均出现不同程度的核染色质聚集、浓缩,甚至核碎裂,呈现出典型的凋亡特征。结论:成功建立一种操作简便、细胞纯度佳、活性好、产率高的胎鼠海马神经元原代培养方法,验证了模拟DD环境对海马神经元的损伤作用,为体外深入研究DD的发病机制及药物防治提供了实验依据。

关键词：细胞培养海马神经元糖尿病抑郁症模拟DD环境凋亡胎鼠

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