研究背景:低密度脂蛋白受体相关蛋白4(low-density lipoprotein receptor-related protein 4,LRP4)是存在于神经肌肉接头处(NMJ)突触后膜上的跨膜蛋白质。聚集蛋白(Agrin)从运动神经元末梢释放,与LRP4结合并激活肌肉特异性激酶(MuSK),...
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研究背景:低密度脂蛋白受体相关蛋白4(low-density lipoprotein receptor-related protein 4,LRP4)是存在于神经肌肉接头处(NMJ)突触后膜上的跨膜蛋白质。聚集蛋白(Agrin)从运动神经元末梢释放,与LRP4结合并激活肌肉特异性激酶(MuSK),磷酸化的MuSK蛋白触发了受体相关蛋白(rapsyn)并诱导了乙酰胆碱受体(AChR)的聚集,形成了NMJ突触后膜的作用机制。LRP4作为聚集蛋白的受体对MuSK的激活,AChR的聚集以及维持NMJ的结构起重要作用。目的:通过建立实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)模型,以研究抗LRP4抗体在重症肌无力(MG)发病机制中的作用。方法:选取雌性BALB/c小鼠,随机分为实验组和对照组。采用被动免疫的方法,将抗LRP4抗体通过腹腔注射的方式给予实验组小鼠,每12小时观察1次鼠的饮食饮水情况以及有无临床症状出现,并随时记录大鼠的体重变化。连续注射5日抗体,首次注射120小时后,处死两组小鼠,并取下鼠腓肠肌和胫前肌,进行免疫荧光实验,用以观察抗LRP4抗体与LRP4蛋白结合情况。同时做透射电镜实验,以观察NMJ的形态学变化。结果:实验组与对照组相比,未出现抓握和嘶叫无力的明显临床症状。经过免疫荧光实验后发现,实验组腓肠肌和胫前肌的细胞膜表面出现明显的黄绿色荧光物质,说明抗LRP4抗体与跨膜蛋白LRP4发生特异性结合。透射电镜观察显示实验组鼠突触结构形态完全不规则,分支简化并且分散突触处的褶皱少而浅,突触囊泡减少。而对照组突触结构呈现卷饼般形态,分支复杂并且连续,突触处的褶皱多而深,突触囊泡数量正常。结论:将抗LRP4抗体注射给鼠后未能引起明显的肌无力的临床症状,但在细胞膜处发现,抗LRP4抗体与LRP4发生特异性结合,同时NMJ发生了超微结构形态学变化。抗LRP4抗体的致病性仍需进一步研究。
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