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人胎盘源间充质干细胞通过CD73/Nrf2途径抑制Th1细胞分泌TNF-α减轻急性移植物抗宿主病小鼠肝损伤机制研究

中华微生物学和免疫学杂志 2023年第9期43卷 663-670页

作者：吴沄桦张恒超韩凯悦赵雅萱栾希英滨州医学院免疫学教研室烟台264003

目的:探究人胎盘源间充质干细胞(human placenta-derived mesenchymal stem cells,hPMSCs)通过CD73/核因子E2相关因子2(nuclear factor-erythroid 2-related factor 2,Nrf2)途径抑制CD4^(+)IFN-γ+T(Th1)细胞分泌TNF-α减轻急性移植物抗宿主病(graft versus-host disease,GVHD)小鼠肝损伤的作用机制。方法:流式细胞术分析GVHD小鼠外周血和肝组织中Th1细胞对TNF-α的表达以及CD4^(+)IFN-γ+TNF-α+T(TNF-α+Th1)细胞上PD-1的表达水平。采用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色、马松(Masson)染色和免疫荧光染色观察各组GVHD小鼠肝组织病理变化,并进一步用HE染色观察各组GVHD小鼠皮肤和肺组织病理变化。体外建立非条件性外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)向Th1细胞诱导方案,检测TNF-α+Th1细胞比例以及其Nrf2和磷酸化细胞核内核因子-κB(phosphorylated nuclear factor-kappa B,p-NF-κB)的平均荧光强度(mean fluorescence intensity,MFI)。结果:与正常对照组相比,GVHD发病高峰组小鼠外周血和肝组织中TNF-α+Th1细胞比例和TNF-α+Th1细胞对PD-1的表达明显升高(P<0.01);hPMSCs干预可降低小鼠外周血和肝组织中TNF-α+Th1细胞比例(P<0.001),促进小鼠外周血和肝组织中TNF-α+Th1细胞对PD-1的表达(P<0.01,P<0.001),然而shCD73对小鼠外周血和肝组织中TNF-α+Th1细胞的干预效果明显减弱(P<0.05,P<0.01)。肝组织病理学分析结果显示,肝脏中TNF-α+Th1细胞比例分别与Suzuki′s评分、胶原面积和α-SMA的MFI呈正相关(P<0.001)。同样,皮肤和肺组织病理学分析结果也显示,外周血中TNF-α+Th1细胞比例分别与皮肤的Cetkovic-Cvrlje评分和肺的Qiao Shukai评分呈正相关(P<0.001)。PBMCs活化实验也显示hPMSCs能下调TNF-α+Th1细胞比例(P<0.01),上调TNF-α+Th1细胞对PD-1的表达(P<0.05);进一步分析发现hPMSCs可增强TNF-α+Th1细胞中Nrf2的MFI(P<0.05),减弱p-NF-κB的MFI(P<0.01)。结论:hPMSCs可能通过CD73/Nrf2途径上调PD1的表达,抑制TNF-α+Th1细胞形成,进而减轻GVHD小鼠肝损伤。

关键词：人胎盘源间充质干细胞 Th1细胞 PD-1 CD73 Nrf2 NF-κB

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GFP拆分方法示踪幽门螺杆菌CagA的转运研究

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中国病原生物学杂志 2024年第5期19卷 502-506,513页

作者：吴倩文刘书振张建辉曹新颖孙泽坤贾钰刚张莹李波清赵慧琳季晓飞滨州医学院病原生物学教研室山东烟台264003 滨州医学院第二临床医学院

目的用GFP拆分方法示踪幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染过程中CagA向胃上皮细胞内的转运过程。方法(1)PCR扩增CagA基因的上下游同源臂,连入敲除质粒pSJHK4中,将质粒通过电击转化的方法转入Hp中,利用卡那霉素筛选CagA敲除突变株... 详细信息

目的用GFP拆分方法示踪幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染过程中CagA向胃上皮细胞内的转运过程。方法(1)PCR扩增CagA基因的上下游同源臂,连入敲除质粒pSJHK4中,将质粒通过电击转化的方法转入Hp中,利用卡那霉素筛选CagA敲除突变株ΔCagA。(2)PCR扩增绿色荧光蛋白GFP第11β折叠(GFP11)的基因序列并与CagA基因序列的3′端相连,将融合序列连入Hp-大肠埃希菌穿梭质粒pCHFHp中,并通过电击转化的方法转入ΔCagA中,利用氯霉素筛选CagA与GFP-11的融合表达突变株。(3)PCR扩增GFP第1-10β折叠(GFP1-10)的基因序列,包装慢病毒,利用病毒感染的方法将其转入胃上皮细胞GES-1中。将(2)中构建的Hp突变株以100∶1的感染复数感染(3)构建的表达GFP(1-10)的GES-1细胞体系,利用荧光显微镜观察细胞内的荧光情况,通过Western blot检测细胞内的CagA蛋白含量。结果构建了CagA敲除质粒pSJHK4-cagA,转入Hp中得到CagA敲除突变株ΔCagA。构建了CagA与GFP-11的融合表达质粒pCHFHp-cagAgfp11,转入ΔCagA中获得CagA与GFP-11的融合表达突变株HpG27-cagAgfp11。构建了含有GFP1-10基因序列的慢病毒,感染GES-1细胞后获得GFP1-10稳定表达的细胞株。在HpG27-cagAgfp11感染GES-1模型中,观察到细胞中的绿色荧光,说明CagA被转运到GES-1细胞内部,其融合表达的GFP-11与细胞内表达的GFP1-10结合发出荧光,Western blot结果也证实CagA被转运至胞内。结论在Hp感染GES-1细胞模型中,GFP拆分方法能够示踪CagA向细胞的转运过程,这为CagA的转运研究提供了新方法,有助于HpIV型分泌系统(T4SS)作用机制的深入研究。

关键词：幽门螺杆菌 CagA GFP拆分 T4SS

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YBX3通过调节UCP1的表达调控棕色脂肪产热和能量消耗

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山东大学学报（医学版） 2024年第6期62卷 38-47页

作者：王文琴高贤龙巩永凤冯科滨州医学院基础医学院生理教研室山东烟台264003

目的探讨棕色脂肪组织(brown adipose tissue,BAT)中Y盒蛋白3(Y-box binding protein 3,YBX3)水平对小鼠产热和能量消耗的影响作用机制。方法将小鼠置于4℃环境作为冷刺激方法。用慢病毒侵染法构建过表达YBX3或者抑制YBX3表达的人血管... 详细信息

目的探讨棕色脂肪组织(brown adipose tissue,BAT)中Y盒蛋白3(Y-box binding protein 3,YBX3)水平对小鼠产热和能量消耗的影响作用机制。方法将小鼠置于4℃环境作为冷刺激方法。用慢病毒侵染法构建过表达YBX3或者抑制YBX3表达的人血管基质组分细胞系。测量细胞的耗氧率用于评估细胞的线粒体功能。向小鼠BAT注射YBX3的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)构建抑制小鼠BAT中YBX3表达的模型。检测小鼠的O_(2)消耗速率、CO_(2)释放速率和能量消耗速率用于评估小鼠能量代谢情况。采用qRT-PCR、Western blotting、免疫荧光染色法检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator 1α,PGC-1α)、解偶联蛋白1(uncoupling protein 1,UCP1)和YBX3基因的表达。采用苏木精-伊红法染色检测BAT中脂肪细胞脂滴大小。采用RNA结合蛋白免疫沉淀提取与YBX3特异性结合的mRNA。采用二代测序方法鉴定mRNA。采用双荧光素酶报告基因系统检测YBX3与目的序列结合的情况。结果在寒冷刺激下野生型小鼠BAT中YBX3的表达显著增加(P<0.05)。过表达YBX3的人血管基质组分细胞系诱导为成熟棕色脂肪细胞后可以促进产热基因PGC-1α和UCP1的表达(P<0.05)。抑制YBX3表达的人血管基质组分细胞系诱导为成熟棕色脂肪细胞后可以抑制PGC-1α和UCP1的表达(P<0.05)、抑制线粒体氧化磷酸化(P<0.05)。与对照组相比,小鼠注射si-Ybx3之后能量消耗显著降低(P<0.05),在寒冷环境难以维持体温(P<0.05),产热基因表达被显著抑制(P<0.01),BAT中脂肪细胞脂滴大小显著增加(P<0.05)。与在25℃相比,4℃环境刺激下BAT中YBX3在细胞核中的表达显著增加(P<0.05)。YBX3能够特异性地与PGC-1αmRNA 3′非翻译区特定位点相结合(P<0.05)。YBX3能够特异性地与PGC-1α和UCP1启动子区域相结合(P<0.05)。结论BAT中YBX3能够通过调控PGC-1α和UCP1的表达影响产热和能量代谢。

关键词： Y-盒蛋白3 产热能量消耗棕色脂肪组织解偶联蛋白1

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IL-6通过促进人胎盘间充质干细胞上CD73的表达调节其迁移、黏附和增殖能力

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中华微生物学和免疫学杂志 2022年第12期42卷 940-948页

作者：张恒超赵楠楠张加深韩凯悦赵雅萱戚荣栾希英滨州医学院免疫学教研室烟台264003

目的探讨IL-6影响人胎盘间充质干细胞(human placenta-derived mesenchymal stem cells,hPMSCs)表面CD73的表达,以及调节其迁移、黏附和增殖的作用机制。方法流式细胞术(flow cytometry,FCM)和Western blot分析外源性IL-6和hPMSCs分泌的IL-6对hPMSCs上CD73表达的影响。单克隆抗体阻断和Western blot方法检测IL-6对hPMSCs中信号转导及转录激活蛋白3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)磷酸化的影响。实时无标记动态细胞分析技术(real-time cellular analysis,RTCA)分析慢病毒转染后低表达CD73的hPMSCs和APCP(5′-α,β亚甲基-二磷酸腺苷)预处理后hPMSCs的迁移、黏附和增殖变化。结果FCM与Western blot检测结果显示,外源性和hPMSCs分泌的IL-6均能促进CD73在hPMSCs上的表达(P<0.001,P<0.01)。IL-6R抑制剂处理后,hPMSCs上CD73表达明显下降(P<0.01);IL-6可上调hPMSCs内STAT3磷酸化和CD73水平(P<0.05,P<0.01),而加入STAT3抑制剂后,CD73表达下降(P<0.01)。RTCA分析结果显示,敲低hPMSCs上CD73的表达后,hPMSCs的黏附和增殖能力均明显降低(P<0.01,P<0.05),迁移能力明显上升(P<0.05)。使用APCP抑制hPMSCs上CD73水解酶活性后,hPMSCs同样表现出黏附和增殖能力明显降低,而迁移能力增强(P<0.05)。结论IL-6能够通过JAK/STAT3通路增强hPMSCs上CD73的表达,进而影响其迁移、黏附和增殖能力。

关键词：间充质干细胞胎盘 IL-6 CD73 迁移黏附增殖

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烟台市成年男性居民吸烟变化情况及影响因素分析

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中国卫生统计 2024年第1期41卷 113-116页

作者：林杨陈琦李佳琏刘文昊陈裕玺孙红卫王玖滨州医学院公共卫生学院卫生统计学教研室 264003

目的了解烟台市成年居民2017年、 2021年吸烟变化趋势及影响因素,为政府部门以及相关机构采取针对性措施提供依据。方法采取多阶段分层抽样方法,于2017年、 2021年对在芝罘区居住6个月及以上,且年龄大于或等于18岁的男性居民进行横断... 详细信息

目的了解烟台市成年居民2017年、 2021年吸烟变化趋势及影响因素,为政府部门以及相关机构采取针对性措施提供依据。方法采取多阶段分层抽样方法,于2017年、 2021年对在芝罘区居住6个月及以上,且年龄大于或等于18岁的男性居民进行横断面调查,由经过统一培训的调查员采用问卷调查、以面对面询问的方式进行。单因素分析采用Wilcoxon秩和检验和卡方检验,多因素分析采用logistic回归分析。结果 2021年各年龄段吸烟率较2017年均有所下降,标化后整体吸烟率由2017年的37.89%降低为2021年的30.80%(χ^(2)=12.669,P<0.001);logistic回归结果显示,文化水平、吸烟致病风险认知、职业、饮酒情况、早餐食用情况为吸烟的独立影响因素。学历越低,吸烟率越高,以本科及以上学历为参考,小学及以下(OR=2.161, 95%CI=1.077~4.335)和初中大专(OR=1.795, 95%CI=1.132~2.848)吸烟率更高;饮酒频率越高,吸烟的概率越高(OR=1.196, 95%CI=1.047~1.367);过量饮酒频率越高,吸烟的概率越高(OR=1.445, 95%CI=1.184~1.764);吸烟致病风险认知越高,吸烟概率越低(OR=0.877, 95%CI=0.806~0.954);职业方面,以当前未就业者/专业技术人员为参考,商业/服务业人员吸烟概率较大(OR=1.761, 95%CI=1.241~2.499);每周早餐次数越多,吸烟概率越低(OR=0.660, 95%CI=0.541~0.805)。结论烟台市居民控烟效果整体较好,但部分人群吸烟率仍然很高,要针对重点人群采取针对性的控烟措施。

关键词：吸烟影响因素变化趋势烟草控制健康教育

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抗大别班达病毒人源单克隆抗体Fab片段的噬菌体展示文库构建

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中国病原生物学杂志 2024年第11期19卷 1251-1254,1259页

作者：徐家馨王静静王琳徐睿杰吴玉龙李波清乔媛媛滨州医学院基础医学院病原生物学教研室山东烟台264003

目的构建具有潜在中和活性的人源抗大别班达病毒(SFTSV)抗体Fab片段的噬菌体展示文库。方法从具有交叉中和活性的SFTS恢复期患者血液样本中分离外周血单个核细胞(PBMC)并提取总RNA,逆转录PCR得到cDNA。以cDNA为模板进行第一轮PCR扩增,... 详细信息

目的构建具有潜在中和活性的人源抗大别班达病毒(SFTSV)抗体Fab片段的噬菌体展示文库。方法从具有交叉中和活性的SFTS恢复期患者血液样本中分离外周血单个核细胞(PBMC)并提取总RNA,逆转录PCR得到cDNA。以cDNA为模板进行第一轮PCR扩增,分别获得抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(Vκ和Vλ)序列。以pComb3XTT、pComb3Xλ质粒为模板,分别获得抗体重链恒定区(CH1)和轻链恒定区(Cκ、Cλ)序列。第二轮通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)扩增VH和CH1得到Fd重链,同样扩增Vκ和Cκ、Vλ和Cλ得到完整的κ和λ抗体轻链。第三轮以上述扩增产物为模板再次进行SOE-PCR,得到完整的抗体Fab基因片段。将Fab基因片段插入到pComb3XSS噬菌粒中,构建噬菌体展示抗体文库。结果通过三轮PCR扩增出抗体Fab片段的序列,成功构建库容量为1.875×10^(9)的噬菌体展示抗体文库。结论利用具有交叉中和活性的SFTS恢复期患者血源建立了人源抗SFTSV Fab片段的噬菌体展示抗体文库,为下一步筛选特异性单克隆中和抗体建立了可靠的前期基础。

关键词： SFTSV 噬菌体展示抗体文库库容量人源单克隆抗体

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基于健康生态学模型的中国女性老年人群抑郁症状影响因素研究

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中国全科医学 2025年第13期28卷 1595-1600页

作者：张滢姜欣彤王萍玉滨州医学院公共卫生学院流行病学教研室山东省烟台市264003

背景我国老年人口基数庞大且增长迅速,抑郁是老年人群常见的情绪障碍和心理健康问题,而女性老年人群的心理健康问题日益成为社会关注的焦点。目的基于健康生态学模型多层次、全方位探讨女性老年人群抑郁症状的影响因素,为识别及干预中... 详细信息

背景我国老年人口基数庞大且增长迅速,抑郁是老年人群常见的情绪障碍和心理健康问题,而女性老年人群的心理健康问题日益成为社会关注的焦点。目的基于健康生态学模型多层次、全方位探讨女性老年人群抑郁症状的影响因素,为识别及干预中国女性老年人群的抑郁症状提供理论依据。方法于2024年1月提取中国健康与养老追踪调查(CHARLS)2020年调查数据,选取≥60岁女性老年人群为研究对象(n=4594)。基于健康生态学模型将影响因素分为个人特征层、行为特征层、人际网络层、生活和工作条件层、政策环境层5个层面,采用χ2检验和二分类Logistic回归模型探讨抑郁症状的影响因素,并建立中国女性老年人群抑郁症状健康生态学模型。结果中国女性老年人群抑郁症状检出率为48.06%(2208/4594)。Logistic回归分析结果显示,年龄≥80岁(OR=0.601,95%CI=0.449~0.804)、睡眠时间≥6 h(OR=0.561,95%CI=0.493~0.639)、对生活满意(OR=0.256,95%CI=0.199~0.330)、自评身体健康状况好(OR=0.459,95%CI=0.395~0.533)、城市户口(OR=0.717,95%CI=0.603~0.853)、对子女满意(OR=0.666,95%CI=0.472~0.940)、受教育程度为初中及以上(OR=0.712,95%CI=0.582~0.871)、家庭收入>5万元(OR=0.822,95%CI=0.704~0.959)、所在城市人均国内生产总值(GDP)为5万~10万元(OR=0.841,95%CI=0.730~0.970)是中国女性老年人群发生抑郁症状的保护因素(P<0.05);已失能(OR=1.786,95%CI=1.556~2.050)、患慢性病(OR=1.159,95%CI=1.014~1.324)、中部地区(OR=1.298,95%CI=1.107~1.522)和西部地区(OR=1.407,95%CI=1.183~1.675)是中国女性老年人群发生抑郁症状的危险因素(P<0.05)。结论中国女性老年人群抑郁症状检出率较高,影响因素较多,包括个人特征层的年龄,行为特征层的睡眠时间、对生活满意度、自评身体健康情况、失能情况、慢性病情况,人际网络层的户口类型、对子女满意度、地理分布,生活和工作条件层的受教育情况、家庭收入,政策环境层的所在城市人均GDP。应从各个层面,针对重点人群,联合采取有效干预措施,减少中国女性老年人群抑郁症状的发生。

关键词：抑郁健康生态学模型老年人女性患病率影响因素研究

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肠上皮脂解刺激脂蛋白受体减轻葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠结肠炎

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中国病理生理杂志 2024年第11期40卷 2114-2123页

作者：李莹王梓琪刘浩巩永凤安雅男滨州医学院生理学教研室山东烟台264003 肾脏病防治分子医学山东省工程研究中心山东烟台264003

目的:探索脂解刺激脂蛋白受体(lipolysis-stimulated lipoprotein receptor,LSR)在葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate,DSS)诱导的结肠炎小鼠中的表达变化,以及肠上皮Lsr特异性敲除及过表达对结肠炎小鼠肠道炎症的影响。方法:C57BL/6... 详细信息

目的:探索脂解刺激脂蛋白受体(lipolysis-stimulated lipoprotein receptor,LSR)在葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate,DSS)诱导的结肠炎小鼠中的表达变化,以及肠上皮Lsr特异性敲除及过表达对结肠炎小鼠肠道炎症的影响。方法:C57BL/6J小鼠饮水中加入浓度为3%(w/v)的DSS,自由饮用6 d诱导小鼠结肠炎模型;实验结束后,通过RNA-seq对对照组和实验组中差异表达的基因进行筛选,通过RT-qPCR、Western blot和免疫荧光染色的方法检测LSR表达变化。接下来,通过Cre-loxP系统构建肠上皮Lsr特异性敲除小鼠,建立DSS诱导的结肠炎模型,检测体重变化、疾病活动度指数(disease activity index,DAI)评分、结肠长度并进行HE染色来评估小鼠肠炎症状;同时,通过ELISA检测血清中促炎细胞因子肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6和IL-18水平;免疫荧光染色检测结肠组织中性粒细胞和巨噬细胞浸润情况;PAS染色观察杯状细胞数量。最后,腹腔注射腺相关病毒(AAV-Lsr)构建LSR过表达小鼠,确定LSR过表达成功后,通过上述方法诱导小鼠结肠炎模型后观察肠道炎症情况。结果:LSR在DSS诱导的结肠炎小鼠中表达下调,同时,肠上皮Lsr特异性敲除小鼠对DSS诱导的结肠炎的易感性增加,表现为体重显著减轻(P<0.05),DAI得分显著升高(P<0.01),结肠长度显著缩短(P<0.05),病理损伤加重,促炎细胞因子TNF-α(P<0.05)、IL-1β(P<0.01)、IL-6(P<0.05)和IL-18(P<0.01)水平显著升高,炎症细胞浸润增加,结肠杯状细胞数量减少。此外,LSR过表达显著减轻DSS诱导的结肠炎小鼠肠道炎症。结论:LSR在DSS诱导的结肠炎小鼠中表达降低,LSR缺失加重DSS诱导的结肠炎小鼠的肠道炎症,AAV介导LSR过表达能减轻DSS诱导的结肠炎小鼠的肠道炎症。

关键词：脂解刺激脂蛋白受体葡聚糖硫酸钠腺相关病毒炎性肠病

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大鼠脂肪间充质干细胞的分离、培养及其向少突胶质前体细胞的诱导分化

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解剖学报 2022年第5期53卷 557-562页

作者：张雅群付丽任译延乔妍梓赵冬梅滨州医学院人体解剖学教研室山东烟台264003

目的改良酶消化法提取脂肪间充质干细胞(ADSCs),并探讨诱导其分化为少突胶质前体细胞(OPCs)的可行性,为脱髓鞘疾病治疗种子细胞来源提供有效途径。方法取SD大鼠腹股沟区脂肪,Ⅰ型胶原酶和胰蛋白酶联合消化法分离培养ADSCs,Ⅰ型胶原酶组... 详细信息

目的改良酶消化法提取脂肪间充质干细胞(ADSCs),并探讨诱导其分化为少突胶质前体细胞(OPCs)的可行性,为脱髓鞘疾病治疗种子细胞来源提供有效途径。方法取SD大鼠腹股沟区脂肪,Ⅰ型胶原酶和胰蛋白酶联合消化法分离培养ADSCs,Ⅰ型胶原酶组作为对照,细胞计数,观察细胞形态。取第3代细胞,流式细胞术检测细胞的表面标志物CD29、CD90和CD45;成脂诱导,油红O染色;利用干细胞分化培养液及OPCs培养液将ADSCs诱导为OPCs,免疫荧光检测α-N-乙酰基神经氨酸α-2、8-唾液酸转移酶1(A2B5)、NG2;利用OPCs培养液继续培养OPCs分化为少突胶质细胞(OLs)。结果Ⅰ型胶原酶组分离的ADSCs为(9.143±0.5084)×10^(7)/L,联合酶组为(13.43±0.4809)×10^(7)/L,联合酶组较Ⅰ型胶原酶组ADSCs数量多,差异有统计学意义(P<0.05,n=7);细胞形态观察显示,ADSCs贴壁生长,呈长梭形;流式细胞术检测CD29阳性率为99.8%,CD90阳性率为99.4%,CD45阳性率为0.35%;成脂诱导后倒置光学显微镜下可见脂滴,油红O染色脂滴呈红染;ADSCs向OPCs诱导第16天,A2B5和NG2表达阳性,A2B5阳性率为(87.03±0.94)%,NG2阳性率为(90.07±0.96)%;继续培养OPCs 3 d,其分化为OLs,髓鞘碱性蛋白(MBP)表达阳性。结论联合酶消化较单独胶原酶消化获取的细胞数量多,分离培养的细胞符合ADSCs的特征,体外可诱导分化为OPCs。

关键词：脂肪间充质干细胞分离培养诱导分化少突胶质前体细胞神经脱髓鞘疾病流式细胞术大鼠

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刚地弓形虫感染孕鼠胎盘组织中中性粒细胞和IL-17与不良妊娠结局的关系

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2024年第1期42卷 48-54页

作者：郑广福刘现兵姜昱竹李新雨胡雪梅张海霞滨州医学院免疫学教研室山东烟台264003 邹平市卫生健康局宣传教育股山东邹平256200

目的探究孕鼠胎盘中性粒细胞和炎性因子白细胞介素17(IL-17)在孕期刚地弓形虫(简称弓形虫)感染致不良妊娠结局中的作用机制。方法将C57BL/6孕鼠随机分为未感染组和感染组(每组6只),感染组孕鼠在孕8 d腹腔注射0.2 ml弓形虫RH株速殖子悬液... 详细信息

目的探究孕鼠胎盘中性粒细胞和炎性因子白细胞介素17(IL-17)在孕期刚地弓形虫(简称弓形虫)感染致不良妊娠结局中的作用机制。方法将C57BL/6孕鼠随机分为未感染组和感染组(每组6只),感染组孕鼠在孕8 d腹腔注射0.2 ml弓形虫RH株速殖子悬液(约400个速殖子),未感染组孕鼠腹腔注射等量灭菌PBS。于孕14 d采用颈椎脱臼法处死孕鼠,解剖观察并记录妊娠结局。取胎盘组织,制备石蜡切片,经苏木苏-伊红(HE)染色后观察胎盘组织学改变和多形核粒细胞的浸润情况,并计算浸润指数。制备胎盘组织单细胞悬液,采用流式细胞术检测胎盘免疫细胞中中性粒细胞。采用免疫组织化学染色检测胎盘组织中弓形虫的分布、定位及IL-17的表达水平(灰度值),采用Spearman相关性分析方法分析IL-17的表达水平与中性粒细胞浸润指数的关系。两组间数据比较采用独立样本Student’s t检验。结果感染组孕鼠出现弓背、耸毛和行动迟缓等症状,胎鼠和胎盘出现明显出血及淤血点,胎鼠发育不良;未感染组孕鼠无异常表现,胎鼠和胎盘发育正常。感染组孕鼠的流产率为82.35%(42/51),高于未感染组的4.08%(2/49)。HE染色结果显示,感染组孕鼠胎盘组织细胞轮廓性增强,并伴有大量的多形核粒细胞浸润,浸润指数为14.500±0.965,高于未感染组的3.917±0.633(t=9.168,P<0.01)。流式细胞术结果显示,感染组孕鼠胎盘组织中中性粒细胞占胎盘细胞的绝对百分数为(13.700±1.790)%,高于未感染组孕鼠的(4.783±0.723)%(t=5.107,P<0.01)。免疫组织化学染色结果显示,感染组孕鼠胎盘组织中检测到大量弓形虫,并且主要集中分布于中性粒细胞内;感染组孕鼠胎盘组织中IL-17的灰度值为17.510±1.372,高于未感染组孕鼠的8.178±1.293(t=4.951,P<0.05)。相关性分析结果显示,孕鼠胎盘组织中IL-17的表达水平与中性粒细胞的浸润指数呈正相关(R2=0.652,P<0.01)。结论刚地弓形虫感染可导致孕鼠胎盘组织出现大量中性粒细胞浸润和高水平IL-17的表达,IL-17表达水平的升高可能与中性粒细胞在母胎界面的募集有关。

关键词：刚地弓形虫不良妊娠结局胎盘中性粒细胞炎症反应 IL-17

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