目的：对一疑似XD遗传的低血鳞抗维生素D佝偻病(X—linkedhypophosphatemic vitamin D resistant rickets)即X连锁低磷酸盐血症(X—linked hypophosphatemia，XLH)的相关基因进行突变检测和新突变的致病性鉴定，以揭示患女发病的分子遗...
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目的：对一疑似XD遗传的低血鳞抗维生素D佝偻病(X—linkedhypophosphatemic vitamin D resistant rickets)即X连锁低磷酸盐血症(X—linked hypophosphatemia，XLH)的相关基因进行突变检测和新突变的致病性鉴定，以揭示患女发病的分子遗传学机制，从而达到确诊的目的并为对症治疗和今后的孕早期产前基因诊断创造必要的前提条件。方法：应用微量DNA快速提取、PCR-Sequencing等方法对患女的X一连锁磷酸盐调节基因一一PHEX基因的所有外显子及外显子与内含子交界处序列进行突变分析;同时应用PCR-DHPLC快速筛检法对70例正常对照相应的外显子进行突变筛查，以排除多态性位点的可能性。结果：该患者PHEX基因第22外显子区域内发生一个新的杂合插入突变即c. 2197-2198 ins AACT，引起密码子发生移位，导致肤链提前在第733位遇上终止密码“TAA"，使肤链从正常的749个氨基酸缩短至732个氨基酸，从而严重影响了PHEX蛋白的结构和功能，导致疾病的发生。结论：应用PCR-DHPLC和PCR-DNA序列分析技术是检测XLH病PHEX基因突变的有效方法。所检测到的c.2197-2198 ins AACT杂合插入突变是国际首见的一种致病性新突变，它极可能是引起患女发病的根本内因。
人类WNK4(Human With No lysine[K]kinase 4,hWVK4)基因编码一种特殊类型的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,该基因的错义突变可导致一种遗传性高血压——Ⅱ型假性低醛固酮血症(Pseudohypoaldosteronism typeⅡ,PHAⅡ,OMIM,No.145260),其主要临...
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人类WNK4(Human With No lysine[K]kinase 4,hWVK4)基因编码一种特殊类型的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,该基因的错义突变可导致一种遗传性高血压——Ⅱ型假性低醛固酮血症(Pseudohypoaldosteronism typeⅡ,PHAⅡ,OMIM,No.145260),其主要临床表现为高血压和高血钾。研究表明WNK4激酶主要表达在肾脏,通过调节肾脏远曲小管和集合管上的多种离子转运体和离子通道参与机体水盐代谢和血压调节。目前关于hWK4基因的研究主要集中在功能方面,而hWNK4基因表达调控机制研究较少。生物信息学分析显示hWNK4基因近端启动子区未见典型的TATA盒,但富含GC序列和一些潜在的转录因子作用元件,如Sp1、AP-1和C/EBP等。为检验转录因子Sp1是否参与hWNK4基因表达调控,本研究选用人胚肾细胞系HEK293细胞为细胞模型,应用不同浓度的Sp1特异性抑制剂Mithramycin A处理细胞,24小时后收集细胞,提取RNA,紫外分光光度计检测标本RNA纯度和浓度后,利用试剂盒将mRNA反转录成cDNA,采用Real-time PCR技术检测处理前后HEK293细胞中WVK4基因mRNA表达水平变化情况。结果显示Mithramycin A负性调节HEK293细胞中WNK4基因mRNA表达,且随着Mithramycin A作用浓度增大,下调效应增强,具有浓度依赖性。该结果提示转录因子Sp1可能参与WNK4基因表达调控。
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