检索结果-内蒙古大学图书馆

中国临床康复 2006年第20期10卷 110-112页

作者：汪宗桂郑文岭马文丽梁念慈广东医学院生物化学教研室广东省湛江市524023 华南基因组研究中心广东省广州市510800 南方医科大学基因工程研究所广东省广州市510515

目的:构建ECHO克隆系统构建人生长激素的哺乳动物表达载体,以克服原核生物表达系统生产人生长激素存在的缺陷。方法:实验于2002-08在解放军广州军区广州总医院医学实验科进行。①先把人生长激素基因片段克隆到ECHO系统的供载体中,构建... 详细信息

目的:构建ECHO克隆系统构建人生长激素的哺乳动物表达载体,以克服原核生物表达系统生产人生长激素存在的缺陷。方法:实验于2002-08在解放军广州军区广州总医院医学实验科进行。①先把人生长激素基因片段克隆到ECHO系统的供载体中,构建供载体pUni/Lox-HGH。②让该供载体与具Lox位点的受载体在Cre重组酶的作用下融合,构建出人生长激素的哺乳动物表达载体pcDNA4.1/pUni-HGH,使人生长激素基因处于CMV启动子的调控下,EcoRI单酶切及BamHI/EcoRI双酶切鉴定重组质粒。结果:由琼脂糖凝胶电泳和序列测定证实,用ECHO克隆系统构建的融合质粒中,确实含有人生长激素带内含子的基因序列。结论:用ECHO克隆系统可以构建人生长激素的哺乳动物表达载体,且方便、快捷,为取代原核生物表达系统生产人生长激素,提供了依据。

关键词：人生长激素遗传载体电泳,琼脂凝胶

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我国人乳头瘤病毒6型新变种基因组克隆及L1晚期结构基因在大肠杆菌中表达

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中国科学（B辑） 1991年第6期 628-632页

作者：舒琍琍冯慧敏金奇侯云德中山医科大学基础医学院微生物与免疫学教研室广州510089 中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室北京100052

本文从一例中国妇女外阴尖锐湿疣组织标本中提取DNA,BamHI酶切,以pAT153为载体,成功地克隆了我国人乳头瘤病毒6型(HPV-6BV)基因组.经South-ern杂交,酶谱及部分DNA序列分析,发现该克隆的HPV6基因组有明显变异,可视为我国发现的第一个HPV... 详细信息

本文从一例中国妇女外阴尖锐湿疣组织标本中提取DNA,BamHI酶切,以pAT153为载体,成功地克隆了我国人乳头瘤病毒6型(HPV-6BV)基因组.经South-ern杂交,酶谱及部分DNA序列分析,发现该克隆的HPV6基因组有明显变异,可视为我国发现的第一个HPV6的新变种.本文进一步分离了HPV6BV的L1基因,以pUR288为载体,在大肠杆菌中表达了β-半乳糖苷酶/HPV6BVL1N融合蛋白.经免疫转印试验证明,它既能与β-半乳糖苷酶抗血清反应,又能与HPV抗体反应,具有融合前各自的抗体亲和活性.该蛋白可用作诊断试剂及流行病学研究.

关键词：人乳头瘤病毒克隆大肠杆菌

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骨髓基质细胞的造血支持作用等生物学特性的研究

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细胞与分子免疫学杂志 2001年第1期17卷 41-45页

作者：杨吉成盛伟华李丽娥童宁征王红卫郭瑃王晓东苏州医学院基因工程研究室苏州市人民路48号江苏苏州215007 苏州医学院人体解剖学教研室苏州市人民路48号江苏苏州215007 苏州医学院附属儿院骨科苏州市人民路48号江苏苏州215007

目的研究人骨髓基质细胞体外长期培养的生物学特性和造血支持功能。方法①采用静置贴壁细胞培养法，体外长期培养胎儿、儿童和成人的骨髓基质细胞。②采用免疫细胞化学染色法和流式细胞仪检测法，分析细胞的表型。③将不同发育阶段的骨... 详细信息

目的研究人骨髓基质细胞体外长期培养的生物学特性和造血支持功能。方法①采用静置贴壁细胞培养法，体外长期培养胎儿、儿童和成人的骨髓基质细胞。②采用免疫细胞化学染色法和流式细胞仪检测法，分析细胞的表型。③将不同发育阶段的骨髓基质细胞体外培养，并扩增脐血造血干细胞。结果①建立了成纤维肌样细胞系，可传至１０代，维持６个月，同时还培养出内皮细胞和巨噬细胞。②儿童骨髓基质肌样细胞的染色特征为：波形纤维蛋白（ｖｉｅｍｅｎｔｉｎ）呈阳性，第Ⅷ因子呈阴性；儿童骨髓基质细胞的表型为：ＣＤ３３－、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－和ＣＤＷ９０＋；成人为：ＣＤ３３－、ＣＤ３４－、ＣＤ３８＋和ＣＤＷ９０＋。③基质细胞能长期维持脐血中ＬＴＣ－ＩＣ的生存。若加入ＩＬ－６、ＩＬ－３和ＳＣＦ扩增体系，基质细胞对长期维持和扩增ＬＴＣ－ＩＣ的效果更为明显（Ｐ〈０．０１），较无基质细胞的对照组所形成的ＬＴＣ－ＩＣ产率高２－４倍。结论人骨髓基质细胞体外可长期培养，对脐血干细胞具有造血支持功能。

关键词：骨髓基质细胞造血支持功能生物学特性细胞培养

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爱泼斯坦-巴尔病毒潜伏期膜蛋白2AcDNA的克隆及序列分析

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南京医科大学学报（自然科学版） 2002年第1期22卷 4-6,9页

作者：彭光勇姚堃许琳徐江英谢芳艺南京医科大学微生物与免疫学教研室江苏南京210029 南京军医学院生物基因工程中心江苏南京210099

目的 :克隆爱泼斯坦巴尔病毒 (EBV)潜伏期膜蛋白 2A(LMP2A)基因 ,进一步研究其基因工程疫苗。方法 :用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)扩增出EBVB95 8株LMP2A全部编码蛋白的基因 ,并克隆至载体pGEM T中 ,通过α 插入失活、PCR及EcoRⅠ... 详细信息

目的 :克隆爱泼斯坦巴尔病毒 (EBV)潜伏期膜蛋白 2A(LMP2A)基因 ,进一步研究其基因工程疫苗。方法 :用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)扩增出EBVB95 8株LMP2A全部编码蛋白的基因 ,并克隆至载体pGEM T中 ,通过α 插入失活、PCR及EcoRⅠ、SmaⅠ限制性内切酶双酶切等鉴定重组质粒 ;采用Sanger双脱氧终止法测定cDNA片段的核苷酸序列。结果 :克隆出LMP2A第 1个外显子到第 8个外显子的全部编码蛋白的cDNA ,测序结果与EB病毒B95 8原型株LMP2AcDNA作同源比较 ,完全一致。结论 :本实验克隆了LMP2A基因的全部编码蛋白的cDNA全长片段。

关键词：爱泼斯坦-巴尔病毒潜伏期膜蛋白基因逆转当-聚合酶链反应克隆鉴定序列分析

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真核细胞RNA的提取和mRNA纯化方法探讨

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遵义医学院学报 1997年第1期20卷 35-37页

作者：王燕妮孙万邦金丽娟付红谢毅遵义医学院免疫学教研室上海复旦大学基因工程国家重点实验室

为采取简便、快速、经济的方法获得高质量的RNA和mRNA，本实验比较了氯化铯超速高心、胍盐／热酚法和“一步法”提取总RNA以及采用Oligo（dT）玻璃柱或离心柱分离纯化mRNA的方法.结果表明:“一步法”与任一种纯化mRNA的方法合用均能获... 详细信息

为采取简便、快速、经济的方法获得高质量的RNA和mRNA，本实验比较了氯化铯超速高心、胍盐／热酚法和“一步法”提取总RNA以及采用Oligo（dT）玻璃柱或离心柱分离纯化mRNA的方法.结果表明:“一步法”与任一种纯化mRNA的方法合用均能获得高纯度、未被降解的RNA和mRNA而可被用于多种实验研究。

关键词： RNA mRNA 真核细胞提取纯化

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苯丁酸钠对人脑胶质细胞瘤株SHG-44的抗肿瘤作用及机制研究

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实用肿瘤杂志 2004年第6期19卷 534-537页

作者：潘碧云许金泉陈亚红耿宝琴雍定国浙江大学医学院附属妇产科医院浙江杭州310006 富阳市中医院浙江富阳311400 杭州九源基因工程有限公司浙江杭州310018 浙江大学医学院药理教研室浙江杭州310006

目的　观察苯丁酸钠对人脑胶质细胞瘤株 SHG- 4 4细胞的体外生长抑制作用及细胞形态分化逆转 ,并观察其与常用抗癌药鬼臼噻吩甙 (VM- 2 6 )、顺铂 (DDP)、多柔比星 (阿霉素 )及卡莫司汀 (卡氮芥 ,BCNU)分别联用对 SHG- 4 4细胞生长的影... 详细信息

目的　观察苯丁酸钠对人脑胶质细胞瘤株 SHG- 4 4细胞的体外生长抑制作用及细胞形态分化逆转 ,并观察其与常用抗癌药鬼臼噻吩甙 (VM- 2 6 )、顺铂 (DDP)、多柔比星 (阿霉素 )及卡莫司汀 (卡氮芥 ,BCNU)分别联用对 SHG- 4 4细胞生长的影响和相互作用。方法　根据 MTT法来观察苯丁酸钠及该药与其它药物合用对 SHG- 4 4细胞生长的抑制 ;细胞形态变化直接在倒置显微镜下观察。结果　苯丁酸钠能抑制人脑胶质细胞瘤株 SHG- 4 4细胞的生长 ,其抑制作用呈浓度依赖性和时间依赖性。作用 72小时的 IC50 为 84 0 .4 μg/ m l。形态学观察显示 ,苯丁酸钠能使 SHG- 4 4细胞的突起明显增长 ,并重获细胞生长的接触抑制 ,促使细胞向成熟的胶质细胞分化 ,逆转其恶性表型。苯丁酸钠与 VM- 2 6联用为协同作用 (P<0 .0 5 ) ;其作用随 VM- 2 6浓度的增加而增强。与顺铂、阿霉素及卡氮芥联用无明显协同作用 (P>0 .0 5 )。结论　苯丁酸钠能抑制 SHG- 4 4细胞的增殖 ,同时促进细胞向较成熟的胶质细胞分化 ;苯丁酸钠与 VM- 2 6联合应用 ,对 SHG- 4 4细胞的肿瘤抑制呈协同作用。

关键词：丁酸类/药理学神经胶质瘤/病理学脑肿瘤/病理学抗肿瘤药多剂联用比色法

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卡地腐霉Pr1蛋白酶miniDNA文库的构建及基因片段的克隆

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贵阳医学院学报 2005年第2期30卷 95-98,107页

作者：杨平夏玉先苏晓庆贵阳医学院生物学教研室贵州贵阳550004 重庆大学基因工程中心重庆400030

目的: 在本实验室已克隆得到的灭蚊真菌卡地腐霉类枯草杆菌蛋白酶基因的部分序列的基础上,继续分离该基因的全基因组序列。方法:采用构建卡地腐霉mini基因组文库的方法,首先利用已知序列设计引物,克隆得到该蛋白酶基因的部分基因组序列... 详细信息

目的: 在本实验室已克隆得到的灭蚊真菌卡地腐霉类枯草杆菌蛋白酶基因的部分序列的基础上,继续分离该基因的全基因组序列。方法:采用构建卡地腐霉mini基因组文库的方法,首先利用已知序列设计引物,克隆得到该蛋白酶基因的部分基因组序列;然后采用限制性内切酶XhoⅠ消化卡地腐霉基因组DNA,同时用该内切酶消化质粒pBluescriptSK( -),经去磷酸化后,将基因组酶切产物克隆到载体上并转化到大肠杆菌JM109中,构建mini基因组文库。利用载体上的通用引物和根据已知序列设计的引物,进行嵌套式PCR。结果:获得一780bp的PCR产物,经克隆、测序和分析为卡地腐霉类枯草杆菌蛋白酶基因已知序列一端301bp未知序列。结论:这种方法操作简便,实验周期短,能够特异地扩增与已知位点相邻的基因组DNA。

关键词：卡地腐霉基因组,真菌聚合酶链反应枯草杆菌蛋白酶类

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巢式逆转录-聚合酶链反应扩增人骨形成蛋白2全长cDNA及其真核表达载体的构建

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中国组织工程研究与临床康复 2007年第14期11卷 2702-2704页

作者：俞莉敏党耕町杨吉成郑祖根北京大学第三医院骨科北京市100083 苏州大学基础医学院基因工程教研室江苏省苏州市215007 苏州大学附属第二医院骨科江苏省苏州市215004

目的:利用巢式逆转录-聚合酶链反应扩增的方法,从肌肉组织中扩增人骨形成蛋白2全长cDNA并构建真核表达载体系统。方法:实验于2003-10/2005-10在苏州大学基因工程教研室和北京大学第三医院骨科实验室完成。提取成人肌肉组织内的总RNA,设... 详细信息

目的:利用巢式逆转录-聚合酶链反应扩增的方法,从肌肉组织中扩增人骨形成蛋白2全长cDNA并构建真核表达载体系统。方法:实验于2003-10/2005-10在苏州大学基因工程教研室和北京大学第三医院骨科实验室完成。提取成人肌肉组织内的总RNA,设计内外两对引物以巢式逆转录-聚合酶链反应扩增方法分两次扩增出人骨形成蛋白2全长1188bp基因,经T-A克隆装入pUCM-T质粒载体内,测序验证后,将克隆质粒以Hind Ⅲ和Xba Ⅰ双酶切后与pcDNA3.0载体相连接,构建真核表达载体系统。结果:利用巢式逆转录-聚合酶链反应扩增方法能从成人肌肉组织内扩增出1188bp的人骨形成蛋白2全长cDNA基因,其测序结果显示与Genebank报道序列完全相符。将扩增序列双酶切后与pcDNA3.0载体相连接,经电泳验证,能构建人骨形成蛋白2全长基因的真核表达系统。结论:巢式逆转录-聚合酶链反应扩增方法能从成人肌肉组织内扩增出人骨形成蛋白2全长cDNA基因,并克隆构建真核表达载体系统,为下一步基因组织工程人工骨实验奠定基础。

关键词：人骨形态发生蛋白基因克隆巢式RT-PCR

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从家兔分离贾第虫并建立纯培养

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首都医学院学报 1995年第1期16卷 24-26页

作者：阎歌卢思奇王凤芸首都医学院寄生虫学教研室济宁市山东省寄研所基因工程室工作

浓集、纯化兔粪便中的贾第虫包囊，用生理盐水制成悬液，感染ＢＡＢＬ／Ｃ乳鼠。接种后第８ｄ，在无菌条件下从鼠小肠上段分离滋养体，接种于改良ＴＹＩ－Ｓ－３３培养基内，置３７℃培养。培养后第２０ｄ虫体在管壁形成密集的细胞单层... 详细信息

浓集、纯化兔粪便中的贾第虫包囊，用生理盐水制成悬液，感染ＢＡＢＬ／Ｃ乳鼠。接种后第８ｄ，在无菌条件下从鼠小肠上段分离滋养体，接种于改良ＴＹＩ－Ｓ－３３培养基内，置３７℃培养。培养后第２０ｄ虫体在管壁形成密集的细胞单层，传代２０余次，并经冷冻及复苏，虫体均生长良好。

关键词：贾第虫培养 TYI-S-33 培养基鞭毛虫

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人硫氧还蛋白还原酶cDNA的克隆及在大肠杆菌中的表达

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南京医科大学学报（自然科学版） 2003年第2期23卷 109-111页

作者：徐江英许琳戴荣华超卢是月彭光勇南京军医学院生物基因工程研究中心江苏南京210099 南京医科大学微生物与免疫学教研室江苏南京210029

目的:克隆人硫氧还蛋白还原酶(TR)基因并构建原核表达载体,获得TR蛋白。方法:采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从人胚脑组织中扩增出TR cDNA片段,克隆至pGEM-T载体并转化大肠杆菌DH5α,获得重组质粒pGEM-TR;经序列分析证实后,提取... 详细信息

目的:克隆人硫氧还蛋白还原酶(TR)基因并构建原核表达载体,获得TR蛋白。方法:采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从人胚脑组织中扩增出TR cDNA片段,克隆至pGEM-T载体并转化大肠杆菌DH5α,获得重组质粒pGEM-TR;经序列分析证实后,提取pGEM-TR重组体,由双酶切得到目的片段,并插入pET9c原核表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),获得重组质粒pET-rhTR。异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导pET-rhTR在BL21中表达,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)及免疫蛋白印迹(Western blot)分析重组蛋白。结果:克隆的TR cDNA与人胎盘组织TR cDNA同源性为99％;pET-rhTR在大肠杆菌中高效表达,目的蛋白占菌体总蛋白量的36％,其分子质量为55 ku。TR cDNA序列被GenBank收录,登录号为AF208018。结论:成功克隆了人脑组织来源的TR基因,该基因在大肠杆菌中得到高表达,为进一步研究其功能奠定基础。

关键词：硫氧还蛋白还原酶序列分析原核表达大肠杆菌克隆 cDNA

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