检索结果-内蒙古大学图书馆

南京医科大学学报（自然科学版） 2003年第2期23卷 109-111页

作者：徐江英许琳戴荣华超卢是月彭光勇南京军医学院生物基因工程研究中心江苏南京210099 南京医科大学微生物与免疫学教研室江苏南京210029

目的:克隆人硫氧还蛋白还原酶(TR)基因并构建原核表达载体,获得TR蛋白。方法:采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从人胚脑组织中扩增出TR cDNA片段,克隆至pGEM-T载体并转化大肠杆菌DH5α,获得重组质粒pGEM-TR;经序列分析证实后,提取... 详细信息

目的:克隆人硫氧还蛋白还原酶(TR)基因并构建原核表达载体,获得TR蛋白。方法:采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从人胚脑组织中扩增出TR cDNA片段,克隆至pGEM-T载体并转化大肠杆菌DH5α,获得重组质粒pGEM-TR;经序列分析证实后,提取pGEM-TR重组体,由双酶切得到目的片段,并插入pET9c原核表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),获得重组质粒pET-rhTR。异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导pET-rhTR在BL21中表达,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)及免疫蛋白印迹(Western blot)分析重组蛋白。结果:克隆的TR cDNA与人胎盘组织TR cDNA同源性为99％;pET-rhTR在大肠杆菌中高效表达,目的蛋白占菌体总蛋白量的36％,其分子质量为55 ku。TR cDNA序列被GenBank收录,登录号为AF208018。结论:成功克隆了人脑组织来源的TR基因,该基因在大肠杆菌中得到高表达,为进一步研究其功能奠定基础。

关键词：硫氧还蛋白还原酶序列分析原核表达大肠杆菌克隆 cDNA

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人胎盘贴壁细胞定向诱导神经样细胞

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基础医学与临床 2009年第12期29卷 1258-1262页

作者：王跃嗣孟凡刚王延伟李建远滨州医学院生物技术教研室山东烟台264003 山东大学齐鲁医院神经外科山东济南250012 山东干细胞工程技术研究中心山东烟台264003

目的探讨胎盘组织培养贴壁细胞的分离培养以及定向诱导神经细胞分化的生物潜能,从而研究胎盘贴壁细胞与神经发育的相互关系。方法用胰酶消化分离培养人胎盘组织中的贴壁细胞,并应用抗体Nestin、MAP2、MBP、CD133、CD34等进行免疫细胞化... 详细信息

目的探讨胎盘组织培养贴壁细胞的分离培养以及定向诱导神经细胞分化的生物潜能,从而研究胎盘贴壁细胞与神经发育的相互关系。方法用胰酶消化分离培养人胎盘组织中的贴壁细胞,并应用抗体Nestin、MAP2、MBP、CD133、CD34等进行免疫细胞化学染色,用2-巯基乙醇和反式维甲酸进行体外向神经细胞诱导分化。结果分离培养出胎盘组织贴壁细胞,是一异质性细胞群体。培养的贴壁细胞表达CD133,不表达CD34,同时表达Nestin和MAP2。经定向神经诱导后的人胎盘贴壁细胞出现神经样细胞的形态,强表达Nestin和MAP2,弱表达MBP和GFAP。结论人胎盘贴壁细胞经体外定向诱导可分化为神经样细胞,其具有间充质干细胞(MSC)性质,胎盘组织是MSC的一个重要来源。

关键词：胎盘贴壁细胞神经细胞间充质干细胞分化

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前列腺癌癌基因表达和DNA倍体分析

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福建医科大学学报 1994年第3期30卷 214-219页

作者：陈碧芬谢建武黄勤万榕福建医学院病理解剖学教研室福建省分子医学基因工程研究中心分子医学研究室

８８例前列腺癌组织应用免疫组化、图像分析及流式细胞仪（ＦＣＭ）方法，检测癌基因Ｐ^（５３），ｃ－ｅｒｂＢ－２及增殖细胞核抗原ＰＣＮＡ的表达及ＤＮＡ含量。Ｐ^（５３）异常表达率为２８％（２５／８８），ｃ－ｅｒｂＢ－２过度... 详细信息

８８例前列腺癌组织应用免疫组化、图像分析及流式细胞仪（ＦＣＭ）方法，检测癌基因Ｐ^（５３），ｃ－ｅｒｂＢ－２及增殖细胞核抗原ＰＣＮＡ的表达及ＤＮＡ含量。Ｐ^（５３）异常表达率为２８％（２５／８８），ｃ－ｅｒｂＢ－２过度表达率为６８％（６０／８８）．ＰＣＮＡ（＞５０％）增殖指数值为７４％（６５／８８）．与对照组前列腺良性增生及正常前列腺组织中呈阴性反应对比有明显差异（Ｐ＜０．０５），与癌组织分化程度、临床分期及ＤＮＡ含量无明显相关（Ｐ＞０．０５）。７７例癌旁前列腺基底细胞异型增生上皮中有９例（１２％）亦显示Ｐ^（５３），ｃ－ｅｒｂＢ－２及ＰＣＮＡ的异常表达，提示该异型增生的基底细胞具有恶性表型。表明前列腺癌中Ｐ^（５３），ｃ－ｅｒｂＢ－２及ＰＣＮＡ的异常表达与癌发生有一定关系，以ｃ－ｅｒｂＢ－２过度表达尤为重要，３种抗体的联合应用可作为前列腺癌的肿瘤标志物，对前列腺癌发病机理研究及预测早癌发生有一定价值，但作为患者预后判断的指标尚显不足。

关键词：前列腺肿瘤癌基因免疫组化 DNA倍体流式细胞仪

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EBV-LMP1 cDNA的克隆测序与原核表达质粒构建

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热带医学杂志 2002年第4期2卷 337-340页

作者：林勇平吴淑华杨英汤郡马桂璋广州医学院微生物与免疫教研室广州医学院医学检验系510182 病毒基因工程国家重点实验室

　目的　克隆EBV LMP1cDNA ,构建EBV LMP1基因的原核表达重组质粒。方法　通过RT PCR技术从B95 8细胞中扩增EBV LMP1cDNA ,克隆至pGEM Teasy载体上并测序 ;利用引物上的BamHⅠ与HindⅢ酶切位点将LMP1基因插入载体pET 32a,转化JM10 9菌... 详细信息

　目的　克隆EBV LMP1cDNA ,构建EBV LMP1基因的原核表达重组质粒。方法　通过RT PCR技术从B95 8细胞中扩增EBV LMP1cDNA ,克隆至pGEM Teasy载体上并测序 ;利用引物上的BamHⅠ与HindⅢ酶切位点将LMP1基因插入载体pET 32a,转化JM10 9菌。提取质粒 ,限制性内切酶消化 ,琼脂糖凝胶电泳鉴定。结果　扩增的LMP1cDNA长度为 115 8bp ,测序结果与已知序列吻合 ,重组原核表达质粒经酶切鉴定表明获得正确重组子。结论　成功克隆了EBV LMP1cDNA ,并构建了pET 32a LMP1原核表达载体。

关键词： LMP1 cDNA 克隆测序原核表达 EB病毒

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关于范德瓦耳斯气体的若干讨论

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聊城大学学报（自然科学版） 2003年第3期16卷 25-26页

作者：阮树仁李向民聊城大学物理科学与信息工程学院山东聊城252059 滨州医学院物理教研室山东滨州256600

讨论了范德瓦耳斯气体的内能和熵,给出了相应数学表达式;推导了范德瓦耳斯气体在准静态的绝热过程中的过程方程.

关键词：范德瓦耳斯气体内能熵准静态绝热过程热力学

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EBV-LMP1基因杆状病毒表达载体的构建及其在昆虫细胞中的表达

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热带医学杂志 2003年第2期3卷 142-145,F002页

作者：林勇平吴淑华杨英汤郡马桂璋广州医学院微生物与免疫教研室病毒基因工程国家重点实验室广州100052

目的　构建EBV LMP1基因的杆状病毒重组供体质粒 ,包装重组LMP1的杆状病毒 ,感染昆虫细胞进行表达。方法　先将已克隆的LMP1cDNA与线性化的pFASTBACHTb进行连接 ,使pFASTBACHTb LMP1与DH1 0BAC感受菌进行转座重组 ,利用抗性及蓝白斑筛... 详细信息

目的　构建EBV LMP1基因的杆状病毒重组供体质粒 ,包装重组LMP1的杆状病毒 ,感染昆虫细胞进行表达。方法　先将已克隆的LMP1cDNA与线性化的pFASTBACHTb进行连接 ,使pFASTBACHTb LMP1与DH1 0BAC感受菌进行转座重组 ,利用抗性及蓝白斑筛选重组Bacmid/LMP1克隆 ,提取Bacmid/LMP1转染昆虫细胞Sf9包装杆状病毒 ,利用病毒感染Sf9细胞进行蛋白表达 ,通过免疫荧光、SDS PAGE和Western blot检测表达情况。结果　获得了重组LMP1的杆状病毒 ,细胞能表达出与LMP1单抗结合的蛋白 ,分子量为 6 3kDa左右 ,细胞可直接分泌LMP1蛋白至上清。结论　LMP1能在昆虫细胞中获得良好表达。

关键词： LMP1 杆状病毒表达系统昆虫细胞

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不同表达载体对人白细胞介素-18原核表达效率的影响

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遵义医学院学报 2003年第1期26卷 4-6页

作者：吉莉莉杨吉成孙万邦盛伟华李丽蛾遵义医学院免疫学教研室贵州遵义563003 苏州大学基因工程研究室江苏苏州215007

目的探讨PBV220及PJW2载体构建的rhIL-18重组质粒的IL-18表达效率。方法将构建的PBV220/rhIL-18重组质粒中的rhIL-18酶切、克隆到表达载体PJW2中,经PCR产物电泳及测序鉴定,热诱导后在大肠杆菌中表达。结果 PJW2/rhIL-18表达的重组人IL... 详细信息

目的探讨PBV220及PJW2载体构建的rhIL-18重组质粒的IL-18表达效率。方法将构建的PBV220/rhIL-18重组质粒中的rhIL-18酶切、克隆到表达载体PJW2中,经PCR产物电泳及测序鉴定,热诱导后在大肠杆菌中表达。结果 PJW2/rhIL-18表达的重组人IL-18占菌体总蛋白质的20％,而PBV220/IL-18重组质粒表达的重组人IL-18占菌体总蛋白质的16％。两者表达的蛋白质分子量约为18KD,与预期分子量相符。结论 PJW2载体rhIL-18表达效率高于PBV220,为下一步的纯化及提高蛋白产量打下了基础。

关键词：白细胞介素18 表达载体大肠杆菌

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转基因植物生产药用蛋白和食用疫苗

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南京军医学院学报 2000年第3期22卷 179-181页

作者：吴家林许琳南京军医学院生物化学教研室 210099 南京军医学院生物基因工程研究中心南京210099

转基因植物正在被作为一种生物反应器用来生产药用蛋白和食用疫苗。植物表达系统与微生物和动物系统相比具有一定的潜在优势 ,如生产成本低 ,易于栽培和管理 ,易于形成产业化规模等。目前这方面的研究已取得一定进展。当然也存在着表达... 详细信息

转基因植物正在被作为一种生物反应器用来生产药用蛋白和食用疫苗。植物表达系统与微生物和动物系统相比具有一定的潜在优势 ,如生产成本低 ,易于栽培和管理 ,易于形成产业化规模等。目前这方面的研究已取得一定进展。当然也存在着表达量低等方面的问题。

关键词：植物,转基因药用蛋白食用疫苗

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清咽滴丸抗常见呼吸道病毒的实验研究

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中国药学杂志 2010年第7期45卷 519-523页

作者：刘剑刘丽华孟庆军李晓眠苏文琴李晶哲天津医科大学微生物学教研室天津300070 协和干细胞基因工程有限公司天津300384 天津中新药业集团股份有限公司第六中药厂天津300401 海南医学院海口571101

目的研究清咽滴丸对呼吸道常见病毒的抑制作用。方法应用MTT方法,检测清咽滴丸对单纯疱疹病毒(HSV-1)和腺病毒(ADV11)的直接抑制作用、侵入细胞的抑制作用。应用鸡胚培养法,检测清咽滴丸体外灭活流感病毒的作用。建立ICR小鼠感染流感病... 详细信息

目的研究清咽滴丸对呼吸道常见病毒的抑制作用。方法应用MTT方法,检测清咽滴丸对单纯疱疹病毒(HSV-1)和腺病毒(ADV11)的直接抑制作用、侵入细胞的抑制作用。应用鸡胚培养法,检测清咽滴丸体外灭活流感病毒的作用。建立ICR小鼠感染流感病毒模型,观察并记录小鼠的死亡情况,检测肺指数、肺脏病理改变及T、B淋巴细胞增殖情况和脾指数。结果①清咽滴丸对HSV-1和ADV11有直接抑制作用并且可抑制其侵入细胞。②鸡胚实验结果显示,清咽滴丸具有明显体外灭活病毒的作用。③动物实验结果显示,清咽滴丸不能降低动物的死亡率,但却可明显延长其平均存活时间;对肺脏有较好的抗炎作用;有刺激免疫细胞增殖,调节机体免疫功能的作用。结论清咽滴丸有明确的体外灭活病毒和一定的抗流感病毒鼠肺适应株(FM1)和调节机体免疫力的作用。在抗HSV-1和ADV11实验中,表现出确切的直接抑制作用和阻断病毒侵入细胞的作用。

关键词：清咽滴丸单纯疱疹病毒1型腺病毒11型流感病毒鼠肺适应株抗病毒作用

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蛋白质芯片与ELISA在人IgG定量分析中的比较

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2007年第3期28卷 312-316页

作者：向征马文丽费嘉郑文岭周烨南方医科大学基因工程研究所广东广州510515 暨南大学医学院生物化学与分子生物学教研室广东广州510632 华南基因组研究中心广东广州510800

建立定量检测人血清IgG(immunoglobulin,IgG)蛋白质芯片,并与酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测的结果进行比较.将纯化的羊抗人IgG 0.5 mg/mL 30%甘油/PBS,点样在经硝酸纤维素修饰的片基上,以人血清白蛋... 详细信息

建立定量检测人血清IgG(immunoglobulin,IgG)蛋白质芯片,并与酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测的结果进行比较.将纯化的羊抗人IgG 0.5 mg/mL 30%甘油/PBS,点样在经硝酸纤维素修饰的片基上,以人血清白蛋白为阴性对照,用1%BSA封闭,制备定量检测人血清IgG的蛋白质芯片;同时用ELISA检测人血清*** 10.0软件分析蛋白质芯片和ELISA的试验结果,采用单因素方差分析两组间相关性.结果显示蛋白质芯片和ELISA校准曲线的R2值分别是0.996和0.994.两种方法检测的10例人血清IgG含量,其检测限均在1.56μg/100μL.用单因素方差分析结果显示f=0.188,P=0.670>0.05,表明两组间差异无显著性意义,具有很好的一致性.

关键词：蛋白质芯片抗体芯片免疫球蛋白G 酶联免疫吸附测定

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