检索结果-内蒙古大学图书馆

山东大学学报（医学版） 2024年第6期62卷 38-47页

作者：王文琴高贤龙巩永凤冯科滨州医学院基础医学院生理教研室山东烟台264003

目的探讨棕色脂肪组织(brown adipose tissue,BAT)中Y盒蛋白3(Y-box binding protein 3,YBX3)水平对小鼠产热和能量消耗的影响作用机制。方法将小鼠置于4℃环境作为冷刺激方法。用慢病毒侵染法构建过表达YBX3或者抑制YBX3表达的人血管... 详细信息

目的探讨棕色脂肪组织(brown adipose tissue,BAT)中Y盒蛋白3(Y-box binding protein 3,YBX3)水平对小鼠产热和能量消耗的影响作用机制。方法将小鼠置于4℃环境作为冷刺激方法。用慢病毒侵染法构建过表达YBX3或者抑制YBX3表达的人血管基质组分细胞系。测量细胞的耗氧率用于评估细胞的线粒体功能。向小鼠BAT注射YBX3的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)构建抑制小鼠BAT中YBX3表达的模型。检测小鼠的O_(2)消耗速率、CO_(2)释放速率和能量消耗速率用于评估小鼠能量代谢情况。采用qRT-PCR、Western blotting、免疫荧光染色法检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator 1α,PGC-1α)、解偶联蛋白1(uncoupling protein 1,UCP1)和YBX3基因的表达。采用苏木精-伊红法染色检测BAT中脂肪细胞脂滴大小。采用RNA结合蛋白免疫沉淀提取与YBX3特异性结合的mRNA。采用二代测序方法鉴定mRNA。采用双荧光素酶报告基因系统检测YBX3与目的序列结合的情况。结果在寒冷刺激下野生型小鼠BAT中YBX3的表达显著增加(P<0.05)。过表达YBX3的人血管基质组分细胞系诱导为成熟棕色脂肪细胞后可以促进产热基因PGC-1α和UCP1的表达(P<0.05)。抑制YBX3表达的人血管基质组分细胞系诱导为成熟棕色脂肪细胞后可以抑制PGC-1α和UCP1的表达(P<0.05)、抑制线粒体氧化磷酸化(P<0.05)。与对照组相比,小鼠注射si-Ybx3之后能量消耗显著降低(P<0.05),在寒冷环境难以维持体温(P<0.05),产热基因表达被显著抑制(P<0.01),BAT中脂肪细胞脂滴大小显著增加(P<0.05)。与在25℃相比,4℃环境刺激下BAT中YBX3在细胞核中的表达显著增加(P<0.05)。YBX3能够特异性地与PGC-1αmRNA 3′非翻译区特定位点相结合(P<0.05)。YBX3能够特异性地与PGC-1α和UCP1启动子区域相结合(P<0.05)。结论BAT中YBX3能够通过调控PGC-1α和UCP1的表达影响产热和能量代谢。

关键词： Y-盒蛋白3 产热能量消耗棕色脂肪组织解偶联蛋白1

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抗大别班达病毒人源单克隆抗体Fab片段的噬菌体展示文库构建

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中国病原生物学杂志 2024年第11期19卷 1251-1254,1259页

作者：徐家馨王静静王琳徐睿杰吴玉龙李波清乔媛媛滨州医学院基础医学院病原生物学教研室山东烟台264003

目的构建具有潜在中和活性的人源抗大别班达病毒(SFTSV)抗体Fab片段的噬菌体展示文库。方法从具有交叉中和活性的SFTS恢复期患者血液样本中分离外周血单个核细胞(PBMC)并提取总RNA,逆转录PCR得到cDNA。以cDNA为模板进行第一轮PCR扩增,... 详细信息

目的构建具有潜在中和活性的人源抗大别班达病毒(SFTSV)抗体Fab片段的噬菌体展示文库。方法从具有交叉中和活性的SFTS恢复期患者血液样本中分离外周血单个核细胞(PBMC)并提取总RNA,逆转录PCR得到cDNA。以cDNA为模板进行第一轮PCR扩增,分别获得抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(Vκ和Vλ)序列。以pComb3XTT、pComb3Xλ质粒为模板,分别获得抗体重链恒定区(CH1)和轻链恒定区(Cκ、Cλ)序列。第二轮通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)扩增VH和CH1得到Fd重链,同样扩增Vκ和Cκ、Vλ和Cλ得到完整的κ和λ抗体轻链。第三轮以上述扩增产物为模板再次进行SOE-PCR,得到完整的抗体Fab基因片段。将Fab基因片段插入到pComb3XSS噬菌粒中,构建噬菌体展示抗体文库。结果通过三轮PCR扩增出抗体Fab片段的序列,成功构建库容量为1.875×10^(9)的噬菌体展示抗体文库。结论利用具有交叉中和活性的SFTS恢复期患者血源建立了人源抗SFTSV Fab片段的噬菌体展示抗体文库,为下一步筛选特异性单克隆中和抗体建立了可靠的前期基础。

关键词： SFTSV 噬菌体展示抗体文库库容量人源单克隆抗体

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信号肽类型对新布尼亚病毒SFTSV Gn蛋白靶向表达特征影响的研究

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中国病原生物学杂志 2023年第2期18卷 132-135,140页

作者：张凡张娟徐家馨吴玉龙李波清乔媛媛滨州医学院基础医学院病原生物学教研室山东烟台264003

目的研究不同类型信号肽对新布尼亚病毒(SFTSV)包膜蛋白Gn表达的影响。方法以SFTSV(SD4毒株)M段为模板PCR扩增Gn基因,双酶切后分别连接至A16H和pHL表达载体,连接产物转染293T细胞,收集细胞和上清进行Western blot、免疫荧光以及质谱检... 详细信息

目的研究不同类型信号肽对新布尼亚病毒(SFTSV)包膜蛋白Gn表达的影响。方法以SFTSV(SD4毒株)M段为模板PCR扩增Gn基因,双酶切后分别连接至A16H和pHL表达载体,连接产物转染293T细胞,收集细胞和上清进行Western blot、免疫荧光以及质谱检测,分析Gn重组蛋白的表达情况;ELISA检测Gn重组蛋白的结合活性。结果成功构建缺失载体信号肽的pA16H-Gn质粒和包含信号肽的sp-pA16H-Gn质粒,以及携带另一种载体信号肽的pHL-Fc-Gn质粒。缺失载体信号肽的pA16H-Gn质粒在细胞内外均不表达Gn重组蛋白(rGn-Fc),包含A16H载体信号肽的sp-pA16H-Gn质粒在细胞内表达Gn重组蛋白(rGn-Fc),但不能分泌表达,包含pHL载体信号肽的pHL-Fc-Gn质粒可将Gn重组蛋白(rGn-Fc)分泌表达到胞外,且具有结合活性。结论载体本身携带的信号肽会影响SFTSV Gn重组蛋白的表达,不同信号肽影响重组蛋白的表达定位。该研究为SFTSV Gn重组蛋白的开发奠定了基础,同时也为SFTSV重组疫苗的研究提供了新思路。

关键词：发热伴血小板减少综合征病毒信号肽分泌重组蛋白

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GPRC5A调控的ABCB1表达对肺腺癌增殖的影响

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Chinese Medical Sciences Journal 2024年第1期39卷 9-18,I0002页

作者：李鋆崔雯雯杨中法刘文豪边茂旺邓炯王彤山东第二医科大学基础医学院生理教研室潍坊市261021 滨州医学院附属医院医学研究中心滨州市256600

目的ATP结合盒B亚家族成员1(ATP binding cassette subfamily B member 1,ABCB1)的异常表达在多种癌症的发生发展中发挥关键作用。然而,G蛋白偶联受体C家族5组A型(G protein coupled receptor family C group5 type A,GPRC5A)调控的ABCB1表达对肺腺癌增殖的影响仍不清楚。本研究探讨了GPRC5A调控的ABCB1表达对肺腺癌增殖的影响。方法我们采用RT-PCR、Western-blot或免疫组化实验,分析ABCB1在肺腺癌细胞系、人肺腺癌组织以及GPRC5A基因敲除小鼠和野生型小鼠的气管上皮细胞和肺组织中的表达。采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)分析GPRC5A基因敲除小鼠气管上皮细胞对化疗药物的敏感性。采用皮下肿瘤形成实验探讨下调ABCB1表达是否可抑制体内肺腺癌增殖。采用免疫荧光和免疫沉淀实验研究GPRC5A和ABCB1之间潜在的调控关系。结果ABCB1在肺腺癌细胞系和人类肺腺癌组织中表达上调。GPRC5A基因敲除小鼠的气管上皮细胞及肺组织的ABCB1表达高于野生型小鼠。与GPRC5A野生型小鼠的气管上皮细胞相比,GPRC5A基因敲除小鼠的气管上皮细胞对塔立奇达和多柔比星更敏感。注射移植细胞28天后,接受ABCB1基因敲除细胞移植的GPRC5A-/-C57BL/6小鼠的肺肿瘤的体积和重量均明显低于野生型细胞移植小鼠(P=0.0043,P=0.0060)。此外,免疫荧光和免疫沉淀实验表明,GPRC5A通过直接结合方式调控ABCB1的表达。结论GPRC5A通过抑制ABCB1表达降低肺腺癌增殖。GPRC5A调节ABCB1表达的途径有待研究。

关键词： ATP结合盒B亚家族成员1 G蛋白偶联受体家族C5组成员A 肺腺癌小鼠

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木犀草素对白血病K562/ADR细胞多药耐药的逆转作用及机制研究

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天津医药 2023年第12期51卷 1321-1325页

作者：周欣宇李京敏张婷贾秀红滨州医学院附属医院儿科 256603 滨州医学院基础医学院人体解剖学教研室

目的探究木犀草素(Lut)对慢性髓系白血病K562/ADR细胞多药耐药性的逆转作用及其机制。方法K562和K562/ADR细胞经不同浓度阿霉素(ADR)处理24 h后,采用CCK-8实验检测K562/ADR细胞耐药倍数。Lut单独或联合ADR作用K562/ADR细胞24 h后,采用C... 详细信息

目的探究木犀草素(Lut)对慢性髓系白血病K562/ADR细胞多药耐药性的逆转作用及其机制。方法K562和K562/ADR细胞经不同浓度阿霉素(ADR)处理24 h后,采用CCK-8实验检测K562/ADR细胞耐药倍数。Lut单独或联合ADR作用K562/ADR细胞24 h后,采用CCK-8实验检测Lut的细胞毒性及对ADR的增敏作用。取对数生长期K562/ADR细胞分为0μmol/L Lut组、2μmol/L Lut组、4μmol/L Lut组,采用流式细胞术检测细胞内ADR蓄积量的变化;RT-PCR法和Western blot法分别检测核因子E2相关因子2(Nrf2)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)、P-糖蛋白(P-gp)、谷胱甘肽-S-转移酶pi(GST-pi)mRNA和蛋白的表达;谷胱甘肽(GSH)试剂盒检测细胞内GSH的含量。结果与K562细胞相比,K562/ADR细胞株对ADR具有明显的耐药性,耐药倍数为53.69倍。与0μmol/L Lut相比,不同浓度Lut作用于K562/ADR细胞后,细胞生长均受到不同程度的抑制(P<0.05),其中2、4μmol/L Lut对K562/ADR细胞的增殖抑制率<10%,为无毒性的Lut浓度。与0μmol/L Lut组相比,2、4μmol/L Lut组可明显增强ADR对K562/ADR的细胞增殖抑制率,增加细胞内ADR蓄积量,提高逆转耐药倍数,降低细胞内GSH含量,下调细胞中MRP1、P-gp、GST-pi、Nrf2 mRNA及蛋白的表达(P<0.05);且4μmol/L Lut作用效果较2μmol/L Lut更显著。结论Lut可抑制K562/ADR细胞增殖,逆转其对ADR的耐药性,其机制可能与Lut下调Nrf2、MRP1、P-gp、GST-pi表达,进而增加细胞内ADR蓄积量有关。

关键词：白血病髓系慢性 BCR-ABL阳性木犀草素抗药性多药核因子E2相关因子2 多药耐药相关蛋白1 P-糖蛋白谷胱甘肽-S-转移酶pi

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汉黄芩苷对大鼠脊髓损伤的修复效果

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解剖学报 2022年第2期53卷 173-182页

作者：王笑刘卿谷成旭李希凯张璐萍滨州医学院基础医学院人体解剖学教研室山东烟台264003

目的通过观察不同剂量汉黄芩苷对大鼠脊髓损伤后介导的炎症反应的干预情况,探讨汉黄芩苷对脊髓损伤的影响。方法建立大鼠脊髓横断损伤模型(n=95),随机分成5组:正常组(N)、生理盐水组(NS)、汉黄芩苷低剂量组(WG12.5)、汉黄芩苷中剂量组... 详细信息

目的通过观察不同剂量汉黄芩苷对大鼠脊髓损伤后介导的炎症反应的干预情况,探讨汉黄芩苷对脊髓损伤的影响。方法建立大鼠脊髓横断损伤模型(n=95),随机分成5组:正常组(N)、生理盐水组(NS)、汉黄芩苷低剂量组(WG12.5)、汉黄芩苷中剂量组(WG25)及汉黄芩苷高剂量组(WG50)。采用ELISA检测炎性因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白细胞介素1(IL-1)的表达水平;静态脚印分析脚趾扩张(TS)和中间脚趾扩张(ITS)的变化;HE染色观察脊髓损伤大鼠组织学情况;尼氏染色观察脊髓损伤大鼠神经元数目变化;透射电子显微镜观察轴突形态及再生现象;劳克坚牢蓝(LFB)髓鞘染色观察脱髓鞘现象;免疫组织化学观察胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和神经生长相关蛋白43(GAP43)的表达变化。结果 NS组与N组相比,TNF-α及IL-1表达明显升高(P<0.01),TS和ITS明显减少(P<0.01),脊髓形态显著异常,神经元严重丢失,髓鞘形态异常,髓鞘严重脱色(P<0.01),GFAP表达明显增多,GAP43表达稍有增加;WG组与NS组相比,TNF-α和IL-1表达明显降低(P<0.01),TS和ITS增加(P<0.01),脊髓形态有所恢复,神经元丢失减少,髓鞘形态趋于正常且有新生轴突出现,髓鞘脱色减少(P<0.01),GFAP表达明显减少,GAP43表达明显增多,且呈现剂量依赖性。结论汉黄芩苷能改善脊髓损伤局部微环境,减少胶质瘢痕形成,促进轴突再生,减少局部神经元丢失、空洞形成等,进而促进脊髓损伤的修复。

关键词：汉黄芩苷脊髓损伤炎性反应胶质纤维酸性蛋白神经生长相关蛋白43 透射电子显微术免疫组织化学大鼠

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脂肪间充质干细胞外泌体可减轻过氧化氢诱导PC12细胞的凋亡

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中国组织工程研究 2024年第19期28卷 2988-2995页

作者：谷成旭张乃丽孟永春刘卿郭绮萱付丽张璐萍黄飞滨州医学院基础医学院人体解剖学教研室山东省烟台市264003 滨州医学院烟台附属医院山东省烟台市264100 山东大学齐鲁医学院基础医学院人体解剖学教研室山东省济南市250021 康复大学健康与生命科学学院山东省青岛市266071

背景:间充质干细胞外泌体在组织损伤修复中可能发挥关键作用,而miRNA是外泌体发挥治疗作用的重要成分,其中miR-29b-3p具有减少细胞凋亡、促进轴突再生和血管生成的作用。目的:研究脂肪间充质干细胞外泌体通过miR-29b-3p对过氧化氢诱导P... 详细信息

背景:间充质干细胞外泌体在组织损伤修复中可能发挥关键作用,而miRNA是外泌体发挥治疗作用的重要成分,其中miR-29b-3p具有减少细胞凋亡、促进轴突再生和血管生成的作用。目的:研究脂肪间充质干细胞外泌体通过miR-29b-3p对过氧化氢诱导PC12细胞损伤模型的保护作用,并探讨相关机制。方法:①首先采用胶原酶消化法提取大鼠脂肪间充质干细胞,通过miR-29b-3p模拟物及抑制物转染脂肪间充质干细胞,采用超速离心法从培养上清中提取外泌体并进行鉴定,从而构建高表达和敲低miR-29b-3p的脂肪间充质干细胞外泌体;②通过过氧化氢诱导PC12细胞模拟神经细胞损伤模型,研究脂肪间充质干细胞外泌体通过miR-29b-3p对神经元细胞损伤模型发挥保护作用的相关机制。结果与结论:①脂肪间充质干细胞外泌体具有典型的杯状形态,直径分布在50-140 nm范围内,表达外泌体表面特异性标志膜蛋白Alix、CD63及TSG101,并可被PC12细胞成功摄取;②脂肪间充质干细胞外泌体预处理可减轻过氧化氢诱导PC12细胞的凋亡,并且这种保护作用随着外泌体中miR-29b-3p表达的增加而增强,随着外泌体中miR-29b-3p表达的降低而减弱,其发挥作用的机制与脂肪间充质干细胞外泌体通过miR-29b-3p促进抗凋亡蛋白Bcl-2的表达及抑制凋亡蛋白Bax的表达相关。

关键词：脂肪间充质干细胞外泌体 miR-29b-3p PC12细胞凋亡 miRNA

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济南市某三级医院急性发热呼吸道症状就诊患者呼吸道病原体检测结果分析

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中国感染控制杂志 2025年第5期24卷 631-637页

作者：兰庆站吕心郝莹莹卢冰如李波清山东第一医科大学附属省立医院临床医学检验部山东济南250014 滨州医学院基础医学院病原生物学教研室山东烟台264003

目的了解济南市某院急性发热呼吸道症状呼吸道病原体感染情况,探究其流行病学特征,为该地区急性呼吸道感染的科学诊疗提供参考依据。方法选取2018年1月—2024年6月于山东第一医科大学附属省立医院进行呼吸道病原体IgM抗体检测的患者... 详细信息

目的了解济南市某院急性发热呼吸道症状呼吸道病原体感染情况,探究其流行病学特征,为该地区急性呼吸道感染的科学诊疗提供参考依据。方法选取2018年1月—2024年6月于山东第一医科大学附属省立医院进行呼吸道病原体IgM抗体检测的患者为研究对象。采用磁微粒化学发光法对9种常见的呼吸道病原体进行IgM抗体检测,分析不同性别、年龄段、季节、年份各组患者病原体检出情况。结果共纳入19 463例就诊者。其中有6 933例患者至少检测出一种病原体,占35.62%,检出率居前三位的病原体分别为肺炎支原体(MP)、乙型流感病毒(FluB)、甲型流感病毒(FluA),检出率分别为17.14%、13.62%、4.58%;单一检出率为28.57%,多重检出率为7.05%;女性检出率较男性高(38.02%VS 33.78%),差异有统计学意义(P<0.001)。随着年龄的增长呼吸道病原体总检出率先降低后增高;呼吸道病原体检出率在冬季最高(41.59%),秋季最低(31.23%);随着年份的增加总检出率逐年降低。结论该地区呼吸道病原体感染以MP、FluB为主,未成年人是高发人群,冬季是高发季节,近年来检出率逐年降低。应加强高发人群在高发季节的防护诊疗力度,避免引起大规模的地区性流行。

关键词：急性呼吸道感染呼吸道病原体检出率 IgM抗体

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线粒体靶向抗氧化剂SKQ1对糖尿病小鼠肾损伤的治疗作用与机制

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滨州医学院学报 2024年第1期47卷 1-7页

作者：高治巩永凤王明霞滨州医学院基础医学院生理学教研室山东烟台264003

目的本文旨在研究线粒体靶向抗氧化剂SKQ1对糖尿病(DM)小鼠肾损伤的影响,以阐明SKQ1对肾脏的保护作用及机制。方法选取野生型雄性C57BL/6小鼠30只,行右侧肾切除术后注射诱导DM模型,分成对照组、DM组、SKQ1组各10只。用药组每天饮用SKQ1... 详细信息

目的本文旨在研究线粒体靶向抗氧化剂SKQ1对糖尿病(DM)小鼠肾损伤的影响,以阐明SKQ1对肾脏的保护作用及机制。方法选取野生型雄性C57BL/6小鼠30只,行右侧肾切除术后注射诱导DM模型,分成对照组、DM组、SKQ1组各10只。用药组每天饮用SKQ1水溶液,对照组和DM组正常饮水。连续饲养28周后,收集尿液测尿微量白蛋白的变化;通过HE和PAS染色法观察小鼠肾脏病理结构和肾脏纤维化的变化;通过q-PCR和免疫荧光法检测小鼠NPHS2、WT1、Podxl、desmin、α-SMA表达情况。结果与对照组比较,DM组小鼠尿微量白蛋白明显增加;与DM组小鼠比较,SKQ1组小鼠尿微量白蛋白降低。HE和PAS染色结果显示,与对照组比较,DM组小鼠肾小球系膜细胞增多,细胞外基质增生,有明显的胶原纤维沉积;与DM组比较,SKQ1组小鼠肾小球系膜细胞数量减少,细胞外基质增生减轻,胶原纤维沉积明显减轻。q-PCR和免疫荧光结果显示,与对照组比较,DM组小鼠足细胞相关分子NPHS2、WT1、Podxl明显降低,desmin、α-SMA表达量增加;与DM组比较,SKQ1组小鼠足细胞相关分子NPHS2、WT1、Podxl表达明显增加,但desmin、α-SMA表达量下降。结论SKQ1可上调NPHS2、WT1、Podxl的表达及下调desmin、α-SMA的表达来减轻足细胞损伤,改善小鼠尿微量白蛋白排泄和肾小球纤维化,进而延缓糖尿病肾病(DN)的进展。

关键词： SKQ1 糖尿病肾病足细胞

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机能学实验室规范化管理的建设与实践

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实验室科学 2025年第1期28卷 131-136页

作者：王桂华李金莲刘红霞蒋淑君滨州医学院烟台校区基础医学院机能学实验室山东烟台264003 滨州医学院烟台校区基础医学院生理学教研室山东烟台264003

机能学实验室是培养学生实践能力和创新思维的重要实验场所,实验室规范化管理是保障实验教学与科研创新、实验教学改革顺利开展的重要部分。为适应不断进行的实验教学改革和发展的需要,以及教育部对高校实验室安全工作的重视和学校各级... 详细信息

机能学实验室是培养学生实践能力和创新思维的重要实验场所,实验室规范化管理是保障实验教学与科研创新、实验教学改革顺利开展的重要部分。为适应不断进行的实验教学改革和发展的需要,以及教育部对高校实验室安全工作的重视和学校各级职能部门对实验室的管理工作有计划的推进,机能学实验室管理也逐步规范和成熟,总结了滨州医学院机能学实验室近几年管理改革和实践情况。

关键词：机能学实验室规范化管理

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