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共沉默miR-221-3p/222-3p表达抑制骨髓间充质干细胞增殖及促成软骨分化

中国组织工程研究 2015年第50期19卷 8056-8061页

作者：闫继红杨姝孙海梅曹丹丹张秀英季凤清郭多吴波孙婷怡周德山首都医科大学基础医学院人体解剖与组织胚胎学系组织胚胎学教研室北京市100069

背景:基于干细胞的组织工程技术作为治疗骨关节损伤修复的有效手段,具有广泛的应用前景。研究表明miRNA在调控干细胞向软骨分化过程中具有重要的作用。目的:探讨共感染慢病毒介导的反义miR-221-3p/222-3p(microRNA-221-3p,microRNA-222-... 详细信息

背景:基于干细胞的组织工程技术作为治疗骨关节损伤修复的有效手段,具有广泛的应用前景。研究表明miRNA在调控干细胞向软骨分化过程中具有重要的作用。目的:探讨共感染慢病毒介导的反义miR-221-3p/222-3p(microRNA-221-3p,microRNA-222-3p)对人骨髓间充质干细胞成软骨分化的作用,为临床软骨损伤修复提供新的策略。方法:利用miRNA基因芯片技术筛选转化生长因子β3诱导人骨髓间充质干细胞成软骨分化过程中不同阶段表达差异的miRNA,并利用荧光实时定量PCR(RT-q PCR)验证;构建慢病毒人反义miR-221-3p/222-3p载体(Lv-miR-221-3p-inhibition,Lv-miR-222-3p-inhibition)并共转染人骨髓间充质干细胞,空载体组(Lv-GFP)以及未转染组作为对照。利用CCK-8法检测沉默miR-221-3p/222-3p 6 d后细胞的增殖情况;通过番红O染色法、免疫组织化学方法以及RT-PCR验证各组软骨诱导21 d后软骨分化相关标志物的表达。结果与结论:构建的Lv-miRNA-221-3p/222-3p inhibition共转染人骨髓间充质干细胞,成功沉默了细胞中的miR-221-3p/222-3p表达水平;miRNA基因芯片与RT-q PCR验证结果显示miR-221-3p/222-3p在软骨分化后期表达明显降低;转染组与未转染组以及空载体组相比:1细胞增殖明显受到抑制。2番红O染色以及免疫组织化学显示软骨分化特征标志物硫酸软骨素以及Ⅱ型胶原表达增强。3RT-qPCR也证实硫酸软骨素以及Ⅱ型胶原的mRNA表达也明显上调。结果显示沉默人骨髓间充质干细胞miRNA-221-3p/222-3p,抑制了细胞增殖并促进了成软骨分化。

关键词：骨髓间质干细胞细胞分化微RNAs 组织工程干细胞骨髓干细胞成软骨分化 miR-221-3p miR-222-3p 慢病毒表达载体骨髓间充质干细胞沉默miRNA 国家自然科学基金

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重组蛋白GDF-9对卵巢黄素化颗粒细胞增殖和凋亡的影响

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宁夏医科大学学报 2016年第5期38卷 484-489,474页

作者：马会明李昕王蒙蒙王永峰田洪成王飞苗王燕蓉裴秀英宁夏医科大学生育力保持教育部重点实验室银川750004 宁夏医科大学基础医学院人体解剖与组织胚胎学系组织胚胎学教研室银川750004 宁夏医科大学总医院生殖医学中心银川750004

目的探讨重组生长分化因子-9(GDF-9)对人卵巢黄素化颗粒细胞周期及细胞增殖、凋亡的影响。方法收集因输卵管和(或)男性因素而接受体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗患者的卵泡液进行密度梯度离心,收集黄素化颗粒细胞,接种于M199培养基进行... 详细信息

目的探讨重组生长分化因子-9(GDF-9)对人卵巢黄素化颗粒细胞周期及细胞增殖、凋亡的影响。方法收集因输卵管和(或)男性因素而接受体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗患者的卵泡液进行密度梯度离心,收集黄素化颗粒细胞,接种于M199培养基进行原代培养,实验组在M199培养基中添加100ng·m L-1GDF-9因子,对照组未添加GDF-9因子;培养48h后,用CCK-8试剂盒测定细胞增殖情况;用流式细胞仪测定细胞周期和细胞凋亡;Western blot法检测裂解的半胱氨酸蛋白水解酶3(cleaved-caspase-3)、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)及其磷酸化表达水平。结果原代培养的人黄素化颗粒细胞在培养第2~4天时处于分裂增殖高峰期,贴壁培养24h再添加GDF-9因子作用48h后,细胞周期检测结果显示,GDF-9使颗粒细胞周期表现为GO/Gl期的比例明显减少,S+G2/M期的比例明显增高(P<0.05)。细胞凋亡检测结果显示,颗粒细胞凋亡率显著减少(P<0.05)。Western blot检测发现,添加GDF-9使cleaved-caspase-3蛋白的相对表达量降低,磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白的相对表达量显著增高(P<0.05)。结论重组GDF-9因子可促进颗粒细胞增殖,抑制颗粒细胞凋亡,其机制可能与活化ERK和抑制cleaved-caspase-3途径、调节细胞周期有关。

关键词：生长分化因子-9 半胱氨酸蛋白水解酶3 细胞外信号调节激酶1/2 颗粒细胞卵巢

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诺考达唑和阿非科林对人胚胎干细胞周期的影响

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生物技术 2015年第6期25卷 591-596页

作者：魏建峰王昱博徐州医学院基础医学院组织胚胎学教研室江苏徐州221004 吉林大学临床医学院吉林长春130021

[目的]探究诺考达唑和阿非科林联合应用对人胚胎干细胞周期同步化到G1和S期的作用并观察药物对细胞生长和生物功能的影响。[方法]采用诺考达唑和阿非科林先后作用于胚胎干细胞,流式细胞仪测定细胞周期,显微镜下观察药物对细胞生长状态... 详细信息

[目的]探究诺考达唑和阿非科林联合应用对人胚胎干细胞周期同步化到G1和S期的作用并观察药物对细胞生长和生物功能的影响。[方法]采用诺考达唑和阿非科林先后作用于胚胎干细胞,流式细胞仪测定细胞周期,显微镜下观察药物对细胞生长状态的影响,荧光染色技术观察胚层标志物α-SMA和β-tubulin表达。[结果]加入诺考达唑和阿非科林后,G1期为66.35%,S期为33.52%,多数细胞被同步化在G1期;诺考达唑作用16 h,G1期为18.45%,S期为79.10%,多数细胞从周期抑制中恢复;能够形成典型的拟胚体;荧光染色显示α-SMA和β-tubulin均有表达。[结论]诺考达唑和阿非科林联合作用能够使胚胎干细胞66.35%同步化在G1期,诺考达唑作用16 h,79.10%的细胞同步化在S期。中胚层标志物α-平滑肌肌动蛋白和外胚层标志物β微管蛋白在蛋白水平均有明显表达。去除药物后,细胞未发生显著性损伤。

关键词：胚胎干细胞诺考达唑阿非科林细胞周期

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小鼠生精细胞的体外双室无血清培养

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河北医科大学学报 2016年第1期37卷 1-4页

作者：龚淼张雷赵昱尹青郭浅妤任广伟河北医科大学基础医学院组织胚胎学教研室河北石家庄050017 河北医科大学第一医院肾内科河北石家庄050031

目的探讨无血清条件下应用插入式细胞培养皿(Transwell小室)对小鼠睾丸间质细胞-支持细胞-生精细胞的双室培养技术。方法取60日龄C57BL/6雄性小鼠睾丸间质细胞和15日龄雄性小鼠睾丸支持细胞与生精细胞混合细胞团双室共培养,不添加血清... 详细信息

目的探讨无血清条件下应用插入式细胞培养皿(Transwell小室)对小鼠睾丸间质细胞-支持细胞-生精细胞的双室培养技术。方法取60日龄C57BL/6雄性小鼠睾丸间质细胞和15日龄雄性小鼠睾丸支持细胞与生精细胞混合细胞团双室共培养,不添加血清。每日在倒置显微镜下观察生精细胞的形态和生长情况,苏木精染色观察生精细胞形态,染色体倍性分析检测细胞分化情况。结果在培养1周后,可见圆形精子细胞出现,2周后可见长形精子细胞,3周后可见较短鞭毛,生精细胞可存活8周;培养1周时,流式细胞术可检测出单倍体细胞,单倍体细胞百分比随培养时间延长而增加。结论应用双室无血清培养体系体外培养小鼠生精细胞可获得精子且生精细胞存活时间较长。

关键词：精细胞细胞培养技术小鼠

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脑缺血性损伤的分子机制和信号通路研究进展

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中国临床解剖学杂志 2015年第6期33卷 728-731页

作者：张蔺珊吴春云昆明医科大学基础医学院人体解剖与组织胚胎学教研室云南昆明650500

脑缺血是威胁人类健康的主要疾病之一，具有高发病率；高致残率和高死亡率等特点。脑缺血或缺血性脑中风是指脑内血液供应障碍导致的大脑某区域的缺血、缺氧。脑的血流量为750～1000 ml/min，耗氧量约占人体总耗氧量的20%，所以脑组织... 详细信息

脑缺血是威胁人类健康的主要疾病之一，具有高发病率；高致残率和高死亡率等特点。脑缺血或缺血性脑中风是指脑内血液供应障碍导致的大脑某区域的缺血、缺氧。脑的血流量为750～1000 ml/min，耗氧量约占人体总耗氧量的20%，所以脑组织对缺血缺氧非常敏感。众所周知，脑缺血会引发一系列的有害反应，从而导致缺血脑组织细胞内稳态的破坏和结构的损伤，最终导致缺血后急性坏死、程序性坏死、细胞凋亡和自噬等，还包括氨基酸兴奋性毒、细胞内钙离子超载、氧化、氮化应激的形成、炎症损伤、血脑屏障损伤、线粒体能量障碍以及细胞凋亡等一系列的病理生理学过程。近年来，脑缺血损伤机制的研究已经到达分子水平和基因水平，已成为脑缺血损伤的研究焦点和热点，取得了较多的进展。近几年的研究发现脑缺血损伤过程中有许多大分子物质参与，如与脑缺血相关的Bcl-2蛋白家族；Caspase蛋白家族和TNFR蛋白家族等，并且相关信号通路的激活与抑制对脑缺血损伤的病理过程有着密切的联系。由此可见，脑缺血损伤的相关分子及信号通路可能成为脑缺血治疗的新靶向。本文将从脑缺血损伤的相关分子和信号通路这两个方面来探讨脑缺血损伤的病理生理学有关机制，具有一定的代表性和先进性，希望能帮助我们更好地认识脑缺血损伤的相关机制，为脑缺血的临床治疗提供有力的理论依据。

关键词：脑缺血性损伤信号通路 Bcl-2蛋白家族分子机制脑缺血损伤脑组织细胞病理生理学血液供应障碍

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TRPC3参与糖氧剥夺致培养的少突胶质细胞凋亡

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中国生物工程杂志 2015年第4期35卷 23-29页

作者：孟赞徐丹李真李静李刚刘永刚刘兆雨吴宏唐勇彭彦重庆医科大学基础医学院组织胚胎学教研室干细胞与组织工程研究室重庆400016

目的:研究瞬时受体电位通道蛋白3(transient receptor potential channel 3,TRPC3)是否参与糖氧剥夺(oxygen glucose deprivation,OGD)少突胶质细胞的凋亡。方法:以原代培养的新生SD大鼠少突胶质细胞为对照组,以OGD2h的少突胶质细胞为... 详细信息

目的:研究瞬时受体电位通道蛋白3(transient receptor potential channel 3,TRPC3)是否参与糖氧剥夺(oxygen glucose deprivation,OGD)少突胶质细胞的凋亡。方法:以原代培养的新生SD大鼠少突胶质细胞为对照组,以OGD2h的少突胶质细胞为模型组,将模型组+Pyr3阻断设为处理组。采用蛋白质免疫印迹法检测TRPC3蛋白的表达水平,MTT试剂盒比色法检测各组细胞存活率,Annexin V-FITC试剂盒染色后经流式细胞仪检测细胞凋亡,fluo-3染色后经流式细胞仪和激光共聚焦显微镜测定胞内游离钙的变化。结果:少突胶质细胞A2B5和MBP特异性标记阳性,细胞纯度可达到95%以上;少突胶质细胞OGD2h成功建立OGD模型;OGD组TRPC3蛋白表达增加;OGD组细胞活性为(54.34±6.55)%,凋亡率为(24.24±0.86)%,与对照组有显著差异(P<0.05),Pyr处理组细胞存活率为(72.26±5.41)%,凋亡率为(14.82±0.28)%,与OGD组有显著差异(P<0.05);OGD组胞内游离钙浓度显著升高,而Pyr3阻断以后可以部分抑制其升高。结论:TRPC3表达增加介导胞内游离钙离子水平的升高可能是OGD少突胶质细胞凋亡的重要原因之一。

关键词：少突胶质细胞 OGD TRPC3 凋亡钙离子

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高危型HPV检测在新疆宫颈癌筛查中的应用价值

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新疆医学 2016年第9期46卷 1097-1101页

作者：马春华张丽王琳昆多孜朱开春玛依努尔.尼牙孜新疆医科大学乌鲁木齐830054 新疆维吾尔自治区人民医院妇科乌鲁木齐830001 新疆医科大学基础医学院组织胚胎学教研室乌鲁木齐830054

目的评价高危型HPV基因型检测（Cobas HPV）在新疆宫颈癌筛查中的应用价值。方法对2014年09月~2015年8月在新疆自治区人民医院住院及门诊就诊行HC2、TCT检测、并有病理诊断结果的564位女性的宫颈细胞标本进行高危型HPV基因型检测。结果 ... 详细信息

目的评价高危型HPV基因型检测（Cobas HPV）在新疆宫颈癌筛查中的应用价值。方法对2014年09月~2015年8月在新疆自治区人民医院住院及门诊就诊行HC2、TCT检测、并有病理诊断结果的564位女性的宫颈细胞标本进行高危型HPV基因型检测。结果 HC2阳性率为83.86%,Cobas HPV阳性率为64.19%,TCT阳性率为61.52%;HC2诊断的灵敏度为94.4%（118/125）,特异度为19.1%（84/439）;Cobas HPV诊断的灵敏度为88.0%（110/125）,特异度为42.6%（187/439）,TCT诊断的灵敏度为54.4%（68/125）,特异度为36.4%（160/439）。不同液基细胞学分级HR-HPV感染率不同,差异具有统计学意义（P〈0.05）,Cobas HPV与HC2总符合率为78.50%（Kappa=0.469）。结论 Cobas HPV在诊断CIN2＋病变时优于HC2、TCT检测,Cobas HPV检测对ASCUS诊断分流优于HC2,Cobas HPV检测在新疆宫颈癌筛查中具有较高的临床应用价值。

关键词：人乳头状瘤病毒宫颈癌高危型HPV基因型检测

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非医学专业基础医学概论课程教学改革探讨

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中国组织化学与细胞化学杂志 2015年第3A期23卷 288-290页

作者：张皓云王孝文陈燕春王凤斌潍坊医学院基础医学概论教研室潍坊医学院人体解剖学教研室潍坊医学院组织胚胎学教研室潍坊医学院生理学教研室山东261053

《基础医学概论》课程是为医学院校中非医学专业的学生开设,目的是普及非医学专业学生的医学基础知识,为他们以后从事与医疗有关的工作奠定基础。本文分析了我校目前《基础医学概论》教学存在的问题,提出了以"器官、系统"为... 详细信息

《基础医学概论》课程是为医学院校中非医学专业的学生开设,目的是普及非医学专业学生的医学基础知识,为他们以后从事与医疗有关的工作奠定基础。本文分析了我校目前《基础医学概论》教学存在的问题,提出了以"器官、系统"为中心的《基础医学概论》教学模式,强调形态与功能的联系;打破了学科之间的界线,强化了各学科间的有机联系,将各单一的课程式教学转变为综合性、形式多样的教学,有利于提高教学效果,对于医学院校的非医学专业学生来讲,是一种行之有效的教学改革。

关键词：医学院校非医学专业基础医学概论教学改革

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富氢盐水对吗啡依赖小鼠自然戒断后焦虑样行为的影响

富氢盐水对吗啡依赖小鼠自然戒断后焦虑样行为的影响

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第十四届全国药物依赖性学术会议暨国际精神疾病研讨会

作者：文迪赵鹏沈千朝龚淼郭红艳王健惠蓉吉马春玲丛斌河北医科大学基础医学院法医学系河北省法医学重点实验室河北省法医分子鉴定协同创新中心河北医科大学基础医学院河北医科大学基础医学院组织胚胎学教研室

目的:观察富氢盐水对吗啡依赖小鼠自然戒断后焦虑样行为的影响。方法:采用剂量递增法腹腔注射吗啡3天(25,25,50,50,50,75,75,75,100 mg/kg)建立小鼠慢性吗啡依赖模型,并进行自然戒断,期间给予2.0 mmol/L富氢盐水(0.2 mL/只,3次/d)进行干... 详细信息

目的:观察富氢盐水对吗啡依赖小鼠自然戒断后焦虑样行为的影响。方法:采用剂量递增法腹腔注射吗啡3天(25,25,50,50,50,75,75,75,100 mg/kg)建立小鼠慢性吗啡依赖模型,并进行自然戒断,期间给予2.0 mmol/L富氢盐水(0.2 mL/只,3次/d)进行干预,通过高架十字迷宫、明暗箱及自发活动测试观察富氢盐水对吗啡戒断小鼠焦虑样行为的影响。结果:给予纳洛酮进行急性催促戒断,可诱导明显的小鼠跳跃及体重下降症状,说明小鼠吗啡依赖模型建立成功。吗啡自然戒断后d 3时,小鼠出现明显的焦虑样行为,高架十字迷宫开臂进入次数百分比、开臂停留时间百分比明显减少(P<0.001),在明暗箱中暗箱停留时间百分比明显增加(P<0.001);自然戒断期间给予富氢盐水干预可显著降低小鼠戒断后焦虑样行为,高架十字迷宫开臂进入次数百分比(P<0.01)、开臂停留时间百分比(P<0.001)较对照组明显增加,明暗箱中暗箱停留时间百分比明显减少(P<0.001);并且富氢盐水干预对小鼠自发活动无明显影响(P>0.05)。结论:富氢盐水可以显著降低吗啡戒断过程中的焦虑样行为。

关键词：吗啡依赖吗啡戒断焦虑样行为富氢盐水

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食管鳞状细胞癌组织中Gstp和HnRNP A2/B1的表达及其临床意义

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世界华人消化杂志 2015年第1期23卷 104-109页

作者：张艳蒲红伟谌宏鸣朱丽娟李晓梅陈晓新疆医科大学基础医学院病理学教研室新疆医科大学厚博学院新疆医科大学基础医学院组织胚胎学教研室

目的:研究食管鳞状细胞癌组织中Gstp和HnRNPA2/B1的表达及其临床意义.方法:应用免疫组织化学SP(immunohistochemical streptavidin-peroxidase)法检测68例食管鳞状细胞癌组织和48例癌旁切端正常食管组织,观察Gstp和HnRNPA2/B1的表达,并... 详细信息

目的:研究食管鳞状细胞癌组织中Gstp和HnRNPA2/B1的表达及其临床意义.方法:应用免疫组织化学SP(immunohistochemical streptavidin-peroxidase)法检测68例食管鳞状细胞癌组织和48例癌旁切端正常食管组织,观察Gstp和HnRNPA2/B1的表达,并应用统计学方法分析其表达与临床病理学指标的意义.结果:(1)食管鳞状细胞癌组织中Gstp和HnRNPA2/Bl的阳性表达率分别为:60.3%(41/68)和54.4%(37/68);正常食管组织中阳性表达率分别为:27.1%(13/48)和29.1%(14/48),差异均有统计学意义(P<0.05);(2)食管鳞状细胞癌组织中Gstp在不同性别、年龄、民族、肿瘤大小及不同浸润深度组之间的表达差异无统计学意义(P>0.05);在不同分化程度、有无淋巴结转移及不同临床分期组之间的表达有差异统计学意义(P<0.05);(3)食管鳞状细胞癌组织中HnRNPA2/B1在不同性别、年龄、民族、肿瘤大小、不同浸润深度及不同临床分期组之间的表达差异无统计学意义(P>0.05);在不同分化程度、有无淋巴结转移组之间的表达差异有统计学意义(P<0.05).结论:Gstp和HnRNPA2/B1在食管鳞状细胞癌的发生和发展中可能起到一定作用;Gstp可能对食管鳞状细胞癌恶性程度判断有一定的指导意义;HnRNPA2/B1可能与食管鳞状细胞癌的发生和发展密切相关.

关键词：食管鳞状细胞癌 Gstp HnRNPA2/B1

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