检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物制品学杂志 2007年第2期20卷 87-90页

作者：袁红艳韩艳非朱明光杨巍常雅萍吉林大学基础医学院免疫学教研室长春130021

目的构建人源性阳离子抗菌肽hCAP-18的真核表达载体pcDNA4/Myc-His-hCAP-18,转染真核细胞,并检测其表达。方法以正常人外周血中性粒细胞的总RNA为模板,用RT-PCR技术钓取hCAP-18编码序列的全长cDNA,并克隆至pcDNA4/Myc-His真核表达载体上... 详细信息

目的构建人源性阳离子抗菌肽hCAP-18的真核表达载体pcDNA4/Myc-His-hCAP-18,转染真核细胞,并检测其表达。方法以正常人外周血中性粒细胞的总RNA为模板,用RT-PCR技术钓取hCAP-18编码序列的全长cDNA,并克隆至pcDNA4/Myc-His真核表达载体上,转染真核细胞株HeLa。RT-PCR及Western blot方法检测目的基因的表达。结果所构建的真核表达载体pcDNA4/Myc-His-hCAP-18,经酶切鉴定所释放片段大小与预期相符,基因序列与GenBank上登录的序列一致,目的基因在转染细胞中获得高水平表达。结论已成功构建真核表达载体pcDNA4/Myc-His-hCAP-18,并在转染细胞中高效表达。

关键词：抗菌肽基因转染真核表达

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病毒与人类基因组同源性初探

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白求恩医科大学学报 1997年第3期23卷 242-243页

作者：常雅萍马晶张猛于永利基础医学院免疫学教研室

探讨病毒与人类基因组同源性问题。选用ＥＢ病毒（ＥＢＶ），肠道病毒（ＥＶｓ）、单纯疱疹病毒－１型（ＨＳＶ－１），丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）特异性引物，以６份健康成人外周血ＤＮＡ为模板，分别进行聚合酶链式反应（ＰＣＲ）。初步... 详细信息

探讨病毒与人类基因组同源性问题。选用ＥＢ病毒（ＥＢＶ），肠道病毒（ＥＶｓ）、单纯疱疹病毒－１型（ＨＳＶ－１），丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）特异性引物，以６份健康成人外周血ＤＮＡ为模板，分别进行聚合酶链式反应（ＰＣＲ）。初步结果表明：有５份ＤＮＡ样品可通过ＥＢＶ、ＨＣＶ特异性引物扩增。ＥＢＶ引物扩增后的片段大小在１５４～２３４ｂｐ之间；ＨＣＶ引物扩增后的片段大小约２００ｂｐ和１２０ｂｐ。提示病毒某些基因可能存在人类基因组中或两者具有很高的同源性。

关键词：病毒基因人类基因组同源性

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登革病毒感染的人脐静脉内皮细胞与人CD4＋ T细胞相互作用对黏附分子和抑炎细胞因子表达的影响

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中华微生物学和免疫学杂志 2017年第6期37卷 449-456页

作者：王克左丽张妮袁静孔维莹毛佳旋陈俊豪贵州医科大学基础医学院免疫学教研室贵阳550000

目的探讨Ⅱ型登革病毒（DENV-2）感染的人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）与CD4＋T细胞的共培养对HUVECs表达细胞间黏附分子（ICAM-1）、血管细胞黏附分子（VCAM-1） mRNA和 CD4＋T细胞表达IL-10、T... 详细信息

目的探讨Ⅱ型登革病毒（DENV-2）感染的人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）与CD4＋T细胞的共培养对HUVECs表达细胞间黏附分子（ICAM-1）、血管细胞黏附分子（VCAM-1） mRNA和 CD4＋T细胞表达IL-10、TGF-β1 mRNA产生的影响,以进一步了解DENV感染的免疫学机制.方法 S1P1选择性激动剂CYM-5442处理HUVECs 24 h,用103半数组织培养感染剂量（TCID50）的DENV-2感染HUVECs后与人CD4＋T细胞共培养.于4、8、12、24、48及72 h,分别收集细胞样本,用real-time PCR检测DENV-2非结构蛋白1（NS1）、鞘氨醇激酶1（SPHK1）、ICAM-1、VCAM-1、IL-10、TGF-β1 mRNA表达变化.结果 HUVECs被DENV-2感染后,病毒NS1 mRNA的表达呈一定时效性,在24 h达到高峰.在DENV-2感染的不同实验组中,CYM-5442处理和未处理组,DENV-2 NS1 mRNA的表达均无明显差异.HUVECs被CYM-5442处理和DENV-2感染后,SPHK1 mRNA表达明显上升,差异有统计学意义（P〈0.05）;在DENV-2感染的HUVECs与CD4＋T细胞共培养的情况下,HUVECs ICAM-1和VCAM-1 mRNA高表达,相对HUVECs仅被DENV-2感染组和未处理组差异有统计学意义（P〈0.01）,CD4＋T细胞TGF-β1 mRNA表达无明显差异,IL-10 mRNA表达上调,差异有统计学意义（P〈0.05）.结论实验证明DENV-2能在HUVECs内复制增殖,CD4＋T细胞可抑制DENV-2增殖;CD4＋T细胞对DENV-2感染的HUVECs产生黏附分子VCAM-1和ICAM-1有明显的促进作用,CD4＋T细胞可促使HUVECs活化,增强炎症反应,这可能与DENV-2感染诱发血管通透性升高有关.DENV-2感染的HUVECs对CD4＋T细胞IL-10 mRNA表达有一定上调作用,对TGF-β1的表达没有明显的影响.

关键词：人脐静脉内皮细胞 CD4+T细胞 Ⅱ型登革病毒细胞因子免疫调节 DENV-2

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人清道夫受体SR-AⅠ过表达对293T细胞摄脂和黏附功能的影响

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中国病理生理杂志 2008年第10期24卷 1937-1942页

作者：杨红戴亚蕾徐婷田菲同济大学基础医学院免疫学教研室上海200092

目的:构建重组真核表达质粒pEGFP-C1-SR-AⅠ在293T细胞上获得高表达,并对A类Ⅰ型清道夫受体(SR-AⅠ)相应的功能进行鉴定。方法:依据人A类Ⅰ型清道夫受体基因MSR1的cDNA设计引物,用PCR等分子克隆技术构建重组真核表达载体pEGFP-C1-SR-AⅠ... 详细信息

目的:构建重组真核表达质粒pEGFP-C1-SR-AⅠ在293T细胞上获得高表达,并对A类Ⅰ型清道夫受体(SR-AⅠ)相应的功能进行鉴定。方法:依据人A类Ⅰ型清道夫受体基因MSR1的cDNA设计引物,用PCR等分子克隆技术构建重组真核表达载体pEGFP-C1-SR-AⅠ,测序证实后,用脂质体法转染293T细胞。用RT-PCR和Western blotting检测SR-AⅠ受体的表达,脂质油红O化学染色法检测实验组细胞的脂质摄取量的变化,通过细胞黏附性实验检测其黏附性的改变。结果:转染后实验组SR-AⅠmRNA表达及蛋白合成明显高于对照组和空载体组,同时发现泡沫细胞转化率由对照组和空载体组的10%显著增加到实验组的20%,且细胞黏附性也提高2倍以上。结论:成功构建了重组真核表达质粒,并在293T细胞获得了高表达,提高了293T细胞的摄脂能力和黏附性,为进一步研究此受体功能的改变对动脉粥样硬化病理发生过程的影响奠定基础。

关键词：受体,清道夫脂蛋白类,LDL 动脉硬化泡沫细胞

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强力天麻杜仲胶囊活性成分的提取及其对巨噬细胞的抑制作用

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吉林大学学报（医学版） 2009年第1期35卷 55-58页

作者：赵小霞台桂香马吉春周静方芳宋献美柳忠辉吉林大学基础医学院免疫学教研室吉林长春130021

目的:提取强力天麻杜仲胶囊(QLTM)的活性成分,检测其药物活性及其对巨噬细胞的调节作用。方法:随机将小鼠分为对照组(生理盐水组)、QLTM胶囊组(阳性药物组)及QLTM活性成分高、中、低剂量提取物组,连续灌胃14 d,通过热板致痛法观察小鼠... 详细信息

目的:提取强力天麻杜仲胶囊(QLTM)的活性成分,检测其药物活性及其对巨噬细胞的调节作用。方法:随机将小鼠分为对照组(生理盐水组)、QLTM胶囊组(阳性药物组)及QLTM活性成分高、中、低剂量提取物组,连续灌胃14 d,通过热板致痛法观察小鼠首次舔后足时间和1 min内的舔后足次数,通过醋酸致痛法观察小鼠首次扭体时间和15 min内的扭体次数,通过腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验检测巨噬细胞活性。结果:在热板致痛实验中,高、中剂量提取物组小鼠首次舔后足时间延长,1 min内的舔后足次数减少(P<0.05或P<0.01);在醋酸致痛实验中,高、中剂量提取物组小鼠首次扭体时间延长,15 min内的扭体次数减少(P<0.05);高、中剂量提取物组及QLTM胶囊组小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞百分率均降低,但中剂量组低于对照组(P<0.05)。结论:QLTM活性成分具有镇痛和抑制巨噬细胞活性作用。

关键词：强力天麻杜仲胶囊活性成分镇痛巨噬细胞

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超滤技术去除重组MUC1-MBP融合蛋白中内毒素的效果评价

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吉林大学学报（医学版） 2014年第3期40卷 539-542页

作者：王娟谢飞陈潭琇孙霞霞李琼书台桂香吉林大学基础医学院免疫学教研室吉林长春130021

目的:评价超滤技术去除纯化后重组MUC1-MBP融合蛋白(MUC1-MBP)溶液中内毒素的效果,阐明超滤技术对去除内毒素的作用。方法:选取表达MUC1-MBP大肠杆菌基因工程菌,分别通过CM Sepharose FF离子交换层析(CM)(CM组)、CM联合Phenyl Sepharose... 详细信息

目的:评价超滤技术去除纯化后重组MUC1-MBP融合蛋白(MUC1-MBP)溶液中内毒素的效果,阐明超滤技术对去除内毒素的作用。方法:选取表达MUC1-MBP大肠杆菌基因工程菌,分别通过CM Sepharose FF离子交换层析(CM)(CM组)、CM联合Phenyl Sepharose 6FF疏水层析(C6)(CM+C6组)、CM加超滤(CM+超滤组)以及CM联合C6加超滤(CM+C6组+超滤)进行纯化,并去除内毒素;采用SDS-PAGE分析蛋白纯度;鲎试剂显色基质法检测内毒素表达水平。结果:SDS-PAGE分析,在预期相对分子质量62 000处呈现单一条带,Quantity One分析纯度>96%;CM组与CM+C6组内毒素表达水平均较高,但2组比较差异无统计学意义(P>0.05);与CM组比较,CM+超滤组内毒素表达水平明显降低(P<0.01);与CM+C6组比较,CM+C6超滤组内毒素表达水平明显降低(P<0.01);CM+超滤组与CM+C6+超滤组内毒素表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:CM或CM联合C6均不能有效去除内毒素,其中C6对去除内毒素几乎无作用;CM加超滤可有效去除内毒素,超滤技术在去除内毒素中发挥重要作用。

关键词： MUC1-MBP融合蛋白离子交换层析疏水层析超滤技术内毒素显色基质法鲎试剂

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激活素受体相互作用蛋白3的基因克隆及其免疫学特性研究

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中国免疫学杂志 2006年第2期22卷 109-113,118页

作者：徐桂月张鹏宇王奭骥台桂香劳凤学杨煜崔雪玲柳忠辉吉林大学基础医学院免疫学教研室长春130021

目的:研究新克隆的激活素受体相互作用蛋白3(ActR IP3)的免疫学特性和其介导Ser/Thr激酶型受体胞内信号传导的作用。方法:以酵母双杂交法发现的ActR IP基因片段作为探针,从小鼠脑cDNA文库中克隆ActR IP3基因。EIA法分析其与激活素ⅡA型... 详细信息

目的:研究新克隆的激活素受体相互作用蛋白3(ActR IP3)的免疫学特性和其介导Ser/Thr激酶型受体胞内信号传导的作用。方法:以酵母双杂交法发现的ActR IP基因片段作为探针,从小鼠脑cDNA文库中克隆ActR IP3基因。EIA法分析其与激活素ⅡA型受体(ActRⅡA)结合能力,W estern b lot杂交检测成熟蛋白在组织中的表达,免疫组化染色分析其在脑组织中的分布,采用pcDNA-ActR IP3与CAGA-lux报告基因质粒共转染HEK293细胞分析信号传导作用。结果:克隆的Ac-tR IP3基因全长1 197 bp,编码101个氨基酸残基,EIA分析显示ActR IP3与ActRⅡA具有特异性结合作用,这种作用与Ac-tR IP3的N末端氨基酸序列有关。W estern b lot杂交显示天然ActR IP3相对分子质量约为14 000,在多种组织表达,免疫组化染色显示其在脑组织中的分布以海马及下丘脑为主。通过表达ActR IP3可促进激活素诱导的特异性基因转录活性。结论:ActR IP3属于ActR IP家族新成员,具有特异结合ActRⅡA的能力,并具有促进激活素信号传导的作用。

关键词：激活索受体相互作用蛋白信号传导免疫印迹杂交免疫组化

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AIRE通过调控Notch1表达影响CD4^+CD25^+Treg的作用及其机制

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吉林大学学报（医学版） 2009年第6期35卷 983-986页

作者：吴静杨巍孙际童苏静波魏晓曦李一吉林大学基础医学院免疫学教研室吉林长春130021

目的:研究AIRE基因是否可通过调控Notch1的表达而影响CD4+CD25+Treg细胞的诱导及功能,探讨AIRE在外周免疫耐受中的作用机制。方法:将RAW264.7细胞分为转染组和未转染组,采用脂质体法将pEGFPC3-AIRE质粒转入RAW264.7细胞,采用RT-PCR法检... 详细信息

目的:研究AIRE基因是否可通过调控Notch1的表达而影响CD4+CD25+Treg细胞的诱导及功能,探讨AIRE在外周免疫耐受中的作用机制。方法:将RAW264.7细胞分为转染组和未转染组,采用脂质体法将pEGFPC3-AIRE质粒转入RAW264.7细胞,采用RT-PCR法检测各组AIRE mRNA的表达及Notch1 mRNA表达的变化。将RAW264.7细胞分为转染组、转染并经Notch1抗体阻断组、阴性对照组及未转染并经Notch1抗体阻断组,分别采用FACS法及RT-PCR法检测各组RAW264.7细胞对CD4+CD25+Treg细胞数量及Foxp3 mRNA表达的影响。结果:质粒成功转入RAW264.7细胞内。AIRE转染组较未转染组Notch1 mRNA表达增加。AIRE转染组较未转染组CD4+CD25+Treg细胞的数量及功能相关基因Foxp3 mRNA的表达水平均增加,经Notch1抗体阻断后,AIRE转染组与未转染组CD4+CD25+Treg细胞的数量及功能均较对照组降低。结论:AIRE可能通过上调RAW264.7细胞上Notch1的表达进而影响CD4+CD25+Treg细胞的诱导产生及功能,从而在维持外周免疫耐受方面发挥一定的作用。

关键词：自身免疫调节因子 Notch1 CD4+CD25+Treg细胞

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人参单体皂甙Re外源性促进小鼠骨髓细胞增殖作用

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白求恩医科大学学报 1997年第2期23卷 141-142页

作者：王树和张东吉基础医学院免疫学教研室

采用软琼脂法和同位素掺入法观察了人参单体皂甙Ｒｅ对小鼠骨髓细胞的影响。结果显示，人参单体皂甙Ｒｅ具有协同条件培养液促进小鼠骨髓细胞集落形成和３Ｈ－ＴｄＲ摄入作用，从而提示Ｒｅ具有协同促进骨髓细胞增殖的可能机理。

关键词：人参皂甙Re 骨髓细胞增殖

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C57BL/6小鼠γδT细胞的组织器官分布和功能特点

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细胞与分子免疫学杂志 2013年第5期29卷 449-452,457页

作者：黄俊罗雪平陈殿慧方会龙谢红艳广州医学院基础医学院病原学与免疫学教研室广东广州510182 湘南学院病原学与免疫学教研室湖南郴州423000 广州医学院机能学实验中心广东广州510182

目的比较C57BL/6小鼠肝脏、肺脏、脾脏和肠系膜淋巴结中γδT细胞占所分离的淋巴细胞及其CD3+T细胞的百分比、表型和功能的特点。方法分离正常C57BL/6小鼠肝脏、肺脏、脾脏和肠系膜淋巴结的淋巴细胞,应用细胞表面分子染色的方法,使用流... 详细信息

目的比较C57BL/6小鼠肝脏、肺脏、脾脏和肠系膜淋巴结中γδT细胞占所分离的淋巴细胞及其CD3+T细胞的百分比、表型和功能的特点。方法分离正常C57BL/6小鼠肝脏、肺脏、脾脏和肠系膜淋巴结的淋巴细胞,应用细胞表面分子染色的方法,使用流式细胞仪观察γδT细胞占从不同组织分离的淋巴细胞及CD3+T细胞的百分比及其表型的特点。细胞经PMA和离子霉素刺激后,应用细胞内细胞因子染色的方法,通过流式细胞仪观察γδT细胞产生IFN-γ、IL-4、IL-9和IL-17细胞因子的情况。结果γδT细胞占分离淋巴细胞中的百分含量在肝脏明显高于肺脏、脾脏和肠系膜淋巴结(P<0.05),而γδT细胞在肠系膜淋巴结CD3+T细胞的百分含量要显著的低于其他脏器(P<0.05)。不同组织器官中γδT细胞以CD4-CD8-表型为主,还存在少量CD8+γδT细胞。在肠系膜淋巴结γδT细胞中CD4+细胞的量明显高于其他器官,且明显可见一群CD4+CD8+细胞。不同组织中γδT细胞中IL-17+的细胞量要明显高于IFN-γ+和IL-4+细胞。γδT细胞基本不分泌IL-9。肺脏的γδT细胞分泌细胞因子的能力最强,其IL-17+细胞的量达到(26.6±12.1)%。IFN-γ+细胞的量在肝脏和肺脏中较高,分别为(1.36±0.37)%和(1.6±0.7)%。结论 C57BL/6小鼠肝脏、肺脏、脾脏和肠系膜淋巴结γδT细胞的含量、表型和功能方面存在显著性差异。

关键词： γδT细胞表型细胞因子免疫器官

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