目的了解hefA外排基因表达与贵阳市幽门螺杆菌(Hp)多重耐药的关系。方法提取耐3种抗生素的多重耐药菌株(10株)、敏感菌株(6株)及质控菌株SS1的基因组DNA,PCR扩增hefA基因片段,PCR产物经2%琼脂糖凝胶电泳检测后测序,将测序基因片段序列输入NCBI中进行BLAST比对;利用TRIzol试剂提取上述细菌的RNA并逆转录成cDNA,以16sRNA为内参基因,通过实时荧光定量PCR(Real time PCR)检测hefA基因和内参基因的CT值,通过比较2-ΔΔCT判断多重耐药菌株和敏感菌株hefA基因表达的差异,以两小样本t检验进行统计学分析。结果 2%琼脂糖凝胶电泳显示,6株敏感菌和10株多耐药菌及SS1hefA基因PCR产物均约140bp,测序显示受试菌hefA基因序列与SS1菌株序列的一致性大于96%;RT-PCR检测hefA外排基因的表达,敏感菌株的2-ΔΔCT为0.895±0.540,多重耐药菌株的2-ΔΔCT为3.387±1.597,差异无统计学意义(t=9.399,P<0.05)。结论 hefA外排基因高表达是贵阳地区Hp多重耐药的机制之一。
目的本研究通过诱导结核分枝杆菌在低氧环境中进入持留状态,来比较分析不同时间不同低氧环境下结核分枝杆菌中的PhoP基因和PhoR基因的表达水平差异,探讨研究PhoPR双组分信号转导系统对结核分枝杆菌持留性的调控机制。方法首先对结核分枝杆菌国际标准无毒株(H37Ra)和结核分枝杆菌国际标准强毒株(H37Rv)在不同低氧环境下进行培养,提取每个样本菌株的总RNA,并进行完整性鉴定;运用SYBR Green I实时荧光定量PCR检测每个样本菌株中PhoP基因和PhoR基因的表达水平;比较分析不同时间不同低氧环境下的结核分枝杆菌菌株PhoP基因和PhoR基因的表达水平差异。结果在不同时间点对低氧环境的结核分枝杆菌PhoP基因和PhoR基因的表达水平进行检测,结果显示:与第10d相比,培养至第15d时H37Rv菌株和H37Ra菌株中的PhoP基因和PhoR基因的表达水平均显著上调,差异有统计学意义(P<0.05);并且培养至第25d时,H37Rv菌株中的PhoP基因和PhoR基因的表达水平比H37Ra菌株表达均上调2.34倍,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在不同时间点相同毒力的结核分枝杆菌的PhoPR双组分信号转导系统中PhoP基因和PhoR基因在不同低氧环境下的表达存在差异,而且在相同时间点不同毒力结核分枝杆菌的PhoPR双组分信号转导系统中PhoP基因和PhoR基因在不同低氧环境下的表达也存在差异,表明PhoPR双组分信号转导系统对结核分枝杆菌的持留性具有调控作用。
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