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浙江省免疫学会第十三次学术大会

作者：陈卓李青峰陈俊朱珊丽张丽芳温州医科大学基础医学院微生物学与免疫学教研室

背景:SARS-CoV-2引起COVID-19大流行,威胁全球公共卫生安全。迄今为止,不同监管机构批准使用的COVID-19疫苗均是通过肌肉免疫接种,该免疫途径诱导粘膜免疫应答能力较弱,迫切需要应对COVID-19大流行的新型疫苗和免疫策略。SARS-CoV-2S蛋... 详细信息

背景:SARS-CoV-2引起COVID-19大流行,威胁全球公共卫生安全。迄今为止,不同监管机构批准使用的COVID-19疫苗均是通过肌肉免疫接种,该免疫途径诱导粘膜免疫应答能力较弱,迫切需要应对COVID-19大流行的新型疫苗和免疫策略。SARS-CoV-2S蛋白通过与宿主细胞ACE2受体结合进而入侵细胞,故S蛋白已成为疫苗研究的重要靶标。其中S蛋白中RBM、FP、HR1、HR2等四个结构域在病毒入侵宿主细胞过程中至关重要。乙肝病毒核心抗原(HBc)可自组装成病毒样颗粒(VLPs),作为载体携带异源蛋白质并能增强其免疫原性。研究目的:以HBc为载体携带新冠病毒S蛋白结构域,制备嵌合VLPs疫苗,并评估不同免疫途径刺激机体产生的免疫应答效应。材料和方法:本研究将新冠病毒S蛋白的四个主要结构域通过柔性肽连接,形成长度为230个氨基酸的多肽分子命名为S230,并以HBc为载体携带S230,构建HBc-S230 VLPs,分别通过肌肉注射、滴鼻免疫、肌肉联合滴鼻的方式免疫小鼠,检测血清抗体IgG、粘膜分泌物抗体sIgA及脾细胞IFN-γ、IL-4等细胞因子的产生情况,同时在细胞水平检测分析了免疫后小鼠血清抗体对野生型、Delta突变株和Omicron突变株新冠假病毒的中和活性,以评估嵌合VLPs疫苗的免疫效应、开发更有效的疫苗及免疫策略。结果:采用肌肉、鼻内及肌肉联合鼻内等三种方式免疫小鼠,通过ELISA检测血清中IgG抗体水平和粘膜分泌物中sIgA抗体水平,结果显示,血清中IgG抗体A450值分别为1.70±0.02、2.10±0.07、1.89±0.08;肺泡灌洗液中sIgA抗体A450值分别为0.81±0.03、1.05±0.05、1.63±0.09,鼻灌洗液中sIgA抗体A450值分别为0.57±0.03、1.21±0.02、2.15±0.04。说明三种途径免疫HBc-S230 VLPs均可刺激机体产生高水平的血清特异性抗体和粘膜分泌物sIgA,以肌肉联合鼻内免疫效果最佳。同时采用ELISA检测脾细胞分泌的细胞因子IFN-γ、IL-4的产生情况,结果显示,三种途径免疫小鼠均能刺激机体产生高水平的IFN-γ,且以肌肉联合鼻内免疫效果最佳。荧光素酶报告实验检测三种免疫途径血清中IgG对新冠假病毒的中和能力,结果显示,肌肉注射、肌肉联合鼻内免疫途径产生的血清IgG均能中和野生型、Delta突变株和Omicron突变株SARS-CoV-2假病毒,且以肌肉联合鼻内免疫组中和效果最佳(对野生型、Delta突变株、Omicron突变株病毒中和活性IC50肌肉注射组分别为1:257、1:26、1:76,肌肉联合鼻内组分别为1:811、1:161、1:3435),而鼻内免疫组无中和活性。结论:HBc-S230 VLPs通过肌肉注射、滴鼻免疫、肌肉联合滴鼻免疫均能刺激机体产生高水平的体液免疫(血清IgG抗体和粘膜分泌物sIgA抗体)和细胞免疫效应,血清IgG抗体均能中和野生型、Delta突变株和Omicron突变株SARS-CoV-2假病毒,且以肌肉联合滴鼻免疫效果最佳。

关键词： SARS-CoV-2 S蛋白粘膜免疫 HBcAg 中和作用

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应用ELISPOT方法筛选确定尼帕病毒融合糖蛋白和附着糖蛋白的H-2 d限制性T细胞表位

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中华微生物学和免疫学杂志 2022年第4期42卷 287-292页

作者：黄梦婧邓瑶赵志敏陈晋妮任皎王文沈晓玲谭文杰内蒙古医科大学基础医学院微生物教研室呼和浩特010010 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家卫生健康委员会生物安全重点实验室北京102206 新乡医学院公共卫生学院新乡453000

目的:在小鼠中筛选和确定尼帕病毒(Nipah virus,NiV)融合糖蛋白(fusion glycoprotein,F)和附着糖蛋白(attachment glycoprotein,G)特异性的H-2 d限制性T细胞表位。方法:本研究基于NiV F和G蛋白全序列设计合成多肽库(单肽长为15个氨基酸... 详细信息

目的:在小鼠中筛选和确定尼帕病毒(Nipah virus,NiV)融合糖蛋白(fusion glycoprotein,F)和附着糖蛋白(attachment glycoprotein,G)特异性的H-2 d限制性T细胞表位。方法:本研究基于NiV F和G蛋白全序列设计合成多肽库(单肽长为15个氨基酸,前后肽重复10个氨基酸),使用表达NiV F和G蛋白的DNA疫苗肌肉注射免疫BALB/c小鼠,通过矩阵设计将F和G抗原全序列肽库分别混合成肽池,取免疫后小鼠脾细胞进行IFN-γ ELISPOT检测,确定肽库中特异反应的优势表位肽。结果:F肽库筛选到12条特异性优势肽,第56条多肽产生的反应最强;G肽库筛选到4条特异性优势肽,第72条多肽产生的反应最强。结论:本研究使用IFN-γ ELISPOT方法筛选和确定了12条NiV F抗原特异性和4条NiV G抗原特异性H-2 d限制性优势T细胞表位,为NiV免疫学与疫苗研究提供了参考。

关键词：尼帕病毒 H-2 d限制 T细胞表位 IFN-γELISPOT

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优化强脉冲光对睑板腺功能障碍患者睑板腺形态和功能的影响

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国际眼科杂志 2025年第6期25卷 968-974页

作者：周一凡张鹏飞刘丽峰韩新红王超刘丽梅滨州医学院第二临床医学院山东省烟台市264000 潍坊眼科医院山东省潍坊市261000 山东第二医科大学基础医学院病原生物学教研室山东省潍坊市261000

目的:评估优化强脉冲光(OPT)对睑板腺功能障碍(MGD)患者睑板腺形态和功能的影响。方法:前瞻性病例对照研究。选取2023年9月至2024年2月于潍坊眼科医院就诊的MGD患者60例60眼(选取右眼)。根据睑板腺缺失面积分为轻度、中度、重度三组,每... 详细信息

目的:评估优化强脉冲光(OPT)对睑板腺功能障碍(MGD)患者睑板腺形态和功能的影响。方法:前瞻性病例对照研究。选取2023年9月至2024年2月于潍坊眼科医院就诊的MGD患者60例60眼(选取右眼)。根据睑板腺缺失面积分为轻度、中度、重度三组,每组20例20眼。所有患者均接受双眼强脉冲光联合睑板腺按摩治疗,每2 wk 1次,共4次。观察并记录治疗前及末次治疗后3 mo眼表疾病指数(OSDI)、角膜荧光素染色(CFS)、非侵入性平均泪膜破裂时间(NIBUTav)、非侵入性泪河高度(NITMH)等眼表功能指标,睑板腺排出能力评分(MGES)、睑板腺分泌物评分(MGYSS)等睑板腺功能指标;活体共聚焦显微镜(IVCM)在细胞水平上观察睑板腺腺泡单元密度(MGAUD)、腺泡间炎症细胞密度(ICD)、睑板腺腺泡最长直径(MGALD)、睑板腺腺泡最短直径(MGASD)等微观结构。结果:治疗前基线水平上,三组间NITMH无差异(P>0.05);三组间NIBUTav、MGES、MGYSS、MGAUD、MGALD、MGASD两两比较均有差异(均P<0.05);中、重度组的OSDI、CFS、ICD与轻度组分别比较均有差异(均P<0.05),但中、重度组间无差异(均P>0.05)。治疗后3 mo,三组患者NITMH无显著改变(均P>0.05),剩余指标比较结果如下:轻度组患者全部指标均有改善(均P<0.05);中度组除MGASD治疗前后无差异(P>0.05),其余指标均有改善(均P<0.05);重度组治疗后OSDI、CFS、NIBUTav显著改善(均P<0.05),MGES、MGYSS变化无差异(均P>0.05),IVCM下各项睑板腺腺泡参数MGAUD、ICD、MGALD、MGASD均无差异(均P>0.05)。结论:OPT可以改善不同睑板腺缺失程度MGD患者的各项眼表功能,改善轻、中度MGD患者的睑板腺排出能力和睑酯的性状,并在细胞水平上改善睑板腺腺泡各项参数。重度患者大部分腺泡功能丧失,腺泡结构无法逆转,但仍可通过治疗改善MGD患者的症状和体征,延缓病情发展。

关键词：睑板腺功能障碍优化强脉冲光共聚焦显微镜

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基于“五步一环模式”的医学免疫学教学实践与探索

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基础医学教育 2024年第10期26卷 829-832页

作者：张帆王艳红刘继斌姚红蔡红艳樊卫平山西医科大学基础医学院微生物学与免疫学教研室太原030001 山西医科大学基础医学院院办

医学免疫学是医学院校本科生一门重要主干和桥梁课程,但基础免疫学内容抽象复杂,理论较为深奥,且知识更新进展迅速,是医学生所学课程中最难理解和学习的课程之一。文章采用“五步一环”教学模式,通过案例-问题-原因-成果-思政五个步骤... 详细信息

医学免疫学是医学院校本科生一门重要主干和桥梁课程,但基础免疫学内容抽象复杂,理论较为深奥,且知识更新进展迅速,是医学生所学课程中最难理解和学习的课程之一。文章采用“五步一环”教学模式,通过案例-问题-原因-成果-思政五个步骤形成的闭环来讲解基础免疫学主要知识点。同时在采用“五步一环模式”的教学中借助故事教学法、案例教学法及文献阅读法等多种教学手段,一方面使抽象的免疫学知识点易于理解,激发学生科研热情,培养学生高阶思维能力;另一方面,可将思政元素巧妙融入,实现专业教学与思政教育互相交融,使学生的学业水平、专业素养和创新能力得到明显提升。

关键词：医学免疫学教学改革 “五步一环”教学模式案例教学法课程思政

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抗人B7-H4嵌合抗体的制备及鉴定

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中国免疫学杂志 2022年第22期38卷 2763-2769页

作者：范振军张文婷张丽张俊爱赵祖国徐军发(指导) 广东医科大学医学技术学院检验医学研究所东莞523808 广东医科大学基础医学院微生物学和免疫学教研室东莞523808

目的:制备抗人B7-H4嵌合单克隆抗体(mAb),并对其生物学功能进行初步鉴定。方法:从杂交瘤细胞株扩增抗人B7-H4可变区基因序列;构建表达人鼠嵌合抗体的表达载体,并转染CHO-K1细胞构建稳定表达抗B7-H4嵌合抗体的CHO-K1细胞株;SDS-PAGE检测... 详细信息

目的:制备抗人B7-H4嵌合单克隆抗体(mAb),并对其生物学功能进行初步鉴定。方法:从杂交瘤细胞株扩增抗人B7-H4可变区基因序列;构建表达人鼠嵌合抗体的表达载体,并转染CHO-K1细胞构建稳定表达抗B7-H4嵌合抗体的CHO-K1细胞株;SDS-PAGE检测mAb纯度;ELISA测定mAb效价;SPR测定mAb的亲和力;BCA法检测mAb浓度;CCK-8法检测T细胞增殖情况;ELISA和Western blot确定mAb结合表位范围;使用Discovery Studio软件对单抗表位进行分析。结果:从杂交瘤细胞成功扩增出抗体可变区基因,筛选出稳定表达嵌合抗体的CHO-K1细胞株;细胞培养上清中mAB浓度为1.82 mg/ml,ELISA有效效价为1.97×10^(5)左右,亲和力为3.72×10^(-9)kD;CCK-8结果表明嵌合单抗可以阻断B7-H4-Fc分子对T细胞增殖的抑制作用;表位分析结果表明嵌合mAb主要以氢键和疏水作用与B7-H4 IgC域结合。结论:本研究成功制备了抗B7-H4的人鼠嵌合单抗,可在体外有效地阻断B7-H4-Fc对T细胞增殖抑制作用并为B7-H4抗体药物研发提供了前期基础。

关键词： B7-H4 嵌合抗体抗体表位 T细胞增殖

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幽门螺杆菌荧光蛋白报告系统的构建

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中国病原生物学杂志 2022年第6期17卷 643-648页

作者：管玉祝王鑫鑫吴道艳洪伟向松吴晓娟张玉典崔古贞陈峥宏贵州省病原生物学特色重点实验室贵州贵阳550025 贵州医科大学基础医学院微生物学教研室地方病与少数民族疾病教育部重点实验室

目的构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)绿色荧光蛋白(GFP)和红色荧光蛋白(RFP)两种报告系统。方法利用PCR方法扩增幽门螺杆菌内源组成型尿素酶基因启动子(PureA),利用重叠延伸PCR方法将PureA启动子分别与绿色荧光蛋白基因(gfp)和红... 详细信息

目的构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)绿色荧光蛋白(GFP)和红色荧光蛋白(RFP)两种报告系统。方法利用PCR方法扩增幽门螺杆菌内源组成型尿素酶基因启动子(PureA),利用重叠延伸PCR方法将PureA启动子分别与绿色荧光蛋白基因(gfp)和红色荧光蛋白基因(rfp)连接,构建两类荧光蛋白基因表达盒PureA-gfp和PureA-rfp。利用无缝组装技术将PureA-gfp和PureA-rfp表达盒分别与EcoRI单切的自杀质粒载体pSD连接,构建两类荧光蛋白基因表达报告质粒pSD-GFP和pSD-RFP。将上述两类荧光蛋白报告质粒分别转化幽门螺杆菌26695,涂布卡那霉素抗性平板,利用同源重组方法构建两类荧光蛋白基因工程菌株Hp::gfp和Hp::rfp。利用卡那霉素抗性和PCR方法筛选阳性工程菌株,并利用荧光显微镜检测两种荧光蛋白在幽门螺杆菌中的表达状况。结果工程菌株能够在卡那霉素抗性平板生长,PCR扩增目的基因片段与预期结果一致,表明gfp和rfp基因表达盒成功插入到幽门螺杆菌染色体靶位点。荧光显微镜下分别观察到明亮的绿色荧光和红色荧光,而野生型对照菌株无任何荧光,表明gfp和rfp基因在幽门螺杆菌中成功表达。结论在幽门螺杆菌中成功构建GFP和RFP两种荧光蛋白报告系统,为幽门螺杆菌的转录调控及致病机制研究提供了良好的检测手段。

关键词：幽门螺杆菌绿色荧光蛋白红色荧光蛋白基因表达报告系统

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结核分枝杆菌蛋白重组腺病毒黏膜免疫对小鼠哮喘的免疫预防作用

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国际呼吸杂志 2023年第6期43卷 646-651页

作者：向光宇陈海沣靳芊芊王丽梅空军军医大学基础医学院学员三大队西安710032 空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室西安710032

目的利用表达结核分枝杆菌蛋白Ag85B、ESAT-6、Rv2031c和Rv2626c的重组腺病毒(Ad-AE-R2)滴鼻黏膜免疫小鼠,探究其对哮喘小鼠气道炎症的免疫预防作用。方法本研究为实验研究,采用单纯随机抽样方法。将18只6~8周龄BALB/c雌性小鼠随机分为3... 详细信息

目的利用表达结核分枝杆菌蛋白Ag85B、ESAT-6、Rv2031c和Rv2626c的重组腺病毒(Ad-AE-R2)滴鼻黏膜免疫小鼠,探究其对哮喘小鼠气道炎症的免疫预防作用。方法本研究为实验研究,采用单纯随机抽样方法。将18只6~8周龄BALB/c雌性小鼠随机分为3组:空白对照组、哮喘模型组和免疫预防组,每组6只。免疫预防组滴鼻免疫108 PFU Ad-AE-R2,空白对照组和哮喘模型组滴鼻等量生理盐水。小鼠免疫3周后,利用卵清蛋白诱导免疫预防组和哮喘模型组小鼠哮喘。空白对照组用生理盐水雾化作为对照。末次激发小鼠哮喘24 h后,麻醉处死各组小鼠,检测小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)和外周血中IgE和γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素5(IL-5)、IL-13等细胞因子的含量,HE染色观察肺组织病理学改变。结果与空白对照组相比,哮喘模型组BALF和血清中的IgE含量增加(均P<0.05),BALF中IFN-γ/IL-5下降(P<0.01)。与哮喘模型组相比,免疫预防组BALF中IL-13含量降低(P<0.01),BALF和血清中IFN-γ/IL-5升高(均P<0.05)。小鼠肺组织病理切片HE染色结果表明,与空白对照组相比,哮喘模型组小鼠肺组织结构出现明显损伤,气道黏膜上皮细胞局部脱落,管壁及基底膜显著增厚,气道及血管周围可见大量炎症细胞浸润;与哮喘模型组相比,免疫预防组小鼠肺组织中的炎症性病理改变明显减轻。结论利用卵清蛋白成功诱导小鼠气道炎症,建立小鼠哮喘模型。Ad-AE-R2黏膜免疫可以提升小鼠气道Th1型免疫反应,促进Th1/Th2型细胞因子平衡,对小鼠哮喘具有一定的预防保护效果,为哮喘的免疫预防提供研究参考。

关键词：结核分枝杆菌重组腺病毒哮喘黏膜免疫免疫预防

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真核表达纯化的SARS-CoV-2 N蛋白在不同人群血清检测中的应用性能分析

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病毒学报 2023年第2期39卷 313-321页

作者：杨燕王慧娟黄梦婧黄保英赵莉邓瑶沈晓玲谭文杰温州医科大学检验医学院生命科学学院 325035 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家卫生健康委员会生物安全重点实验室北京102206 内蒙古医科大学基础医学院微生物教研室呼和浩特010010

通过真核系统表达纯化新型冠状病毒(SARS-CoV-2)的全长核衣壳蛋白(Nucleocapsid protein,N蛋白),分析其抗原性与应用性能。将SARS-CoV-2 N蛋白表达质粒转染HEK-293T细胞后,通过Western Blot和免疫荧光验证蛋白表达以及表达定位。对N蛋... 详细信息

通过真核系统表达纯化新型冠状病毒(SARS-CoV-2)的全长核衣壳蛋白(Nucleocapsid protein,N蛋白),分析其抗原性与应用性能。将SARS-CoV-2 N蛋白表达质粒转染HEK-293T细胞后,通过Western Blot和免疫荧光验证蛋白表达以及表达定位。对N蛋白进行纯化后,通过Western Blot和ELISA并采用多种血清样本(WHO参比品血清、正常人血清、新冠灭活疫苗接种后血清、新冠感染者恢复期血清)对该N蛋白在血清抗体检测中的应用性能进行分析。比较真核系统与原核系统表达的N蛋白抗原性上的差异,并分析基于真核系统表达N蛋白构建的IgG抗体ELISA检测体系与获批的商品化新冠RBD (Receptor binding domain)IgG抗体ELISA检测试剂盒及用于检测中和抗体的活病毒微量中和试验结果间的相关性。结果显示,真核系统表达的全长N蛋白主要定位于胞质,作为抗原检测新冠IgG抗体,具有比原核系统表达的N蛋白更高的检测灵敏度。针对新冠感染者恢复期血清,基于哺乳动物细胞表达的N蛋白构建的ELISA体系检测的IgG抗体滴度与试剂盒检测的RBD-IgG抗体滴度以及中和抗体滴度之间具有良好的相关性。本研究表明真核系统表达纯化的SARS-CoV-2 N蛋白具有良好的抗原性与检测性能,为SARS-CoV-2血清学检测方法的建立与优化以及进一步明确N蛋白诱发的免疫反应特点提供了参考。

关键词：新型冠状病毒核衣壳蛋白真核表达抗原性 ELISA

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医学微生物学科研课题式实验体系的探索研究

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基础医学教育 2024年第1期26卷 25-29页

作者：王微微宋姗姗杨艾华王小敏遵义医科大学基础医学院医学微生物学与免疫学实验室遵义563000 遵义医科大学基础医学院微生物学教研室国家感染性疾病临床医学研究中心药效学评价平台

培养创新能力强的应用型护理人才是新医科背景下护理人才的培养目标。医学微生物实验是护理专业的基础课程,集应用性和实践性于一体,培养了学生的实践动手能力和解决问题的能力。为了更好地提升学生实践创新的能力,实现课程的人才培养... 详细信息

培养创新能力强的应用型护理人才是新医科背景下护理人才的培养目标。医学微生物实验是护理专业的基础课程,集应用性和实践性于一体,培养了学生的实践动手能力和解决问题的能力。为了更好地提升学生实践创新的能力,实现课程的人才培养目标和强化护理学生的岗位胜任力,课题组将医学微生物学科研课题式实验体系应用于护理学生的实验教学中,通过实验设计、实验操作、数据分析和论文撰写的课题研究过程,提升学生自主学习、积极思考和实践论证的能力,锻炼创新思维和科研实践能力,增强学生的综合素养的同时,课程教学质量也得以提高,教学改革成效初显。

关键词：医学微生物学实验教学教学改革科研素养创新意识

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溴结构域蛋白2:有望作为治疗银屑病的新靶点

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中国皮肤性病学杂志 2023年第11期37卷 1227-1231页

作者：邹朋李俊琴王泽洪李新华山西医科大学基础医学院微生物与免疫学教研室山西晋中030619 山西医科大学附属太原中心医院皮肤科实验室山西太原030009

银屑病是一种慢性、易复发的炎症性皮肤病。主要特征是免疫细胞浸润、表皮过度增生、角质形成细胞异常分化。目前主要治疗手段存在明显副作用、复发和耐药性等问题。溴结构域蛋白2(bromodomain protein 2,BRD2)作为转化医学研究领域的... 详细信息

银屑病是一种慢性、易复发的炎症性皮肤病。主要特征是免疫细胞浸润、表皮过度增生、角质形成细胞异常分化。目前主要治疗手段存在明显副作用、复发和耐药性等问题。溴结构域蛋白2(bromodomain protein 2,BRD2)作为转化医学研究领域的新方向,通过转录调控在银屑病的发生、发展中发挥重要作用,有望为银屑病的治疗提供新的疗法和治疗靶点。本文主要对BRD2基本特征和功能、近年来在银屑病的致病机理和治疗前景研究进展进行阐述。

关键词：银屑病溴结构域蛋白2 转录调控

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