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CXC趋化因子配体10对肝细胞癌SMMC-7721细胞增殖和迁移的影响及其机制

吉林大学学报（医学版） 2023年第5期49卷 1227-1233页

作者：邓文俊胡连涛赵彬男董新宇李学斌李杰杨馨妍郭晓莉李玥曲义坤王伟群佳木斯大学基础医学院生理学教研室黑龙江佳木斯154007 黑龙江省微生物-免疫调节网络与相关疾病重点实验室黑龙江佳木斯154007 佳木斯大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室黑龙江佳木斯154007 佳木斯大学附属第一医院检验科黑龙江佳木斯154007 佳木斯大学附属第一医院普外科黑龙江佳木斯154007

目的:探讨外源性CXC趋化因子配体10 (CXCL10)对肝细胞癌(HCC) SMMC-7721细胞增殖和迁移的影响,并阐明其作用机制。方法:按照CXCL10作用浓度,将人HCC SMMC-7721细胞分为0 mg·L^(-1)CXCL10组、10 mg·L^(-1)CXCL10组和30 mg·... 详细信息

目的:探讨外源性CXC趋化因子配体10 (CXCL10)对肝细胞癌(HCC) SMMC-7721细胞增殖和迁移的影响,并阐明其作用机制。方法:按照CXCL10作用浓度,将人HCC SMMC-7721细胞分为0 mg·L^(-1)CXCL10组、10 mg·L^(-1)CXCL10组和30 mg·L^(-1)CXCL10组。上述部分细胞给予细胞外调节蛋白激酶(ERK)抑制剂PD98059 (80μmol·L^(-1))后,将SMMC-7721细胞分为0 mg·L^(-1)CXCL10+PD98059组、 10mg·L^(-1)CXCL10+PD98059组和30mg·L^(-1)CXCL10+PD98059组。CCK-8法检测各组SMMC-7721细胞增殖率,EdU法检测各组SMMC-7721细胞中EdU阳性表达率,Transwell小室实验检测各组SMMC-7721细胞迁移率,Western blotting法检测各组SMMC-7721细胞中ERK、磷酸化ERK (p-ERK)和细胞周期蛋白D1 (Cyclin D1)蛋白表达水平。结果:CCK-8法检测,培养24h后,与0mg·L^(-1)CXCL10组比较,10mg·L^(-1)CXCL10和30mg·L^(-1)CXCL10组SMMC-7721细胞增殖率升高(P<0.05或P<0.01)。EdU法检测,与0mg·L^(-1)CXCL10组比较,10mg·L^(-1)CXCL10和30mg·L^(-1)CXCL10组SMMC-7721细胞中EdU阳性表达率升高(P<0.01);Transwell小室实验检测,培养48 h后,与0 mg·L^(-1)CXCL10组比较,10 mg·L^(-1)CXCL10和30 mg·L^(-1)CXCL10组SMMC-7721细胞迁移率升高(P<0.01)。Western blotting法检测,细胞培养24 h后,采用CXCL10溶液处理24h,与0mg·L^(-1)CXCL10组比较,10mg·L^(-1)CXCL10组和30 mg·L^(-1)CXCL10组SMMC-7721细胞中ERK、p-ERK及Cyclin D1蛋白表达水平升高(P<0.01)。CCK-8法检测,加入ERK抑制剂PD98059后,与0 mg·L^(-1)CXCL10组比较,10 mg·L^(-1)CXCL10+PD98059组和30 mg·L^(-1)CXCL10+PD98059组SMMC-7721细胞增殖率降低(P<0.05);与10 mg·L^(-1)CXCL10组比较,10 mg·L^(-1)CXCL10+PD98059组SMMC-7721细胞增殖率降低(P<0.05);与30 mg·L^(-1)CXCL10组比较,30 mg·L^(-1)CXCL10+PD98059组SMMC-7721细胞增殖率降低(P<0.05)。结论:CXCL10能够促进HCCSMMC-7721细胞增殖和迁移,其作用机制与上调ERK/p-ERK/Cyclin D1通路蛋白表达有关。

关键词： CXC趋化因子配体10 肝细胞肿瘤细胞外调节蛋白激酶周期蛋白D1 细胞增殖

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宏基因组测序在中枢神经系统感染性疾病诊断中的应用及研究进展

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微生物学报 2022年第10期62卷 3722-3731页

作者：孙新蕾吴长城谭文杰魏兰兰哈尔滨医科大学基础医学院微生物学教研室黑龙江哈尔滨150081 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206 深圳市第三人民医院广东深圳518112

中枢神经系统(central nervous system,CNS)感染是指由病毒、细菌或真菌等侵染中枢神经系统引起的急性或慢性炎症性(或非炎症性)疾病,致死率高,易引发严重后遗症。由于检测通量及灵敏度的限制,一半以上的中枢神经系统感染患者无法通过... 详细信息

中枢神经系统(central nervous system,CNS)感染是指由病毒、细菌或真菌等侵染中枢神经系统引起的急性或慢性炎症性(或非炎症性)疾病,致死率高,易引发严重后遗症。由于检测通量及灵敏度的限制,一半以上的中枢神经系统感染患者无法通过常规检测方法确定病原体。宏基因组测序是一种新兴的病原检测技术,能够极大地提升病原检出率。当前部分临床医生及相关从业人员对宏基因组测序的认识存在不足,限制了其在临床诊疗中的快速推广和应用。本文系统介绍了宏基因组测序整体流程,综述了该技术在中枢神经系统感染性疾病诊疗中的发展历程和最新研究进展,希望为中枢神经系统感染性疾病的诊断和治疗提供参考。

关键词：宏基因组测序中枢神经系统感染脑脊液病原检测

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PAK2通过调节ERK信号通路的活性促进肺癌细胞顺铂耐药

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现代肿瘤医学 2023年第13期31卷 2448-2454页

作者：王爽荣雪竹王斯李珍刘洋中国医科大学附属第一医院麻醉科辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一医院病理科辽宁沈阳110001 中国医科大学基础医学院病原微生物教研室辽宁沈阳110122

目的:探讨p21激活激酶2(PAK2)在非小细胞肺癌(NSCLC)中是否存在异常表达,以及是否影响肺癌细胞的顺铂敏感性。方法:采用免疫组化和Western blot(WB)方法检测NSCLC中PAK2的蛋白表达模式。利用PAK2-siRNA下调肺癌细胞系中PAK2的表达后,通... 详细信息

目的:探讨p21激活激酶2(PAK2)在非小细胞肺癌(NSCLC)中是否存在异常表达,以及是否影响肺癌细胞的顺铂敏感性。方法:采用免疫组化和Western blot(WB)方法检测NSCLC中PAK2的蛋白表达模式。利用PAK2-siRNA下调肺癌细胞系中PAK2的表达后,通过WB和细胞功能学实验等方法,明确PAK2对NSCLC细胞系增殖和侵袭能力的影响,并检测顺铂耐药前后的肺癌细胞系中PAK2的表达改变,及其对肺癌细胞顺铂敏感性的影响。结果:PAK2在NSCLC中呈现明显的胞浆强表达,并且其异常表达与肺癌的恶性表型相关;PAK2在顺铂耐药肺癌细胞中表达增强,抑制ERK活性后,PAK2的表达上调不能显著促进肺癌细胞对顺铂耐药。结论:PAK2在NSCLC中发挥着重要的促癌基因功能,并通过调节ERK信号通路的活性介导肺癌细胞系对顺铂耐药性。

关键词：非小细胞肺癌 p21激活激酶2 细胞增殖细胞侵袭 ERK信号通路

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临床医学专业病原生物学实验教学的整合

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基础医学教育 2022年第10期24卷 746-749页

作者：杨树国赵燕清李健刘龙刘志新关玮谢祎婷徐道修湖北医药学院基础医学院寄生虫学教研室十堰442000 湖北医药学院基础医学院微生物学教研室

医学微生物学和人体寄生虫学是病原生物学两大分支学科。打破学科壁垒,以系统器官为中心整合分支学科,有利于构建临床医学专业学生的病原生物学知识体系与框架。文章在实验项目选择、实验流程制定、教学质量保障及考核模式建立等多个方... 详细信息

医学微生物学和人体寄生虫学是病原生物学两大分支学科。打破学科壁垒,以系统器官为中心整合分支学科,有利于构建临床医学专业学生的病原生物学知识体系与框架。文章在实验项目选择、实验流程制定、教学质量保障及考核模式建立等多个方面进行有机融合,以此为导向构建课程实验教学体系,有利于建立病原生物整体观,改变以生物分类的传统认识,为病原生物学知识的临床应用奠定基础。

关键词：病原生物学学科整合实验教学

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用于汉滩病毒固有免疫应答研究的永生化人脐静脉内皮细胞系的建立

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细胞与分子免疫学杂志 2021年第12期37卷 1057-1065页

作者：张惠贾岩靳嘉岩叶伟程林峰雷迎峰张芳琳刘赫空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室陕西西安710032 空军军医大学基础医学院学员三大队十一队陕西西安710032

目的通过导入人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因构建永生化人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC-hTERT),探索永生化HUVEC对汉滩病毒(HTNV)感染效率及细胞固有免疫调控的影响,评价HUVEC-hTERT作为研究HTNV细胞模型的潜能。方法将hTERT基因克隆入慢病... 详细信息

目的通过导入人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因构建永生化人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC-hTERT),探索永生化HUVEC对汉滩病毒(HTNV)感染效率及细胞固有免疫调控的影响,评价HUVEC-hTERT作为研究HTNV细胞模型的潜能。方法将hTERT基因克隆入慢病毒载体,构建pCDH-CMV-hTERT-EF1-puro质粒后包装慢病毒并感染HUVEC;嘌呤霉素筛选稳定表达hTERT基因的HUVEC命名为HUVEC-hTERT;利用显微镜观察和免疫荧光细胞化学染色法对HUVEC-hTERT的形态及内皮细胞标志分子人血管性假血友病因子(vWF)、CD31和血管内皮细胞钙黏蛋白(VE-cadherin)进行鉴定;利用免疫荧光法检测HTNV感染后核衣壳蛋白(NP)阳性细胞百分比,观察HTNV对HUVEC和HUVEC-hTERT的感染效率差异;利用实时定量PCR和Western blot法分别检测感染HTNV后,病毒基因组小片段(S)及其编码的NP在不同时间点的复制水平,验证HTNV在细胞中的增殖效率;利用实时定量PCR检测细胞β干扰素(IFN-β)、黏病毒抗性蛋白A(MxA)、MxB、干扰素诱导蛋白2(IFIT2)、干扰素诱导跨膜蛋白3(IFITM3)及炎症因子环加氧酶2(COX2)、细胞间黏附因子(ICAM)和CC趋化因子配体5(CCL5)的mRNA水平并利用Western blot法检测IFIT2、IFITM3和MxA的蛋白水平,观察细胞固有免疫对HTNV的反应是否一致。利用Western blot、实时定量PCR检测感染HTNV后细胞上述分子的表达情况,观察永生化后细胞固有免疫对HTNV的反应是否一致。结果成功筛选出永生化细胞系HUVEC-hTERT,鉴定出其与HUVEC具有相同的表型并表达内皮细胞标志分子vWF、CD31、VE-cadherin;HUVEC-hTERT和HUVEC均可被HTNV感染且感染效率基本相同;在HTNV感染过程中,HUVEC-hTERT的固有免疫分子,如IFN-β、MxA、MxB、IFIT2、IFITM3、COX2、ICAM及CCL5的表达情况与HUVEC相同,表明HUVEC-hTERT固有免疫调控未发生改变。结论HUVEC-hTERT可在一定程度上代替原代HUVEC用于HTNV感染致固有免疫应答调控的研究。

关键词：永生化人脐静脉血管内皮细胞人端粒酶逆转录酶(hTERT) 汉滩病毒固有免疫

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IL-1β诱导甲状腺细胞UGRP1表达及其与Fas/FasL介导凋亡的相关性

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安徽医科大学学报 2022年第7期57卷 1073-1077页

作者：陈翠萍李阿楠任翠平沈际佳左春林安徽医科大学第一附属医院内分泌科合肥230022 安徽医科大学基础医学院微生物与寄生虫学教研室合肥230032

目的探讨白细胞介素-1β(IL-1β)诱导甲状腺细胞子宫球蛋白相关蛋白1(UGRP1)的表达及其与Fas/FasL介导细胞凋亡的相关性。方法设立对照组、IL-1β组、IL-1β+抗FasL抗体组,体外培养大鼠甲状腺细胞(FRTL-5细胞),采用Real-time PCR法检测... 详细信息

目的探讨白细胞介素-1β(IL-1β)诱导甲状腺细胞子宫球蛋白相关蛋白1(UGRP1)的表达及其与Fas/FasL介导细胞凋亡的相关性。方法设立对照组、IL-1β组、IL-1β+抗FasL抗体组,体外培养大鼠甲状腺细胞(FRTL-5细胞),采用Real-time PCR法检测各组细胞UGRP1及Fas mRNA表达水平;采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率。结果与对照组比较,IL-1β组、IL-1β+抗FasL抗体组UGRP1及Fas mRNA表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,IL-1β组甲状腺细胞早期凋亡率升高(7.49%±1.91%vs 28.46%±3.17%),差异有统计学意义(P<0.001),与IL-1β组比较,IL-1β+抗FasL抗体组甲状腺细胞早期凋亡率降低(28.46%±3.17%vs 19.20%±1.75%),差异有统计学意义(P<0.05);与IL-1β组比较,IL-1β+抗FasL抗体组UGRP1 mRNA(2.22±0.31 vs 2.66±0.28)及Fas mRNA(2.75±0.18 vs 3.03±0.16)表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论IL-1β诱导甲状腺细胞UGRP1与Fas高表达以及细胞凋亡,UGRP1高表达与Fas/FasL介导的细胞凋亡不相关。

关键词：白细胞介素-1β 子宫球蛋白相关蛋白1 Fas/FasL通路凋亡自身免疫性甲状腺病

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课程思政元素融入《医学免疫学》教学案例解析 ——免疫耐受与哈医大事件

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健康管理 2021年第23期 172-173页

作者：姚韵靓周洪昌蒋培余郭跃湖州师范学院医学院病原微生物与免疫学教研室　湖州　313000 湖州师范学院医学院病原微生物与免疫学教研室　湖州　313000 湖州师范学院医学院病原微生物与免疫学教研室　湖州　313000 湖州师范学院医学院病原微生物与免疫学教研室　湖州　313000

“课程思政”是加强医学专业大学生思想政治教育的重要途径，为更好地发挥“课程思政”的协同育人效应，提升医学专业学生的专业知识和医德素养，设计了医学免疫学课程“免疫耐受”部分与轰动一时的“ 哈医大伤人事件”结合的思政案例... 详细信息

“课程思政”是加强医学专业大学生思想政治教育的重要途径，为更好地发挥“课程思政”的协同育人效应，提升医学专业学生的专业知识和医德素养，设计了医学免疫学课程“免疫耐受”部分与轰动一时的“ 哈医大伤人事件”结合的思政案例，显著提高了学生的学习兴趣和思辨能力，取得了很好的教学效果。

关键词：医学免疫学免疫耐受哈医大伤人事件思政案例

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2013-2018年度滨州市B型流感病毒血凝素和神经氨酸酶基因进化特征分析

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中华疾病控制杂志 2020年第2期24卷 151-154页

作者：张丽芳张静孙辉黄莹尹秀升韩锋产滨州医学院生物化学与分子生物学教研室烟台264000 滨州市疾病预防控制中心微生物检验科滨州256600

目的分析滨州市2013-2018监测年度B型流感病毒血凝素(hemagglutinin,HA)、神经氨酸酶(neuraminidase,NA)基因突变及其抗原变异特征。方法采集滨州市2013-2018年的流感监测哨点医院流感样病例(influenza-like illness,ILI)咽拭子标本进... 详细信息

目的分析滨州市2013-2018监测年度B型流感病毒血凝素(hemagglutinin,HA)、神经氨酸酶(neuraminidase,NA)基因突变及其抗原变异特征。方法采集滨州市2013-2018年的流感监测哨点医院流感样病例(influenza-like illness,ILI)咽拭子标本进行病毒分离,选取29株B型流感分离代表毒株进行HA、NA基因序列测定,通过基因分析软件进行同源性比对、构建HA、NA基因进化树。结果 2013-2018各年度B型流感占比分别为47.0%、23.0%、31.0%、7.2%和65.1%,差异有统计学意义(χ~2=1 485.143,P<0.001)。2013-2014年度分离株与当年世界卫生组织推荐的疫苗株匹配度差。2013-2014年度流行的B型流感病毒为Yamagata系HA与Victoria系NA基因的重配株。结论 2013-2018监测年度,滨州市B型流感病毒的进化是通过系间基因重配、不同谱系共流行、连续不断的不同抗原谱系的更替来完成的。

关键词： B型流感病毒血凝素神经氨酸酶变异序列比对

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岩藻多糖体外抗KRV活性初步研究(英文)

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中国海洋药物 2022年第3期41卷 69-74页

作者：吕昌宁孙延龙张敏安琪周雨石管福来刘志军潍坊医学院临床医学院山东潍坊261053 潍坊医学院药学院山东潍坊261053 潍坊医学院形态学实验室山东潍坊261053 潍坊医学院医学微生物学教研室山东潍坊261053

目的研究岩藻多糖体外抗 Kilham rat virus(KRV)病毒的活性以及抑制炎症因子 IL-1、IL-6 的表达。方法 CCK-8 法测得岩藻多糖对大鼠肾细胞(NRK)的半数细胞毒性浓度(CC;);通过细胞病变效应测定药物的抗病毒活性,计算药物的半数抑制浓度(... 详细信息

目的研究岩藻多糖体外抗 Kilham rat virus(KRV)病毒的活性以及抑制炎症因子 IL-1、IL-6 的表达。方法 CCK-8 法测得岩藻多糖对大鼠肾细胞(NRK)的半数细胞毒性浓度(CC;);通过细胞病变效应测定药物的抗病毒活性,计算药物的半数抑制浓度(IC;)以及治疗指数(SI);建立 KRV感染大鼠肾细胞(NRK)细胞模型,设置阴性对照、病毒感染组以及治疗实验组,通过实时荧光定量 PCR 检测病毒以及 IL-1、IL-6 的表达水平。结果 CCK-8 法测得药物的 CC;> 2 500 μg/mL,岩藻多糖的 IC;为(114.8 ± 8.1) μg/mL,SI > 21.78;qPCR 结果表明 KRV 病毒衣壳蛋白 2(VP2)的转录水平实验组较阳性对照组明显降低,且 IL-1、IL-6 的转录水平亦显著降低。结论岩藻多糖具有较小的细胞毒性以及良好的抗 KRV 病毒的效果,并且能够减轻病毒诱导的炎症反应,为防治病毒感染导致的糖尿病提供理论基础。

关键词：岩藻多糖 KRV IL-1 IL-6

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临床宏基因组学应用现状及存在问题分析

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中国微生态学杂志 2021年第5期33卷 594-598页

作者：邱薇钟民涛伦永志莆田学院药学与医学技术学院医学微生态学福建省高校重点实验室福建莆田351100 大连医科大学基础医学院微生物学教研室

众所周知,宏基因组学是一种通过提取样品中微生物的总DNA,构建宏基因组文库,研究环境中全部微生物的遗传组成及其菌落功能的方法。而宏基因组新一代测序(metagenome next-generation sequencing, mNGS)是在宏基因组学基础上进一步发展... 详细信息

众所周知,宏基因组学是一种通过提取样品中微生物的总DNA,构建宏基因组文库,研究环境中全部微生物的遗传组成及其菌落功能的方法。而宏基因组新一代测序(metagenome next-generation sequencing, mNGS)是在宏基因组学基础上进一步发展起来的新一代测序技术,无需对患者标本进行培养,直接分析标本中的微生物DNA或RNA。本文介绍了宏基因组学在临床上的应用,包括传染病的诊断、疾病和健康状态下的微生物组分析、人类宿主反应分析和肿瘤相关病毒及其基因组鉴定,并简要探讨了临床宏基因组学研究中所遇到的挑战及解决方法。

关键词：临床微生物学宏基因组学传染病诊断生物信息学

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