检索结果-内蒙古大学图书馆

解剖学杂志 2008年第1期31卷 25-27页

作者：马朋曹同涛宋晓冬张页滨州医学院生物学教研室滨州256603 北京大学医学部细胞生物学系北京100083

目的:探讨合成紫花茄皂苷对人肝癌细胞株BEL-7402的增殖抑制及凋亡诱导作用。方法:采用酸性磷酸酶(ACP)法检测细胞增殖抑制率;电镜观测BEL-7402细胞形态变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:合成紫花茄皂苷对人肝癌BEL-7402细胞有明显... 详细信息

目的:探讨合成紫花茄皂苷对人肝癌细胞株BEL-7402的增殖抑制及凋亡诱导作用。方法:采用酸性磷酸酶(ACP)法检测细胞增殖抑制率;电镜观测BEL-7402细胞形态变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:合成紫花茄皂苷对人肝癌BEL-7402细胞有明显的增殖抑制作用,其72h的IC50为6·5μg/ml。皂苷可引起细胞形态的明显改变。细胞经皂苷作用6h和12h后,凋亡率显著增加。结论:合成紫花茄皂苷对人肝癌细胞的增殖抑制呈浓度相关性,可诱导肿瘤细胞凋亡。

关键词：紫花茄皂苷细胞增殖细胞凋亡肝癌细胞

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人呼吸道禽流感病毒受体的分布趋势(英文)

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生物化学与生物物理进展 2008年第12期35卷 1387-1393页

作者：张增峰樊晓晖李康生黄楷罗殿中冯振博韦敏怡管轶陈鸿霖张锦霞汕头大学医学院国际感染与免疫研究所汕头515031 香港大学医学院微生物系新发传染病国家重点实验室广西医科大学微生物与免疫学教研室南宁530021 广西医科大学病理学教研室南宁530021

禽类流感病毒和人类流感病毒具有很强的受体识别特异性,分别与唾液酸α-2,3Gal和α-2,6Gal受体分子结合而感染各自的宿主细胞.这种受体结合特异性是流感病毒在禽类和人类之间跨种属传递的主要障碍.应用凝集素组织化学染色技术,探讨人呼... 详细信息

禽类流感病毒和人类流感病毒具有很强的受体识别特异性,分别与唾液酸α-2,3Gal和α-2,6Gal受体分子结合而感染各自的宿主细胞.这种受体结合特异性是流感病毒在禽类和人类之间跨种属传递的主要障碍.应用凝集素组织化学染色技术,探讨人呼吸道各解剖学部位流感病毒唾液酸受体的分布特征.结果显示,唾液酸α-2,3Gal受体,即禽类流感受体,主要分布在下呼吸道的呼吸部即呼吸细支气管和肺泡,而在主气管、支气管和细支气管仅少量分布.相反,人类流感病毒受体,唾液酸α-2,6Gal受体在气管、支气管呈高密度分布,随着支气管分级逐渐降低分布减少,至肺泡分布最少.但比较人呼吸道发育成熟过程中,唾液酸α-2,3Gal和α-2,6Gal受体的表达,未发现明显差别.禽流感H5N1病毒体外感染人呼吸道组织试验结果表明,肺泡上皮较支气管和气管上皮易感染,与唾液酸α-2,3Gal受体分布特点相符合.结果提示,人呼吸道可被禽流感病毒感染,目前H5N1病毒极少发生人传人的特点,可能与个体间上呼吸道唾液酸α-2,3Gal受体表达差异有关.

关键词： A型流感病毒唾液酸 SAα2,6Gal受体 SAα2,3Gal受体 H5N1病毒

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嗜酸乳酸杆菌ATCC4356菌株异源二聚体β-半乳糖苷酶的克隆表达

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微生物学报 2008年第10期48卷 1339-1343页

作者：潘渠李晋川丛延广刘丽娜朱军民胡福泉成都医学院病原教研室成都610083 第三军医大学基础部微生物学教研室重庆400038

嗜酸乳酸杆菌(Lactobacillus acidophilus)的异源二聚体β-半乳糖苷酶属于糖苷水解酶2家族,由两个部分重叠、协同翻译的基因编码(lacL和lacM)。【目的】克隆表达该酶并测定其酶学特性。【方法】参照已全基因组测序的嗜酸乳酸杆菌NCFM菌... 详细信息

嗜酸乳酸杆菌(Lactobacillus acidophilus)的异源二聚体β-半乳糖苷酶属于糖苷水解酶2家族,由两个部分重叠、协同翻译的基因编码(lacL和lacM)。【目的】克隆表达该酶并测定其酶学特性。【方法】参照已全基因组测序的嗜酸乳酸杆菌NCFM菌株,以嗜酸乳酸杆菌ATCC4356菌株基因组为模板,将lacL的RBS到lacM的终止子之间的序列(2834bp)克隆到pQE31质粒上,并电转化JM109菌株。以下列步骤纯化表达产物:硫酸铵分级沉淀、阴离子交换、亲和层析和凝胶排阻层析。以凝胶排阻层析测定纯化酶的天然分子量,以邻硝基苯基半乳糖为底物测定其酶学特性。【结果】实现了该酶在JM109菌株中的可溶性表达。其氨基酸序列有一处不同于嗜酸乳酸杆菌NCFM菌株,即其大亚基(LacL)的第512位氨基酸不是组氨酸而是精氨酸。纯化酶比活力为226U/mg蛋白,天然分子量为96.3±4.6kDa,最适pH为7,最适温度为49℃,Km和Vmax值分别是:2.18±0.12mmol/L,273±5U/mg蛋白。

关键词：嗜酸乳酸杆菌 β-半乳糖苷酶克隆表达纯化 Km值

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甲型流感病毒M2e与CtB基因融合表达及其免疫特性初步研究

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细胞与分子免疫学杂志 2008年第3期24卷 263-266页

作者：杨晓芳江滟李婉宜邝玉蒋忠华王丰平李明远四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室四川成都610041

目的:构建真核表达重组质粒pcDNA 3.1a(+)-M2e/CtB,并初步研究其在NIH3T3细胞中的表达特性及免疫特性。方法:重叠PCR法扩增甲型流感病毒M2e基因和霍乱毒素CtB基因,将扩增得到的融合基因片段M2e-CtB定向克隆入真核表达载体pcDNA 3.1a(+)... 详细信息

目的:构建真核表达重组质粒pcDNA 3.1a(+)-M2e/CtB,并初步研究其在NIH3T3细胞中的表达特性及免疫特性。方法:重叠PCR法扩增甲型流感病毒M2e基因和霍乱毒素CtB基因,将扩增得到的融合基因片段M2e-CtB定向克隆入真核表达载体pcDNA 3.1a(+)中,再转化*** JM109。将酶切鉴定、PCR扩增及序列鉴定正确的重组质粒命名为pcDNA3.1a(+)-M2e/CtB。用KEGEN TRANSⅢ阳离子聚合物将重组质粒pcDNA 3.1a(+)-M2e/CtB转染NIH3T3细胞,经免疫荧光、RT-PCR产物序列分析、Western blot检测其稳定表达产物。结果:重组质粒pcDNA 3.1a(+)-M2e/CtB含完整的M2e和CtB基因,与相对应基因的序列同源性分别为100%。重组质粒转染NIH3T3细胞后获得了有效表达,并且稳筛株细胞裂解物和上清均能用抗霍乱毒素抗体和抗流感病毒抗体检测到Mr约18000的蛋白条带。结论:成功构建了真核表达重组质粒pcDNA 3.1a(+)-M2e/CtB,初步证明其在体外表达的重组蛋白可分泌至胞外,且有M2e和CTB的双特异反应原性和免疫原性,为流感病毒核酸疫苗的进一步研究奠定了坚实基础。

关键词：甲型流感病毒 M2e 黏膜免疫佐剂霍乱毒素B亚单位融合蛋白

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贵州地区汉族结核病患者HLA-DM基因多态性的研究

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免疫学杂志 2008年第6期24卷 714-715页

作者：蒋红梅王永霞贵阳医学院临床微生物学和免疫学教研室贵阳550004

HLA-DM基因是人类HLA-Ⅱ类基因区的一种非典型基因,分为DMA和DMB两个区,目前已明确的DMA等位基因有4个(DMA*0101－0104),DMB等位基因有5个(DMB*0101－0105)。HLA-Ⅱ类分子依赖途径是结核分枝杆菌抗原的主要递呈方式,HLA-DM分子作为经典... 详细信息

HLA-DM基因是人类HLA-Ⅱ类基因区的一种非典型基因,分为DMA和DMB两个区,目前已明确的DMA等位基因有4个(DMA*0101－0104),DMB等位基因有5个(DMB*0101－0105)。HLA-Ⅱ类分子依赖途径是结核分枝杆菌抗原的主要递呈方式,HLA-DM分子作为经典Ⅱ类分子的分子伴侣,其基因多态性是否影响结核抗原的递呈值得研究。[第一段]

关键词： HLA—DM 遗传多态性结核病 PER—RFLP

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HPV6b结构蛋白L1和沙眼衣原体CTL表位嵌合病毒样颗粒在昆虫细胞中的表达

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中国人兽共患病学报 2008年第12期24卷 1095-1099页

作者：黄秋穗朱珊丽侯晓红王乐丹赖娟张丽芳温州医学院微生物和免疫教研室温州医学院附属第二医院妇产科温州325053

目的为研制能同时防治人乳头瘤病毒(HPV)和沙眼衣原体(Ct)的嵌合疫苗。方法将Ct主要外膜蛋白(MOMP)插入到HPV衣壳蛋白L1羧基端,通过PCR、酶切、连接等方法构建了杆状病毒表达载体,进一步在大肠杆菌中组装成重组杆状病毒,经感染昆虫细胞... 详细信息

目的为研制能同时防治人乳头瘤病毒(HPV)和沙眼衣原体(Ct)的嵌合疫苗。方法将Ct主要外膜蛋白(MOMP)插入到HPV衣壳蛋白L1羧基端,通过PCR、酶切、连接等方法构建了杆状病毒表达载体,进一步在大肠杆菌中组装成重组杆状病毒,经感染昆虫细胞表达嵌合病毒样颗粒,并经SDS-PAGE电泳和Westernblot分析鉴定,电镜负染。结果嵌合蛋白HPV6bL1/CtMOMP249-268在昆虫细胞中得到了表达,表达产物的相对分子质量为56000,与HPV6bL1单抗产生特异性反应,电子显微镜观察到病毒样颗粒形成。结论在昆虫细胞中表达的含HPV6bL1和CtCTL表位的嵌合蛋白,能自行组装成病毒样颗粒,为人乳头瘤病毒和沙眼衣原体嵌合疫苗的研究奠定基础。

关键词：人乳头瘤病毒沙眼衣原体嵌合病毒样颗粒

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副粘病毒Tianjin株NP、P、M及L蛋白的生物信息学分析

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微生物学通报 2008年第9期35卷 1433-1438页

作者：石立莹李梅李晓眠何健民袁立军天津医科大学基础医学院微生物学教研室天津300070

为了进一步明确副粘病毒Tianjin株的来源和种系进化地位,探讨其高致病性的机制。对Tianjin株NP、P、M及L蛋白进行了生物信息学分析。进化树显示：Tianjin株属于副粘病毒亚科呼吸道病毒属,且很可能为仙台病毒新的基因型。相似性比较表明,... 详细信息

为了进一步明确副粘病毒Tianjin株的来源和种系进化地位,探讨其高致病性的机制。对Tianjin株NP、P、M及L蛋白进行了生物信息学分析。进化树显示：Tianjin株属于副粘病毒亚科呼吸道病毒属,且很可能为仙台病毒新的基因型。相似性比较表明,P蛋白变异最大,相似性仅为78.7%～91.9%;L蛋白相似性最高,为96.0%～98.0%。序列比对显示：NP蛋白氨基酸序列中存在15个独特的变异位点,P蛋白存在29个,M蛋白存在6个,L蛋白存在29个。这些独特变异位点的存在很可能是导致Tianjin株在宿主来源和致病特点等方面与已知仙台病毒株具有较大差异的原因。

关键词：副粘病毒仙台病毒狨猴生物信息学

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血管活性肠肽对肺炎支原体诱导的人肺上皮细胞分泌TNF-α的影响

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武汉大学学报（医学版） 2008年第6期29卷 747-750页

作者：张海红刘先洲饶帮忠汤纪路白瑞珍宗润芝武汉大学医学院微生物学教研室湖北武汉430071

目的:观察肺炎支原体(Mp)体外诱导A549细胞(人肺腺癌上皮细胞株)产生肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平以及血管活性肠肽(VIP)对TNF-α产生水平的影响。方法:将A549细胞与不同感染复数和不同刺激时间的Mp共同孵育,用ELISA法检测细胞培养上... 详细信息

目的:观察肺炎支原体(Mp)体外诱导A549细胞(人肺腺癌上皮细胞株)产生肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平以及血管活性肠肽(VIP)对TNF-α产生水平的影响。方法:将A549细胞与不同感染复数和不同刺激时间的Mp共同孵育,用ELISA法检测细胞培养上清液中TNF-α的含量;用不同浓度的VIP预处理A549细胞,然后再以Mp诱导,测定细胞培养上清液中TNF-α的含量。结果:A549细胞经Mp刺激后,TNF-α的产生水平明显高于正常细胞对照组(P<0.05),且TNF-α的产生水平与Mp的感染复数和感染时间具有依赖性。VIP不同浓度的干预,A549细胞TNF-α的分泌浓度较无VIP干预组有不同程度的降低(P<0.05)。结论:Mp可诱导A549细胞产生TNF-α,VIP可有效降低Mp诱导的TNF-α的产生,提示VIP对肺上皮细胞有直接抗炎作用。

关键词：肺炎支原体 A549细胞肿瘤坏死因子-α 血管活性肠肽

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EGFR和LRP表达与卵巢癌化疗耐药及预后的关系

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癌症 2008年第12期27卷 1331-1336页

作者：张晶陈爱平王斌赵淑萍刘丽芝戴淑真青岛大学医学院附属医院妇科山东青岛266003 青岛大学医学院微生物学教研室山东青岛266003

背景与目的:表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的异常表达和活化能引起肿瘤细胞化疗耐药的产生,与卵巢癌化疗后复发及预后密切相关。肺耐药蛋白(lung resistance protein,LRP)是一种主要介导铂类等化疗药物耐药... 详细信息

背景与目的:表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的异常表达和活化能引起肿瘤细胞化疗耐药的产生,与卵巢癌化疗后复发及预后密切相关。肺耐药蛋白(lung resistance protein,LRP)是一种主要介导铂类等化疗药物耐药的多药耐药蛋白。研究表明,LRP是预测卵巢癌化疗敏感的独立预后因素。本研究探讨EGFR和LRP表达与卵巢癌化疗耐药及预后的关系。方法:采用免疫组化PV-6000二步法,检测76例恶性卵巢肿瘤、9例卵巢交界性肿瘤、17例卵巢良性肿瘤和15例卵巢正常组织中EGFR和LRP的表达,分析EGFR和LRP表达与卵巢癌化疗疗效及患者术后生存时间的关系。结果:卵巢癌组织中EGFR和LRP的阳性率分别为73.68%和71.79%,均显著高于正常卵巢组织和良性肿瘤组织(P<0.01);EGFR高表达于Ⅲ～Ⅳ期、低分化和有腹水的卵巢癌组织中(P<0.05)。EGFR和LRP阳性者近期化疗有效率分别为57.14%和53.70%,低于阴性者(P<0.05);化疗耐药型卵巢癌患者EGFR和LRP阳性率分别为92.86%和85.71%,高于化疗敏感型(P<0.05)。生存分析表明,卵巢癌患者3年生存率为53.00%。EGFR、LRP阳性和近期化疗疗效无效者术后生存时间短(P<0.01)。结论:EGFR和LRP可作为预测卵巢癌化疗耐药及预后的指标。

关键词：卵巢肿瘤 EGFR LRP 化学疗法耐药预后

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沙蚕消化道细菌D2胞外蛋白酶的分离纯化及其性质

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中国生物制品学杂志 2008年第2期21卷 93-98页

作者：代玉梅闫志勇王斌钱冬萌宋旭霞丁守怡刘明军张艳丽青岛大学医学院微生物学教研室青岛市医药生物技术重点实验室青岛266071

目的分离纯化沙蚕消化道菌D2胞外蛋白酶,并对其性质进行分析。方法收集48 h发酵液上清,经80%饱和硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose阴离子交换层析、Superdex G-75凝胶过滤层析逐步纯化D2蛋白酶,分析其酶学性质,并用ESI-MS/MS测定其酶解后的... 详细信息

目的分离纯化沙蚕消化道菌D2胞外蛋白酶,并对其性质进行分析。方法收集48 h发酵液上清,经80%饱和硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose阴离子交换层析、Superdex G-75凝胶过滤层析逐步纯化D2蛋白酶,分析其酶学性质,并用ESI-MS/MS测定其酶解后的部分氨基酸序列。结果经纯化,得到电泳纯的D2蛋白酶,纯化倍数为4.9倍,活性回收率为33%,相对分子质量约42 000,纯度大于99%;最适作用温度为60℃,最适pH为9,在pH6-11及0-60℃具有较好的稳定性,水解酪蛋白的Km值为2.44 mg/ml;Cu2＋、Ca2＋、Mg2＋、K＋等金属离子对酶活力有明显促进作用,EDTA和PMSF对酶活力有强烈抑制作用;该酶对尿素、SDS、DTT等变性剂有较好的耐受性,其两个内部肽段经质谱测序,序列分别为AHGFLPLTK和APSATG-GSALYPLEFVVGK。结论该酶为一高温碱性丝氨酸蛋白酶,具有较高的工业开发价值和较大的应用潜力。

关键词：双齿围沙蛋消化道蛋白酶纯化性质

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