检索结果-内蒙古大学图书馆

中华检验医学杂志 2007年第6期30卷 670-674页

作者：于维林李慧王笑峰青岛大学医学院附属医院检验科 266021 青岛大学医学院微生物教研室

目的构建人疱疹病毒8型(HHV8)小衣壳蛋白 ORF65编码基因的原核表达载体,并进行原核表达。方法提取 BCBL-1细胞(HHV8阳性而 EBV 阴性)DNA,PCR 技术扩增 HHV8ORF65基因,目的基因与原核表达载体 pThioHis A 连接后,转化宿主菌 Escherichia ... 详细信息

目的构建人疱疹病毒8型(HHV8)小衣壳蛋白 ORF65编码基因的原核表达载体,并进行原核表达。方法提取 BCBL-1细胞(HHV8阳性而 EBV 阴性)DNA,PCR 技术扩增 HHV8ORF65基因,目的基因与原核表达载体 pThioHis A 连接后,转化宿主菌 Escherichia coli BL21,异丙基硫代-D-乳糖苷(IPTG)诱导融合蛋白表达,经带有6个组氨酸标签的亲和层析柱纯化获得重组抗原。重组蛋白电泳后转至聚偏氟乙烯(PVDF)膜,与 HHV8阳性血清进行免疫印迹反应。对相关患者进行检测,并与美国 Biotrin 公司生产的 HHV8 IgM 和 HHV8 IgG 抗体间接荧光抗体试验(IFA)检测试剂盒和德国 Qiagen 公司 ELISA 检测试剂盒进行比较。结果 DNA 序列分析表明目的基因序列与HHV8标准毒株相应序列完全一致,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酸胺凝胶电泳(SDS-PAGE)电泳可观察到相对分子质量为31 500的融合蛋白的表达,免疫印迹反应显示重组抗原具有较高的特异性。基因工程抗原的各项技术指标与 Biotrin 公司和 Qiagen 公司检测试剂盒有较好的符合率,对临床标本的检测表明该试剂盒简单、实用、结果稳定可靠。结论 HHV8重组抗原具有较好的抗原性,进一步完善后可用于 HHV8抗体的检测。

关键词：人疱疹病毒8型衣壳蛋白质类原核表达

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人GM-CSF基因真核表达载体构建与表达

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中山大学学报（医学科学版） 2007年第5期28卷 590-593,597页

作者：卢燕茹江振友暨南大学医学院微生物学与免疫学教研室广东广州510632

【目的】构建以基因佐剂hGM-CSF基因为基础的真核表达质粒pIGM-CSF,并在宫颈癌细胞HeLa中表达与鉴定。【方法】采用聚合酶链反应从载体pORF-hGM-CSF中,扩增出hGM-CSF基因,克隆到双顺反子真核表达载体pIRES的多克隆位点B(MCSB)中,构建pIG... 详细信息

【目的】构建以基因佐剂hGM-CSF基因为基础的真核表达质粒pIGM-CSF,并在宫颈癌细胞HeLa中表达与鉴定。【方法】采用聚合酶链反应从载体pORF-hGM-CSF中,扩增出hGM-CSF基因,克隆到双顺反子真核表达载体pIRES的多克隆位点B(MCSB)中,构建pIGM-CSF真核表达载体。然后采用脂质体转染法将其转染HeLa细胞,用RT-PCR在RNA水平和ELISA在蛋白水平检测其在真核细胞中的表达。【结果】所克隆hGM-CSF基因片段经测序完全正确;重组质粒转染Hela细胞后,检测有hGM-CSF表达。【结论】成功构建含基因佐剂真核表达载体pIGM-CSF,并在宫颈癌细胞中能有效表达,为继续克隆目的抗原从而构建双顺反子真核表达质粒奠定了基础。

关键词：真核表达载体 hGM-CSF 基因佐剂双顺反子

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沙蚕消化道产蛋白酶菌D2株的筛选及其酶学性质

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中国生物制品学杂志 2007年第7期20卷 493-496页

作者：代玉梅闫志勇王斌钱冬萌宋旭霞丁守怡刘明军张艳丽青岛大学医学院微生物学教研室青岛市医药生物技术重点实验室

目的从海洋生物双齿围沙蚕消化道筛选产蛋白酶菌株,并对其胞外蛋白酶的性质进行分析。方法用脱脂奶粉平板溶圈法及改良Lowry法进行产蛋白酶菌株的筛选和蛋白酶活力测定;Bradford法测定蛋白含量;UVP GDS8000型凝胶成像系统和VisionWorks... 详细信息

目的从海洋生物双齿围沙蚕消化道筛选产蛋白酶菌株,并对其胞外蛋白酶的性质进行分析。方法用脱脂奶粉平板溶圈法及改良Lowry法进行产蛋白酶菌株的筛选和蛋白酶活力测定;Bradford法测定蛋白含量;UVP GDS8000型凝胶成像系统和VisionWorks、Bandscan4·03软件进行相对分子质量和纯度分析,并对酶的各项性质进行检测。结果筛选出高蛋白水解活性菌株D2,其胞外蛋白酶比活性为156·0U/mg,相对分子质量约为42000,纯度大于97%,最适作用温度60℃,最适pH为9,在pH6～10及0～55℃具有较好的稳定性。结论D2株分泌的胞外蛋白酶有望成为一种新型的海洋微生物蛋白酶资源。

关键词：双齿围沙蚕胞外蛋白酶筛选酶学性质

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二级结构模拟辅助MTB脱氧核酶潜在作用靶点预测

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微生物学通报 2007年第2期34卷 287-290页

作者：钱中清吕静竹安徽理工大学医学院病原微生物与免疫学教研室生物化学教研室淮南232001

异柠檬酸裂解酶(ICL)是结核病病原体结核分枝杆菌(MTB)乙醛酸循环中的关键酶,可作为抗结核新型药物治疗的潜在靶点。脱氧核酶(DRz)是一类独特的、具备酶活性的单链小分子DNA。实验针对MTBICL基因mRNA片段,通过二级结构模拟预测理论上适... 详细信息

异柠檬酸裂解酶(ICL)是结核病病原体结核分枝杆菌(MTB)乙醛酸循环中的关键酶,可作为抗结核新型药物治疗的潜在靶点。脱氧核酶(DRz)是一类独特的、具备酶活性的单链小分子DNA。实验针对MTBICL基因mRNA片段,通过二级结构模拟预测理论上适合与不适合DRz10～23作用的位点,据此设计针对ICL基因mRNA片段两种不同位点的DRz,并在体外水平上观察两种DRz对MTBICL基因mRNA片段的切割作用,以此验证底物二级结构模拟辅助MTB脱氧核酶潜在作用靶点预测的可行性。结果显示,底物二级结构模拟能够辅助预测MTB脱氧核酶潜在作用靶点,为探讨其作为抗结核病基因药物的可能提供实验基础。

关键词：二级结构模拟结核分枝杆菌脱氧核酶 ICL基因

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老年住院患者医院感染相关因素调查

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现代预防医学 2007年第7期34卷 1379-1380+1382页

作者：林平浙江台州学院医学院微生物学教研室椒江区318000

[目的]了解老年患者医院感染的高危因素,为控制老年患者医院感染提供依据。[方法]采用回顾性调查,对2002～2004年住院病例中﹥60岁老年患者医院感染病例进行统计分析。[结果]3年间老年患者发生医院感染835例,平均感染发生率8.40%,感染例... 详细信息

[目的]了解老年患者医院感染的高危因素,为控制老年患者医院感染提供依据。[方法]采用回顾性调查,对2002～2004年住院病例中﹥60岁老年患者医院感染病例进行统计分析。[结果]3年间老年患者发生医院感染835例,平均感染发生率8.40%,感染例次1 292例,平均感染例次率12.99%;感染的主要部位是呼吸道,其次是泌尿道;医院感染多发生在住院后3～4周,占25.51%;医院感染老年患者原发疾病以恶性肿瘤的发病率最高,占36.17%,其次是慢性支气管炎、脑血管意外、糖尿病;大多老年患者入院后使用过各种侵入性诊疗;抗生素使用率达89.82%,三联及以上应用占59.20%。[结论]高龄、侵入性诊疗、不合理抗生素使用、免疫功能低下及某些原发疾病是老年患者发生医院感染的高危因素。

关键词：老年患者医院感染危险因素分析

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沙眼衣原体感染对树突状细胞功能的影响

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山东大学学报（医学版） 2007年第10期45卷 973-976,980页

作者：赵红梅赵蔚明于修平赵蕾王红郑燕吕慧李靖刘娟于晗山东大学医学院微生物学教研室济南250012

目的探讨鼠型沙眼衣原体(Chlamydia muridarum,***)在树突状细胞(Dendritic Cell,DC)内的存活情况以及对DC功能的影响,为衣原体致病机制的研究提供实验依据。方法诱导培养BALB/c小鼠骨髓来源的DC。用***感染DC,分别在247、2 h固定细胞... 详细信息

目的探讨鼠型沙眼衣原体(Chlamydia muridarum,***)在树突状细胞(Dendritic Cell,DC)内的存活情况以及对DC功能的影响,为衣原体致病机制的研究提供实验依据。方法诱导培养BALB/c小鼠骨髓来源的DC。用***感染DC,分别在247、2 h固定细胞进行衣原体包涵体染色;采用ELISA方法检测感染DC上清中的细胞因子;感染DC与T细胞共孵育48 h,CCK-8检测T细胞增殖。结果***-darum能够感染骨髓来源DC,衣原体在DC中生长缓慢,形成非典型的包涵体;感染后的DC分泌较高水平的IL-12和低水平的IL-10;并且能够刺激T细胞增殖,说明衣原体感染的DC仍然具有抗原递呈能力。结论成功建立***感染DC的体外细胞模型,且沙眼衣原体感染对DC抗原递呈功能没有造成明显影响。

关键词：衣原体沙眼树突细胞小鼠近交BALBC

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骨髓间充质干细胞分化神经元后多巴胺D2受体的表达

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解剖学杂志 2007年第4期30卷 431-434页

作者：鄢文海吴素霞柴立辉陈中德韩雪飞许燕邢莹郑州大学医学院干细胞研究中心郑州大学医学院病理生理学教研室郑州450052 郑州大学医学院微生物学与免疫学教研室郑州450052 郑州大学医学院微生物学与免疫学教研室

目的:检测骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)分化为神经元后多巴胺D2受体(dopamine receptor D2,DRD2)的表达,探讨体外分化神经元的基本功能。方法:采用密度梯度离心法和贴壁培养的方法分离纯化MSCs,流式细胞仪检测MSCs表... 详细信息

目的:检测骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)分化为神经元后多巴胺D2受体(dopamine receptor D2,DRD2)的表达,探讨体外分化神经元的基本功能。方法:采用密度梯度离心法和贴壁培养的方法分离纯化MSCs,流式细胞仪检测MSCs表面标志,DMSO/BHA/FSK作为诱导剂来诱导分化;硝酸银染色法检测神经纤维丝,RT-PCR和免疫细胞化学法检测NSE、DRD2 mRNA及蛋白的表达情况。结果:分离纯化的MSCs经流式细胞仪检测显示CD34、CD45表达阴性;间充质干细胞相对特异性标志CD44强阳性表达;加入诱导剂后,MSCs形成多极神经元的形态。银染色法显示神经纤维丝阳性表达,RT-PCR显示诱导后细胞表达NSE、DRD2 mRNA,免疫组化显示NSE、DRD2蛋白表达阳性。结论:MSCs分化为神经元后可以表达神经受体DRD2。

关键词：骨髓间充质干细胞细胞分化神经元多巴胺D2受体

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人HIF-1α真核表达载体质粒的建立和鉴定

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广西医科大学学报 2007年第4期24卷 514-516页

作者：陈森洲廖振林黄大林王险峰袁桂峰裴蕾桂林医学院微生物学与免疫学教研室桂林541004 华南农业大学微生物学教研室广州510642

目的:建立低氧诱导因子lα(HIF-1α)真核表达质粒。方法:从人胎肝细胞中提取总RNA,RT-PCR法反转录合成HIF-1α cDNA,与T载体连接后转化感受态细胞TOP10,测序正确后克隆入pcDNA3真核表达载体,酶切鉴定重组子。结果:获得人HIF-1α真核表... 详细信息

目的:建立低氧诱导因子lα(HIF-1α)真核表达质粒。方法:从人胎肝细胞中提取总RNA,RT-PCR法反转录合成HIF-1α cDNA,与T载体连接后转化感受态细胞TOP10,测序正确后克隆入pcDNA3真核表达载体,酶切鉴定重组子。结果:获得人HIF-1α真核表达载体质粒,酶切及测序结果证明表达质粒的DNA序列完全正确。结论:成功克隆和建立人HIF-lα基因真核表达质粒,为进一步研究HIF-1α对风湿性疾病的靶向治疗奠定了基础。

关键词：低氧诱导因子-1 cDNA克隆质粒构建风湿性疾病

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丝裂原激活蛋白激酶在内毒素脂多糖诱导大鼠施万细胞一氧化氮合酶表达中的作用

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解剖学报 2007年第6期38卷 660-664页

作者：沈爱国王海波秦永伟程纯牛淑琼南通大学神经再生重点实验室南通大学医学院微生物和免疫学教研室南通226001

目的主要研究丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)信号途径在内毒素脂多糖(LPS)诱导大鼠施万细胞(Scs)诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因表达和一氧化氮(NO)产生中的作用。方法先用3种MAPK的特异性抑制剂PD98059(ERK1/2)、SB202190(P38MAPK)和SP600125... 详细信息

目的主要研究丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)信号途径在内毒素脂多糖(LPS)诱导大鼠施万细胞(Scs)诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因表达和一氧化氮(NO)产生中的作用。方法先用3种MAPK的特异性抑制剂PD98059(ERK1/2)、SB202190(P38MAPK)和SP600125(JNK)以不同浓度预处理细胞1h,再用LPS作用施万细胞4h后,用RT-PCR检测细胞中iNOS mRNA、IL-6mRNA和TNF-αmRNA的表达;Western blotting观察iNOS蛋白水平的表达变化;通过测定细胞培养液中亚硝酸盐含量来观察NO的水平。结果LPS可显著激活施万细胞中MAPK信号通路诱导iNOS表达。MAPK的抑制剂预处理细胞后,可显著抑制细胞iNOS mRNA和NO的合成及IL-6mRNA和TNF-αmRNA的表达。结论MAPK信号通路参与了LPS介导的大鼠施万细胞iNOS基因表达和NO产生,通过阻断细胞内信号转导通路来减少iNOS及其他细胞因子的产生,为抑制周围神经损伤后的炎症以及免疫反应发生提供了一条新思路。

关键词：丝裂原激活蛋白激酶内毒素脂多糖一氧化氮合酶施万细胞 RT-PCR Western blotting 大鼠

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ANP与5-HT在胃肠道中的定位及相互关系的研究

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山东医药 2007年第4期47卷 76-77页

作者：潘理会李春辉承德医学院基础部微生物教研室河北承德067000 承德医学院附属医院

自1981年发现心房钠尿肽(ANP)以来,目前钠尿肽(NP)家族已有六大成员,即ANP、BNP、CNP、DNP、VNP、MNP。NP家族成员共同的结构特征是由17个氨基酸组成环形结构,其共有的生理学作用是利尿、利钠、舒张血管、降低血压和调节电解质平衡。Vuo... 详细信息

自1981年发现心房钠尿肽(ANP)以来,目前钠尿肽(NP)家族已有六大成员,即ANP、BNP、CNP、DNP、VNP、MNP。NP家族成员共同的结构特征是由17个氨基酸组成环形结构,其共有的生理学作用是利尿、利钠、舒张血管、降低血压和调节电解质平衡。Vuolteenaho等首次在大鼠的胃和小肠内发现ANP的免疫反应物质,以后相继在大鼠的大肠,豚鼠的胃、小肠、结肠以及人的胃、空肠、回肠、结肠和直肠等组织中也发现有ANP的免疫反应物质,并在大鼠的小肠微绒毛、空肠、回肠上皮细胞中发现ANP受体。随着研究的深入,人们发现胃肠道中5-羟色胺(5-HT)和ANP有密不可分的关系。现将其研究现状综述如下。[第一段]

关键词：心房钠尿肽 5-羟色胺胃肠道

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