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靶向ST6GalⅠ的siRNA与ASO联合应用对宫颈癌细胞转移能力的影响

四川大学学报（医学版） 2007年第2期38卷 217-221页

作者：苑天红李明远李婉宜李虹蒋忠华四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室成都610041

目的探讨人α2,6-唾液酸转移酶(ST6GalⅠ)小分子干扰RNA(siRNA)及其与反义寡核苷酸(ASO)联合应用对ST6GalⅠ高表达的宫颈癌HeLa细胞的粘附和侵袭力的影响。方法设计并合成靶向ST6GalⅠ的siRNA及ASO,用脂质体Lipofectamine 2000包裹后转... 详细信息

目的探讨人α2,6-唾液酸转移酶(ST6GalⅠ)小分子干扰RNA(siRNA)及其与反义寡核苷酸(ASO)联合应用对ST6GalⅠ高表达的宫颈癌HeLa细胞的粘附和侵袭力的影响。方法设计并合成靶向ST6GalⅠ的siRNA及ASO,用脂质体Lipofectamine 2000包裹后转染HeLa细胞。实验分为空白对照组、脂质体对照组、siRNA组、ASO1组(与siRNA相同靶点)、ASO2组(与siRNA不同靶点)、siRNA+ASO1组及siRNA+ASO2组,用RT-PCR测定细胞中ST6GalⅠ mRNA水平,流式细胞仪检测细胞表面α2,6-唾液酸含量,分别用CytoMatrixTM细胞粘附试剂盒及细胞侵袭分析试剂盒,检测细胞对细胞外基质(ECM)的粘附与侵袭力。结果转染后各实验组细胞的ST6GalⅠ mRNA表达水平、细胞表面α2,6-唾液酸含量及细胞对ECM的粘附与侵袭力均低于空白对照组及脂质体对照组(P均<0.05),以siRNA+ASO2组调低作用最明显。其中siRNA组细胞的ST6GalⅠ mRNA表达水平(0.55±0.08)、细胞表面α2,6-唾液酸含量(39.27±9.23)分别与siRNA+ASO1组(0.54±0.09、38.27±7.74)比较,差异均无统计学意义,与siRNA+ASO2组(0.33±0.09、9.10±0.40)比较,差异有统计学意义(P均<0.05);siRNA组与siRNA+ASO1组比较,细胞对ECM的粘附与侵袭力差异均无统计学意义,而siRNA+ASO2组细胞对ECM的粘附与侵袭力较siRNA组降低(P均<0.05)。结论化学合成的靶向ST6GalⅠ的siRNA能够下调HeLa细胞中ST6GalⅠ基因的表达,继而降低细胞对ECM的粘附和侵袭力,并且与不同靶点的ASO联合应用具有相加和协同效应。

关键词： siRNA 反义寡核苷酸唾液酸转移酶宫颈肿瘤转移

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甲型流感病毒NP基因真核载体的构建及初步表达

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中国人兽共患病学报 2007年第4期23卷 366-369页

作者：钟利李婉宜李明远李虹张卫东蒋忠华四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室成都610041

目的构建甲型流感病毒A/PR/8/34(H1N1)NP基因的真核表达载体,转染HEK293细胞,检测其表达情况。方法采用RT-PCR技术克隆甲型流感病毒株NP基因,将克隆的片段插入真核表达载体pcDNA3.1(+)。经酶切、PCR和测序鉴定后,构建好的pcDNA3.1(+)/N... 详细信息

目的构建甲型流感病毒A/PR/8/34(H1N1)NP基因的真核表达载体,转染HEK293细胞,检测其表达情况。方法采用RT-PCR技术克隆甲型流感病毒株NP基因,将克隆的片段插入真核表达载体pcDNA3.1(+)。经酶切、PCR和测序鉴定后,构建好的pcDNA3.1(+)/NP用脂质体转染法转染HEK293细胞,通过免疫荧光技术检测其目的蛋白的瞬时表达。结果RT-PCR扩增到NP基因,插入真核表达载体pcDNA3.1(+),转染HEK293后经免疫荧光技术检测到目的蛋白的表达。结论本实验构建的甲型流感病毒NP部分基因序列的真核表达载体,为深入研究流感病毒核衣壳蛋白和有效的核酸疫苗奠定了基础。

关键词：甲型流感病毒 NP基因 pcDNA3.1(+) 免疫荧光技术

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我国高校艾滋病教育课程开设情况调查

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中国公共卫生 2007年第2期23卷 187-188页

作者：肖丽君赵恩宏闫凤霞吴杰王岩承德医学院免疫微生物教研室河北承德067000 承德医学院附属医院承德医学院

目的调查我国高校艾滋病教育课程开设情况,为建立适合我国艾滋病教育模式提供依据。方法随机抽取我国21个省、直辖市的4l所高校进行问卷调查,对调查结果进行统计分析。结果绝大多数高校尚未正式开设艾滋病教育课程,大部分被调查者认为... 详细信息

目的调查我国高校艾滋病教育课程开设情况,为建立适合我国艾滋病教育模式提供依据。方法随机抽取我国21个省、直辖市的4l所高校进行问卷调查,对调查结果进行统计分析。结果绝大多数高校尚未正式开设艾滋病教育课程,大部分被调查者认为高校有必要以一定学时将艾滋病教育课程正式纳入教学计划并配以相应的教材和专业教师;师资来源被认为是艾滋病教育课程开设面临的最大困难。结论在我国高校开设艾滋病教育课程具有重要性和紧迫性,相关部门应予以重视。

关键词：高校艾滋病教育课程

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海藻糖高产株Brevibacterium sp SY361海藻糖磷酸化酶(EC2.4.1.64)的纯化

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苏州大学学报（医学版） 2007年第1期27卷 69-71页

作者：王蕾黄瑞顾冠彬万海燕苏州大学医学院微生物学教研室江苏苏州215123

目的研究分离纯化海藻糖高产株Brevibacterium sp SY361中海藻糖磷酸化酶的工艺,获得高纯度的海藻糖磷酸化酶。方法大量培养细菌Brevibacterium sp SY361,超声粉碎细胞,通过硫酸铵分级沉淀、DEAE-SephadexA-25柱层析和Sephadex G-200凝... 详细信息

目的研究分离纯化海藻糖高产株Brevibacterium sp SY361中海藻糖磷酸化酶的工艺,获得高纯度的海藻糖磷酸化酶。方法大量培养细菌Brevibacterium sp SY361,超声粉碎细胞,通过硫酸铵分级沉淀、DEAE-SephadexA-25柱层析和Sephadex G-200凝胶过滤等步骤纯化其海藻糖磷酸化酶,并通过SDS-PAGE检测纯化效果。结果经纯化后的海藻糖磷酸化酶纯度提高了35.6倍,比活力达到7.48U/mg,SDS-PAGE呈1条带。结论纯化后的海藻糖磷酸化酶已达到纯度要求,可用于酶性质的研究。

关键词：海藻糖磷酸化酶 Brevibacterium sp SY361 纯化

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人乳头瘤病毒结构蛋白L1与白色念珠菌甘露糖蛋白CTL表位嵌合基因在昆虫细胞中的表达

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中国生物制品学杂志 2007年第6期20卷 393-396页

作者：朱珊丽侯晓红欧琴陈韶董海艳林巧爱张丽芳温州医学院微生物学与免疫学教研室温州325000 温州医学院附属二院妇产科温州325000

目的构建携带人乳头瘤病毒(HPV)结构蛋白L1和白色念珠菌甘露糖蛋白(CaMp65)细胞毒性T细胞表位(CTL)基因的重组质粒,并在杆状病毒-昆虫细胞系统中进行表达。方法分别设计包含HPV6bL1和CaMp65CTL145-153的引物,经PCR扩增嵌合基因HPV6bL1/C... 详细信息

目的构建携带人乳头瘤病毒(HPV)结构蛋白L1和白色念珠菌甘露糖蛋白(CaMp65)细胞毒性T细胞表位(CTL)基因的重组质粒,并在杆状病毒-昆虫细胞系统中进行表达。方法分别设计包含HPV6bL1和CaMp65CTL145-153的引物,经PCR扩增嵌合基因HPV6bL1/CaMp65CTL145-153,并进一步将其插入杆状病毒表达载体pFastBacTM1。在***10Bac中组装成重组杆状病毒,在昆虫细胞sf-9中表达嵌合蛋白,并经SDS-PAGE和Westernblot分析鉴定。结果HPV6bL1/CaMp65CTL145-153嵌合蛋白在昆虫细胞sf-9中得到了表达,表达产物的相对分子质量为56000,与HPV6bL1单抗能产生特异性反应。结论HPV6bL1/CaMp65CTL145-153嵌合蛋白在杆状病毒-昆虫细胞系统中得到了成功表达,为防治HPV和白色念珠菌感染的基因工程疫苗的研究奠定了基础。

关键词：人乳头瘤病毒白色念珠菌嵌合基因昆虫细胞

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大鼠脑损伤后SSeCKS的表达变化

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中国临床解剖学杂志 2007年第6期25卷 656-659页

作者：沈爱国肖锋季玉红刘海鸥孙琳琳秦婧杨君伶南通大学江苏省神经再生重点实验室南通大学医学院微生物与免疫教研室南通大学医学院病理教研室南通226001

目的:探讨大鼠脑损伤后,SSeCKS(Src抑制的蛋白激酶C的底物)在脑组织中的表达变化及其意义。方法:制备成年SD(Sprague-Dawley)大鼠脑损伤模型。通过Western blot和RT-PCR方法检测脑损伤后SSeCKS表达的时相变化,免疫组织化学方法检测SSeCK... 详细信息

目的:探讨大鼠脑损伤后,SSeCKS(Src抑制的蛋白激酶C的底物)在脑组织中的表达变化及其意义。方法:制备成年SD(Sprague-Dawley)大鼠脑损伤模型。通过Western blot和RT-PCR方法检测脑损伤后SSeCKS表达的时相变化,免疫组织化学方法检测SSeCKS在脑组织中的细胞定位。结果:Western blot显示,大鼠脑损伤后,SSeCKS的表达逐步降低,伤后3d降至最低点,之后逐渐上升,7d达到高峰,14d后趋于平稳;RT-PCR的结果与Western blot一致。免疫荧光双标记结果显示SSeCKS与星形胶质细胞的标记物GFAP、神经元的标记物NeuN共定位。结论:大鼠脑损伤可以改变SSeCKS的表达,这种改变可能参与脑损伤后星型胶质细胞的活化和增殖过程,并与神经元的凋亡、轴突再生有关。

关键词：脑损伤蛋白激酶C(PKC) SSeCKS 大鼠

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白介素-6保护小脑颗粒神经元抵抗NMDA的神经毒性作用

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生理学报 2007年第2期59卷 150-156页

作者：王晓春邱一华彭聿平南通大学医学院生理学教研室与江苏省神经再生重点实验室江苏大学医学技术学院医学微生物学与免疫学教研室镇江212023

近来研究发现,细胞因子白介素-6(interleukin-6,IL-6)不仪是重要的免疫调节因子,而且也是重要的神经调节因子。中枢神经系统中IL-6的作用是复杂的,尤其是对脑损伤时IL-6所发挥的作用及其作用机制尚不十分清楚。为此,我们利用N-甲基-D-... 详细信息

近来研究发现,细胞因子白介素-6(interleukin-6,IL-6)不仪是重要的免疫调节因子,而且也是重要的神经调节因子。中枢神经系统中IL-6的作用是复杂的,尤其是对脑损伤时IL-6所发挥的作用及其作用机制尚不十分清楚。为此,我们利用N-甲基-D-天门冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)处理小脑颗粒神经元引起急性损伤的细胞模型,探讨IL-6对神经元损伤的保护及其作用机制。取出生后8 d幼鼠的小脑,进行小脑颗粒神经元培养。将IL-6(5或10 ng/mL)加入到小脑颗粒神经元的培养液中孵育8 d,然后用NMDA(100μmol／L)刺激小脑颗粒神经元30 min以造成神经元损伤。用噻唑兰(methyl-thiazole tetrazolium,MTT)比色法检测神经元的活性;用末端脱氧核苷酸转移酶介导的原位缺口末端标记(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)法检测神经元的凋亡;用激光扫描共聚焦显微镜(confocal laser scanning microscope,CLSM)观察神经元内游离Ca2+浓度的动态变化。用抗gp130单克隆抗体(75 ng／mL)抑制IL-6的活性,然后观察IL-6抗NMDA神经毒性作用的变化;并利用Western blot法检测IL-6对小脑颗粒神经元表达IL-6的细胞内信号转导蛋白——信号转导子和转录激活子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)和细胞外信号调节激酶(extracellular signal regulated kinase 1／2,ERK1／2)磷酸化水平的影响。NMDA刺激未经IL-6处理的小脑颗粒神经元,导致神经元活性降低、神经元凋亡增加和神经元内Ca2+超载。NMDA刺激经IL-6慢性预处理的小脑颗粒神经元,其损伤程度与未经IL-6处理的神经元相比明显减轻,包括神经元活性明显增强、神经元凋亡显著减少和神经元内Ca2+超载减轻。抗gp130抗体可阻断IL-6减轻NMDA激发的神经元内Ca2+超载的作用;经IL-6慢性处理的小脑颗粒神经元,其细胞内STAT3和ERK1／2的磷酸化水平显著增加。结果表明,IL-6能保护神经元抵抗由NMDA诱导的兴奋性神经毒性,此神经保护机制与IL-6减轻神经元内Ca2+超载密切相关,而且可能通过激活神经元内IL-6的信号转导路径调节细胞内的基因表达而实现。

关键词：小脑颗粒神经元白介素-6 N-甲基-D-天冬氨酸神经毒性神经保护凋亡 Ca^2+超载 gP 1 30 信号转导子和转录激活子3 细胞外信号调节激酶1/2

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紫杉醇诱导人肺腺癌多药耐药细胞系的建立及DNA polβ、mdr1、mrp1、GST-πl、rp和topo Ⅱ基因的表达

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西安交通大学学报（医学版） 2007年第4期28卷 358-363页

作者：王志举樊红琨李敏赵国强董子明郑州大学基础医学院生理学教研室河南郑州450052 郑州大学基础医学院微生物与免疫学教研室河南郑州450052 郑州大学基础医学院病理生理学教研室河南郑州450052

目的体外建立人肺腺癌细胞多药耐药细胞系,观察其生物学特性并探讨其细胞内DNA polβ和多药耐药基因mdr1、mrp1、GST-πl、rp和topo Ⅱ的表达及意义。方法以紫杉醇为诱导药,采用间歇逐步增加剂量法建立人肺腺癌多药耐药细胞系A549/TXL20... 详细信息

目的体外建立人肺腺癌细胞多药耐药细胞系,观察其生物学特性并探讨其细胞内DNA polβ和多药耐药基因mdr1、mrp1、GST-πl、rp和topo Ⅱ的表达及意义。方法以紫杉醇为诱导药,采用间歇逐步增加剂量法建立人肺腺癌多药耐药细胞系A549/TXL20;MTT法检测A549/TXL20对紫杉醇、顺铂、长春新碱、5-氟尿嘧啶和丝裂霉素的耐药指数(RF);细胞克隆形成法测定A549/TXL20对紫杉醇的敏感性;高效液相色谱测定细胞内紫杉醇的浓度;RT-PCR法测定人肺腺癌多药耐药细胞系A549/TXL20中DNA polβ、mdr1、GST-π、mrp1l、rp和topo Ⅱ的基因表达。结果①A549/TXL20形态不规则,较亲本细胞略小,核/浆比增加,倍增时间没有明显变化;②A549/TXL20对紫杉醇的RF为19.3,对顺铂的RF为67.4,对长春新碱、5-氟尿嘧啶、丝裂霉素和顺铂等抗癌药物有不同程度的耐药性;③A549/TXL20对紫杉醇的敏感性降低,其紫杉醇的含量较亲本细胞下降;④A549/TXL20细胞中DNA polβ、mdr1、GST-π、mrp1l、rp的基因表达量分别较A549细胞中的表达量明显增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论建立了相对稳定的人肺腺癌多药耐药细胞系A549/TXL20,其耐药机制可能与mdr1、GST-π、mrp1l、rp和DNA polβ基因的高表达有关。

关键词：人肺腺癌细胞系多药耐药紫杉醇 DNA聚合酶β

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抗人SOCS3单克隆抗体的制备及其生物学特性鉴定

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南方医科大学学报 2007年第11期27卷 1778-1780,1783页

作者：陈长春李婉宜章崇杰魏大鹏邝玉四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室四川成都610041 四川大学华西基础医学与法医学院免疫学教研室四川成都610041

目的制备高效价的抗人SOCS3单克隆抗体并对其生物学特性进行鉴定。方法以重组GST-SOCS3融合蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与Sp2/0细胞融合,经多次筛选及克隆化,建立可稳定分泌抗SOCS3单克隆抗体的杂交瘤细胞株。用ELISA及Western blot... 详细信息

目的制备高效价的抗人SOCS3单克隆抗体并对其生物学特性进行鉴定。方法以重组GST-SOCS3融合蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与Sp2/0细胞融合,经多次筛选及克隆化,建立可稳定分泌抗SOCS3单克隆抗体的杂交瘤细胞株。用ELISA及Western blot鉴定单克隆抗体的特性,并测定其效价、Ig亚类及相对亲和力。结果筛选到一株可稳定分泌抗人SOCS3单克隆抗体的杂交瘤细胞株。Western blotting显示在相对分子质量为6.3×104处出现特异性反应带。杂交瘤细胞培养上清效价为1∶640,腹水效价为1∶25600,Ig亚类为IgG2a,相对亲和力达4.84×106L/mol。结论成功制备能特异性识别人SOCS3的单克隆抗体,为进一步研究人体细胞因子信号传导的负反馈调节及SOCS3在微生物感染中的免疫调节作用奠定了基础。

关键词： SOCS3 单克隆抗体抗体制备杂交瘤细胞

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中药与抗生素配伍抗菌活性的观察

中药与抗生素配伍抗菌活性的观察

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贵州省中西医结合学会男科专业委员会成立大会暨男科疾病提高班

作者：江滟陈峥宏朱以勇王和贵阳医学院微生物教研室贵阳医学院微生物教研室贵阳医学院微生物教研室贵阳医学院微生物教研室

目的观察川参通注射液与头孢曲松联合作用的抗菌活性及稳定性。方法将川参通注射液与头孢曲松钠注射液混合,以最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC) 试检验测其对粪链球菌、淋病奈瑟菌、大肠埃希菌及普通变形杆菌的抑菌与杀菌性活并以... 详细信息

目的观察川参通注射液与头孢曲松联合作用的抗菌活性及稳定性。方法将川参通注射液与头孢曲松钠注射液混合,以最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC) 试检验测其对粪链球菌、淋病奈瑟菌、大肠埃希菌及普通变形杆菌的抑菌与杀菌性活并以分光光度仪检测其吸光度值。结果头孢曲松-川参通注射液配伍对粪链球菌的 MIC 为200g μml-1,/0．8μ***-1,MBC 为500μ***-1/2μ***-1;对淋病奈瑟菌的 MIC 为0．1μ***-1 /0．0004μ***-1,MBC 为0．1μgml-1/0．0004μ***-1;对大肠埃希菌的 MIC 为0．005μgml-1 /0．00002μ***-1,MBC 为0．5μgml-1/0．002μ***-1,对变形杆菌的 MIC 为0．01μgml-1 /0．00004μ***-1,MBC 为0．01μ***-1/0．00004μ***-1,较配伍前降底或不变。头孢曲松- 川参通配伍液外观为棕色澄清液体,无沉淀、浑浊或絮状物形成,405nm 波长处的吸光度值小于川参通注射液的吸光度值。结论川参通注射液与头孢曲松钠配伍后以对淋病奈琴菌和大肠埃希菌的抗菌活性增高,对粪链球菌与普通变形杆菌活菌的抗菌活性不变,并且未见配伍液出现浑浊或沉淀。

关键词：中药抗生素抗菌活性

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