检索结果-内蒙古大学图书馆

hPMSCs对白血病细胞Jurkat T表面CD分子表达的影响及机制研究

滨州医学院学报 2021年第5期44卷 327-332页

作者：丁瑞松胡雯黄盼盼胡涛滨州医学院免疫学教研室山东烟台264003

目的探究人胎盘源间充质干细胞(human placenta derived mesenchymal stromal cells,hPMSCs)对人急性淋巴白血病细胞(Jurkat T)表面CD4、CD28及CD175表达的影响及机制。方法将hPMSCs与Jurkat T细胞共培养,采用FCM检测共培养前后Jurkat T细胞表面CD4、CD28、CD175的表达水平;Western blot检测Cosmc蛋白表达水平,荧光法检测T-合酶(T-synthase)活性,细胞O-糖组扩增技术(Cellular O-glycome Reporter/Amplifition,CORA)检测O-糖组变化。结果hPMSCs O-糖组结构较复杂,表达核心1来源的O-糖链结构(m/z955.4、1129.5、1316.6)及核心2来源的O-糖链结构(m/z1217.6、1648.7、1782.8、1939.9、2058.0、2563.2);Jurkat T细胞不表达核心1及核心2来源的O-糖链。与hPMSCs共培养后,Jurkat T细胞表面CD4表达增高,CD28、CD175表达降低;Cosmc蛋白表达增多,T-合酶活性增高,表达核心1来源的O-聚糖结构(m/z955.4,1316.6)。结论hPMSCs可通过上调Cosmc蛋白、T-合酶活性,改变Jurkat T细胞O-糖基化状态影响其表面CD4、CD28及CD175表达。

关键词：人胎盘源间充质干细胞人急性淋巴白血病细胞分子伴侣免疫调节 O-糖基化

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整合素β1通过ILK/FAK/F-actin通路影响幽门螺杆菌诱导的GES-1细胞自噬的研究

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中国病原生物学杂志 2020年第9期15卷 1028-1032,1037页

作者：杜运秋张锐清曲磊程雪吴玉龙赵慧琳张莹李波清滨州医学院病原生物学教研室山东烟台264003

目的观察整合素β1对ILK/FAK/F-actin通路的调节作用,分析其对幽门螺杆菌(Hp)诱导GES-1细胞自噬的影响。方法利用siRNA沉默GES-1细胞整合素β1的表达后与幽门螺杆菌共培养6 h,Western blot检测ILK的表达。以ILK特异性抑制剂Cpd22抑制细... 详细信息

目的观察整合素β1对ILK/FAK/F-actin通路的调节作用,分析其对幽门螺杆菌(Hp)诱导GES-1细胞自噬的影响。方法利用siRNA沉默GES-1细胞整合素β1的表达后与幽门螺杆菌共培养6 h,Western blot检测ILK的表达。以ILK特异性抑制剂Cpd22抑制细胞ILK的表达后与幽门螺杆菌共培养6 h,Western blot检测LC3B、p62、FAK、Paxillin的表达;制备细胞爬片,以iFluor-594标记的鬼笔环肽对F-actin进行染色,观察细胞形态。结果沉默整合素β1后,空白组、Hp组、沉默组、阴性对照组、沉默+Hp组、阴性对照+Hp组ILK相对表达量分别为1.012±0.073、0.637±0.216、0.727±0.173、1.173±0.177、0.712±0.160、0.983±0.119,与空白组相比,Hp组ILK的相对表达量降低(t=3.288,P<0.05),沉默组较阴性对照组,沉默+Hp组较阴性对照+Hp组ILK相对表达量均显著降低(t值分别为-4.420和-3.238,均P<0.01)。抑制ILK表达后,空白组、Cpd22组、Hp组、Cpd22+Hp组LC3B的相对表达量分别为0.437±0.064、0.808±0.116、0.812±0.130、1.247±0.201,p62相对表达量分别为0.904±0.141、1.121±0.105、1.392±0.110、0.960±0.103,与空白组相比,Cpd22和Hp组细胞内LC3B及p62相对表达量均显著增加(t值分别为-4.838、-4.479、-3.269、3.313,均P<0.01),Cpd22+Hp组较Hp组细胞LC3B的相对表达量增高(t=-3.147,P<0.05),p62相对表达量降低(t=2.907,P<0.05)。Cpd22组FAK、Paxillin相对表达量较空白组均增加(t值分别为-2.303、-3.460,均P<0.05),Cpd22+Hp组FAK、Paxillin相对表达量较Hp组均降低(t值分别为2.446、-2.648,P<0.05),Cpd22抑制ILK后感染Hp,细胞F-actin染色呈现明显杂乱碎丝状。结论整合素β1通过上调ILK的表达抑制幽门螺杆菌诱导的GES-1细胞自噬,其机制可能与FAK/Paxillin/F-actin通路有关。

关键词：幽门螺杆菌整合素β1 GES-1细胞整合素连接激酶细胞自噬

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幽门螺杆菌对GES-1细胞自噬及凋亡的影响

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中国病原生物学杂志 2020年第11期15卷 1262-1267,1276页

作者：张锐清杜运秋李菁佟小涵曲磊吴玉龙季晓飞张莹李波清滨州医学院病原生物学教研室山东烟台264003

目的研究幽门螺杆菌(Hp)对胃上皮细胞GES-1自噬与凋亡的影响。方法Hp与自噬抑制剂3-MA、广谱凋亡抑制剂Z-VAD-FMK处理后的GES-1细胞共培养,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测LC3B-Ⅱ、Caspase-3及PARP蛋白的表达。结果3-MA... 详细信息

目的研究幽门螺杆菌(Hp)对胃上皮细胞GES-1自噬与凋亡的影响。方法Hp与自噬抑制剂3-MA、广谱凋亡抑制剂Z-VAD-FMK处理后的GES-1细胞共培养,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测LC3B-Ⅱ、Caspase-3及PARP蛋白的表达。结果3-MA处理后,与空白对照组相比,Hp组LC3B-Ⅱ蛋白相对表达量显著增高(t=7.54,P<0.01);3-MA+Hp组与Hp组相比,LC3B-Ⅱ蛋白相对表达量显著降低(t=-3.24,P<0.05);与空白对照组相比,Hp组、3-MA组GES-1细胞凋亡率均显著增加(t值分别为-9.71和-3.25,P<0.01或P<0.05)。Z-VAD-FMK处理后,与空白对照组相比,Hp组GES-1细胞凋亡率显著增加,(t=-9.29,P<0.01);Hp+Z-VAD-FMK组较Hp组GES-1细胞凋亡率显著下降(t=-8.47,P<0.01);与空白对照组相比,Hp组、Z-VAD-FMK组的LC3B-Ⅱ蛋白相对表达量均显著增加(t值分别为-12.98和-11.28,均P<0.01)。3-MA与Z-VAD-FMK共处理后,3-MA+Hp+Z-VAD-FMK组较3-MA+Z-VAD-FMK组和Hp+Z-VAD-FMK组的GES-1细胞凋亡率显著增加(t值分别为-4.91和-9.64,P<0.05或P<0.01);3-MA+Hp+Z-VAD-FMK组与3-MA+Z-VAD-FMK组相比,Caspase-3蛋白相对表达量显著增加,PARP蛋白相对表达量显著下降(t值分别为-5.16和3.02,均P<0.05);3-MA+Hp+Z-VAD-FMK组较Hp+Z-VAD-FMK组LC3B-Ⅱ蛋白相对表达量显著下降(t=4.63,P<0.05)。结论幽门螺杆菌既能上调GES-1细胞自噬也能诱导其凋亡,并通过增加Caspase-3表达的同时降低PARP的表达以增强自噬抑制引起的细胞凋亡。而在抑制凋亡后,幽门螺杆菌可能诱导GES-1细胞发生自噬性死亡。

关键词：幽门螺杆菌自噬凋亡 GES-1细胞

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无托槽隐形矫治混合牙列扩弓效率的研究

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中国医科大学学报 2022年第12期51卷 1074-1078页

作者：赵睿刘洋吕翱郭学强刘新强青岛大学附属医院口腔正畸科山东青岛266003 青岛大学口腔医学院口腔正畸学教研室山东青岛266003 滨州医学院口腔医学院牙体牙髓病学教研室山东烟台264003 青岛市妇女儿童医院口腔科山东青岛266003

目的探讨混合牙列期无托槽隐形矫治器的扩弓效率。方法选取2019年至2021年于青岛大学附属医院口腔正畸科就诊并使用隐形矫治器扩弓的混合牙列患者32例,收集矫治前、排牙预置及矫治后的三维数字化模型,分别测量上下颌牙尖水平和龈缘水平... 详细信息

目的探讨混合牙列期无托槽隐形矫治器的扩弓效率。方法选取2019年至2021年于青岛大学附属医院口腔正畸科就诊并使用隐形矫治器扩弓的混合牙列患者32例,收集矫治前、排牙预置及矫治后的三维数字化模型,分别测量上下颌牙尖水平和龈缘水平牙弓宽度及磨牙颊倾度,计算各牙位扩弓效率。配对样本t检验比较矫治前、排牙预置及矫治后牙弓差异宽度。结果矫治后各牙位牙弓宽度显著增加(P<0.05),上颌乳尖牙、第一乳磨牙、第二乳磨牙、第一恒磨牙区牙尖水平扩弓效率分别为69%、70%、71%、61%,龈缘水平扩弓效率分别为63%、55%、59%、47%;下颌相应牙位牙尖水平扩弓效率分别为84%、78%、76%、69%,龈缘水平分别为69%、68%、64%、56%。矫治后上颌第一恒磨牙颊倾(1.19±3.56)°,下颌第一磨牙颊倾(5.54±3.03)°,实际颊倾量大于预置值(P<0.05)。结论隐形矫治器能在替牙期实现有效的上下颌扩弓,乳尖牙及乳磨牙区扩弓效率较高,龈缘水平扩弓效率低于牙尖水平,第一恒磨牙实际颊倾量大于预置值。

关键词：混合牙列早期矫治无托槽隐形矫治器扩弓效率

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白细胞免疫球蛋白样受体LILRB4条件表达小鼠模型的构建

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滨州医学院学报 2022年第5期45卷 321-324,354页

作者：王磊赵志玲连霞金昌洙滨州医学院基础医学院生物化学与分子生物学教研室滨州医学院山东省肿瘤免疫治疗研究创新团队山东烟台264003

目的将灵长类动物lilrb4基因表达在小鼠髓系细胞表面,以构建人白细胞免疫球蛋白受体亚家族成员B4(LILRB4)免疫耐受小鼠,为LILRB4功能研究提供小鼠模型。方法利用NCBI数据库分析人lilrb4与小鼠Gp49b基因的同源性。在小鼠rose26基因位点... 详细信息

目的将灵长类动物lilrb4基因表达在小鼠髓系细胞表面,以构建人白细胞免疫球蛋白受体亚家族成员B4(LILRB4)免疫耐受小鼠,为LILRB4功能研究提供小鼠模型。方法利用NCBI数据库分析人lilrb4与小鼠Gp49b基因的同源性。在小鼠rose26基因位点通过同源重组的方式,定点插入含有LoxP位点的人lilrb4基因编码序列,获得Rosa26^(LSL/LSL)小鼠,与Lyz2-Cre小鼠进行杂交,在小鼠髓系细胞切除LoxP序列,进而启动下游人lilrb4基因的表达。应用PCR进行小鼠基因型鉴定,通过流式细胞仪检测Rose26^(LSL/LSL);Cre小鼠外周血以及骨髓中髓系细胞人LILRB4的水平。结果人lilrb4与小鼠Gp49b基因比对结果表明,无论是碱基还是氨基酸序列,两者都存在较大差异,无明显同源性。PCR结果表明,Rose26^(LSL/LSL);Cre小鼠能够检测到相应的目的条带,而且在髓系细胞条件表达人lilrb4基因,不影响小鼠的表型。流式细胞仪检测结果显示,Rose26^(LSL/LSL);Cre小鼠的髓系细胞特异性表达人LILRB4。结论Rose26^(LSL/LSL);Cre小鼠的髓系细胞中能够检测到人LILRB4的表达,本研究成功构建了人LILRB4耐受的基因敲入小鼠模型。

关键词：免疫抑制受体 LILRB4 条件表达髓系细胞

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人脐带间充质干细胞来源的外泌体治疗过敏性哮喘小鼠模型的实验研究

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临床医学进展 2023年第8期13卷 13736-13744页

作者：殷勇张艳丽丁勇曹琦马征来马春玲滨州医学院免疫学教研室山东烟台山东药品食品职业学院医学检验教研室山东威海临沂市妇幼保健院出生缺陷防治重点实验室山东临沂山东医学高等专科学校分子生物学实验中心山东临沂

目的:构建过敏性哮喘小鼠模型,研究人脐带干细胞来源的外泌体治疗过敏性哮喘模型小鼠的有效性,并探讨外泌体发挥作用的分子机制。方法:本研究中BALB/c小鼠随机分为人脐带间充质干细胞外泌体(hUCMSCs-exos)治疗组、激素治疗对照组、哮喘... 详细信息

目的:构建过敏性哮喘小鼠模型,研究人脐带干细胞来源的外泌体治疗过敏性哮喘模型小鼠的有效性,并探讨外泌体发挥作用的分子机制。方法:本研究中BALB/c小鼠随机分为人脐带间充质干细胞外泌体(hUCMSCs-exos)治疗组、激素治疗对照组、哮喘小鼠模型对照组和正常小鼠对照组。① 模型构建方法:在第1天和第14天给予15只小鼠腹腔内注射0.2 ml含有卵清蛋白(OVA)和AL(OH)3的混合液构建小鼠模型;② 治疗方法:在第21到27天,OVA组每天将致敏小鼠放入有机玻璃箱内给予5% OVA雾化30 min;正常对照组(CON)采用PBS雾化吸入30 min;激素治疗对照组采用布地奈德雾化吸入治疗30 min,每只鼠平均吸入0.02 mg;hUCMSCs-exos治疗组采用人脐带间充质干细胞培养上清制备的浓度为0.7 mg/ml的外泌体每天雾化治疗30 min。③ 标本采取和检测方法:造模和治疗结束后,采用眼周静脉丛采血法采静脉血;取肺组织和肺灌洗液。利用ELISA方法检测静脉血中的IgE及IL-4的浓度;肺组织切片做HE染色;肺灌洗液进行白细胞总数和嗜酸性粒细胞计数。结果:hUCMSCs-exos干预治疗组的小鼠与模型对照组的小鼠相比炎症明显改善,可明显降低IL-4 (p < 0.05)和IgE (p < 0.01)的水平,BALF中的白细胞总数及嗜酸性粒细胞的指标也明显降低(p < 0.01),小鼠的肺组织炎症也有明显的改善;布地奈德治疗组的干预效果与hUCMSCs-exos治疗组的效果相似,但是从小鼠肺泡灌洗液嗜酸性粒细胞数量的组间比较,可见hUCMSCs-exos治疗组的降低更加明显(p < 0.01)。结论:本研究结果证明,人脐带间充质干细胞来源的外泌体治疗过敏性哮喘模型小鼠是有效的。

关键词：人脐带间充质干细胞外泌体过敏性哮喘小鼠模型

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临床耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌对头孢他啶/阿维巴坦的药物敏感性分析

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现代检验医学杂志 2022年第1期37卷 164-167页

作者：徐卫皓杨凤真伊茂礼薛兆平王鑫张玉梅滨州医学院基础医学院病原生物学教研室山东烟台264000 烟台毓璜顶医院检验中心山东烟台264000

目的分析携带不同碳青霉烯酶的耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(carbapenem-resistant Enterobacteriaceae,CRE)对头孢他啶/阿维巴坦(cerftazidime-avibactam,CZA)的药物敏感性,为临床合理精准用药提供依据。方法采用药敏纸片扩散法(K-B法)对... 详细信息

目的分析携带不同碳青霉烯酶的耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(carbapenem-resistant Enterobacteriaceae,CRE)对头孢他啶/阿维巴坦(cerftazidime-avibactam,CZA)的药物敏感性,为临床合理精准用药提供依据。方法采用药敏纸片扩散法(K-B法)对烟台毓璜顶医院2018~2020年临床分离并保存的98株非重复CRE菌株进行CZA的药敏试验,并对CZA抑菌圈在20~22mm的菌株用微量肉汤稀释法(broth microdilution method,BMD)进行验证,聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)方法检测其碳青霉烯酶型,分析产不同碳青霉烯酶的CRE菌株对CZA的药物敏感性。结果烟台毓璜顶医院CRE菌株以产金属β-内酰胺酶为主,占72.45%,总体对CZA敏感率为23.47%。CZA对单产丝氨酸酶(bla_(KPC),bla_(OXA-48))的CRE敏感率为100%,对单产金属酶(bla_(NDM),bla_(VIM),bla_(IMP))的CRE耐药率为100%,对同时产丝氨酸酶和金属酶的CRE菌株和对不产酶的CRE菌株敏感率分别为25.0%和83.3%。结论携带不同碳青霉烯酶的CRE菌株对CZA的药物敏感性不同,CZA体外药敏试验有必要在临床开展,同时需增加酶型检测方法指导临床精准用药。

关键词：耐碳青霉烯肠杆菌科细菌头孢他啶/阿维巴坦药物敏感性试验碳青霉烯酶型检测

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Pdcd1基因敲除鼠的构建及其对肿瘤生长的影响

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滨州医学院学报 2024年第6期47卷 452-458页

作者：刘润楷贾玉萱赵鑫钰李尊岭烟台毓璜顶医院检验科山东烟台264003 滨州医学院附属烟台山医院手术室山东烟台264003 滨州医学院基础医学院生物化学与分子生物学教研室山东烟台264003 山东省肿瘤免疫治疗研究创新团队山东烟台264003 山东省医药卫生呼吸系统感染与肿瘤免疫重点实验室山东烟台264003

目的获得程序性死亡受体-1基因(Pdcd1)敲除鼠,即C57BL/6J-Pdcd1^(-/-)鼠;构建小鼠荷瘤模型,初步探究Pdcd1基因敲除对肿瘤生长的影响。方法应用CRISPR/Cas9技术,将Cas9 mRNA和靶向Pdcd 1的gRNA显微注射到C57BL/6J小鼠的受精卵中,利用非... 详细信息

目的获得程序性死亡受体-1基因(Pdcd1)敲除鼠,即C57BL/6J-Pdcd1^(-/-)鼠;构建小鼠荷瘤模型,初步探究Pdcd1基因敲除对肿瘤生长的影响。方法应用CRISPR/Cas9技术,将Cas9 mRNA和靶向Pdcd 1的gRNA显微注射到C57BL/6J小鼠的受精卵中,利用非同源重组修复引入突变的方式,造成Pdcd1基因蛋白读码框移码和功能缺失,获得C57BL/6J-Pdcd1^(+/-)杂合子小鼠;杂合子小鼠自交,获得Pdcd1基因敲除的纯合子小鼠(C57BL/6J-Pdcd1^(-/-));接下来,应用PCR和基因测序确定小鼠基因型。提取C57BL/6J-Pdcd 1^(+/+)和C57BL/6J-Pdcd1^(-/-)小鼠外周血,流式细胞仪检测各免疫细胞水平;取小鼠脾脏CD3^(+)T细胞,anti-CD3/CD28 beads激活4天后,流式细胞仪检测活化CD3^(+)T细胞表面PD-1的表达。将3×10^(6)个小鼠结肠癌细胞MC38接种于C57BL/6J-Pdcd1^(+/+)和C57BL/6J-Pdcd 1^(-/-)小鼠皮下,每隔2天测量一次肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线;取小鼠肿瘤组织,拍照并称重,分析Pdcd1基因敲除对肿瘤生长大小的影响。结果测序结果序列对比表明,Pdcd1基因2-4号外显子之间缺失1691 bp,即Pdcd1基因产生了读码框移码突变;小鼠基因型的检测结果显示,引物P1/P2 PCR获得单一的341 bp片段,P3/P4 PCR不能获得条带,成功构建C57BL/6J-Pdcd1^(-/-)小鼠。流式检测结果显示,与C57BL/6J-Pdcd 1^(+/+)小鼠相比较,C57BL/6J-Pdcd 1^(-/-)小鼠外周血各免疫细胞水平无明显变化,活化的CD3^(+)T细胞表面几乎检测不到PD-1的表达。MC38小鼠皮下荷瘤模型表明,与WT小鼠相比较,C57BL/6J-Pdcd 1^(-/-)小鼠荷瘤后肿瘤生长显著被抑制。结论成功构建Pdcd1基因敲除鼠,小鼠Pdcd1基因敲除能够显著抑制肿瘤生长。

关键词：免疫检查点 PD-1 CD3^(+)T细胞肿瘤免疫

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CNV-seq技术在流产组织遗传病因学中的临床应用价值

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中国妇幼保健 2023年第9期38卷 1700-1705页

作者：孙雪晶张俊梅舒静周林魏娜席作明李有杰滨州医学院生物化学与分子生物学教研室山东烟台264003 聊城市东昌府区妇幼保健院检验科山东聊城252000

目的利用CNV-seq技术对流产组织或绒毛进行染色体异常分析,探讨早期流产和晚期流产患者的遗传学病因,为再生育提供指导。方法收集2015年7月—2021年8月在聊城市东昌府区妇幼保健院进行流产手术患者的流产物绒毛或肌肉组织,采用CNV-seq... 详细信息

目的利用CNV-seq技术对流产组织或绒毛进行染色体异常分析,探讨早期流产和晚期流产患者的遗传学病因,为再生育提供指导。方法收集2015年7月—2021年8月在聊城市东昌府区妇幼保健院进行流产手术患者的流产物绒毛或肌肉组织,采用CNV-seq技术进行染色体异常检测。结果检测样本622例,共检出染色体异常369例(59.3%),包括常染色体非整倍体210例(33.8%),性染色体非整倍体60例(9.6%),染色体微缺失/微重复83例(13.3%),非整倍体合并微缺失/微重复16例(2.6%)。早期流产和晚期流产患者染色体异常比例分别为62.5%(324/518)和43.3%(45/104)。早期流产患者常染色体非整倍体发生率(37.3%)高于晚期流产患者(16.3%),差异有统计学意义(χ^(2)=19.50,P<0.05),早期流产患者性染色体非整备体、染色体微缺失/微重复发生率(9.8%、12.4%)与晚期流产患者(8.6%、18.3%)比较,差异均无统计学意义(χ^(2)=0.47、2.62,均P>0.05)。所有流产胚胎中共检测出83例CNVs,其中“致病性”35例(42.2%)、“可能致病性”4例(4.8%)、“临床意义不明”41例(49.4%)、“可能良性”和“良性”3例(3.6%),35例“致病性”CNVs中发现22例微缺失/微重复综合征。结论利用CNV-seq技术进行流产组织的遗传学病因分析可以明确流产原因,为遗传咨询提供依据,为再生育提供指导。

关键词：流产染色体异常病因学 CNV-seq 再生育指导

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miRNA与伊马替尼耐药相关性的研究进展

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生命科学 2020年第6期32卷 581-589页

作者：曹慧贞孙航孙允霄滨州医学院烟台附属医院儿科烟台264100 滨州医学院生物化学与分子生物学教研室烟台264003

伊马替尼(imatinib,IM)是BCR-ABL1、KIT和PDGFR等多种酪氨酸激酶的抑制剂。90%~95%的慢性粒细胞白血病(CML)含有BCR-ABL融合基因,85%~90%的胃肠道间质瘤(GIST)存在KIT或PDGFRA突变,目前IM主要作为靶向药应用于CML和GIST,它的问世是CML和GIST治疗的重大突破。然而,约30%的CML由于耐药或不耐受而停止使用,约50%的GIST在治疗后的两年内出现了耐药,因此,了解IM耐药机制对于解决IM耐药问题至关重要。miRNA(microRNA,small RNA)是一类长约22 nt的非编码RNA,可通过与特定mRNA结合或调节特定mRNA的翻译过程来调控基因的表达。许多药物耐药与miRNA的异常表达有关,miRNA与IM耐药是近年来的研究热点,改变miRNA的表达模式可以有效抑制耐药和应对治疗。该文综述了miRNA表达与IM耐药的关系及其作用机制,为解决IM耐药问题提供了新的思路。

关键词：伊马替尼 miRNA 白血病胃肠道间质瘤

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