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顺铂对LTEP-a-2细胞中miR-34b、Bcl-2、Smad3表达的影响

滨州医学院学报 2016年第2期39卷 81-84页

作者：郑瑛李有杰王萍玉庞敏张菡菡阎云飞谢书阳滨州医学院基础医学院生物化学与分子生物学教研室山东省高校肿瘤分子生物学重点实验室烟台264003 蓬莱市人民医院检验科

目的探讨顺铂对LTEP-a-2细胞内miR-34b、Bcl-2、Smad3表达的影响,明确顺铂的抗癌机制。方法体外培养LTEP-a-2细胞,实验组加入不同浓度顺铂,阴性对照组为不加顺铂的细胞;倒置显微镜观察各组细胞形态,台盼蓝染色法计算细胞存活率,MTT法测... 详细信息

目的探讨顺铂对LTEP-a-2细胞内miR-34b、Bcl-2、Smad3表达的影响,明确顺铂的抗癌机制。方法体外培养LTEP-a-2细胞,实验组加入不同浓度顺铂,阴性对照组为不加顺铂的细胞;倒置显微镜观察各组细胞形态,台盼蓝染色法计算细胞存活率,MTT法测定顺铂对LTEP-a-2细胞的抑制率;实时定量PCR检测miR-34b;western blot方法分析细胞中Bcl-2及Smad3蛋白的表达变化。结果随着顺铂作用剂量的增加,LTEP-a-2细胞凋亡增加,miR-34b在顺铂作用后的细胞中的表达呈上升趋势,Bcl-2及Smad3的表达显著下降。结论顺铂可能通过上调miR-34b的表达,进一步抑制Bcl-2及Smad3的表达,导致LTEP-a-2细胞的凋亡。

关键词： miR-34b Bcl-2 Smad3 肺癌顺铂

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依据RF滴度及抗CCP抗体的变化评价早期联合治疗类风湿性关节炎的临床疗效

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滨州医学院学报 2014年第3期37卷 194-197页

作者：王建明田秀娥翟长彬谢书阳滨州医学院生物化学与分子生物学教研室烟台264003 滨州医学院附属医院关节外科滨州医学院附属医院手术室滨州医学院附属医院放射科

目的通过对病人随机分组对照的研究方法,对联合用药治疗RA的疗效进行观察和评价,探索治疗RA较为有效的方法,指导临床用药。方法选择滨州医学院附属医院2012年3月~2014年3月收治确诊为RA的患者80例,随机分为实验组和对照组,其中实验组41... 详细信息

目的通过对病人随机分组对照的研究方法,对联合用药治疗RA的疗效进行观察和评价,探索治疗RA较为有效的方法,指导临床用药。方法选择滨州医学院附属医院2012年3月~2014年3月收治确诊为RA的患者80例,随机分为实验组和对照组,其中实验组41例,对照组39例。实验组同时应用2种慢作用抗风湿药及免疫抑制剂药物治疗,对照组每次服用1种慢作用抗风湿药及免疫抑制剂药物治疗,详细记录两组患者治疗及随访时的各项观察指标数据,然后将观察数据应用SAS统计软件进行统计学分析处理,将两组的ACR-20、X线改变、症状/体征、生存质量HAQ量表、RF及抗CCP抗体变化等资料进行统计学分析以评价两种治疗效果。结果发现治疗第12周时两组ACR-20的改善率相当,差异无统计学意义（P〉0.05）;但治疗第24周时两组ACR-20的改善出现了明显差异,分析显示实验组优于对照组,统计学分析两组间差异有统计学意义（P〈0.05）。两组治疗后第12周、第24周两项观察指标数据（患者对疾病的治疗效果评价及医生对患者疾病治疗的评价）进行比较分析,结果显示实验组优于对照组,两组间差异均有统计学意义（P〈0.05）。治疗后24周两组间生存质量HAQ分析的数据进行比较,结果同样显示实验组效果明显优于对照组,两组间差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论通过本研究,证明了对于RA的两种治疗方案均有效,实验组对于RF滴度及抗CCP抗体改变优于对照组,也为临床治疗RA的联合用药提供了参考。

关键词：联合药物类风湿性关节炎疗效

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DMC致白血病细胞凋亡基因及小RNA表达的改变

DMC致白血病细胞凋亡基因及小RNA表达的改变

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华东六省一市生物化学与分子生物学会2010年学术交流会

作者：李有杰张帅岳真张文娟谢书阳滨州医学院医学分子遗传研究所生物化学与分子生物学教研室烟台山医院血液科

目的探讨抗肿瘤药物DMC诱导K562细胞凋亡过程中相关基因和miRNA表达的改变。方法DMC诱导细胞凋亡后,通过基因芯片技术筛选凋亡基因和miRNA表达的变化,进一步通过RT-PCT等方法验证部分基因和相关的miRNA表达变化关系。结果DMC致凋亡组,... 详细信息

目的探讨抗肿瘤药物DMC诱导K562细胞凋亡过程中相关基因和miRNA表达的改变。方法DMC诱导细胞凋亡后,通过基因芯片技术筛选凋亡基因和miRNA表达的变化,进一步通过RT-PCT等方法验证部分基因和相关的miRNA表达变化关系。结果DMC致凋亡组,基因芯片技术可检测到2300多种基因和290种miRNA的表达发生明显改变,抑癌基因RB1和P53表达增高明显,BCL2、E2F1和E2F3癌基因表达显著降低;miR-16、miR-34a、miR-125等表

关键词：白血病 RNA DMC miRNA

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免疫抑制受体IGSF9单克隆抗体的制备以及功能验证

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滨州医学院学报 2022年第4期45卷 241-247页

作者：刘祎璠赵鑫钰栾惠雯刘晓丽李尊岭滨州医学院基础医学院生物化学与分子生物学教研室山东省肿瘤免疫治疗研究创新团队山东烟台264003

目的研发靶向免疫球蛋白超家族成员9(IGSF9)的特异阻断型单克隆抗体,并验证该抗体的功能。方法将带有His标签的IGSF9细胞外结构域(IGSF9 extracellular domain,IGSF9-ECD)克隆到pcDNA3.1(-)的表达载体上,转染HEK293细胞,亲和层析获得IGS... 详细信息

目的研发靶向免疫球蛋白超家族成员9(IGSF9)的特异阻断型单克隆抗体,并验证该抗体的功能。方法将带有His标签的IGSF9细胞外结构域(IGSF9 extracellular domain,IGSF9-ECD)克隆到pcDNA3.1(-)的表达载体上,转染HEK293细胞,亲和层析获得IGSF9-ECD-His蛋白,应用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blotting进行蛋白鉴定。应用IGSF9-ECD-His蛋白免疫6周龄BALB/c小鼠4次,ELISA和流式细胞仪检测小鼠抗血清效价。分离小鼠脾脏细胞,与小鼠多发性骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,ELISA和流式细胞仪筛选阳性克隆,并进一步筛选亚克隆细胞,制备靶向IGSF9的单克隆抗体。将IGSF9抗体加入到T细胞和THP-1细胞共培养体系中,检测上清中IFN-γ和TNF-α水平。结果IGSF9-ECD-His蛋白条带单一,分子量与预期相一致。在T细胞培养体系中加入该蛋白,显著抑制T细胞增殖。IGSF9-ECD-His蛋白免疫小鼠后,小鼠抗血清效价为1∶364500,而且抗血清能够显著逆转THP-1对T细胞的增殖抑制。本研究获取了64株克隆阳性细胞株,其中有6株能够用于流式细胞仪检测。本研究选择了阻断效应最好的5C3母克隆制备单克隆抗体,流式细胞仪和T细胞共培养结果筛选后,选择了阻断效应最好的5C3-1A4作为IGSF9单克隆抗体(anti-IGSF9),该抗体能够显著逆转IGSF9对T细胞的增殖抑制,并促进IFN-γ和TNF-α的分泌。结论本研究成功制备了IGSF9单克隆抗体,而且该抗体能够显著逆转IGSF9对T细胞增殖抑制。

关键词：免疫抑制受体 IGSF9 单克隆抗体免疫治疗

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白细胞免疫球蛋白样受体LILRB4条件表达小鼠模型的构建

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滨州医学院学报 2022年第5期45卷 321-324,354页

作者：王磊赵志玲连霞金昌洙滨州医学院基础医学院生物化学与分子生物学教研室滨州医学院山东省肿瘤免疫治疗研究创新团队山东烟台264003

目的将灵长类动物lilrb4基因表达在小鼠髓系细胞表面,以构建人白细胞免疫球蛋白受体亚家族成员B4(LILRB4)免疫耐受小鼠,为LILRB4功能研究提供小鼠模型。方法利用NCBI数据库分析人lilrb4与小鼠Gp49b基因的同源性。在小鼠rose26基因位点... 详细信息

目的将灵长类动物lilrb4基因表达在小鼠髓系细胞表面,以构建人白细胞免疫球蛋白受体亚家族成员B4(LILRB4)免疫耐受小鼠,为LILRB4功能研究提供小鼠模型。方法利用NCBI数据库分析人lilrb4与小鼠Gp49b基因的同源性。在小鼠rose26基因位点通过同源重组的方式,定点插入含有LoxP位点的人lilrb4基因编码序列,获得Rosa26^(LSL/LSL)小鼠,与Lyz2-Cre小鼠进行杂交,在小鼠髓系细胞切除LoxP序列,进而启动下游人lilrb4基因的表达。应用PCR进行小鼠基因型鉴定,通过流式细胞仪检测Rose26^(LSL/LSL);Cre小鼠外周血以及骨髓中髓系细胞人LILRB4的水平。结果人lilrb4与小鼠Gp49b基因比对结果表明,无论是碱基还是氨基酸序列,两者都存在较大差异,无明显同源性。PCR结果表明,Rose26^(LSL/LSL);Cre小鼠能够检测到相应的目的条带,而且在髓系细胞条件表达人lilrb4基因,不影响小鼠的表型。流式细胞仪检测结果显示,Rose26^(LSL/LSL);Cre小鼠的髓系细胞特异性表达人LILRB4。结论Rose26^(LSL/LSL);Cre小鼠的髓系细胞中能够检测到人LILRB4的表达,本研究成功构建了人LILRB4耐受的基因敲入小鼠模型。

关键词：免疫抑制受体 LILRB4 条件表达髓系细胞

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免疫抑制受体igsf 9基因敲除鼠的构建以及对肿瘤生长的影响

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滨州医学院学报 2021年第5期44卷 321-326页

作者：孙爽刘祎璠李尊岭滨州医学院基础医学院生物化学与分子生物学教研室山东省肿瘤免疫治疗研究创新团队山东烟台264003

目的构建免疫抑制受体igsf 9基因敲除小鼠模型,并探究该小鼠模型对肺癌细胞生长的影响。方法将Cas 9 mRNA和igsf 9-sg RNA显微注射到C57BL/6小鼠受精卵中,利用非同源重组修复引入突变,造成igsf 9基因蛋白移码突变、功能缺失;应用PCR和... 详细信息

目的构建免疫抑制受体igsf 9基因敲除小鼠模型,并探究该小鼠模型对肺癌细胞生长的影响。方法将Cas 9 mRNA和igsf 9-sg RNA显微注射到C57BL/6小鼠受精卵中,利用非同源重组修复引入突变,造成igsf 9基因蛋白移码突变、功能缺失;应用PCR和测序技术进行基因型鉴定。将2×10^(6)个Lewis肺癌细胞(LL/2)皮下接种到C57BL/6-igsf 9^(+/+)和C57BL/6-igsf 9^(-/-)小鼠皮下,每3天检测肿瘤大小,绘制肿瘤生长曲线;当肿瘤体积大于2 cm^(3)时,在麻醉状态下处死小鼠,称肿瘤质量、流式细胞仪检测肿瘤组织各免疫细胞水平。结果igsf 9基因4-9外显子区域出现了2892 bp缺失,igsf 9基因发生移码突变,提前出现终止密码子,成功构建igsf 9基因敲除小鼠模型,而且该小鼠的体质量以及外周血、脾脏和骨髓中免疫细胞的比例未见明显差异。与C57BL/6-igsf 9^(+/+)小鼠相比,C57BL/6-igsf 9^(-/-)小鼠显著抑制肿瘤细胞的生长,肿瘤组织浸润,CD3^(+)T细胞、CD3^(+)/CD4^(+)T细胞、CD3^(+)/CD8^(+)T细胞水平显著升高,B细胞、中性粒细胞和巨噬细胞数量未见明显变化。结论C57BL/6小鼠敲除igsf 9基因表达能够促进肿瘤组织中T细胞的浸润或激活,从而抑制肿瘤生长。

关键词：免疫抑制受体 IGSF 9 基因敲除肺癌细胞免疫受体酪氨酸抑制序列

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AOPP病人血清ChE、CK-MB和LDH活性的变化

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齐鲁医学杂志 2009年第6期24卷 511-512,514页

作者：李尊岭王桂兰崔萌邵淑红滨州医学院生物化学与分子生物学研究所山东烟台264003 滨州医学院网络中心山东烟台264003 滨州医学院应用心理学教研室山东烟台264003

目的探讨急性有机磷农药中毒（AOPP）病人血清胆碱酯酶（ChE）、肌酸激酶同工酶（CK—MB）、乳酸脱氢酶（LDH）活性变化及其意义。方法检测38例重度AOPP病人人院第1、3、7天血清ChE、CK—MB和LDH活性，以10例健康成人作为对照。结果 ... 详细信息

目的探讨急性有机磷农药中毒（AOPP）病人血清胆碱酯酶（ChE）、肌酸激酶同工酶（CK—MB）、乳酸脱氢酶（LDH）活性变化及其意义。方法检测38例重度AOPP病人人院第1、3、7天血清ChE、CK—MB和LDH活性，以10例健康成人作为对照。结果与对照组比较，AOPP组病人血清ChE降低，CK—MB、LDH升高，差异有显著性（F=142．515～513．542，q=4．505～42．764，P〈0．05、0．01）；与第1天比较，人院第3天、第7天AOPP组病人血清ChE升高，CK—MB、LDH降低，差异有显著性（q=17．665～45．655，P〈0．05、0．01）。随治疗进展，血清ChE、CK—MB和LDH活性呈逐渐恢复趋势。结论血清ChE水平不能作为临床评价有机磷农药中毒程度的有效指标，而CK—MB和LDH可作为有机磷农药中毒程度、病情和预后的判断指标。

关键词：农药中毒有机磷化合物胆碱酯酶类肌酸激酶乳酸脱氢酶类

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miR-21对宫颈癌Siha细胞增殖侵袭及调控SPRY2表达的影响

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重庆医学 2019年第11期48卷 1801-1805页

作者：夏红褚桂芬杨翔杨丽胡金霞广东省广州市番禺区中心医院妇科 511400 滨州医学院生物化学与分子生物学教研室山东烟台264003

目的探讨微小RNA-21(miR-21)对人宫颈癌Siha细胞增殖、凋亡、侵袭及调控快速发育生长因子同源蛋白2抗体(SPRY2)表达的影响。方法收集2016年1月至2017年12月广州市番禺区中心医院收治患者的宫颈癌组织和正常宫颈组织标本各22例,采用实时... 详细信息

目的探讨微小RNA-21(miR-21)对人宫颈癌Siha细胞增殖、凋亡、侵袭及调控快速发育生长因子同源蛋白2抗体(SPRY2)表达的影响。方法收集2016年1月至2017年12月广州市番禺区中心医院收治患者的宫颈癌组织和正常宫颈组织标本各22例,采用实时荧光定量聚合酶链反应(QPCR)检测宫颈癌组织中miR-21和SPRY2的表达水平。采用Lipofectamine^Tm^2000脂质体法将miR-21模拟物(minic-21组)、模拟物对照寡核苷酸(minic-nc组)、抑制剂(inhibitor-21组)和抑制剂对照寡核苷酸(inhibitor-nc组)转染到宫颈癌Siha细胞。转染48h后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell检测细胞侵袭,QPCR和Westernblot检测各组细胞中SPRY2mRNA和蛋白水平。结果与正常宫颈组织比较,宫颈癌组织中miR-21表达明显增高,SPRY2表达明显降低(P<0.05),二者呈负相关(P<0.01)。与相应对照组相比,minic-21组Siha细胞增殖率升高,凋亡率降低,侵袭能力提高(P<0.05);inhibitor-21组Siha细胞增殖率降低,凋亡率升高,侵袭能力减弱(P<0.05)。与相应对照组相比,minic-21组SPRY2蛋白水平明显降低(P<0.05),SPRY2mRNA水平无明显差异(P>0.05);inhibitor-21组SPRY2mRNA和蛋白水平均明显升高(P<0.01)。结论miR-21在宫颈癌中可能通过调控肿瘤抑制基因SPRY2发挥作用,有望成为宫颈癌基因治疗的一个新靶点。

关键词：宫颈肿瘤微小RNA-21 增殖凋亡快速发育生长因子同源蛋白2抗体

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血清CA125、CA19-9、HE4联合检测在卵巢癌诊断中的应用价值研究

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科技视界 2017年第3期 237-238页

作者：田红艳张茜郝瑞敏李有杰滨州医学院生物化学与分子生物学教研室山东烟台264003 东营市人民医院创伤骨科山东东营257091

目的 :探讨联合检测血清CA125、CA19-9、HE4在卵巢癌诊断中的应用价值。方法:收集卵巢癌标本70例(卵巢癌组)、卵巢良性病变标本36例(良性病变组)、健康妇女卵巢标本42例(正常对照)。对研究对象进行血清CA125、CA19-9及HE4的检测,比较三... 详细信息

目的 :探讨联合检测血清CA125、CA19-9、HE4在卵巢癌诊断中的应用价值。方法:收集卵巢癌标本70例(卵巢癌组)、卵巢良性病变标本36例(良性病变组)、健康妇女卵巢标本42例(正常对照)。对研究对象进行血清CA125、CA19-9及HE4的检测,比较三组的血清CA125、CA19-9及HE4的水平及阳性检出情况,对比三种肿瘤标记物在卵巢癌诊断的敏感性、特异性。结果 :卵巢癌组、良性病变组CA125、CA19-9、HE4水平明显高于对照组(P<0.05),卵巢癌组明显高于良性病变组(P<0.05)。卵巢癌组、良性病变组CA125、CA19-9阳性率明显高于对照组(P<0.05);卵巢癌组CA125、CA19-9、HE4阳性率均明显高于良性病变组(P<0.05)。单项检测中,CA125敏感性最高,其次为HE4;HE4特异性最高,其次为CA19-9。两项联合检测中,CA125+HE4敏感性最高,为94.2%,CA19-9+HE4特异性最高为87.9%,三项联合检测的敏感性和特异性分别为97.1%、79.5%。三项联合检测敏感性明显高于单项检测和两项联合检测(P<0.05)。结论:CAl25、CAl9-9、HE4联合检测可明显提高对卵巢癌诊断的敏感性。

关键词： CA125 CA19-9 HE4 卵巢癌

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CNV-seq技术在流产组织遗传病因学中的临床应用价值

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中国妇幼保健 2023年第9期38卷 1700-1705页

作者：孙雪晶张俊梅舒静周林魏娜席作明李有杰滨州医学院生物化学与分子生物学教研室山东烟台264003 聊城市东昌府区妇幼保健院检验科山东聊城252000

目的利用CNV-seq技术对流产组织或绒毛进行染色体异常分析,探讨早期流产和晚期流产患者的遗传学病因,为再生育提供指导。方法收集2015年7月—2021年8月在聊城市东昌府区妇幼保健院进行流产手术患者的流产物绒毛或肌肉组织,采用CNV-seq... 详细信息

目的利用CNV-seq技术对流产组织或绒毛进行染色体异常分析,探讨早期流产和晚期流产患者的遗传学病因,为再生育提供指导。方法收集2015年7月—2021年8月在聊城市东昌府区妇幼保健院进行流产手术患者的流产物绒毛或肌肉组织,采用CNV-seq技术进行染色体异常检测。结果检测样本622例,共检出染色体异常369例(59.3%),包括常染色体非整倍体210例(33.8%),性染色体非整倍体60例(9.6%),染色体微缺失/微重复83例(13.3%),非整倍体合并微缺失/微重复16例(2.6%)。早期流产和晚期流产患者染色体异常比例分别为62.5%(324/518)和43.3%(45/104)。早期流产患者常染色体非整倍体发生率(37.3%)高于晚期流产患者(16.3%),差异有统计学意义(χ^(2)=19.50,P<0.05),早期流产患者性染色体非整备体、染色体微缺失/微重复发生率(9.8%、12.4%)与晚期流产患者(8.6%、18.3%)比较,差异均无统计学意义(χ^(2)=0.47、2.62,均P>0.05)。所有流产胚胎中共检测出83例CNVs,其中“致病性”35例(42.2%)、“可能致病性”4例(4.8%)、“临床意义不明”41例(49.4%)、“可能良性”和“良性”3例(3.6%),35例“致病性”CNVs中发现22例微缺失/微重复综合征。结论利用CNV-seq技术进行流产组织的遗传学病因分析可以明确流产原因,为遗传咨询提供依据,为再生育提供指导。

关键词：流产染色体异常病因学 CNV-seq 再生育指导

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